Đang tải... (xem toàn văn)
Luận văn tốt nghiệp với nội dung nghiên cứu gồm có những phần sau: Nuôi cấy 3 loài nấm mốc thuộc giống Aspergillus có khả năng tổng hợp enzyme pectinase bằng phương pháp nuôi cấy bề sâu: từ kết quả thực nghiệm thu được, chúng tôi tuyển chọn loài A,...
ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌC & DẦU KHÍ BỘ MÔN CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM -o0o - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY NẤM MỐC SINH TỔNG HP ENZYME PECTINASE GVHD : TS Lê Văn Việt Mẫn SVTH : Vũ Thò Hồng Vân MSSV : 60103229 Tp HCM, tháng 12/2005 Luận văn tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin chân thành cảm ơn Bố, Mẹ gia đình giúp đỡ mặt từ vật chất đến tinh thần để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường ĐHBK – TpHCM, cảm ơn quý thầy cô, cán phòng thí nghiệm giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt năm học vừa qua Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy Lê Văn Việt Mẫn giáo viên hướng dẫn tập thể thầy cô môn Công nghệ thực phẩm trường ĐH Bách Khoa dạy giúp đỡ em suốt thời gian thực luận văn tốt nghiệp Mình cảm ơn bạn nhóm Châu, Tùng, Song, Đức, bạn phòng 101 em giúp đỡ động viên Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn chúc người nhiều sức khỏe thành công Tp.HCM, tháng 1/2006 VŨ THỊ HỒNG VÂN -ii- Luận văn tốt nghiệp TÓM TẮT LUẬN VĂN Tên đề tài “Xác đònh thành phần môi trường nuôi cấy nấm mốc sinh tổng hợp enzyme pectinase” Pectinase nhóm enzyme xúc tác phản ứng thủy phân pectin Chế phẩm pectinase ứng dụng rộng rãi công nghiệp thực phẩm dược phẩm, công nghiệp sản xuất loại nước ép trái Hiện nay, chế phẩm enzyme sản xuất chủ yếu từ vi sinh vật, phương pháp nuôi cấy bề sâu có nhiều ưu điểm phương pháp khác Phương pháp bề sâu cho phép điều khiển xác thông số kỹ thuật trình lên men thúc đẩy trình sinh tổng hợp enzyme vi sinh vật Trong luận văn tốt nghiệp này, nội dung nghiên cứu gồm có phần sau: Nuôi cấy loài nấm mốc thuộc giống Aspergillus có khả tổng hợp enzyme pectinase phương pháp nuôi cấy bề sâu: từ kết thực nghiệm thu được, tuyển chọn loài A awamori có khả tổng hợp pectinase cao để nghiên cứu tiếp Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon nitơ lên trình sinh tổng hợp pectinase nấm mốc Tối ưu hóa hàm lượng chất carbon nitơ môi trường nuôi cấy phương pháp quy hoạch thực nghiệm Thử ứng dụng chế phẩm enzyme pectinase thô thu để làm giảm độ nhớt nước ổi ép -iii- Luận văn tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Ảnh hưởng nguồn Nitơ lên hoạt tính enzyme pectinase Bảng 2.2: Nồng độ chất khoáng cần thiết cho vi sinh vật phát triển Bảng 2.3: Thành phần môi trường nuôi cấy vi sinh vật theo phương pháp nuôi cấy bề sâu Bảng 3.1: Thực phản ứng pectinase chất Bảng 3.2: Dựng đường chuẩn monogalacturonic acid Bảng 3.3: Xây dựng đường chuẩn Tyrosin Bảng 4.1: Sự thay đổi hoạt tính endo-polygalacturonase canh trường nuôi cấy nấm mốc theo thời gian Bảng 4.2: Sự thay đổi hoạt tính exo-polygalacturonase canh trường nuôi cấy nấm mốc theo thời gian Bảng 4.3: Ảnh hưởng hàm lượng pectin đến hoạt tính endo-polygalacturonase môi trường nuôi cấy A. awamori Bảng 4.4: Ảnh hưởng nguồn nitơ đến hoạt tính endopolygalacturonase môi trường nuôi cấy A. awamori Bảng 4.5: Ảnh hưởng hàm lượng NH 4Cl môi trường nuôi cấy đến hoạt tính endo-polygalacturonase Bảng 4.6: Thành phần môi trường mẫu thí nghiệm quy hoạch thực nghiệm Bảng 4.7: Hoạt tính endo-polygalacturonase mẫu thí nghiệm tối ưu hóa theo phương pháp trực giao bậc hai Bảng 4.8: Các hệ số phương trình hồi quy Bảng 4.9: Thể tích dòch ổi ép dòch enzyme sử dụng Bảng 4.10: Thời gian chảy dòch ổi ép bổ sung enzyme không bổ sung enzyme -iv- Luận văn tốt nghiệp -v- Luận văn tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Phân tử pectin Hình 2.2: Cơ chế tác dụng exo-polygalacturonase Hình 2.3: Cơ chế tác dụng endo-polygalacturonase Hình 2.4: Cơ chế tác dụng enzyme pectinesterase Hình 2.5: Cơ chế tác dụng enzyme pectate lyase Hình 2.6: Cơ chế tác dụng enzyme pectin lyase Hình 2.7: Kết khảo sát ảnh hưởng pH môi trường ban đầu đến hoạt tính enzyme polygalacturonase Hình 3.1: Sơ đồ nghiên cứu Hình 4.1: Sự thay đổi hoạt tính endo-polygalacturonase canh trường nuôi cấy nấm mốc theo thời gian Hình 4.2: Sự thay đổi hoạt tính exo-polygalacturonase canh trường nuôi cấy nấm mốc theo thời gian Hình 4.3: Ảnh hưởng hàm lượng pectin đến hoạt tính endo-polygalacturonase Hình 4.4: Ảnh hưởng nguồn nitơ đến hoạt tính endopolygalacturonase môi trường nuôi cấy A. awamori Hình 4.5: Ảnh hưởng hàm lượng NH 4Cl môi trường nuôi cấy đến hoạt tính endo-polygalacturonase Hình 4.6: Đồ thò biểu diễn phương trình hồi quy -vi- Luận văn tốt nghiệp MỤC LỤC MỞ ĐẦU: 2 Lời mở đầu 2 CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 5 Pectin:[7,8] 5 1.1.1. Nguồn gốc: 5 1.1.2. Cấu tạo của pectin: 5 1.1.3. Một số tính chất của pectin: 6 1.1.4. Phân loại pectin: 7 1.2. Enzyme pectinase:[2,3,5,8,9] 7 1.2.1. Phân loại enzyme pectinase: 7 1.2.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tổng hợp enzyme pectinase ở vi sinh vật: 12 1.2.3. Phương pháp thu nhận enzyme pectinase:[2, 4] 17 1.2.4. Ứng dụng của chế phẩm enzyme pectinase:[2] 22 1.3. Đặc điểm của một số loài nấm mốc trong sinh tổng hợp enzyme pectinase:[7] 24 1.3.1. Aspergillus niger: 25 1.3.2. Aspergillus oryzae: 25 1.3.3. Aspergillus awamori: 25 CHƯƠNG 3: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: 28 Nguyên liệu: 28 1.3.4. Vi sinh vật sử dụng để thu nhận enzyme pectinase: 28 1.3.5. Hóa chất: 28 1.3.6. Môi trường để giữ giống: 28 1.3.7. Môi trường cơ bản để nuôi cấy nấm mốc sinh tổng hợp enzyme pectinase: 29 1.4. Phương pháp nghiên cứu: 30 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm: 30 Thuyết minh sơ đồ nghiên cứu: 31 1.5. Phương pháp phân tích: 35 1.5.1. Cách xác đònh hoạt tính enzyme pectinase: 35 2. Chương 4: Kết quả và bàn luận: 44 2.1. Khảo sát chọn loài nấm mốc sinh tổng hợp pectinase có hoạt tính cao nhất: . 44 2.2. Ảnh hưởng của hàm lượng pectin đến hoạt tính pectinase: 48 2.3. Chọn nguồn Nitơ vô cơ cho môi trường nuôi cấy: 51 2.4. Ảnh hưởng của hàm lượng nitơ lên hoạt tính pectinase: 54 2.5. Quy hoạch thực nghiệm: 57 2.5.1. Thực hiện: 57 2.5.2. Kết quả: 59 2.6. Thử ứng dụng chế phẩm pectinase thô thu được để làm giảm độ nhớt của dòch quả: 64 3. Kết luận và đề nghò: 67 -vii- Luận văn tốt nghiệp 3.1. Kết luận: 67 3.2. Đề nghò: 67 4. TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 5. PHUÏ LUÏC 71 -viii- Luận văn tốt nghiệp CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU -1- Luận văn tốt nghiệp CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU MỞ ĐẦU: Lời mở đầu Trong vòng vài chục năm gần đây, công nghiệp sản xuất chế phẩm enzyme có bước tiến khổng lồ với tốc độ phát triển mạnh mẽ Các chế phẩm enzyme sản xuất ngày nhiều số lượng, đa dạng chủng loại Vì enzyme chất tổng hợp đường hóa học nên người ta thu chúng từ nguồn sinh học Ta thu nhận enzyme từ động vật, thực vật vi sinh vật Tuy nhiên, hầu hết nguồn nguyên liệu động vật, thực vật dùng làm nguyên liệu để sản xuất chế phẩm enzyme với quy mô công nghiệp lớn Như vậy, nguồn nguyên liệu sinh học nguồn nguyên liệu vi sinh vật dồi đầy hứa hẹn enzyme từ vi sinh vật có tốc độ sinh trưởng nhanh có hoạt lực xúc tác mạnh mẽ Nguyên liệu làm môi trường nuôi cấy vi sinh vật lại dễ kiếm rẻ tiền, dùng vi sinh vật làm nguồn thu enzyme đem lại hiệu kinh tế lớn Một chế phẩm enzyme ứng dụng nhiều pectinase Enzyme ứng dụng rộng rãi công nghiệp thực phẩm, công nghiệp dệt, y dược nông nghiệp Trong công nghiệp sản xuất nước rau quả, tượng gây ảnh hưởng không tốt đến chất lượng sản phẩm trình tồn trữ nước rau bò hoá đục Nguyên nhân chủ yếu loại rau chứa lượng lớn hợp chất pectin Có nhiều giải pháp để giải vấn đề trên, giải pháp sử dụng chế phẩm enzyme thủy phân pectin cho hiệu tốt Hiện sản xuất công nghiệp, chế phẩm pectinase thu nhận từ nguồn vi sinh vật nấm mốc vi khuẩn… chủ yếu phương pháp nuôi cấy bề mặt hay bề sâu Để đáp ứng cho yêu cầu tự động hóa, giới hóa công nghiệp, phương pháp nuôi cấy -2- CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Luận văn tốt nghiệp Bảng 4.7: Hoạt tính endo-polygalacturonase mẫu thí nghiệm tối ưu hóa theo phương pháp trực giao bậc hai Mẫu thí nghiệm Hàm lượng pectin (%w/v) Hàm lượng NH4Cl (%w/v) Hoạt tính endopolygalacturon ase (UI/ml) Mẫu 1 0,2 0,2200 0,4 0,2054 0,3 0,2170 0,2 0,2190 0,4 0,2290 0,3 0,2286 1,5 0,2 0,2250 1,5 0,4 0,2110 1,5 0,3 0,2290 Maãu Maãu Maãu Maãu Maãu Maãu Maãu Maãu Maãu 10 Maãu 11 Maãu 12 1,5 1,5 1,5 0,3 0,3 0,3 0,23434 0,23074 0,2319 Từ kết thu được, thực tính toán theo phương pháp trực giao cấp có hệ số phương trình hồi quy bảng 4.8: CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Luận văn tốt nghiệp Bảng 4.8: Các hệ số phương trình hồi quy: Hệ số b s t 0,220444 0,000613 359,8188 0,0057 0,00075 7,596507 -0,0031 0,00075 -4,13143 12 0,00615 0,000919 6,692195 11 -0,00183 0,0013 -1,41065 22 -0,00663 0,0013 -5,104 Các thí nghiệm ôû taâm: Y10 0,23434 Y20 0,23074 Y30 0,2319 Y o 0,232327 ; sth2 3,38.10-6 ; t0.05(3-1) = 4.3 t2 < t0.05(2): không chọn hệ số b2 t11 < t0.05(2): không chọn hệ số b11 Chúng có phương trình hồi quy nhö sau: ^ Y 0,22 + 0,057X1+0,00615X1X2 -0,00663(X2)2 Kiểm tra tương thích phương trình hồi quy với thực nghiệm theo tiêu chuẩn Fisher: s tt2 6,1.10-5 Ftính = 18,064 F0.95(9 – 4, – 1) = 19.3 F < F0.95(5, ): Phương trình tương thích với thực nghiệm CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Luận văn tốt nghiệp Phương trình hồi quy: ^ Y 0,22 + 0,057X1+0,00615X1X2 -0,00663(X2)2 (*) Với X1 [-1;1], X2 [-1;1] Từ phương trình hồi quy, ta nhận thấy sinh tổng hợp endo-polygalacturonase từ A. awamori bò ảnh hưởng đồng thời hàm lượng pectin X1 hàm lượng NH4Cl X2 Khi X1 tăng Y tăng, nên X =1 (tương ứng với hàm lượng pectin 2%) Y đạt max Thay X1=1 vào phương trình (*), ta có: Y = 0,2257+0,00615X2-0,00663(X2)2 (**) Từ (**), ta tìm Y max cách đạo hàm Y theo X2, ta có: Y’=-0,01326X2+0,00615 Ymax tương ứng với Y’=0, ta tìm X 2=0,464 Giá trò tương ứng với hàm lượng NH4Cl 0,346% ( 0,35%) Ymax có giá trò 0,2275 UI/ml Vậy sau thực quy hoạch thực nghiệm, xác đònh điều kiện tối ưu để thu nhận endopolygalacturonase có hoạt tính cao nhất: hàm lượng pectin 2% hàm lượng NH4Cl 0,5% Vẽ đồ thò phương trình hồi qui lập trình Matlab, kiểm tra lại giá trò tối ưu Y max =0,2275 UI/ml X1 = 1, X2 = 0,464 Các giá trò phù hợp với việc giải cực trò CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Luận văn tốt nghiệp Hình 4.6: Đồ thò biểu diễn phương trình hồi quy CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Luận văn tốt nghiệp Từ phương trình hồi quy, tìm giá trò tối ưu cho môi trường nuôi cấy A. awamori: hoạt tính enzyme cực đại 0,2275UI/ml tương ứng với hàm lượng pectin 2% hàm lượng NH4Cl 0,35% 2.6 Thử ứng dụng chế phẩm pectinase thô thu được để làm giảm độ nhớt của dòch quả: Cách thực hiện: Sử dụng chế phẩm enzyme thu nhận từ thí nghiệm với hoạt tính 0,22 UI/ml Hiệu chỉnh hoạt tính chế phẩm enzyme pectinase hãng Novo giá trò 0,22UI/ml Ta tiến hành thí nghiệm bảng sau: Bảng 4.9: Thể tích dòch ổi ép dòch enzyme sử dụng Mẫu Thể tích dòch ổi ép (ml) 35ml 35ml 35ml Thể tích chế phẩm enzyme (ml) 5 Thể tích nước (ml) 0 o Mẫu 1: sử dụng chế phẩm enzyme hãng Novo o Mẫu 2: sử dụng chế phẩm enzyme o Mẫu 3: mẫu đối chứng Điều kiện phản ứng: o Nhiệt độ: 450C o Thời gian: 60 phút o Dòch ổi ép có pH tự nhiên 4,42 Sau phản ứng, vô hoạt enzyme nhiệt, làm nguội dùng nhớt kế để xác đònh thời gian chảy mẫu CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Luận văn tốt nghiệp Kết quả: Bảng 4.10: Thời gian chảy dòch ổi ép bổ sung enzyme không bổ sung enzyme Mẫu Thời gian chảy (giây) 91,2 86,79 131,16 Từ bảng 4.10, so với mẫu (kiểm chứng), ta thấy: o Mẫu (sử dụng chế phẩm enzyme hãng Novo): độ nhớt giảm 30,47% o Mẫu (sử dụng chế phẩm enzyme thu nhận): độ nhớt giảm 33,83% Nhận xét bàn luận: Từ kết thí nghiệm, nhận thấy sau 30 phút xử lý enzyme, mức độ giảm độ nhớt dòch ổi sử dụng hai chế phẩm enzyme tương đương Như vậy, sử dụng chế phẩm enzyme thu nhận từ nấm mốc phương pháp nuôi cấy bề sâu vào việc rút ngắn thời gian lọc sản xuất nước ổi nâng cao độ bền hóa lý, giá trò cảm quan sản phẩm CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Luận văn tốt nghiệp CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Luận văn tốt nghiệp Kết luận và đề nghò: 3.1 Kết luận: Từ kết thực nghiệm, đưa số kết luận sau: Sau nuôi cấy loài nấm mốc A niger, A oryzae, A awamori để thu nhận enzyme pectinase, thấy loài nấm mốc thích hợp để sinh tổng hợp pectinase A. awamori thời gian nuôi cấy ngắn loài lại Thành phần môi trường tối ưu để nuôi cấy A. awamori nhằm mục đích sinh tổng hợp endo-polygalacturonase có hoạt tính cao nhất: Hàm lượng pectin: 2% (w/v) Nguồn nitơ sử dụng: NH4Cl Hàm lượng NH4Cl 0,35% (w/v) Sau 60 nuôi cấy, polygalacturonase thu 0,2275 UI/ml hoạt tính endo- Chế phẩm pectinase thu từ A. awamori có tác dụng làm giảm độ nhớt dòch nước ổi ép với mức độ tương đương chế phẩm pectinase hãng Novo sử dụng chế phẩm với số đơn vò hoạt độ để thủy phân pectin 3.2 Đề nghò: Vì thời gian nghiên cứu có hạn, có điều kiện, thấy cần tiếp tục nghiên cứu sau: Nghiên cứu bổ sung thêm yếu tố sinh trưởng (growth factor) vào môi trường nuôi cấy nhằm rút ngắn thời gian nuôi cấy nấm mốc cải thiện hoạt tính enzyme Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy (pH, nhiệt độ, oxy, lượng giống cấy ) lên trình sinh tổng hợp enzyme pectinase Nghiên cứu tinh enzyme từ canh trường nuôi cấy bề sâu CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Luận văn tốt nghiệp Xác đònh tính chất chế phẩm pectinase thu nhận Ứng dụng chế phẩm pectinase thu nhận Công nghệ Thực phẩm TÀI LIỆU THAM KHẢO Luận văn tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Lâm Thò Kim Châu cộng tác, Thực tập lớn sinh hóa, Tủ sách Đại học Khoa học tự nhiên, TPHCM, 1998 [2] Lê Ngọc Tú, Hóa sinh công nghiệp, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 2002 [3] Lê Ngọc Tú, Enzyme vi sinh vật tập 2, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 1982 [4] Lê Văn Nhương, Thu nhận và ứng dụng các chất hoạt động sinh học từ vi sinh vật, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà nội, 1978 [5] Nguyễn Cảnh, Quy hoạch thực nghiệm, Trường đại học Bách khoa thành phố Hồ Chí Minh, 2004 [6] Lương Đức Phẩm, Công nghệ vi sinh vật, NXB Nông nghiệp, TpHCM [7] Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo dục Hà Nội, 2002 [8] Nguyễn Đức Lượng, Công nghệ sinh học, Đại học Kỹ thuật, 1998 [9] Nguyễn Trọng Cẩn (Chủ biên), Công nghệ enzyme, NXB Nông nghiệp TpHCM, 1998 [10] Đồng Thò Thanh Thu, Hóa sinh ứng dụng, Tủ sách Đại học Khoa học tự nhieân Tphcm, 1998 [11] C.Lang, Perspectives in the biological function and the technological application of polygalacturonases, Appl Microbiol Biotechnol, Vol 53, 2000, pp 366-375 [12] D.R.Kashyap, S.Chandra, A.Kaul, R.Tewari, Production, purification and characterization of pectinase from a Bacillus sp DT7, World Journal of Microbiology & Biotechnology, Vol 16, 2000, pp 277-282 [13] Eloane Malvessi, Mauricio Moura Da Silveira, Influence of medium composition and pH on the production of polygalacturonase by Aspergillus oryzae, Brazilian archives of biology and technology, Vol 47, september 2004, pp 693-702 TÀI LIỆU THAM KHẢO Luận văn tốt nghiệp [14] G Hoondal, R Tiwari, R Tewari, N Dahiya, Q Beg, Microbial alkaline pectinases and their industrial applications, Applied Microbiology and Biotechnology, Vol 59, January 2002, pp 409-418 [15] M Galiotou, Panayotou, M Kapantai, O Kalantzi, Growth conditions of Aspergillus.sp. ATHUM3482 for polygalacturonase production, Appl Microbiol Biotechnol, Vol 47, 1997, pp 425-429 [16] Mc Maldonado, Am Strasser De Saad, Production of pectinesterase and polygalacturonase by Aspergillus niger in submerged and solid state systems, Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, Vol 20, 1998, pp 34-38 [17] Ramesh Chander Kuhad, Mukesh Kapoor, Renuka Rustagi, Enhanced production of an alkaline pectinase from Streptomyces sp, World Journal of Microbiology & Biotechnolog, Vol 20, 2000, pp 257-236 [18] V.Taragano, V.E.Sanchez, A.M.R Pilosof, Combined effect of water activity depression and glucose addition on pectinase and protease production by Aspergillus niger, Biotechnology Letters, Vol 19, March 1997, pp 233236 PHỤ LỤC Luận văn tốt nghiệp PHỤ LỤC PHỤ LỤC Các công thức tính toán cho phương án cấu trúc có tâm cấp hai: Số thí nghiệm phương án cấu trúc có tâm, k yếu tố: K < 5: N = 2k + 2k + n0 K : N = 2k-1 + 2k + n0 Số thí nghiệm tâm phương án: n = cánh tay đòn α= Khi đó: X'j Xj X 2j (j = 1:k ) Các hệ số phương trình hồi quy: N X jiYi i N bj N X ; b ji ji ( X i X l ) i Yi i N i N ; i N b jj l i (X j X ) i X ' ji Yi (l ( X ' ji ) j) i Các phương sai sbj2 hệ số bj: sth2 bj s N X ji i ; s b ji sth2 N l i (X j X ) ; s sth2 b jj N i ( X ' ji ) i Trong đó: n Y o Yuo u n n ; sth2 o (Yuo Y ) u n Với n: số thí nghiệm làm thêm tâm Tính ý nghóa hệ số kiểm tra theo tiêu chuẩn Student: PHỤ LỤC tj Luận văn tốt nghiệp bj t jl ; sb j b jl t jj ; sb jl b jj sb jj Tra baûng – trang 112 – tài liệu tham khảo [ ], tìm t p(f) Với mức ý nghóa p = 0.05; số bậc tự tái hiện: f = n – l Nếu tj < tp(f) hệ số bj bò loại khỏi phương trình hồi quy Ta có phương trình hồi quy: ^ Y bo b1 X b2 X b12 X X b11 X 112 Kieåm tra tương thích phương trình hồi quy với thực nghiệm: F N stt2 với: stt sth2 ^ (Yi Y i ) i N l Tra bảng – trang 114 – tài liệu tham khảo [5], tìm F 1-p(f1,f2) Trong đó: f1 = N – f = n-l, với l hệ số có ý nghóa phương trình hồi quy Nếu F < F1-p(f1,f2): phương trình tương thích với thực nghiệm Các bảng số liệu: Bảng 1: Số liệu đường chuẩn monogalacturonic acid: Nồng độ dung dòch chuẩn (mg/ml) 0,25 OD(A) 0,10 0,21 0,44 0,68 1 2 0,5 1,5 0,9 Bảng 2: Số liệu đường chuẩn Tyrosin: Nồng độ dung dòch chuẩn ( mol/ml) 0,05 OD(A) 0,10 0,21 0,1 0,1 0,2 0,25 0,3 0,3 0,42 0,53 0,61 PHUÏ LUÏC Luận văn tốt nghiệp PHỤ LỤC Luận văn tốt nghiệp Đồ thò các đường chuẩn: y = 0,4667x - 0,014 R = 0,9992 OD (A) 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0,5 1,5 2,5 Nồ ng độđườ ng khử(mg/ml) Hình 1: Đường chuẩn monogalacturonic acid 1,2 y = 2,0744x + 0,0039 R = 0,9995 OD (A) 0,8 0,4 0 0,2 Nồ ng độtyrosin ( 0,4 mol/ml) Hình 2: Đường chuẩn Tyrosin 0,6 ... khỏe thành công Tp.HCM, tháng 1/2006 VŨ THỊ HỒNG VÂN -ii- Luận văn tốt nghiệp TÓM TẮT LUẬN VĂN Tên đề tài Xác đònh thành phần môi trường nuôi cấy nấm mốc sinh tổng hợp enzyme pectinase Pectinase. .. trường hợp này, chế phẩm enzyme thu enzyme thô pH môi trường yếu tố ảnh hưởng lớn đến trình sinh tổng hợp enzyme pectinase vi sinh vật có pH tối ưu để sinh trưởng sinh tổng hợp enzyme pH thích hợp. .. xuất chế phẩm enzyme Trên sở đó, bước đầu khảo sát trình sinh tổng hợp pectinase từ nấm mốc phương pháp nuôi cấy bề sâu, từ tối ưu hóa thành phần môi trường nuôi cấy nhằm thu nhận pectinase có