Đang tải... (xem toàn văn)
Mục đích cơ bản của luận án này là xác định được nguyên nhân, đặc điểm sinh học, sinh thái và các yếu tố ảnh hưởng đến sự lan truyền bệnh vàng rụng lá cao su làm cơ sở khoa học xây dựng các giải pháp phòng chống có hiệu quả cho cây cao su tại Bình Phước.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC NGHIÊN CỨU BỆNH VÀNG RỤNG LÁ CAO SU Corynespora cassiicola (Berk & Curtis) Wei VÀ BIỆN PHÁP QUẢN LÝ TỔNG HỢP TẠI BÌNH PHƢỚC Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật Mã số: 62 01 12 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI, NĂM 2018 Cơng trình đƣợc hồn thành tại: VIỆN KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM Ngƣời hƣớng dẫn khoa học TS Ngô Vĩnh Viễn PGS.TS Nguyễn Xuân Hồng Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: ……………………………………………………………… Luận án tiến sĩ đƣợc bảo vệ Hội đồng chấm luận án cấp Viện họp tại: Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi ngày tháng năm 2018 Có thể tìm hiểu luận án thƣ viện: Thƣ viện quốc gia Việt Nam Thƣ viện Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Thƣ viện Viện Bảo vệ thực vật MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Cây cao su (Hevea brasiliensis Mull-Arg) trồng đa mục đích, có vai trị lớn mặt kinh tế, bảo vệ mơi trường an ninh quốc phịng Diện tích cao su nước ta ngày tăng, 10 mặt hàng xuất chủ yếu Theo Tập đoàn Cao su Việt Nam (2015), diện tích đến năm 2015 đạt 981,0 nghìn ha, tăng gấp đơi so với năm 2000 Việt nam đứng thứ giới suất (1.695 kg/ha), thứ sản lượng (1.017.000 tấn) thứ giới xuất (1,14 triệu tấn) (ANRPC, 2015) Bệnh vàng rụng cao su đối tượng bệnh hại quan trọng cao su Nấm gây bệnh quanh năm tất thời kỳ sinh trưởng cây, gây bệnh mà nấm gây bệnh cuống chồi Vết bệnh đốm có hình trịn, màu xám đến xám nâu, xung quanh vết bệnh có viền vàng, trung tâm vết bệnh đơi hình thành lỗ thủng vết bệnh sọc màu đen có hình xương cá dọc theo gân Nấm gây hại cho cao su từ vườn ươm, nhân đến vườn kiến thiết vườn khai thác Bệnh vàng rụng cao su bắt đầu xuất Bình Phước vào khoảng đầu tháng năm 2010, sau bệnh phát triển lây lan rộng với diện tích bị nhiễm lúc cao điểm 8.024 Bệnh gây hại làm vườn cao su bị rụng lá, sinh trưởng phát triển kém, suất mủ giảm, bị nhiễm bệnh nặng gây chết đặc biệt thời kì vườn ươm kiến thiết Những nghiên cứu bước đầu bệnh Việt Nam tiến hành, chưa có cơng trình nghiên cứu sâu thực cách có hệ thống đặc điểm sinh học, tồn tại, lây lan biện pháp phòng trừ Đề tài “Nghiên cứu bệnh vàng rụng cao su Corynespora cassiicola (Bert & Curt.) Wei biện pháp quản lý tổng hợp Bình Phước” thực nhằm xây dựng sở khoa học để đề xuất biện pháp quản lý có hiệu bệnh vàng rụng cao su, góp phần phát triển ngành cao su bền vững Mục đích, yêu cầu đề tài 2.1 Mục đích Xác định nguyên nhân, đặc điểm sinh học, sinh thái yếu tố ảnh hưởng đến lan truyền bệnh vàng rụng cao su làm sở khoa học xây dựng giải pháp phịng chống có hiệu cho cao su Bình Phước 2.2 Yêu cầu - Xác định nguyên nhân gây bệnh vàng rụng cao su Bình Phước - Xác định đặc điểm sinh học, sinh thái nấm gây bệnh vàng rụng cao su Bình Phước, yếu tố ảnh hưởng đến phát sinh gây hại bệnh vàng rụng cao su - Đề xuất biện pháp phịng chống bệnh có hiệu thân thiện với môi trường Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Ý nghĩa khoa học: Bổ sung dẫn liệu bệnh vàng rụng cao su, đặc điểm sinh học, sinh thái, tồn nấm Corynespora cassiicola yếu tố ảnh hưởng đến phát sinh, phát triển, gây hại bệnh điều kiện tự nhiên làm sở khoa học cho việc đề xuất giải pháp phịng chống bệnh có hiệu Ý nghĩa thực tiễn Kết nghiên cứu đề tài khẳng định nguyên nhân gây bệnh vàng rụng cao su, đồng thời làm sáng tỏ gây bệnh nấm C cassiicola hại cao su điều kiện sản xuất Đề tài đề xuất quy trình tổng hợp phịng chống bệnh có hiệu an tồn mơi trường, góp phần phát triển bền vững ngành trồng cao su Bình Phước Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu đề tài 4.1 Đối tượng nghiên cứu - Nấm Corynespora cassiicola - Bệnh vàng rụng cao su 4.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu xác định nguyên nhân gây bệnh vàng rụng cao su Bình Phước, đặc điểm sinh học, tính gây bệnh, phổ ký chủ nấm C cassiicola Nghiên cứu quy luật phát sinh gây hại bệnh Bình Phước đề xuất quy trình quản lý bệnh tổng hợp Những đóng góp luận án - Bổ sung dẫn liệu khoa học triệu chứng, đặc điểm sinh học, tồn nấm C cassiicola tàn dư bệnh trình xâm nhiễm gây bệnh nấm cao su - Xác định hậu bào tử nấm C cassiicola điều kiện in vitro Xác định thêm 12 trồng ký chủ nấm điều kiện tự nhiên có sắn trồng xen phổ biến vườn cao su tiểu điền - Bổ sung thông tin diễn biến yếu tố ảnh hưởng tới phát sinh phát triển bệnh vàng rụng cao su đồng ruộng - Xác định số chủng vi sinh vật đối kháng nấm C cassiicola sử dụng chúng để xử lý nguồn bệnh đồng ruộng - Chỉ rõ thời điểm xử lý bệnh hiệu hạn chế bệnh biện pháp phòng trừ, xây dựng ứng dụng thành cơng quy trình quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng cao su Cấu trúc luận án Luận án gồm 156 trang, gồm phần mở đầu trang; Chương Cơ sở khoa học tổng quan tài liệu (37 trang); Chương Nội dung phương pháp nghiên cứu (23 trang); Chương Kết nghiên cứu thảo luận (75 trang); Kết luận kiến nghị trang với 40 bảng số liệu, 32 hình Tham khảo 136 tài liệu, có 24 tài liệu tiếng việt, 112 tài liệu tiếng anh CHƢƠNG CƠ SỞ KHOA HỌC VÀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Cơ sở khoa học đề tài Bệnh vàng rụng cao su bệnh hại quan trọng cao su vùng giới Triệu chứng bệnh biểu với mức độ khác tùy thuộc vào giống, nguồn gốc giống biện pháp canh tác, bảo vệ vườn Các nghiên cứu nước giới rõ bệnh vàng rụng cao su có khả lây lan nhanh mức độ gây hại nặng sử dụng giống nhiễm bệnh, giống mẫn cảm, kỹ thuật canh tác không quan tâm (Chee, 1988, Fernando, 2010; Jill, 2016; Manju, 2011) Ở nước ta, có số nghiên cứu triệu chứng, nguyên nhân gây bệnh chưa có nghiên cứu đầy đủ diễn biến phát sinh, tồn thời điểm phòng trừ để hạn chế thiệt hại bệnh gây Do vậy, nghiên cứu này, nghiên cứu tập trung xác định xác nguyên nhân gây bệnh, đặc điểm sinh học, tồn nấm diễn biến phát sinh nhằm đề xuất giải pháp quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng có hiệu 1.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 1.2.1 Triệu chứng, lịch sử phát hiện, phân bố bệnh rụng Corynespora cassiicola Bệnh rụng cao su nấm Corynespora cassiicola gây ghi nhận lần đầu cao su thực sinh Sierra Leone (châu Phi) năm 1936 (Wei, 1950) Tới nấm C cassiicola lan truyền gây hại tất nước sản xuất cao su thuộc châu Á châu Phi, gây tổn thất lớn cho sản xuất cao su chưa ghi nhận miền nam châu Mỹ (Déon et al., 2012) Triệu chứng bệnh biểu cao su trồng vườn ươm trồng vườn sản xuất, gây hại lá, chồi Triệu chứng dễ nhận thấy vết bệnh dạng xương cá Khi bệnh nặng chuyển thành màu vàng, sau chuyển sang màu nâu đồng cuối bị rụng 1.2.1 Đặc điểm sinh học sinh thái học nấm Corynespora cassiicola (Berk & Curtis) Wei Nấm mô tả Berk & Curtis 1868 với tên gọi Helminthosporium cassiicola, tới năm 1950 nấm gọi Corynespora cassiicola (Berk.& Curtis) Wei Nuôi cấy mơi trường, tản nấm phát triển có dạng xốp, màu sắc tản nấm biến thiên từ màu xanh vàng đến màu xám Sợi nấm phân nhánh có vách ngăn với bào tử phân sinh hình thành đầu sợi nấm Hình dáng bào tử từ thẳng, cong, hình trụ Bào tử nảy mầm sinh vài ống mầm vách ngăn, thường ống mầm mọc từ tế bào cuối bào tử (Chee, 1988; Peiris et al., 2015) Nấm tồn tới năm tàn dư trồng Phổ kí chủ rộng lồi nấm tạo điều kiện cho sống sót nấm Nấm C cassiicola có khả lây nhiễm chéo cao (Peiris et al., 2015) Rất nghiên cứu ghi nhận diện hậu bào tử nấm C cassiicola Ricardo (2012) ghi nhận mẫu tạo hậu bào tử hai điều kiện in vitro in vivo tổng số 15 mẫu phân lập nấm C cassiicola nhiều trồng như: Nghệ tây, sơ ri, bí xanh, đậu tương, cà chua, đu đủ, hoa ngũ sắc, xà lách… Hậu bào tử hình thành theo cách: phần cuối sợi nấm (terminal), xen vào sợi nấm (intercalary) tạo dạng hình chuỗi (chain) với hậu bào tử Hình 1.3 Hậu bào tử tạo điều kiện in vitro in vivo A tạo từ đầu sợi nấm; B C Tạo từ sợi nấm; D Tạo hình chuỗi (Nguồn: Ricardo, năm 2012) 1.2.3 Nghiên cứu yếu tố sinh thái ảnh hưởng đến phát sinh phát triển bệnh đồng ruộng Các yếu tố môi trường ẩm độ cao, nhiệt độ từ 28-30°C, trời nhiều mây với lượng mưa trung bình thuận lợi cho nảy mầm bào tử nấm C cassiicola Sự phóng thích bào tử bắt đầu vào lúc sáng đạt đỉnh cao vào 12h trưa, vào ban đêm bào tử phóng thích khơng có phát tán Triệu chứng bệnh phát triển có liên quan đến lượng mưa, nhiệt độ độ ẩm (Purwantara and Pawirosoemardjo, 1991) Cao su trồng vùng thấp bị bệnh nặng (Situmorang et al., 1984) 1.2.4 Những nghiên cứu biện pháp quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng cao su Sử dụng dòng cao su kháng bệnh, trồng nhiều dòng đa dịng vùng có nguy lây bệnh cao (Ho et al., 1974) Tại vườn cao su thiếu dinh dưỡng, hệ vi sinh vật đất suy giảm, nấm C cassiicola có điều kiện phát triển gây bệnh phát tán nhanh mùa mưa ẩm độ khơng khí bão hồ Bón đủ phân hữu NPK cho vườn cao su hạn chế bệnh phát triển (Liyanage, 1987) Manju (2011a) cho biết Trichoderma viride ức chế phát triển nấm điều kiện invitro đồng ruộng T harzianum, Bacillus subtilis Pseudomonas fluorescens có hiệu ức chế nấm điều kiện invitro, chưa ghi nhận hiệu điều kiện đồng ruộng Jill (2016) cho biết sử dụng hoạt chất: Propineb, Chlorothalonil Copper hydroxide phun lần (1 tuần/lần) điều kiện vườn ươm có hiệu giảm bệnh từ 92,51% tới 98,08% Đối với cao su vườn sản xuất cần tiến hành phun thuốc từ bệnh xuất Các loại thuốc Mancozeb 0,2%, Carbenzim 0,05% Boocdo 1% giai đoạn rụng cho hiệu phòng trừ bệnh (Manju, 2011; Fernaldo, 2012) 1.3 Một số nghiên cứu nƣớc 1.3.1 Triệu chứng, phân bố bệnh vàng rụng cao su Bệnh vàng rụng cao su phát lần đầu Việt Nam vào tháng năm 1999 Trạm Thực Nghiệm cao su Lai Khê thuộc Viện Nghiên cứu cao su Việt Nam Từ cuối 2009 đến năm 2010 điều kiện thời tiết thuận lợi, mưa nhiều, bệnh vàng rụng phát sinh gây hại diện tích lớn vườn cao su vùng Đơng Nam Bộ số vùng Tây Nguyên Nấm công già, non, chồi non gây vàng rụng ảnh hưởng đến sinh trưởng sản lượng mủ vườn cao su (Phan Thành Dũng, 2010) 1.4.2.3 Đặc điểm sinh học, sinh thái học nấm C cassiicola Tác giả Lê Thị An Nhiên (2016), Nguyễn Thị Thu Thủy (2016) nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh thái nấm C cassiicola gây bệnh vàng rụng cao su 1.3.1.2 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ Từ tháng 10 năm 2000 trở trước, nấm C cassiicola gây xếp vào danh mục đối tượng kiểm dịch thực vật Việt Nam, biện pháp xử lý bệnh thời gian phải tuân thủ quy định pháp luật bảo vệ kiểm dịch thực vật Việt Nam, phải phù hợp với Quy định Công ước quốc tế bảo vệ thực vật Trần Ánh Pha cs (2013) thu thập 24 nguồn nấm Trichoderma cao su khô, thân cao su, đất vườn cao su, rễ cao su, … có khả đối kháng với bệnh chồi non cao su nấm Corynespora cassiicola Đỗ Thị Thanh Dung (2015) chọn chủng BD1N1, ĐN9N2, ĐN5N1 thuộc chủng Trichoderma sp có khả đối kháng mạnh với nấm C.cassiicola có tiềm ứng dụng làm chế phẩm vi sinh giúp phòng trị bệnh Corynespora cao su Nguyễn Văn Minh (2014) phân lập 21 chủng vi khuẩn nội sinh xác định chủng T9 T16 có kết đối kháng với nấm Corynespora cassiicola, ức chế 100% nồng độ 1:1 Các loại thuốc trừ nấm chứa hoạt chất Hexaconazole nồng độ 0,15% Carbendazim (Carbenzim 500FL, Carbenvil 50SC, Carban 50SC,.), hay hỗn hợp Hexaconazole Carbendazim phối trộn theo tỷ lệ 1:1, Arivit 250SC Vixazol 275SC nồng độ 0,2-0,3% có hiệu cao sử dụng để phịng trừ nấm C.cassiicola (Trần Huy Bình, 2013; Phan Thành Dũng cs, 2010) Một số tồn nghiên cứu phòng trừ bệnh vàng rụng cao su Bình Phước hướng giải đề tài - Từ kết phần tổng quan Việt Nam cho thấy từ năm 2012 trở trước đề tài thực có số cơng trình cơng bố triệu chứng bệnh chưa có nhiều tài liệu nước cơng bố tồn nấm, yếu tố ảnh hưởng đến lan truyền bệnh đồng ruộng, thuốc hóa học thời điểm thử nghiệm có hiệu Chưa có cơng trình nghiên cứu sử dụng chế phẩm sinh học phòng trừ bệnh đồng ruộng - Chưa có tài liệu cơng bố q trình xâm nhiễm nấm C cassiicola cao su thời điểm phun thuốc hóa học biện pháp khác phịng trừ có hiệu - Bệnh vàng rụng (VRL) bệnh lần đầu gây hại diện rộng, người dân chủ quan lúng túng biện pháp phòng trừ Trong bệnh VRL cao su lại lây nhiễm gây hại phận non phía đầu cành Trong cịn thiếu dụng cụ chuyên dùng để phun ướt tán hiệu phun thuốc hóa học phịng trừ bệnh thấp Do vậy, đề tài xây dựng với mục tiêu cụ thể xác định nguyên nhân, đặc điểm sinh học, sinh thái yếu tố ảnh hưởng đến lan truyền, phát sinh gây hại bệnh VRL cao su, làm sở khoa học đề xuất quy trình phịng trừ tổng hợp bệnh có hiệu CHƢƠNG II NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung nghiên cứu + Xác định nguyên nhân gây bệnh vàng rụng cao su Bình Phước + Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái nấm C cassiicola gây bệnh vàng rụng cao su + Nghiên cứu diễn biến, ảnh hưởng yếu tố sinh thái (giống, tuổi cây, đất đai….) đến phát sinh phát triển bệnh vàng rụng cao su + Nghiên cứu biện pháp quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng cao su Bình Phước 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu Địa điểm nghiên cứu - Phịng thí nghiệm Bộ môn Bệnh – Viện Bảo vệ thực vật, Bắc Từ Liêm, Hà Nội - Các vườn trồng cao su địa bàn xã thuộc huyện Chơn Thành, Lộc Ninh, Đồng Phú, Đồng Xoài, Bù Gia Mập tỉnh Bình Phước Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 10/2012 - 8/2016 2.2 Vật liệu nghiên cứu: - Mẫu triệu chứng bệnh vàng rụng lá, mẫu đất, mẫu rễ cao su - Các nguồn nấm C cassiicola phân lập giống cao su RRIV4, PB 260 số ký chủ sắn, cà chua, đậu tương - Các chủng vi sinh vật đối kháng TS1, TS2, LH G2.8 ( Bacillus sp.), B Subtilis, Steptomycetes Trichoderma harzianum, Trichoderma viride, Trichoderma sp - Các môi trường nghiên cứu nấm môi trường PDA (Potato Dextrose agar), PSA (Potato Sucrose agar), CMA (Corn meal agar), CA (Carot agar), Czapek’s agar, King’s B, TSA, V8, YES, WA (water agar) - Các cặp mồi ITS4 ITS5 - Chế phẩm nấm Trichoderma (109 bào tử/gr) Chế phẩm đóng gói 1kg, chủng nấm Trichoderma harzianum Các hoạt chất BVTV: Carbendazim 500g/l; Hexaconazole 50g/l; Tebuconazole 430g/l; Difeconazole 250g/l; Propiconazole 250g/l; Thiophanate methyl; Chlorothalonil 75%; Mancozeb 80%; Propineb 80%; Zineb 80%; Copper oxychloride 80% - Các giống cao su : RRIV 4, PB 260, GT 1, LH 90/952 - Máy PCR, máy điện di, kính hiển vi quang học, kính lúp soi nổi, máy đo pH, tủ sấy, nồi hấp, dụng cụ vật liệu thí nghiệm, cần thiết khác 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.4.1 Xác định nguyên nhân gây bệnh vàng rụng cao su 2.4.1.1 Phương pháp điều tra, thu thập mẫu: theo phương pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật, tập 1, Viện Bảo vệ thực vật, 1997 2.4.1.2 Phương pháp phân lập mẫu Phân lập làm phương pháp cấy đơn bào tử Burgess ctv (2009) 2.4.1.3 Lây bệnh nhân tạo nhà lưới theo quy trình Koch’s Tạo nguồn nấm theo phương pháp Chee (1988) Phun dịch bào tử có bổ sung Tween 20 (1 giọt/100ml) lên hai mặt Giữ cao su điều kiện 28°C, độ ẩm 100% 48h sau ni điều kiện nhà kính, 28°C 2.4.1.4 Phương pháp xác định nấm hình thái theo khóa phân loại Ellis and Holiday (1971) 2.4.1.5 Xác định tác nhân giải trình tự gen Trình tự cặp mồi sử dụng ITS4 (White et al, 1990) 5’- TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ ITS5 (White et al., 1990) 5’-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’ - Giải trình tự phân tích trình tự: Sản phẩm PCR tinh chiết từ gel agarose dùng kít tinh chiết PureLinkTM Quick Gel Extraction Kit (Invitrogen) theo hướng dẫn nhà sản xuất Phân tích trình tự thực dùng phầm mềm ClustalX MEGA5.1 2.4.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái nấm C cassiicola gây bệnh vàng rụng cao su 2.4.2.1 Nghiên cứu đặc điểm hình thái nấm - Nấm bệnh phân lập nuôi cấy môi trường PDA điều kiện 28°C, chế độ sáng tối xen kẽ sau 12 h - Quan sát màu sắc tản nấm, hình dạng, kích thước bào tử, cành bào tử - Đo kích thước bào tử kính hiển vi quang học 2.4.2.2 Nghiên cứu yếu tố sinh thái ảnh hưởng đến phát triển nấm C cassiicola Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy, nhiệt độ, điều kiện chiếu sáng, điều kiện pH đến phát triển nấm theo phương pháp nghiên cứu BVTV 2.4.2.3 Nghiên cứu tính gây bệnh nấm C cassiicola + Nghiên cứu khả nảy mầm bào tử nấm môi trường Các mẫu nấm C cassiicola nuôi cấy môi trường PDA nhiệt độ 28 C, sau ngày thu bào tử hiệu chỉnh dung dịch để đạt số lượng bào tử 10 5/ml Đếm số bào tử nảy mầm 100 bào tử quan sát sau 0,75 h; 1,5 h; h; 4,5 h; h 7,5 h + Nghiên cứu tính gây bệnh nấm C cassiicola tuổi cao su khác Theo phương pháp Fernando, 2010b + Nghiên cứu trình xâm nhiễm nấm C cassiicola cao su Chuẩn bị cao su 10 ngày tuổi Tạo vết thương nhẹ cạnh gân Lây nhiễm nhân tạo nấm C.cassiicola 105 bào tử/ml lên cao su non đặt hộp nhựa ẩm độ 100% 28oC Mỗi nhỏ giọt dung dịch nấm dọc theo gân (20µl) Lá đối chứng nhỏ nước lã Tiến hành thí nghiệm Dùng lam cắt mỏng sau nhuộm cotton blue Xác định cấu trúc sợi nấm, bào tử, bào tử nảy mầm mơ kính hiển vi quang học sau h đến bào tử nảy mầm 2.4.2.4 Nghiên cứu tồn nấm C cassiicola + Nghiên cứu tồn nấm C cassiicola tàn dư cao su rụng Phân lập nấm từ mẫu khô rụng sau 1, 3, 6, 9, 12, 18 tháng mơi trường PDA có bổ sung kháng sinh chloramphenicol (50 mg/l), mẫu đĩa petri Mỗi thời điểm tiến hành với 30 mẫu có triệu chứng bệnh Quan sát hàng ngày kiểm tra xuất bào tử nấm C.cassiicola Đánh giá phát triển bào tử sau ngày nuôi cấy môi trường theo phương pháp Manju, 2011 + Nghiên cứu tạo hậu bào tử nấm C cassiicola Theo phương pháp Olive et al., 1945 2.4.2.5 Nghiên cứu phổ ký chủ tính gây bệnh nấm C cassiicola ký chủ khác Xác định ký chủ nấm C cassiicola Khảo sát trồng xung quanh vườn cao su có triệu chứng bệnh tương tự bệnh vàng rụng Xác định diện nấm C cassiicola theo Ellis (1971) Xác định khả lây nhiễm chéo nấm C cassiicola loại ký chủ khác Lây nhiễm nguồn nấm ký chủ dịch bào tử 105 bào tử/ml có bổ sung Tween 20 Bảy ngày sau lây nhiễm tiến hành đánh giá mức độ biểu bệnh theo phương pháp Onesirosan et al.,1974 2.4.3 Nghiên cứu diễn biến, ảnh hưởng yếu tố sinh thái (giống, tuổi cây, đất đai) đến phát sinh phát triển bệnh vàng rụng cao su - Điều tra diễn biến, yếu tố sinh thái ảnh hưởng đến bệnh vàng rụng cao su theo phương pháp BVTV I Đặng Vũ Thị Thanh, Hà Minh Trung (1997) 11 3.1.3 Kết lây bệnh nhân tạo Kết lây bệnh cho thấy sau 2-5 ngày cao su xuất triệu chứng đốm xương cá, đen gân, vàng Sau ngày dịng vơ tính RRIV có bị rụng Các mẫu bị bệnh thu thí nghiệm tái phân lập nấm C cassiicola 3.1.4 Xác định loài nấm gây bệnh vàng rụng cao su 3.1.4.1 Đặc điểm hình thái nấm C cassiicola Trên mơi trường PDA, ban đầu tản nấm có màu trắng sau chuyển màu xám nhạt đến nâu, có dạng vòng tròn đồng tâm Sau ngày tản nấm mọc kín đĩa petri Sợi nấm có màu nâu đến nâu đậm, mọc mịn bề mặt môi trường Sợi nấm phân nhánh có vách ngăn Cành bào tử sinh trực tiếp từ sợi nấm bề mặt môi trường, cành bào tử đơn lẻ hay thành cụm, thẳng cong, cành khúc khuỷu, đa bào, cành khơng có màu hay có màu nâu nhạt Bào tử đơn lẻ mọc thành chuỗi Bào tử có dạng hình trụ đầu to, đầu thon dần, thẳng, cong, màu nâu nhạt có từ 1-10 vách ngăn, với hilum Kích thước bào tử mơi trường PDA biến động từ 40,66 - 54,34 x 5,97 -7,78 µm Căn vào đặc điểm ni cấy hình thái nấm từ mẫu phân lập xác đinh nấm gây bệnh vàng rụng cao su C cassiicola Những đặc điểm phù hợp với mô tả Ellis Holliday (1971) Chee (1988) A B C D Hình 3.4 Đặc điểm hình thái nấm C cassiicola môi trƣờng nhân tạo (A) Tản nấm; (B) Cành bào tử; (C) bào tử đơn; (D) Bào tử chuỗi đính với bới Hilum (Nguồn: Nguyễn Thị Bích Ngọc, năm 2012) 3.1.4.2 Định danh nấm C cassiicola phân lập cao su kỹ thuật PCR Giải trình tự vùng ITS Hai mồi ITS4 ITS5 (White et al., 1990) sử dụng để nhân toàn vùng ITS 10 mẫu nấm Corynespora phân lập từ cao su bị bệnh vàng rụng 12 thu Bình Phước (6 mẫu), Đồng Nai (3 mẫu) Quảng Bình (1 mẫu) Tất 10 mẫu có chất lượng trình tự tốt Đoạn đọc 10 mẫu chứa vùng ITS ITS cần cho phân tích trình tự Mười mã trình tự đăng ký ngân hàng gen với kí hiệu từ MF974861 đến MF974870 Tìm kiếm trình tự tương đồng thực phần mềm tìm kiếm trực tuyến (Blast search) dùng trình tự đoạn ITS làm chuỗi hỏi (query) Kết tìm kiếm cho thấy tất 10 mẫu nấm Corynespora cassiicola với mức đồng trình tự tìm kiếm Blas từ 97-99% Hình 3.5 PCR nhân vùng ITS cặp mồi ITS4 ITS5 10 mẫu Corynespora phân lập cao su M thang DNA kb (Generuler kb, Fermentas) với băng tham khảo 500 bp mũi tên Thứ tự giếng từ đến 10 mẫu nấm từ Corynes đến Corynes 10 Bảng 3.6 Giải trình tự tìm kiếm chuỗi gần gũi Ngân Hàng Gen (GenBank) TT Mã trình tự Mẫu 14A7ZAA049 Corynes 14A7ZAA050 14A7ZAA051 14A7ZAA052 14A7ZAA053 14A7ZAA054 14A7ZAA055 Corynes Corynes Corynes Corynes Corynes Corynes 14A7ZAA056 14A7ZAA057 10 14A7ZAA058 Corynes Corynes Corynes 10 Triệu chứng Đốm xương cá Đen gân Đốm tròn Đốm tròn Đốm tròn Đốm tròn Đốm xương cá Đen gân Đen gân Đốm xương cá Địa điểm thu thập Đồng Xoài, BP Hớn Quản, BP Bù Gia Mập, BP Đồng Phú, BP Đồng Xoài, BP Đồng Xoài, BP Long Thành, ĐN Xuân Lộc, ĐN Cẩm Mỹ, ĐN Quảng Bình Đoạn đọc đƣợc (nucleotide) 508 520 520 520 520 520 520 520 520 520 Loài xác định Corynespora cassiicola Mã đ ng ký GenBank MF974861 Corynespora cassiicola Corynespora cassiicola Corynespora cassiicola Corynespora cassiicola Corynespora cassiicola Corynespora cassiicola MF974862 Corynespora cassiicola Corynespora cassiicola Corynespora cassiicola MF974868 MF974863 MF974864 MF974865 MF974866 MF974867 MF974869 MF974870 13 3.3 Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái nấm C.cassiicola 3.3.1.Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy Mơi trường PDA, PSA, thích hợp cho phát triển sợi nấm, cho khả tạo bào tử tốt từ 1,83-1,93 x 106 bào tử/ml Các kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Chee (1988), Manju (2011c) 3.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ Ngưỡng nhiệt độ 25°C - 30°C nấm phát triển sinh bào tử tốt Sau ngày ni cấy tản nấm đạt đường kính lớn từ: 7,2 – 7,3 cm, sau ngày nuôi cấy đường kính tản nấm đạt 8,7 – 8,8 cm Kết phù hợp với nghiên cứu Manju, 2011c, nấm phát triển sinh bào tử tốt khoảng nhiệt độ từ 25 đến 30oC 3.3.3 Ảnh hưởng độ pH Nấm C cassiicola phát triển thích hợp mức pH từ 6,0 – 7,0, sau ngày ni cấy đường kính tản nấm đạt từ 8,4 – 8,7 cm Nấm C cassiicola phát triển sinh bào tử tốt pH môi trường 6,5; mật độ bào tử đạt 2,67 x 10 bào tử/ml 3.3.4 Ảnh hưởng chế độ chiếu sáng Trong điều kiện sáng tối xen kẽ chiếu sáng liên tục nấm phát triển sinh bào tử tốt so với điều kiện tối liên tục Trong điều kiện sáng liên tục nấm phát triển tốt nhất, đường kính tản nấm ở ngày sau cấy 8,9cm, mật độ bào tử đạt 2,3 x 106 bào tử/ml 3.3.5 Khả nảy mầm bào tử nấm C.cassiicola Trong điều kiện ẩm độ cao (>90%) sau 1,5h bào tử bắt đầu nảy mầm Sau 7,50 h hầu hết mẫu nấm có bào tử mầm cao dao động khoảng 90,56 – 94,00% ng mầm mọc hay hai đầu bào tử Kết nghiên cứu Fernando et al (2012) cho thấy nấm C cassiicola có khả sinh bào tử nhiều sau nuôi cấy 12 ngày, nhiệt độ thích hợp 15-35oC, bào tử sản sinh ống mầm hai đầu bào tử 3.3.6 Khả xâm nhiễm nấm C cassiicola cao su điều kiện in vitro 3.3.6.1 Khả xâm nhiễm nấm C cassiicola tuổi khác Nghiên cứu khả xâm nhiễm nấm C cassiicola tuổi cao su khác cho thấy khả xâm nhiễm gây bệnh nấm C cassiicola phụ thuộc vào tuổi lá: (i) Lá, chồi non mẫn cảm với xâm nhiễm nấm C cassiicola.; (ii) Thời gian tiềm dục bệnh phụ thuộc vào tuổi chồi Lá chồi non triệu chứng bệnh xuất sớm Lá non giai đoạn nhú chân chim hay màu đồng có thời gian tiềm dục ngắn nhất, biểu triệu chứng mức độ rụng nặng (+++), TLB đạt từ 83,25 – 100%, giai đoạn màu xanh nhạt mức độ rụng trung bình (++), giai đoạn thành thục không gây rụng (Bảng 3.14) 14 Bảng 3.14 Khả n ng xâm nhiễm gây bệnh nấm C cassiicola cao su độ tuổi khác (Viện BVTV, 2013) Tuổi Lá non nhú chân chim (< ngày tuổi) Lá non màu đồng( – 10 ngày tuổi) Lá non màu xanh nhạt (10 - 15 ngày tuổi) Lá thành thục (> 15 ngày tuổi) Đối chứng (phun nước cất khử trùng) Thời gian tiềm dục ngày 2- ngày 3-4 ngày 4-5 ngày Triệu chứng Gân chính, gân phụ bị đen Các vết đốm hình trịn khơng định hình, rụng Gân chính, gân phụ bị đen xuất Vết đốm nhỏ lá, có quầng vàng rụng Vết đốm hình trịn khơng định hình có quầng vàng, rụng Vết đốm nhỏ có quầng vàng, khơng rụng Khơng xuất vết bệnh TLB (%) 100,0 CSB (%) 73,0 83,25 44,5 52,5 30,4 32,5 14,2 - - Do chương trình quản lý bệnh vàng rụng cao su nên áp dụng vào thời điểm trở lại Khoảng 85% số bảo vệ thuốc BVTV thời gian thay khỏe mạnh đến cuối năm Số lần phun thuốc giảm (Fernando, 2010) 3.3.6.1 Quá trình xâm nhiễm nấm C cassiicola cao su Kết cho thấy lớp tế bào bề mặt vết lây nhiễm có xuất sợi nấm Bào tử nảy mầm tạo giác bám khoảng 4-6h sau lây nhiễm, sau xâm nhiễm vào bề mặt thơng qua vết thương; sản sinh sợi nấm 48-50h; sau tạo bào tử 72-96h (Hình 3.9) Hình 3.9 Bào tử nảy mầm xâm nhiễm vào mô cao su (Nguồn: Nguyễn Thị Bích Ngọc, năm 2015) 15 3.3.7 Sự tồn nấm C cassiicola 3.3.7.1 Sự tồn nấm C cassiicola tàn dư rụng Cây cao su có q trình rụng tự nhiên từ tháng đến tháng hàng năm Bình Phước Sự tồn nấm C cassiicola rụng đánh giá thời điểm 1, 3, 6, 9, 12,15 18 tháng sau rụng (Bảng 3.15, Hình 3.11) Bảng 3.15 Khả n ng tồn nấm C cassiicola tàn dƣ bệnh (Viện Bảo vệ thực vật, 2012-2013) Thời gian sau Tỷ lệ nấm C cassiicola Phát triển nấm phân lập đƣợc (%) môi trƣờng PDA2 rụng (tháng) 1 74,5 +++ 61,2 +++ 54,3 +++ 35,2 ++ 12 23,1 + 15 0,0 18 0,0 (1) Ghi : Nấm phân lập môi trường PDA sau ngày theo dõi (2) +++ Nấm phát triển tốt, số lượng bào tử/quang trường từ 11 – 20 ++ Phát triển bình thường, số lượng bào tử/quang trường từ – 10 + Phát triển kém, số lượng bào tử/quang trường từ – - Khơng phát triển TT Hình 3.11 Nấm C cassiicola phân lập từ mẫu rụng tháng (Nguồn: Nguyễn Thị Bích Ngọc, năm 2012) Từ cao su rụng sau tháng, có 74,5% có triệu chứng phân lập nấm C cassiicola Mười hai tháng sau rụng phân lập nấm C cassiicola với tỷ lệ mẫu phân lập nấm đạt 23,1% Sau 15 đến 18 tháng không thấy diện nấm C cassiicola mẫu rụng phân lập Kết tương tự nghiên cứu tác giả Kingsland (1985) Lee et al (2013), nấm C cassiicola phân lập từ xác hữu xác định nguồn bệnh cho vụ 3.3.7.2 Khả tạo hậu bào tử nấm C cassiicola Trong 12 mẫu phân lập nấm C cassiicola phân tích, có mẫu ghi nhận hình thành hậu bào tử trng điều kiện in vitro có mẫu phân lập từ cao 16 su mẫu phân lập từ ký chủ cà chua, đậu tương sắn Bào tử hậu hình thành từ dạng: tạo từ đầu sợi nấm sợi nấm (Hình 3.12) Ricardo (2012) ghi nhận có kiểu hình thành hậu bào tử: đầu sợi nấm, sợi nấm hình thành dạng chuỗi tới hậu bào tử Mặc dù C cassiicola tác nhân lây nhiễm khơng khí tới phận cây, việc ghi nhận hậu bào tử nấm khẳng định nấm tồn điều kiện bất thuận ký chủ A B E F C D G H Hình 3.12 Hậu bào tử tạo từ mẫu phân lập cao su A Dòng DK4; B Dòng RRIV4; C Dòng RRIV5; D Dòng PB 260; E Dòng R 107; F Dòng LH G Cà chua; H: Sắn ((Nguồn: Nguyễn Thị Bích Ngọc, năm 2015) 3.3.8 Ký chủ nấm C cassiicola khả gây bệnh nguồn nấm C cassiicola ký chủ khác 3.3.8.1 Điều tra ký chủ nấm C cassiicola Đã ghi nhận nấm C cassiicola xâm nhiễm gây bệnh 15 loại ký chủ khác điều kiện tự nhiên Trong 12 lần phát Việt Nam dưa chuột, đậu đũa, đậu tương, cà tím, sắn, xoài, hồ tiêu, cà phê Đặc biệt nấm C cassiicola gây bệnh sắn (Manihot esculenta), trồng xen phổ biến vườn cao su tiểu điền giai đoạn kiến thiết Bảng 3.17 Danh sách ký chủ đƣợc phát nấm C cassiicola (2012 – 2016) STT Tên tiếng Việt Cà chua Dưa chuột* Cà tím* Đậu dải* Đu đủ Đậu tương* Cao su thực sinh Sắn* Tên ký chủ Tên khoa học Lycopersicum esculentum Mill Cucumis sativus L Solanum melongena L Vigna sinensis (Linn.) Endl ex Hassk Carica papaya Linn Glycine max (Linn.) Merr Hevea brasiliensis (Willd Ex A Juss.) Muell Arg Manihot esculenta Crantz Bộ phận bị hại Lá thân Lá Lá Lá Lá Lá Lá Lá 17 Xoài* Mangifera indica 10 Ớt* Capsicum annum Linn 11 Dây sữa bò* Streptocaulon juventas Merr 12 Cẩm tú cầu* (Hydrangea macrophylla 13 Mướp đắng* Momordica charantia L 14 Hồ tiêu* Piper nigrum Linn 15 Cà phê* Coffea arabica L Ghi chú: Ký chủ phát hiện* Lá Lá Lá Lá Lá Lá Lá 3.3.8.2 Khả gây bệnh nguồn nấm C cassiicola số ký chủ Nguồn nấm C cassiicola phân lập từ cao su, sắn, xoài, đu đủ, đậu tương cà chua lây chéo cho Tuy nhiên mức độ biểu triệu chứng khác phụ thuộc vào loại ký chủ nguồn nấm Tất nguồn nấm dùng nghiên cứu không lây nhiễm điều Kết nghiên cứu nguồn nấm C cassiicola từ ký chủ lây nhiễm sang cao su, từ giúp xác định việc lựa chọn sử dụng trồng xen vườn cao su, gặp điều kiện thuận lợi, việc lây nhiễm chéo xảy ký chủ dẫn đến phát sinh dịch bệnh 3.4 Diễn biến gây hại yếu tố ảnh hƣởng đến phát sinh, phát triển bệnh vàng rụng cao su đồng ruộng 3.4.1 Diễn biến gây hại bệnh vàng rụng cao su C cassiicola Bình Phước Kết điều tra năm 2012, 2013 Bình Phước cho thấy nấm C cassiicola tồn cao su suốt năm Vào tháng đến tháng tháng cao su thay mới, thời điểm ẩm độ lượng mưa thấp nên không ghi nhận triệu chứng bệnh VRL, có vết bệnh cũ tồn từ năm trước Trên non chủ yếu xuất bệnh phấn trắng Sự nhiễm bệnh VRL quan sát thấy sau mọc trở lại vào tháng Bệnh VRL bắt đầu tăng dần vào tháng 5, đạt đỉnh cao vào tháng 9, 10 lượng mưa trung bình/ tháng đạt 294 – 674 mm, độ ẩm khơng khí vào khoảng 83 – 88%, tỷ lệ bệnh số bệnh tương ứng Bình Phước 55,1 - 57,2%; 20,2 - 21,6% Bệnh vàng rụng có xu hướng giảm vào tháng 11, 12 năm Năm 2013 mức độ bệnh giảm so với năm 2012 18 Hình 3.17 Diễn biến bệnh vàng rụng cao su Bình Phƣớc n m 2012 -2013 Các số liệu khí hậu địa phương cho thấy có mối tương quan thuận chặt với điều kiện ẩm độ tương quan trung bình với lượng mưa tới phát sinh phát triển bệnh vàng rụng cao su (Hình 3.19 & 3.20) Hình 3.19 Tƣơng quan TLB ẩm độ Bình Phƣớc Hình 3.20 Tƣơng quan TLB lƣợng mƣa Bình Phƣớc * Ghi chú: Hệ số tương quan r đo mức độ quan hệ biến X Y quan hệ tuyến tính (trong đ ẩm độ.lượng mưa biến X tỷ lệ bệnh biến Y ): Trị tuyệt đối r > 0.8 tương quan mạnh trị tuyệt đối r = 0.4 - 0.8 tương quan trung bình trị tuyệt đối r < 0.4 tương quan yếu R nằm khoảng {0.1} tương quan tuyến tính thuận R nằm khoảng {-1.0} tương quan tuyến tính nghịch 3.4.2 Ảnh hưởng giống đến phát sinh gây hại bệnh vàng rụng Giống RRIV 4, RRIV 2, RRIV giống nhiễm, giống PB 260 nhiễm nhẹ Các giống PB235, PB 255, ĐK4 giống kháng với bệnh vàng rụng TLB (%) CSB(%) giống RRIV4 đạt tương ứng từ 51,2% 31,4% giống ĐK4 TLB(%) CSB(%) đạt tương ứng 7,5% 2,3% 3.4.3 Ảnh hưởng tuổi đến bệnh vàng rụng cao su Cây cao su thời điểm tuổi bệnh gây hại nhẹ TLB từ 10,1 – 18,7% , CSB (%) từ 2,2 – 7,4% dòng RRIV4, dòng PB260 TLB từ 8,4 – 14,6% CSB từ 1,6 – 5,3% Bệnh gây hại nặng cao su bước vào khai thác, thời kỳ giao tán, tán cao, dụng cụ phun rải chưa đủ chiều cao để phòng trừ bệnh nguồn bệnh khơng phịng trừ triệt để, tỷ lệ bệnh số bệnh tương ứng 59,8% 34,1% dòng RRIV4 42,6% 23,7% dòng PB 260 Mặt khác kỹ thuật cạo mủ chế độ cạo dày, mở miệng cạo sớm vườn chưa đủ tiêu chuẩn đưa vào khai thác (cây đủ tiêu chuẩn đưa vào khai thác chu vi vòng thân đo cách mặt đất 1m phải đạt từ 50cm trở lên; độ dày vỏ đạt 6mm) nguyên nhân làm cho vườn sinh trưởng phát triển kém, tăng khả nhiễm bệnh giảm tuổi thọ vườn 19 3.4.4 Ảnh hưởng điều kiện đất trồng đến bệnh vàng rụng cao su Bệnh ghi nhận nặng cao su trồng đất xám hai dòng RRIV4 PB260 Trên đất xám mật độ cao su trồng dày hơn, vườn cao su thơng thống tạo điều kiện thuận lợi cho bệnh phát triển, mặt khác theo kết phân tích trạng đất trồng tỉnh Bình Phước, đất xám có hàm lượng chất hữu thấp, độ chua cao, sinh trưởng hơn, khả nhiễm bệnh tăng 3.5 Nghiên cứu biện pháp quản lý bệnh vàng rụng cao su 3.5.1 Khả chống chịu dòng/ giống cao su bệnh vàng rụng vườn ươm Kết điều tra cho thấy, giống cao su danh sách khuyến cáo trồng sản xuất từ năm 2010-2015 mức kháng trung bình đến kháng bệnh vàng rụng Chỉ có dvt PB 260 nhiễm nhẹ điều kiện vườn ươm 3.5.2 Nghiên cứu ảnh hưởng biện pháp canh tác đến bệnh vàng rụng cao su 3.5.2.1 Biện pháp thu dọn tàn dư, vệ sinh đồng ruộng Thu gom tàn dư rụng, cành khô chết, cao su thực sinh làm giảm nguồn bệnh ban đầu, giảm tỷ lệ bệnh số bệnh vàng rụng so với đối chứng không áp dụng Sau tháng công thức thu gom xử lý tàn dư tỷ lệ bệnh số bênh giảm so với đối chứng, hiệu phòng trừ bệnh năm 2013 đạt 37,15% năm 2014 đạt 36,86% (Bảng 3.25) Bảng 3.25 Hiệu biện pháp thu dọn tàn dƣ đến mức độ bệnh vàng rụng cao su Bình Phƣớc (n m 2013 - 2014) Công thức CT CT TXL TLB CSB (%) (%) 13,20 3,25 13,48 3,37 Ghi chú: N m 2013 Sau xử lý 120 ngày TLB CSB HQPT (%) (%) (%) 16,77 7,14 37,15 24,12 11,78 - TXL TLB CSB (%) (%) 10,4 3,10 11,56 3,24 N m 2014 Sau xử lý 120 ngày TLB CSB HQPT (%) (%) (%) 14,56 5,24 36,86 22,17 9,23 - - CT Vệ sinh vườn,thu gom rụng, cao su thực sinh - CT Đối chứng không áp dụng - TXL trước xử lý 3.5.2.2 Hiệu biện pháp b n phân đến bệnh vàng rụng cao su Các cơng thức bón phân theo khuyến cáo tập đồn cao su có hiệu phịng trừ bệnh tăng từ 21,7 - 30,2% so với cách bón nông dân Nấm C.cassiicola thường xâm nhiễm giai đoạn non, bón phân cân đối có bổ sung phân chuồng giúp cho khỏe hơn, xanh, tán dày làm tăng khả quang hợp làm tăng khả chống chịu với bệnh VRL Hơn nữa, bón phân cân đối cịn giúp nâng cao suất mủ cao su Kết Bình Phước cho suất trung bình 0,162kg/cây/ lần cạo (CT3), cao so với công thức đối chứng 20 3.5.3 Nghiên cứu ứng dụng biện pháp sinh học phòng trừ bệnh vàng rụng cao su 3.5.3.1 Khả đối kháng nguồn vi khuẩn, xạ khuẩn nấm C cassiicola Cả dòng vi khuẩn, xạ khuẩn tham gia thí nghiệm bao gồm nguồn vi khuẩn Bacillus sp.(TS1, TS2, LH G2.8), nguồn vi khuẩn B subtilis xạ khuẩn Steptomycetes phân lập từ đất trồng cao su, hồ tiêu, cà phê sẵn có mơn Bệnh có khả đối kháng từ tới tốt với nấm Corynespora cassiicola, đường kính vịng vơ khuẩn cơng thức biến động khoảng 8,17 – 22,80mm Trong dịng TS1 mức độ đối kháng cao nhất, vịng vơ khuẩn đạt 22,80mm, hiệu ức chế cao đạt 58,01% (Bảng 3.27, hình 3.26) Hình 3.25 Khả n ng đối kháng nấm C cassiicola chủng vsv (Nguồn: Nguyễn Thị Bích Ngọc, năm 2015) 21 Kết nghiên cứu triển vọng ứng dụng nguồn vi khuẩn đối kháng tuyển chọn để phòng trừ bệnh vàng rụng cao su nấm C cassiicola gây 3.5.3.2 Khả đối kháng nấm C cassiicola nguồn nấm Trichoderma sp nguồn Trichoderma sp tuyển chọn nguồn nấm Trichoderma harzianum Trichoderma viride Bộ mơn bệnh có hiệu ức chế nấm cao từ 79,07 - 100% điều kiện invitro Ở ngày sau cấy, tản nấm C cassiicola có đường kính lớn 1,8 cm Đặc biệt tản nấm T hazianum phủ hoàn tồn tản nấm C cassiicola A B C Hình 3.26 Khả n ng đối kháng nấm C cassiicola Trichoderma sp A: nấm T harzianum; B: nấm T viride ; C: nấm Trichoderma sp (Nguồn: Nguyễn Thị Bích Ngọc, năm 2014) 3.5.3.3 Hiệu chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma đến khả hạn chế nguồn nấm C cassiicola tồn tàn dư cao su Thí nghiệm nhà lưới Trong liều lượng thí nghiệm 0,15; 0,20; 0,25g/chậu liều lượng xử lý 0,25 g/chậu có hiệu giảm nguồn bệnh cao (63,2%) so sánh với hai liều lượng 0,15 0,20 g/chậu (43,4 53,3%) Sau tháng xử lý, tỉ lệ mẫu nấm phân lập liều lượng 10,3; 8,5 6,7%, thấp có ý nghĩa với công thức đối chứng (tỉ lệ mẫu nấm phân lập sau tháng 18,2%) Thí nghiệm vườn cao su Sau xử lý tháng, tỉ lệ mẫu phân lập nấm C cassiicola công thức liều lượng phun 15 kg 20 kg/ha 22,3 15,9%, thấp có ý nghĩa so với công thức đối chứng (29,6%) Sau tháng, tỉ lệ 6,7 5,9% Hiệu giảm nguồn bệnh lớp cao su rụng sau tháng xử lý chế phẩm liều lượng thí nghiệm 10, 15 20 kg 38,51; 54,72 60,01% 3.5.4 Hiệu lực số loại thuốc BVTV bệnh vàng rụng cao su 3.5.4.1 Hiệu lực phòng trừ nấm C cassiicola số loại thuốc BVTV điều kiện in vitro Trong số 17 hoạt chất thí nghiệm có Carbendazim, Mancozeb Mancozeb + Metalaxyl ức chế hồn toàn phát triển nấm tất nồng độ thí nghiệm Các hoạt chất propineb (Antracol 70WP); Hexaconazole (Anvil 5SC), Defenoconazole + Azoxystrobin (Amistar Top 325SC); Propiconazole + 22 Defenoconazole (Tilt Super 300EC), Thiophanate methyl (Topxin M 70WP) cho hiệu ức chế từ 82,5 – 96,25% nồng độ 0,2% Thuốc Zineb Bull 80WP cho hiệu ức chế 42,6% Vidoc 80WP đạt 28,4% Hình 3.28 Hiệu ức chế nấm C cassiicola số thuốc BVTV nồng độ khác (Nguồn: Nguyễn Thị Bích Ngọc, năm 2012) 3.5.4.2 Hiệu lực số loại thuốc BVTV bệnh vàng rụng vườn ươm Kết cho thấy Amistar Top 325SC 0,2%; Hexaconazole + Carbendazim (Anvil 5SC 0,1% + Carban 50SC 0,1%) Carbendazim + Mancozeb (Carban 50SC 0,2% + Dithan M 80WP 0,2%) có CSB sau phun 14 ngày đạt từ 3,18 – 3,78% Hiệu phòng trừ bệnh đạt từ 65,39 – 76,54%, Copper Oxychloride có hiệu đạt 25,19% 14 ngày sau phun 3.5.4.3 Hiệu lực số loại thuốc BVTV bệnh vàng rụng vườn cao su kinh doanh Hỗn hợp Defenoconazole + Azoxystrobin cho hiệu phòng trừ bệnh vàng rụng tốt (73,2%), hỗn hợp Hexaconazole + Carbendazim Propiconazole + Carbendazim (Carban 50SC 0,1% + Tilt Super 300EC 0,1%) cho hiệu tương đương 69,8 – 71,8%, hoạt chất Carbendazim (Carban 50SC) có hiệu phịng trừ đạt 66,4%, hiệu thấp từ 59,0 – 60,4% hoạt chất Hexaconazole Propiconazole + Defenoconazole Hiệu phòng trừ nhất, đạt 56,5% hoạt chất Mancozeb (Dithan 80WP 0,2%) 3.5.4.4 Hiệu thời điểm xử lý thuốc h a BVTV thích hợp bệnh vàng rụng cao su Hiệu cao phun thuốc phịng bệnh đợt: Giai đoạn hình thành non (Tháng 2,3) thời điểm đầu mùa mưa (Tháng 5,6) Phun thuốc vào thời điểm giúp bảo vệ có tán dày, xanh hạn chế tác hại bệnh phấn trắng mà hạn chế gây hại bệnh vàng rụng lá, giảm số lần phun thuốc giai đoạn mùa mưa, cho hiệu phòng trừ cao đạt 78,39% Bình Phước 3.5.4.5 Hiệu cơng cụ phun rải thuốc h a BVTV đến hiệu giảm bệnh vàng rụng cao su Sử dụng máy phun thuốc BVTV có cải tiến hệ thống vịi phun phận điều khiển tự động đưa thuốc lên phần làm tăng hiệu phòng trừ bệnh, TLB(%) CSB(%) 18,33 6,18%, hiệu phòng trừ đạt: 73,5% 21 ngày sau phun 23 3.5.5 Kết mơ hình quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng cao su Bình Phước 3.5.5.1 Kết phân tích nấm C cassiicola rụng mơ hình Sử dụng chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma để xử lý nguồn cao su rụng làm giảm đáng kể nguồn bệnh tồn đồng ruộng, hiệu sau tháng đạt 53,1% 3.5.5.2 Đánh giá hiệu phòng trừ bệnh vàng rụng cao su mơ hình QLTH Khi áp dụng đồng biện pháp phòng trừ bệnh vàng rụng vườn mơ hình cho mức độ gây hại bệnh vàng rụng cao su mơ hình thấp hẳn so với đối chứng, hiệu phòng trừ đầu mùa mưa đạt 49,2% Sau tháng (Tháng 9) cho hiệu phòng trừ đạt cao (77,22%) so với vườn ngồi mơ hình 3.5.5.3 Thành phần bệnh hại cao su vườn mơ hình QLTH bệnh vàng rụng Trong mơ hình ghi nhận loại bệnh gây hại mức nhẹ bệnh vàng rụng cao su bệnh phấn trắng gây hại nặng vườn ngồi mơ hình 3.5.5.4 Đánh giá suất mủ cao su mơ hình QLTH bệnh vàng rụng Trong mơ hình QLTH áp dụng biện pháp như: gom tàn dư rụng vào hàng, bón phân cân đối bón bổ sung phân chuồng, sử dụng chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma để hạn chế nguồn bệnh, giúp sinh trưởng tốt, bỗ rễ khỏe hơn, trì tán dày, xanh suất mủ cao su mơ hình tăng lên rõ rệt, hiệu tăng so với vườn ngồi mơ hình đạt 26,3% 3.5.6 Hiệu kinh tế mơ hình quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng cao su Trong mơ hình QLTH bệnh VRL Bình Phước làm giảm số lần phun thuốc BVTV lần mà đảm bảo hiệu cao, hiệu giảm bệnh đạt từ 70 – 80% Chi phí thuốc hóa BVTV cho mơ hình trung bình 5.750.000 đồng, thấp so với ngồi mơ hình 8.700.000 đồng Mơ hình áp dụng số biện pháp canh tác tiên tiến phí cao so với ngồi mơ hình 3,73 triệu đồng biện pháp sinh học cao 3,6 triệu đồng Mơ hình QLTH bệnh vàng rụng cho suất mủ cao su tăng sản xuất đại trà 440,5 kg mủ khô/ha/năm, lãi đạt 58,84 triệu đồng/ha/9 tháng cao so với đại trà đạt 44,208 triệu đồng, thu nhập tăng 33,1% Tán cao su ngồi mơ hình (Tháng 5) Tán cao su mơ hình (Tháng 5) Hình 3.32 Mơ hình quản lý bệnh vàng rụng cao su (Nguồn: Nguyễn Thị Bích Ngọc, năm 2013 ) 24 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Bệnh vàng rụng cao su Bình Phước nấm Corynespora cassiicola (Berk & Curtis) Wei gây Vết bệnh đốm có hình trịn, màu xám đến xám nâu, xung quanh vết bệnh có viền vàng, trung tâm vết bệnh đơi hình thành lỗ thủng vết bệnh sọc màu đen có hình xương cá dọc theo gân 1.2 Nấm phát triển tốt môi trường PDA, PSA khoảng nhiệt độ từ 25 – 30oC, pH từ – 7, chiếu sáng liên tục Sau 72- 96 giờ, điều kiện ẩm độ 100%, nhiệt độ 28oC nấm hồn thành q trình xâm nhiễm gây bệnh cho cao su 10 ngày tuổi Trong điều kiện phịng thí nghiệm nấm C cassiicola có khả hình thành hậu bào tử Hậu bào tử dạng hình cầu, kích thước 13,59 x 13,22 µm, tạo từ đầu sợi nấm 1.3 Nấm C cassiicola có khả tồn tàn dư cao su bệnh đến 12 tháng điều kiện tự nhiên Lá cao su non khả xâm nhập gây bệnh nấm cao Đã ghi nhận thêm 12 loại hệ sinh thái vùng trồng cao su ký chủ nấm C cassiicola Bệnh phát sinh gây hại vườn cao su từ bắt đầu vào tháng tăng dần, đạt đỉnh cao vào tháng 9, tháng 10 Mức độ tác hại bệnh tương quan thuận mức chặt với độ ẩm tương quan thuận mức trung bình với lượng mưa 1.4 Các giống cao su RRIV 4, RRIV 2, RRIV bị bệnh nặng Các giống cao su RRIV 124, RRIV 1, RRIV 5, RRIV 106, RRIV 107, RRIV 109, RRIV 114, PB260, PB255 có khả kháng trung bình kháng với nấm C cassicola Bệnh hại nặng vườn cao su trồng đất chua, nghèo dinh dưỡng vườn cao su nhiều tuổi Bổ sung thêm phân chuồng (10 tấn/ha) tăng 25% kali có hiệu phịng trừ bệnh vàng rụng cao su, suất mủ tươi tăng 34,1% so với đối chứng 1.5 Thu gom xử lý tàn dư bệnh, vệ sinh đồng ruộng làm giảm bệnh từ 36,8637,15% Các chủng vi sinh vật Bacillus sp Trichoderma sp có hiệu ức chế nấm C cassiicola Xử lý tàn dư bệnh vườn cao su chế phẩm Trichoderma Viện Bảo vệ thực vật sản xuất với liều lượng 20kg/ha giảm tới 60,5% nguồn bệnh tồn tàn dư sau tháng Thuốc trừ bệnh chứa hoạt chất Hexaconazole; Propiconazole Defenoconazole + Azoxystrobin có hiệu trừ bệnh từ 69,8 – 73,2% Phun phịng bệnh đợt hình thành non (tháng - tháng 3) vào đầu mùa mưa (tháng tháng 6) máy phun động hạn chế phát sinh, gây hại bệnh 1.6 Ứng dụng quy trình quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng vườn cao su khai thác Bình Phước đem lại hiệu phịng trừ bệnh đạt 77,22%, suất mủ tăng 26,3%, hiệu kinh tế tăng 33,1% Đề nghị 2.1 Tiếp tục nghiên cứu thành phần nòi nấm C cassiicola, tác nhân sinh học chế phẩm sinh học phòng trừ nấm C cassiicola gây bệnh vàng rụng cao su 2.2 Theo Thông tư số 15/2017/TT-BNNPTNT ngày 14/8/2017 Bộ NNPTNT hoạt chất Carbendazim bị loại khỏi Danh mục thuốc BVTV phép sử dụng Việt Nam kể từ ngày 1/10/2017 Vì vậy, thời gian tới Quy trình PTTH bệnh vàng rụng cao su khơng khuyến cáo sử dụng hoạt chất Carbendazim 25 DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Thị Bích Ngọc, Ngơ Vĩnh Viễn, Đoàn Thị Thanh, Phạm Thị Dung, Nguyễn Nam Dương, Đố Duy Hưng, Nguyễn Xuân Hồng (2013), “Nghiên cứu tồn nấm Corynespora cassiicola (Berk.&Curt) Wei gây bệnh vàng rụng cao su Đông Nam Bộ”, Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 6, tr 3642 Nguyễn Thị Bích Ngọc, Ngơ Vĩnh Viễn, Phạm Thị Dung, Nguyễn Nam Dương, Đỗ Duy Hưng, Ngô Thanh Hường (2014), “Nghiên cứu thử nghiệm số biện pháp quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng Corynespora cassiicola (Berk.& Curt) Wei hại cao su”, Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 4, tr 20-27 Nguyễn Thị Bích Ngọc, Ngơ Vĩnh Viễn, Nguyễn Xn Hồng, Hà Viết Cường, Phạm Thị Dung, Lê Mai Nhất, Nguyễn Nam Dương cộng (2015), “Đặc điểm sinh học, sinh thái nấm C cassiicola gây bệnh vàng rụng cao su Đông Nam Bộ”, Kỷ yếu hội thảo quốc gia bệnh hại thực vật Việt nam lần thứ 14, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, tr 62-72 Nguyễn Thị Bích Ngọc, Ngơ Vĩnh Viễn, Đồn Thị Thanh, Phạm Thị Dung, Nguyễn Nam Dương, Đỗ Duy Hưng, Ngô Thị Thanh Hường, Nguyễn Thị Thanh Nga, Phan văn Don, Trần Ngọc Kinh, Nguyễn Cơng Tú (2016), “Quy trình quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng cao su (Corynespora cassiicola) cho vùng Đơng Nam Bộ”, Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 3, tr 47-50 Nguyễn Thị Bích Ngọc, Phạm Thị Dung, Lê Mai Nhất, Nguyễn Nam Dương, Đỗ Duy Hưng, Ngô Thanh Hường (2016), “Tuyển chọn vi sinh vật đối kháng nấm C cassiicola gây bệnh vàng rụng cao su”, Hội thảo quốc gia khoa học trồng lần thứ hai, Cần Thơ, tr 941-947 ... phát triển bệnh vàng rụng cao su + Nghiên cứu biện pháp quản lý tổng hợp bệnh vàng rụng cao su Bình Phước 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu Địa điểm nghiên cứu - Phịng thí nghiệm Bộ mơn Bệnh – Viện... đặc điểm sinh học, tồn tại, lây lan biện pháp phòng trừ Đề tài ? ?Nghiên cứu bệnh vàng rụng cao su Corynespora cassiicola (Bert & Curt.) Wei biện pháp quản lý tổng hợp Bình Phước? ?? thực nhằm xây dựng... canh tác bệnh vàng rụng cao su - Đánh giá hiệu biện pháp thu dọn tàn dư đồng ruộng đến bệnh vàng rụng cao su - Đánh giá ảnh hưởng phân b n bệnh vàng rụng cao su Theo phương pháp nghiên cứu Bảo vệ