Natri valproate (NV) là một loại thuốc chống động kinh chính và phổ biến. Tuy nhiên, có mối quan ngại ngày càng tăng về các tác động của NV đối với chức năng nội tiết sinh sản. Mục tiêu: Đánh giá hiệu quả của NV trên thể trọng của chuột, số lượng và sự vận động của tinh trùng, thay đổi mô học trong tinh hoàn. Phương pháp: Chuột đực Swiss.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CHỨC NĂNG SUY GIẢM SINH DỤC CỦA THUỐC NATRI VALPROATE TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT ĐỰC SWISS ALBINO Trần Thị Thanh Loan*, Nguyễn Lê Việt Hùng*, Bùi Thị Thanh Tâm*, Nguyễn Phương Dung* TÓM TẮT Mở đầu: Natri valproate (NV) loại thuốc chống động kinh phổ biến Tuy nhiên, có mối quan ngại ngày tăng tác động NV chức nội tiết sinh sản Mục tiêu: Đánh giá hiệu NV thể trọng chuột, số lượng vận động tinh trùng, thay đổi mơ học tinh hồn Phương pháp: Chuột đực Swiss albino (6 - tuần tuổi) thử nghiệm NV với liều 100 mg/kg, 250 mg/kg, 500 mg/kg, 750 mg/kg, 1000 mg/kg nước cất Số lượng tinh trùng, khả vận động tinh trùng mơ bệnh học tinh hồn phân tích Kết quả: Số lượng tinh trùng nhu động tinh trùng giảm đáng kể NV Nghiên cứu mô bệnh học cho thấy NV gây sụt giảm tế bào biểu mơ tinh hồn Kết luận: NV gây thay đổi vận động tinh trùng, số lượng tinh trùng, hình thái cấu trúc biểu mơ tinh hồn Từ khóa: Suy giảm sinh dục, natri valproate, tinh trùng ABSTRACT EVALUATING THE EFFICIENCY OF THE NATRI VALPROATE INDUCED BY SEXUAL DYSFUNCTION WITH NATRI VALPROATE IN MALE MICE SWISS ALBINO MODEL Tran Thi Thanh Loan, Nguyen Le Viet Hung, Bui Thi Thanh Tam, Nguyen Phuong Dung * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2018: 86 – 91 Background: Natri valproate (NV) is a major antiepileptic drug with a broad spectrum of antiepileptic activity There is, however, increasing concern about the possible effects of NV on reproductive endocrine function Objective: To assess the effects of NV on mice body weight, sperm count, motility, and histopathological changes in testis Methods: Male Swiss albino mice (6 - week old) were treated with sodium valpraote at 100 mg/kg, 250 mg/kg, 500 mg/kg, 750 mg/kg, and 1000 mg/kg dose and distilled water Epididymal sperm count, sperm motility, and histopathology of testes were analyzed Sperm count and sperm motility were decreased significantly by NV Results: A histopathological study revealed that NV had caused sloughing of epithelial cells in testes Conclusion: NV causes reversible change in sperm motility, sperm count, morphology, and cytoarchitecture of testes Keywords: sexual dysfunction, natri valproate, sperm ĐẶT VẤN ĐỀ Natri valproat (NV) thuốc chống động kinh đa chế, lựa chọn đầu tay cho điều trị thể động kinh(9) Những người bị động kinh có tỷ lệ sinh thấp đáng kể so với cộng đồng rối loạn chức tình dục Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS Trần Thị Thanh Loan 86 ĐT: 0903968810 Email: nnld2001@gmail.com Chuyên Đề Ngoại Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 phổ biến(10) Trên giới có nhiều nghiên cứu chứng minh NV làm suy giảm khả sinh sản nam giới theo hướng tác dụng vào trục đồi tuyến yên(2,5) ảnh hưởng trực tiếp lên tinh hoàn, dẫn đến chất lượng tinh dịch việc tạo mơ hình thử nghiệm gây suy sinh dục chuột nhắt trắng đực tiến hành nhằm tạo bước đệm nghiên cứu, đánh giá tác khả phục hồi bệnh lý suy sinh dục nam giới tiến hành đề tài “Đánh giá ảnh hưởng chức suy giảm sinh dục thuốc NV mơ hình chuột đực swiss albino” Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng mơ hình thực nghiệm gây suy sinh dục chuột nhắt trắng đực NV Đánh giá tác dụng thuốc NV lên chức suy giảm sinh dục chuột đực swiss albino ĐỐITƯỢNG–PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Nghiên cứu Y học chuột qua tiêu: lượng thể, trọng lượng tinh hoàn, số sinh lý, bệnh lý tinh trùng, tiêu mô học lượng hormone testosterone Chia chuột thành lô: lô chứng (L1) gồm uống nước cất lần lô gồm uống NV liều 100 mg/kg (L2), 250 mg/kg (L3), 500 mg/kg (L4), 750 mg/kg (L5), 1000 mg/kg (L6) thể trọng chuột (Bảng 1) Chuột thí nghiệm gây ngạt CO2, tiến hành giải phẫu, thu nhận máu tim tinh hoàn ống dẫn tinh Bảng 1: Thiết kế mơ hình thí nghiệm dùng thuốc NV Lô chuột (n=6) Lô (Lô chứng) Lô Lô Lô Lô Lô Liều (10 ml/kg) Nước cất NV 100 mg/kg NV 250 mg/kg NV 500 mg/kg NV 750 mg/kg NV 1000 mg/kg Phương tiện nghiên cứu Qui trình đánh giá chất lượng tinh trùng Đối tượng nghiên cứu NV 500 mg hay gọi Depakine chrono 500 mg (Sanofi, Pháp) Ống dẫn tinh sau giải phẫu, rửa PBS để 250 μl dung dịch Ferticult Flushing Medium (Fertipro – Bỉ), tách mô ống dẫn tinh kẹp để thu nhận tinh trùng Tinh trùng sau thu nhận tiến hành đánh giá tiêu chí tinh trùng vòng Động vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng đực chủng Swiss albino viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh cung cấp Chuột thí nghiệm khoảng 6-7 tuần tuổi có khối lượng 30 ± 2,0g/con nuôi ổn định nhiệt độ 25 C, chu kỳ 12 sáng – tối, chuột cung cấp dinh dưỡng theo tiêu chuẩn dành cho động vật thí nghiệm Thiết kế nghiên cứu Thực nghiệm, so sánh lô Phương pháp nghiên cứu Xây dựng mơ hình suy sinh dục Liều NV khảo sát đường uống chuột sau ổn định tuần Chuột uống theo liều 10ml/kg, ngày lần vào 8g sáng Khảo sát liên tục trong vòng 35 ngày Sau kết thúc quy trình xử lí thuốc, tiến hành đánh giá hiệu suy giảm sinh dục Chuyên Đề Ngoại Khoa Phương pháp xác định độ di động tinh trùng Hút 10 μl mẫu tinh dịch trãi lame quan sát khả di động tinh trùng kính hiển vi độ phóng đại x40 [40] theo tiêu chí đánh giá là: tinh trùng di động (tinh trùng vận động thẳng tiến tới tinh trùng vận động chỗ), tinh trùng bất động (tinh trùng nằm im, không vận động) Phương pháp xác định mật độ tinh trùng Tinh dịch pha loãng với dung dịch NaHCO3 0,5% Hút 10 μl dung dịch tinh dịch pha loãng bơm vào bên buồng đếm hồng cầu có tráng bạc Số lượng tinh trùng đánh giá buồng đếm hồng cầu kính hiển vi độ phóng đại 40X Tính tổng số hiệu số tinh trùng lần đếm Cơng thức tính mật độ tinh trùng(8): 87 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học C= D Trong đó: C: Mật độ tinh trùng, đơn vị (triệu con/mL) D: Độ pha loãng tinh dịch N: Số tinh trùng đếm buồng đếm n: Thể tích tổng số hàng khảo sát cho lần khảo sát (thể tích tinh dịch nạp vào buồng đếm 10 μl) Phương pháp xác định tỉ lệ sống chết tinh trùng(8) Đánh giá tỉ lệ tinh trùng sống/chết, dị dạng mẫu tinh dịch phương pháp nhuộm Eosin – Nigrosin Trong mẫu nhuộm, tinh trùng sống có đầu sáng, trắng khơng bắt màu; tinh trùng chết có đầu bắt màu hồng tím thuốc nhuộm Phương pháp mơ học tinh hồn(1) Sử dụng kỹ thuật nhuộm Hematoyline– Eosin (HE) để đánh giá hình thái tinh hồn Tinh hồn sau phẫu thuật, nguyên vỏ bao, cố định dung dịch Neutral buffered formalin 10% (NBF) Sau cố định 24h, tinh hoàn xử lý qua bước: vùi paraffin hệ thống xử lý mô Microm STP120, đúc khối paraffin tạo thành bloc nến chứa mẫu bệnh phẩm, cắt lát bệnh phẩm dày micrimet, trải lam kính, nhuộm HE Xử lý số liệu Xử lý số liệu phần mềm Microsoft Excel 2013, xử lý thống kê dựa vào phép kiểm One–Way ANOVA t-Test: Two-Sample Assuming Unequal Variances Được trình bày dạng số liệu thực nghiệm thể số trung bình (M) ± sai số chuẩn giá trị trung bình (SEM) Kết thử nghiệm đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% P < 0,05 so với lô chứng KẾTQUẢ Ảnh hưởng Natri valproate lên trọng lượng chuột Kết đánh giá ảnh hưởng NV lên thể trọng chuột trước sau cho chuột uống thuốc 35 ngày thể biểu đồ ta thấy thể trọng chuột lô trước thí nghiệm đồng khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) Sau thí nghiệm nhận thấy thể trọng chuột lô 1, 2, 3, tăng; Tuy nhiên, lô (NV 750 mg/kg) lô (NV 1000 mg/kg) thể trọng chuột sau thí nghiệm giảm so với lúc đầu Kết cho thấy thể trọng chuột sau thí nghiệm lô 2, lô 3, lô 4, lô 5, lô đạt ý nghĩa thống kê so với lô đối chứng (lô 1) đạt độ tin cậy đến 95% (Hình 1) Hình Thể trọng chuột trước sau thí nghiệm (g), *P < 0,05 so với lơ (lô chứng) 88 Chuyên Đề Ngoại Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Ảnh hưởng Natri valproate lên khối lượng tinh hoàn NV làm thay đổi trọng lượng kích thước tinh hồn Trọng lượng kích thước tinh hồn giảm dần từ lơ đến lơ Nhưng lô (NV 100 mg/kg) lô (NV 250 mg/kg) không đạt ý nghĩa thống kê so với lô (lô chứng) Lô (NV 500 mg/kg), lô (NV 750 mg/kg), lô (NV 1000 mg/kg) đạt ý ngĩa thống kê so với lô (lơ chứng) đạt độ tin cậy đến 95% (Hình 2) Nghiên cứu Y học triệu 0,14 ± 0,05 (triệu con/mL) (lô 5) Tuy nhiên lô sử dụng liều 1000 mg/kg nhận thấy khơng có tinh trùng Các lô 2, lô 3, lô 4, lô đạt ý nghĩa thống kê so với lô (lô chứng), với độ tin cậy lên đến 99% (Hình 3) Ảnh hưởng Natri valproate lên độ di động tinh trùng Các lô (NV 250 mg/kg), lô (NV 500 mg/kg), lô (NV 750 mg/kg) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng (lô 1) với P < 0,05 đạt độ tin cậy 95% Mặt khác nhận thấy lô (NV 750 mg/kg) tinh trùng hồn tồn khơng di động, điều cho thấy NV ảnh hưởng đến khả di động tinh trùng Khả di động tinh trùng giảm cho chuột uống NV nồng độ cao (Hình 4) Hình Thể trọng tinh hồn ảnh hưởng NV (g), *P