Nghiên cứu tạo chế phẩm Protease từ Bacillus subtilis sử dụng trong chế biến thức ăn gia cầm

Cung cấp sản phẩm enzyme vào chế độ ăn sẽ giúp gia cầm hấp thụ nhiều chất dinh dưỡng, tăng lợi nhuận cho nông dân. Trong một nghiên cứu để tạo ra một sản phẩm protease có thể xúc tác cho gia cầm mà vẫn duy trì hoạt động của nó ở nhiệt độ cao của chế biến viên thức ăn cho gà, chúng tôi thấy rằng trong số 15 chủng Bacillus subtilis, chủng Ba15 có hoạt tính protease cao nhất và ổn định với nhiệt độ cao. Năng suất protease tối đa đã được quan sát thấy trong môi trường bán rắn chứa các thành phần với tỷ lệ 2 dư lượng đậu nành: 8 bột ngô; pH của dung dịch khoáng là 6,8; trong thời gian nuôi cấy 72 giờ. Sản phẩm nhận được từ sản xuất quy mô nhỏ có hoạt động protease 14.16 UI / gr. Protease của sản phẩm có thể xúc tác trong khoảng pH từ 5,8 đến 8,0, phù hợp với giá trị pH ở gia cầm. Sản phẩm xử lý ở nhiệt độ 150oC trong 1 phút, hoạt tính của protease vẫn ở mức 94,3%. Thêm sản phẩm vào viên thức ăn cho gà với tỷ lệ 0,1 - 0,5%, trọng lượng của gà tăng trung bình 25 - 30% so với lô đối chứng sau 7 tuần. Kết quả của nghiên cứu này cho thấy rằng chúng ta có thể tối ưu hóa sản phẩm này để sản xuất viên thức ăn cho gà.

Tạp chí Đại học Thủ Dầu Một, số (11) – 2013 NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM PROTEASE TỪ BACILLUS SUBTILIS SỬ DỤNG TRONG CHẾ BIẾN THỨC ĂN GIA CẦM Trần Ngọc Hùng(1), Lê Phi Nga(2) (1) Trường Đại học Thủ Dầu Một, (2) Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên – Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh TÓM TẮT Việc bổ sung chế phẩm enzyme vào phần ăn giúp cho gia cầm hấp thu tốt thành phần dinh dưỡng, gia tăng lợi nhuận cho người chăn nuôi Trong nghiên cứu nhằm tạo chế phẩm protease hoạt động tốt diều gia cầm giữ hoạt tính với nhiệt độ cao trình ép viên, nhận thấy chủng Ba15 có hoạt tính protease cao bền nhiệt số 15 chủng Bacillus subtilis nghiên cứu Chủng Ba15 sinh tổng hợp protease tốt nuôi cấy môi trường bán rắn có thành phần bã đậu nành: bột bắp; pH dòch khoáng 6,8 thời gian nuôi cấy 72 Chế phẩm thu qui mô sản xuất nhỏ có hoạt tính protease 14,16 UI/g Enzyme protease chế phẩm hoạt động khoảng pH 5,8 – 8,0, phù hợp với điều kiện pH diều gia cầm Khi xử lí chế phẩm nhiệt độ 150oC thời gian phút, hoạt tính protease giữ 94,3% Bổ sung chế phẩm vào thức ăn dạng viên với tỉ lệ từ 0,1 – 0,5 %, sau tuần nuôi, trọng lượng gà ri tăng trung bình từ 25 – 30% so với lô đối chứng Kết nghiên cứu cho thấy sử dụng chế phẩm vào việc sản xuất thức ăn viên cho gia cầm Từ khóa: chế phẩm sinh học, protease, thức ăn viên cho gia cầm, Bacillus subtilis * Giới thiệu Trong chăn nuôi nói chung chăn nuôi gia cầm nói riêng, thức ăn vấn đề quan trọng nhất, đònh trực tiếp đến suất, chất lượng giá thành sản phẩm thòt, trứng, sữa… Hiện nay, việc bổ sung chế phẩm sinh học vào hỗn hợp thức ăn xu hướng mới, nhiều nhà máy chế biến thức ăn gia súc hộ chăn nuôi lựa chọn[4] Các chế phẩm sinh học với nhiều loại enzyme có tác dụng hỗ trợ tiêu hóa cho vật nuôi amylase, protease, phytase… giúp vật nuôi tận dụng tối đa vật chất lượng thức ăn Riêng gia cầm, tỉ lệ protein phần thức ăn phải đảm bảo từ 19-24% [3, 4] Do việc bổ sung chế phẩm có chứa protease vào phần ăn giúp hấp thu protein tốt hơn, nâng cao hiệu kinh tế mà giảm lượng nitơ phân, yếu tố có khả gây ô nhiễm môi trường chăn nuôi Trong số vi sinh vật có khả sinh tổng hợp protease cao, Bacillus subtilis không sinh enzyme khác có tác dụng tốt cho tiêu hóa -amylase, cellulose, phytase, xylanase… mà vi khuẩn có lợi, ức chế vi sinh vật gây bệnh đường ruột gia cầm 29 Journal of Thu Dau Mot University, No (11) – 2013 Thò trường chế phẩm sinh học có hoạt tính protease đa dạng chủng loại chất lượng, chủ yếu cung cấp cho hộ chăn nuôi gia đình, bổ sung vào thức ăn hỗn hợp dạng bột Việc sử dụng chế phẩm sinh học vào qui trình công nghiệp chế biến thức ăn cho gia cầm hạn chế, đặc biệt bổ sung vào thức ăn dạng viên, chế phẩm bò hoạt tính trình nén viên nhiệt độ cao Với mục tiêu chế phẩm sinh học có hoạt tính protease bổ sung vào thức ăn cho gia cầm, chòu nhiệt độ cao máy nén viên hoạt động tốt hệ tiêu hóa gia cầm Chúng tiến hành đề tài: Nghiên cứu tạo chế phẩm protease từ Bacillus subtilis để sử dụng chế biến thức ăn gia cầm dung dòch enzyme vào 2,5ml dung dòch casein 1% đệm phosphate pH 7.6 Ủ 35oC 20 phút Mẫu đối chứng làm ngừng phản ứng ml dung dòch TCA 5% Xác đònh hàm lượng tyrosine dòch cách đo mật độ quang bước sóng 660 nm với thuốc thử folin Một đơn vò hoạt tính (UI) lượng enzyme protease tối thiểu thủy phân Casein thời gian phút tạo thành µmol tyrosine Phương pháp nuôi cấy bán rắn thu nhận chế phẩm có hoạt tính protease Chủng Bacillus subtilis tăng sinh môi trường MT2 48 Cấy dòch tăng sinh vào môi trường bán rắn MT3 cho mật độ giống đạt khoảng 1x107 CFU/g canh trường, trộn đều, giữ nhiệt độ phòng Sau thời gian thích hợp, thu nhận canh Vật liệu – phương pháp trường bán rắn, sấy thông gió nhiệt độ 4550oC Khi canh trường khô, xay nhuyễn bảo quản canh trường dạng bột mòn 2.1 Vật liệu Các chủng vi khuẩn Bacillus subtilis đề tài Chi nhánh công ty TNHH Gia Tường tỉnh Bình Dương cung cấp Phương pháp xác đònh khả chòu nhiệt chế phẩm protease Đối tượng thử nghiệm giống gà ri thu gom từ hộ chăn nuôi đòa bàn huyện Trảng Bom, tỉnh Đồng Nai Sấy dóa petri tủ sấy nhiệt độ khảo sát (120 – 150oC) Khi dóa petri ổn đònh nhiệt độ, trải 5g Môi trường giữ giống (MT1)[1]: glucose 50g; pepton 10g; cao thòt 3g; agar 20g; nước cất vừa đủ lít chế phẩm vào nắp dóa petri dùng đáy nắp dóa petri ép lên mặt chế phẩm Sau thời gian khảo sát, đổ chế phẩm sang dóa petri nguội khác xác đònh Môi trường tăng sinh (MT2)[1]: glucose 35g; pepton 10g; nước giá: 10% vừa đủ lít hoạt tính protease lại chế phẩm phương pháp Anson Môi trường bán rắn thu nhận protease (MT3)[1]: ZnSO4 0.0014g; KH2PO4 0.4g; DAP 0.8g; NaCl 1.44g; CaCO3 2.4g; MgSO4 0.2g; bắp 200g; đậu nành 200g; nước 60% (w/w) Phương pháp khảo sát ảnh hưởng pH lên khả thủy phân enzyme protease chế phẩm 2.2 Phương pháp thí nghiệm Casein hòa tan dung dòch Các phương pháp đònh lượng đệm phosphate có pH khác nhau: 5,6; 5,8; 6,0; 6,2; 6,4; 6,8; 7,0; 7,2; 7,4; 7,6 8,0, với Hoạt tính protease xác đònh theo phương pháp Anson[6] cải tiến: cho 1ml nồng độ cuối 1% (w/v) Chế phẩm 30 Tạp chí Đại học Thủ Dầu Một, số (11) – 2013 li trích enzyme protease pha loãng dung dòch đệm phosphate có pH tạo Mỗi lô thí nghiệm gồm 18 gà con, thả tương ứng với độ pha loãng thích hợp Sau thời gian 30 phút, lọc thu dòch enzyme Tiến Lô 1: Lô đối chứng, thức ăn không bổ tự diện tích khoảng m2 sung chế phẩm Lô 2-5: thức ăn bổ sung chế hành đo hoạt tính protease chế phẩm phẩm với tỉ lệ tương ứng 0,1; 0,5; 1,0; 2,0 % giá trò pH thủy phân khác Thức ăn viên Công ty cám Con Cò cung Phương pháp xác đònh khả hoạt cấp, thành phần thức bao gồm: đạm 20%, động protease chế phẩm với xơ thô 5%, độ ẩm 13%, canxi (0,7 – 1,2) chất thức ăn viên cho gà điều kiện pH phospho 0,5% Hàng tuần, cân khối lượng mô diều gà cá thể lô lượng thức ăn trung bình mà cá thể sử dụng Bổ sung chế phẩm vào thức ăn hỗn hợp dạng viên cho gà với nồng độ 0,1% Phương pháp đánh giá xử lí số liệu Bổ sung vào hỗn hợp dung dòch đệm Các thí nghiệm thực lặp lại cho độ ẩm đạt 60%, pH hỗn hợp lần lần Số liệu thu nhận tính lượt đạt 5,0; 5,5 6,0 Sau thời gian ủ toán sai số đánh giá mức độ tương đồng nhiệt độ 40oC, thu dòch lọc, xác theo sai số chuẩn đònh nồng độ protein hòa tan acid Kết amine dòch lọc Tiến hành song song 3.1 Chọn lọc chủng Bacillus subtilis với mẫu có bổ sung chế phẩm bất hoạt enzyme protease Na-EDTA tốt có khả sinh protease chòu nhiệt độ cao PMSF[8,10] Tiến hành lặp lại lần Canh trường nuôi cấy bán rắn Bacillus với mẫu subtilis sau thời gian nuôi cấy sấy khô Phương pháp thử nghiệm khả hỗ xác đònh hoạt tính protease Song song trợ tiêu hóa chế phẩm có hoạt tính đó, tiến hành xử lí canh protease gà ri từ đến 49 ngày tuổi trường nhiệt độ 125oC thời gian Trứng gà ri thu nhận từ nhiều phút Sau xác đònh hoạt tính protease Hoạt tính (UI/g) nguồn bố mẹ khác cho ấp nở nhân 25,0 lại canh trường Khơng xử lý Xử lý nhiệt 20,0 19,64 18,19 15,0 11,08 10,0 5,74 6,78 7,84 5,62 5,28 5,0 3,28 4,47 4,96 4,27 2,74 2,00 4,24 2,64 0,0 Ba 01 Ba 02 Ba 03 Ba 04 Ba 05 Ba 06 Ba 07 Ba 08 Ba 09 Ba 10 Ba 11 Ba 12 Ba 13 Ba 14 Ba 15 Chủng Bacillus subtilis Hình 1: Hoạt tính protease chủng B subtilis trước sau xử lí nhiệt 31 Journal of Thu Dau Mot University, No (11) – 2013 Khi nuôi cấy môi trường bán rắn, khoảng 30 giờ, nuôi cấy môi trường có chủng nghiên cứu có khả tổng hợp thành phần chất bột bắp: bã đậu nành protease khác Thấp số ép dầu với tỉ lệ 8:2, pH dòch khoáng 6,8 chủng Ba-05 với hoạt tính đạt 2,0 thời gian nuôi cấy 72 giờ, với hoạt tính UI/g cao chủng Ba-15 với hoạt protease đạt 63,66 UI/g canh trường khô tính đạt 19,64 UI, cao 77% so với chủng 3.3 Khảo sát sơ tính chất có hoạt tính cao thứ hai Ba-03 (hình1) protease chế phẩm nuôi cấy Sau trình xử lí nhiệt (125oC, 60 giây), qui mô sản xuất nhỏ hoạt tính protease canh trường nuôi Các kết nghiên cứu mục 3.2 cấy bán rắn lại 88,4 - 98,8% Canh sử dụng để thử nghiệm nuôi cấy qui trường chủng Ba-15 giữ 92,6% mô sản xuất nhỏ với khối lượng mẻ hoạt tính protease lại cao 70kg Thành phẩm sấy khô, xay nhiều so với chủng khác Mặc dù nhuyễn bảo quản bao PE hàn protease Bacillus subtilis khả kín miệng Chế phẩm sử dụng để khảo hoạt động nhiệt độ cao, sát hoạt tính protease sau xử lí 150oC giữ hoạt tính sau trình xử lí nhiệt khoảng thời gian khác nhau; Điều phân tử enzyme nằm hoạt tính protease giá trò pH thủy sâu hạt môi trường rắn nên nhiệt phân khác Hoạt tính (UI/g) độ cao làm ảnh hưởng đến lớp bên Mặt khác, việc có mặt ion Ca2+ canh trường góp phần làm tăng khả 16 14,99 14,13 14 13,11 12 11,85 11,30 10 bền nhiệt protease Từ kết trên, chủng Bacillus subtilis Ba-15 8,84 8,15 7,37 5,89 sử dụng để tối ưu khả sinh protease 0,0 môi trường bán rắn 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 Thời gian sấy (phút) Hình 2: Hoạt tính protease chế phẩm sau xử lí 150oC khoảng thời gian khác 3.2 Nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng tới trình sinh protease Hoạt tính (UI/g) chủng Bacillus subtilis Ba-15 qui mô phòng thí nghiệm Chủng B subtilis sau taêng sinh 16,0 13,11 12,88 14,0 12,0 10,72 bán rắn sinh tổng hợp protease MT3 2,0 11,72 9,99 8,73 8,0 6,0 11,91 12,57 10,07 10,0 cấy vào erlen chứa 75g môi trường 12,34 7,48 7,09 4,0 0,0 Trong có thay đổi caùc 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 8,2 pH thủy phân thông số yếu tố thử nghiệm Sau Hình 3: Hoạt tính protease chế phẩm giá trò pH thủy phân khác thời gian nuôi cấy, thu nhận canh trường xác đònh hoạt tính protease Hoạt tính protease chế phẩm giảm Sau trình thử nghiệm, nhanh theo thời gian sấy Sau thời gian sấy xác đònh chủng có khả sinh phút, hoạt tính protease giảm không protease tốt tăng sinh nhiều (5,7%), đạt trung bình 14,1 UI/g 32 Tạp chí Đại học Thủ Dầu Một, số (11) – 2013 (hình 2) Ở thời gian sấy phút, hoạt tính động tốt điều kiện tiêu hóa diều protease khoảng 59,0% Kết gia cầm[7,9] Hỗ trợ cho việc phân giải cho thấy enzyme protease chế protein thành chất đơn giản, dễ hấp phẩm chòu đựng nhiệt độ cao thu Ngoài ra, với khoảng pH hoạt động trình tạo viên nén cho gia cầm rộng, chế phẩm sử dụng để hỗ cá Kết thí nghiệm cho trợ tiêu hóa cho nhiều loại vật nuôi khác đánh giá sơ khả chòu nhiệt 3.4 Thử nghiệm khả thủy protease chế phẩm, từ có điều phân chế phẩm thức ăn viên chỉnh phù hợp thời gian nhiệt độ cho gia cầm tạo viên nén bổ sung chế phẩm vào hỗn Thức ăn viên cho gia cầm trộn với hợp thức ăn dạng viên Bên cạnh khả chế phẩm với tỷ lệ 0,1% Sau ủ chòu nhiệt, hệ enzyme protease chế điều kiện mô diều gia cầm; pH phẩm có khả hoạt động 5,0; 5,5 6,0; độ ẩm hỗn hợp 60% khoảng pH từ acid yếu kiềm yếu nhiệt độ 40oC Song song đó, Với hoạt tính tốt pH 6,8, đạt 13,1 tiến hành nghiệm thức với chế phẩm UI/g (hình 3) Tại pH 5,8, hoạt tính xử lý với Na-EDTA PMSF để ức protease đạt 57% so với pH tối ưu chế chế phẩm Kết thí nhiệm cho thấy hoạt tính protease chế phẩm hoàn toàn có khả hoạt Bảng 1: Nồng độ protein hòa tan, tyrosine đường khử có thức ăn trộn không trộn chế phẩm pH 26,3 ±1,81 Nồng độ tyrosine ( mol/ml) 6,59 ± 1,06 Mẫu trộn chế phẩm xử lí chất ức chế protease 30,7 ± 0,43 10,11 ± 0,45 33,1 ± 0,4 Mẫu trộn chế phẩm 35,2 ± 0,20 16,15 ± 0,22 35,6 ± 0,4 Maãu không trộn chế phẩm 22,9 ± 0,49 7,04 ± ,71 28,6 ± 1,3 Mẫu trộn chế phẩm xử lí chất ức chế protease 24,7 ± 0,37 10,61 ± 0,17 47,5 ± 1,1 Mẫu trộn chế phẩm 27,2 ± 0,30 14,62 ± 0,43 45,0 ± 0,1 Mẫu không trộn chế phaåm 24,1 ± 0,53 6,83 ± 0,42 30,9 ± 0,3 Mẫu trộn chế phẩm xử lí chất ức chế protease 28,2 ± 0,89 8,16 ± 0,44 47,7 ± 0,2 31,0 ± 0,4 12,64 ± 0,50 47,1 ± 0,4 Nghieäm thức Nồng độ protein TB (mg/ml) Mẫu đối không trộn chế phẩm 6.0 5.5 5.0 Mẫu trộn chế phẩm Nồng độ đường khử TB (mg/ml) 22,3 ± 0,6 Ghi chú: g thức ăn tương ứng với ml dòch lọc Tại giá trò pH khảo sát, có gia tăng hàm lượng protein hòa tan tyrosine ủ hỗn hợp thức ăn với chế phẩm không xử lí chế phẩm xử lí Na-EDTA, PMSF so với mẫu đối chứng Sự gia tăng hàm lượng protein hòa tan 33 Journal of Thu Dau Mot University, No (11) – 2013 mẫu có chế phẩm so với mẫu có chế phẩm xử lí pH 5,0; 5,5 6,0 11,8; 10,9 17,3% Lượng tyrosine đạt cao pH 6,0 (16,15 mol/ml) giảm dần pH dòch thủy phân giảm acid với giá trò pH 5,5 5,0 đạt 14,62 12,64 mol/ml (bảng 1) Kết phù hợp với đặc điểm protease Ba-15 đề cập mục 3.3 Điều Hình 4: Khối lượng gà ăn thức ăn có bổ sung chế phẩm chứa protease cho thấy enzyme protease chế phẩm có khả thủy phân protein không tan hỗn hợp thức ăn chứng, trọng lượng gà lô thứ có mức thành đoạn peptid hòa tan tăng cao nhất, tăng 37, 25 27%, amino acid, giúp cho việc tiêu hóa hấp thu protein gia cầm dễ dàng lô thứ có mức tăng thấp hơn, đạt 31, 14 Ở nghiệm thức có xử lí chất ức chế protease, hàm lượng protein hòa tan và lô 5, khác biệt nhiều độ tyrosine cao so với mẫu đối chứng, khác biệt độ tăng trọng chứng tỏ việc gia tăng hàm lượng peptid acid amine thân protease chế phẩm đònh Hệ enzyme cellulase (cellulase, xylanase, glucanase, pectinase…) không bò ảnh hưởng lô lô 3, tất tăng 24% so với lô Từ tuần đến tuần 4, so với lô đối 20% qua hàng tuần khảo sát Giữa lô tăng trọng so với lô đối chứng Ở tuần 5, đối chứng Ở tuần tuần 7, gà lô có độ tăng trọng cao so với lô đối chứng, tăng 43 30% trọng lượng gà lô tăng 28 25% Na-EDTA PMSF nên thủy phân phá vỡ vách tế bào thực vật, giải phóng protein hòa tan acid amine vào dòch môi trường Tuy nhiên có mặt protease nhận thấy sử dụng thức ăn dạng làm gia tăng đáng kể hàm lượng tyrosine dòch thủy phân đầu Việc bổ sung giúp cho đàn gà có Từ kết thực nghiệm chúng viên có bổ sung chế phẩm có hoạt tính protease với tỷ lệ 0,1% vòng tuần độ tăng trọng khoảng 26% so với sử 3.5 Thử nghiệm khả hỗ trợ tiêu hóa chế phẩm có hoạt tính protease gà ri dụng thức ăn không bổ sung chế phẩm Từ rút ngắn thời gian nuôi, tiết kiệm chi phí thức ăn, giúp tăng lợi nhuận cho Sau tuần tuổi, trọng lượng gà ri lô đối chứng đạt trung bình 576 g/con, không khác biệt nhiều so với kết mà tác giả Nguyễn Huy Đạt[2] Bùi Đức Lũng [5] thực Gà ăn thức ăn lô thức ăn có trộn chế phẩm với tỷ lệ 0,1; 0,5; 2% có trọng lượng thể cao so với lô đối chứng người chăn nuôi Kết luận khuyến nghò 4.1 Kết luận Dựa vào hoạt tính protease thu nuôi cấy chủng môi trường bán rắn, nhận thấy chủng Bacillus subtilis Ba-15 có khả đáp ứng 34 Tạp chí Đại học Thủ Dầu Một, số (11) – 2013 mục tiêu mà đề tài đặt Chủng Ba-15 cho Việc thử nghiệm tác dụng chế hoạt tính protease tốt nuôi cấy phẩm gà ri qui mô thử nghiệm môi trường bán rắn chứa nguồn thu nhiều kết khả quan Chế phẩm chất bã đậu nành bột bắp với tỉ lệ 2:8; có hoạt tính protease có khả hỗ trợ tiêu pH dòch khoáng 6,8 thời gian nuôi cấy hóa tốt cho gà ri Khi bổ sung chế phẩm vào bán rắn tốt 72 thức ăn dạng viên với tỉ lệ từ 0,1 – 0,5 % Sau tuần nuôi, trọng lượng gà tăng trung bình Áp dụng điều kiện tối ưu vào từ 25 – 30% so với lô đối chứng qui mô sản xuất nhỏ, hoạt tính protease chủng Ba-15 thu đạt 14,16 (UI/g 4.2 Khuyến nghò CP) So với sản phẩm loại Với khả hoạt động khoảng thò trường, chế phẩm thu có hoạt pH trung tính ổn đònh hoạt tính nhiệt tính protease cao từ hàng độ cao, đề nghò nghiên cứu thêm trăm lần (không thể bài), số ứng dụng khác bổ sung vào thức nhiên kết đạt 23% so với ăn viên cá, thủy cầm nuôi cấy phòng thí nghiệm Chủng có khả sinh tổng hợp Đây hạn chế mà đề tài chưa khắc protease cao nuôi cấy quy mô phục thí nghiệm lợi cho việc tinh Chế phẩm thu quy mô sản protease chủng, từ có xuất nhỏ hoàn toàn đáp ứng yêu nghiên cứu ứng dụng có ý nghóa cầu mà mục tiêu ban đầu đặt ra: (1) hoạt Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng lên tính protease chế phẩm có khả khả sinh tổng hợp chủng qui ổn đònh thời gian phút xử lí nhiệt mô sản xuất nhỏ o khô nhiệt độ xấp xỉ 150 C; (2) hoạt động Nghiên cứu tác động hỗ trợ tiêu hóa tốt khoảng pH nghiên cứu từ 5,8 – 8,0; chế phẩm chứa protease bổ tốt pH 6,8 sung vào thức ăn cho gia cầm * STUDY OF PRODUCTION PROTEASE PRODUCT FROM BACILLUS SUBTILIS TO USE FOR CHICKEN-FEED PROCESSING Tran Ngoc Hung(1), Le Phi Nga(2) (1) Thu Dau Mot University (2) University of Science (VNU HCM) ABSTRACT Supplying enzyme products to diet will help poultry absorb more nutrients, increasing the profit of farmers In a study to make a protease product that can catalyse in poultry and yet retain its activity at the high temperatures of chicken-feed tablet processing, we found that among 15 strains of Bacillus subtilis, strain Ba15 had the highest protease activity and was stable with high temperature Maximum protease yield was observed in the semi-solid medium containing ingredients with ratio of soybean residue : corn powder; pH of mineral solution is 6.8; in a culture time of 72 hours The product received from small-scale production had a protease activity 14.16 UI/gr Protease of the product could catalyse in pH ranges from 35 Journal of Thu Dau Mot University, No (11) – 2013 5.8 to 8.0, conforming to the pH value in poultry Treating product at temperature of 150oC in minute, the activity of protease remained at 94.3% Adding the product to the chicken-feed tablet with the ratio of 0.1 – 0.5%, the weight of the chickens increased average 25 – 30% compared to the control batch after weeks The result of this study show that we can ultilize this product for producing chicken-feed tablets TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Vũ Ngọc Bội (2004), Nghiên cứu trình thủy phân protein cá enzyme protease từ Bacillus subtilis S5, Luận án tiến só, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh, tr 13-21, 56-57 [2] Nguyễn Huy Đạt CS (2006), Nghiên cứu chọn lọc nâng cao suất gà Ri vàng rơm, Báo cáo khoa học Viện chăn nuôi 2006, Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Vạn Phúc, tr [3] Nguyễn Đức Hưng (2006), Chăn nuôi gia cầm, NXB Nông Nghiệp, tr 26-30 [4] Dương Thanh Liêm (2008), Thức ăn dinh dưỡng gia cầm, NXB Nông Nghiệp, tr 5-20 [5] Bùi Đức Lũng, Nguyễn Huy Đạt, Vũ Thò Hưng, Trần Long (2005), Đặc điểm ngoại hình suất gà Ri vàng rơm (VR) Việt Nam hệ xuất phát qua chọn lọc nhân giống, Viện Chăn nuôi [6] Nguyễn Văn Mùi (2001), Thực hành hóa sinh học, NXB Khoa học Kó thuật, tr.51-53, 7172 [7] Clifford A Adams (1998), Enzyme technology for feed industry: European perspective, Asian Poultry Magazine, No 02, )02/1998, pp 14-16 [8] Hiroshi Uehara, Kunio Yamane, Bunji Maruo (1979), Thermosensitive, Extracellular Neutral Protease in Bacillus subtilis: Isolation, Characterization, and genetics, Journal of Bacteriology, Vol 139, No 2, 08/1979, pp.583-584 [9] Kemin (1998), Modern enzyme technology for feed industry, Asian Poultry Magazine, No 02, 02/1998, pp 37, 46, 58-59 [10] Shang-Shyng Yang (1998), Protease and amylase production of Streptomyces rimosus in submerged and solid state cultivations, Botanical Bulletin Academia Sinica, Vol 40, 1999, pp 259-260 36 ... vào thức ăn cho gia cầm, chòu nhiệt độ cao máy nén viên hoạt động tốt hệ tiêu hóa gia cầm Chúng tiến hành đề tài: Nghiên cứu tạo chế phẩm protease từ Bacillus subtilis để sử dụng chế biến thức ăn. .. điều phân chế phẩm thức ăn viên chỉnh phù hợp thời gian nhiệt độ cho gia cầm tạo viên nén bổ sung chế phẩm vào hỗn Thức ăn viên cho gia cầm trộn với hợp thức ăn dạng viên Bên cạnh khả chế phẩm với... công nghiệp chế biến thức ăn cho gia cầm hạn chế, đặc biệt bổ sung vào thức ăn dạng viên, chế phẩm bò hoạt tính trình nén viên nhiệt độ cao Với mục tiêu chế phẩm sinh học có hoạt tính protease bổ