Từ cao ethyl acetat của thân cây Chiêu liêu cườm (Xylia xylocarpa), bằng các phương pháp sắc ký đã phân lập được bốn hợp chất polyphenol. Cấu trúc của các hợp chất được xác định bằng các phương pháp phổ nghiệm và kết hợp với so sánh tài liệu tham khảo, bao gồm acid ferulic (1), methyl 3-(4- hydroxyphenyl)-2-methoxy carbonyl propionate (2), vanillin (3) và acid syringic (4). Đây là những hợp chất lần đầu tiên được phân lập từ chi này.
An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 MỘT SỐ HỢP CHẤT POLYPHENOL ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ THÂN CÂY CHIÊU LIÊU CƯỜM (XYLIA XYLOCARPA) Lâm Thị Mỹ Linh1 Trường Đại học An Giang Thông tin chung: Ngày nhận bài: 04/05/2017 Ngày nhận kết bình duyệt: 22/11/2017 Ngày chấp nhận đăng: 12/2017 Title: Polyphenol compounds isolated from the stem of Xylia xylocarpa Keywords: Ethyl acetate extract, Xylia xylocarpa, phenolic Từ khóa: Cao ethyl acetat, Chiêu liêu cườm, polyphenol ABSTRACT Basing on the ethyl acetate extract of the stem of Xylia xylocarpa, four phenolic compounds were isolated by chromatography methods The chemical structure of these compounds was determined by NMR spectra and compared with previous studies, including ferulic acid (1), methyl 3-(4-hydroxyphenyl)-2methoxy carbonyl propionate (2), vanillin (3) and syringic acid (4) These compounds were firstly isolated from Xylia TÓM TẮT Từ cao ethyl acetat thân Chiêu liêu cườm (Xylia xylocarpa), phương pháp sắc ký phân lập bốn hợp chất polyphenol Cấu trúc hợp chất xác định phương pháp phổ nghiệm kết hợp với so sánh tài liệu tham khảo, bao gồm acid ferulic (1), methyl 3-(4hydroxyphenyl)-2-methoxy carbonyl propionate (2), vanillin (3) acid syringic (4) Đây hợp chất lần phân lập từ chi Theo tài liệu tham khảo (1963), hai nhà khoa học R A Laidlaw J W W Morgan tiến hành phân lập sáu hợp chất từ thân Xylia dolabriformi gồm manoyl oxide, 3-oxo-manoyl oxide, sandaracopimaradiene, 3-oxosandaracopimaradiene, 3β-hydroxysandaracopimaradiene 3β, 18β-dihydroxysandaracopimaradiene GIỚI THIỆU Cây Chiêu liêu cườm hay gọi Căm xe, có tên khoa học Xylia xylocarpa, họ Đậu (Fabaceae) Loài trồng phổ biến vùng Tây Nguyên nước ta số vùng lân cận Lào, Campuchia (Võ Văn Chi, 1991) Trong y học dân gian sử dụng vỏ làm thuốc trị ho máu, tiêu chảy, lậu,… Ngồi ra, thân sử dụng thuốc gia truyền Amakong Buôn Đôn, Đăk Lăk với công dụng bổ thận tráng dương, bồi bổ sức khỏe, điều trị đau xương khớp, đau dây thần kinh tọa, ăn ngon, ngủ khỏe, hỗ trợ điều trị bệnh gout Hiện chưa có cơng trình nghiên cứu cụ thể thành phần hóa học hoạt tính sinh học Chiêu liêu cườm, nên chúng tơi xin trình bày thành phần hóa học chi nghiên cứu có tên khoa học Xylia dolabriformi Sau tra cứu tài liệu giới cho thấy, chi Xylia nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Do đó, báo cơng bố việc phân lập xác định cấu trúc bốn hợp chất từ thân Chiêu liêu cườm acid ferulic (1), methyl 3-(4-hydroxyphenyl)-2methoxy carbonyl propionate (2), vanillin (3) acid syringic (4) (Hình 1) Đây hợp chất lần tìm thấy chi Xylia 69 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 Hình Các hợp chất polyphenol phân lập từ thân Chiêu liêu cườm PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Bếp cách thủy (Memmert) Mẫu thân Chiêu liêu cườm thu hái vào tháng 02/2012 định danh Tiến sĩ Lưu Hồng Trường, Viện Sinh thái học miền Nam, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, thành phố Hồ Chí Minh - Máy cộng hưởng từ hạt nhân (Bruker Avance) với tần số 500 MHz cho phổ 1HNMR 125 MHz cho phổ 13CNMR - Các dụng cụ thông thường khác: erlene, becher, pipetman, đầu tip, micropipette 2.1 Hóa chất thiết bị 2.2 Quy trình trích ly điều chế loại cao từ thân Chiêu liêu cườm 2.1.1 Hóa chất - - Dung mơi: n-hexane, chloroform, ethyl acetate, acetone, methanol, ethanol, n-butanol (Chemsol, Việt Nam) Thuốc thử hình vết sắc ký lớp mỏng: H2SO4 30%, nung nóng Sắc ký lớp mỏng pha thường: TLC silica gel 60 F254 (250 µm, Merck,USA) Sắc ký lớp mỏng pha đảo: TLC silica gel 60 RP 18 F254 S (200 µm, Merck,USA) Sắc ký cột pha thường: silica gel 60 (0,0400,063 mm, Himedia) Bột khô thân Chiêu liêu cườm (9,0 kg) trích phương pháp hồn lưu dung mơi methanol, thu cao MeOH (0,48 kg) Phần cao MeOH phân tán vào nước tiến hành trích lỏng - lỏng với dung môi nhexan, ethyl acetat n-butanol Các phần dịch trích thu hồi dung mơi áp suất kém, thu loại cao phân đoạn tương ứng cao nhexan (21,6 g), cao ethyl acetat (52,5 g), cao nbutanol (180 g) cao nước (225,8 g) 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.1.2 Thiết bị Áp dụng phương pháp sắc ký cột silica gel pha thường cao EtOAc để tách thành phân đoạn có độ phân cực khác Tiếp tục sử dụng phương pháp sắc ký phân đoạn thu được, sắc ký cột silica gel pha thường pha đảo, sắc ký lớp mỏng điều chế - Cột sắc ký - Bình triển khai sắc ký lớp mỏng - Đèn UV hai bước sóng 254/365 nm (Spectroline ENF-240C/FE, USA) (a) - Cân phân tích (Sartorious BL 210S) - Cân kỹ thuật Mettler Toledo AB204 - Tủ sấy (Memmert) - Hệ thống quay chân khơng (Buchi) Theo dõi q trình sắc ký cột phương pháp sắc ký mỏng (TLC), kết hợp soi đèn UV, vết dung dịch H2SO4 30% nung nóng Từ cao ethyl acetate thân Chiêu liêu cườm 70 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 phân lập bốn hợp chất acid ferulic (1), methyl 3-(4-hydroxyphenyl)-2-methoxy carbonyl propionate (2), vanillin (3) acid syringic (4) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hợp chất ghi máy Bruker-500 MHz với chất nội chuẩn TMS ra, có tín hiệu hai proton olefine ghép cặp trans δH 6,48 (1H, d, J = 16 Hz, H-α), δH 7,59 (1H, d, J = 16 Hz, H-β) (Bảng 1, Phụ lục 1a) Phổ 13C-NMR hợp chất cho mười tín hiệu, có tín hiệu carbon carbonyl nhóm carboxyl δC 171,0 (COOH), tín hiệu carbon nhóm methoxyl δC 56,1 (3-OCH3) tám tín hiệu carbon vùng 109 – 150 ppm ứng với carbon vùng benzene carbon olefine (Bảng 1, Phụ lục 1b) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Hợp chất thu có dạng bột, màu trắng, tan tốt dung môi methanol Phổ 1H-NMR hợp chất cho tín hiệu vòng benzene vị trí 1,3,4 với δH 7,05 (1H, d, J = 1,6 Hz, H-2), δH 6,93 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5), δH 7,12 (1H, dd, J = 8,0 1,6 Hz, H-6) tín hiệu proton nhóm methoxyl δH 3,94 (3H, s, 3-OCH3) Ngoài Đối chiếu với tài liệu tham khảo cho phép xác nhận hợp chất acid ferulic (tên IUPAC: Trans-4-hydroxy-3-methoxycinnamic acid, Prachayasittikul S, 2009) Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất so sánh với acid ferulic (trị số ngoặc J tính Hz) Hợp chất (CD3OD) Vị trí Acid ferulic (CD3OD) Loại C δH (ppm) δC (ppm) δH (ppm) 127,8 δC (ppm) >C= -CH= >C= 149,4 149,2 >C= 150,5 150,2 -CH= 6,76 d (8,5) 116,5 6,78 d (8,2 ) 116,2 -CH= 7,07 dd (8,5; 1,5) 124,0 7,05 dd (8,2; 2,0) 123,7 α -CH= 6,33 d (16,0) 115,9 6,35 d (15,9 ) 116,3 β -CH= 7,52 d (16,0) 147,0 7,57 d (15,9) 146,4 -COOH -COOH -OMe -OMe 7,18 d (1,5) 111,7 127,7 7,17 d (2,0 ) 171,1 3,80 s 56,4 Hợp chất thu có dạng bột, màu trắng, tan dung môi chloroform Phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy có tám tín hiệu proton Trong đó, bốn tín hiệu δH 7,03 (2H, d, J = 8,4 Hz, H2,6) δH 6,72 (2H, d, J = 8,4 Hz, H-3,5) vùng trường thấp cho thấy cấu trúc chứa vòng benzene 1, trí hốn Ngồi ra, xuất thêm tín hiệu cộng hưởng sáu proton nhóm methoxyl δH 3,69 (6H, s,-OCH3); tín hiệu proton nhóm methine δH 3,64 (1H, d, J = 111,5 171,1 3,89 s 55,9 7,9 Hz, H-8) hai tín hiệu proton nhóm methylene δH 3,14 (2H, d, J = 7,9 Hz, H-7) (Bảng 2, Phụ lục 2a) Phổ 13C DEPT-NMR cho thấy hợp chất có mười tín hiệu carbon bao gồm bốn carbon nhân thơm tam cấp δC 115,6 (C-3,5) δC 130,1 (C2,6); hai carbon vòng benzene tứ cấp δC 122,0 (C1), 154,8 (C-4); carbon nhóm carbonyl δC 169,5 (-COO) carbon nối nhóm eter δC 71 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 54,1 (C-8); carbon methyl nối nhóm carbonyl δC 52,7 (CH3) carbon methylene δC 34,1 (C-7) (Bảng 2, Phụ lục 2b) Đối chiếu với tài liệu tham khảo cho phép xác nhận hợp chất methyl 3-(4hydroxyphenyl)-2-methoxy carbonyl propionate (Cai X-h, 2006) Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất so sánh với methyl 3-(4-hydroxyphenyl)-2-methoxy carbonyl propionate (trị số ngoặc J tính Hz) Vị trí Loại C Methyl 3-(4-hydroxyphenyl)-2-methoxy carbonyl propionate (CDCl3) Hợp chất (CDCl3) δH (ppm) δC (ppm) δH (ppm) >C= 4,8 =CH- 7,03 d (8,4) 130,1 7,03 d (8,2) 5,7 =CH- 6,72 d (8,4) 115,6 6,72 d (8,2) >C= 154,8 5,89 brs >CH2 3,15 d (7,9) 34,1 3,15 d (7,9) >CH- 3,64 d (7,9) 54,1 3,64 d (7,9) -COO- -COO- -OCH3 -OCH3 122,0 169,5 3,69 s 52,7 3,70 s Phổ 13C-NMR cho thấy hợp chất có tám carbon, có carbon carbonyl ceton δC 190,9 (C-7); ba carbon nhân thơm tam cấp δC 109,1 (C-2); 114,6 (C-5) 130,2 (C-6); ba carbon vòng benzene tứ cấp δC 127,6 (C-1); 151,9 (C-3) 147,1 (C-4); carbon nhóm metoxy δC 56,3 (-OCH3) (Bảng 3, Phụ lục 3b) Hợp chất thu có dạng bột, màu trắng, tan dung mơi acetone, chloroform Phổ 1HNMR hợp chất vùng trường thấp có ba tín hiệu δH 7,05 (1H; d; J= 8,1 Hz; H-5); 7,42 (1H; dd; J= 8,1 & 1,8 Hz; H-6) 7,40 (1H; d; J= 1,8 Hz; H-2) cho thấy có proton ghép ortho ghép meta với hai proton lại Đó ba proton vòng benzen mang ba nhóm tương ứng với hệ ABX (Bảng 3) Ngồi ra, có xuất nhóm ceton với tín hiệu proton methyl δH 9,83 (3H, s, -CH3) nhóm metyl với tín hiệu δH 3,97 (3H, s, -CH3) (Bảng 3, Phụ lục 3a) Đối chiếu với tài liệu tham khảo cho phép xác nhận hợp chất vanillin (tên IUPAC: 4hydroxy-3-methoxy benzaldehyde, Pouységu L, 2010) Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất so sánh với vanillin (trị số ngoặc J tính Hz) Vị trí Loại C Hợp chất (CDCl3) δH (ppm) >C= >CH- >C= Vanillin (CDCl3) δC (ppm) δH (ppm) 130,2 7,42 d (1,8) 109,1 147,0 72 δC (ppm) 129,6 7,37 d (1,8 ) 108,8 147,2 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 Vị trí Hợp chất (CDCl3) Loại C δH (ppm) Vanillin (CDCl3) δC (ppm) δH (ppm) δC (ppm) >C= 151,8 151,8 >CH- 7,04 d (8,5) 114,6 7,00 d (8,5) 114,4 >CH- 7,43 d (8,5; 1,8) 127,6 7,40 d (8,5; 1,8) 127,4 1-CHO 1-CHO 9,83 s 190,1 9,78 s 190,1 4-OH 4-OH 6,20 s 3-OMe 3-OMe 3,97 s 6,39 s 56,1 Hợp chất thu có dạng bột, màu trắng, tan dung môi chloroform Phổ 1H-NMR hợp chất xuất hai tín hiệu proton Trong đó, tín hiệu δH 7,38 (2H, s, H-2,6) vùng trường thấp cho thấy cấu trúc chứa vòng benzene 1, 3, 4, trí hốn Ngồi ra, xuất thêm tín hiệu cộng hưởng sáu proton nhóm metoxy δH 3,96 (6H, s,-OCH3) (Bảng 4, Phụ lục 4a) 3,90 s 55,9 107,3 (C-2,6); bốn carbon vòng benzene tứ cấp δC 120,1 (C-1), 140,0 (C-4), 146,7 (C-3,5); carbon nhóm carbonyl δC 170,3 (-COOH) hai carbon nhóm metoxy δC 56,5 (-OCH3) (Bảng 4, Phụ lục 4b) Đối chiếu với tài liệu tham khảo cho phép xác nhận hợp chất acid syringic (tên IUPAC: 4-hydroxy-3,5-dimethoxy benzoic acid, Chatsumpun M, 2010) Phổ 13C-NMR hợp chất có chín tín hiệu carbon bao gồm hai carbon nhân thơm tam cấp δC Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất so sánh với acid syringic (trị số ngoặc J tính Hz) Vị trí Loại C Hợp chất CLC-10 (CDCl3) δH (ppm) δC (ppm) Acid syringic (CDCl3) δH (ppm) 120,1 δC (ppm) >C= 2, =CH- 3,5 >C= 146,7 148,3 >C= 140,0 141,6 -COOH- -COOH- 170,3 167,5 3-OCH3 3-OCH3 5-OCH3 5-OCH3 7,38 s 107,3 3,96 s 56,5 121,5 7,32 s 3,87 s 108,1 56,6 Chiêu liêu cườm Trên sở phổ cộng hưởng từ hạt nhân kết hợp với so sánh tài liệu tham khảo, xác định cấu trúc hợp chất acid ferulic (1), methyl 3-(4hydroxyphenyl)-2-methoxy carbonyl propionate (2), vanillin (3) acid syringic (4) Đây lần KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Bằng kỹ thuật sắc ký cột silica gel pha thường, kết hợp với sắc ký mỏng điều chế pha thường pha đảo với hệ dung môi giải ly khác nhau, phân lập bốn hợp chất tinh khiết từ cao ethyl acetat thân 73 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 bốn hợp chất phân lập từ chi Xylia Bốn hợp chất hợp chất polyphenol, chúng có số hoạt tính sinh học thơng dụng kháng oxy hóa, kháng khuẩn, kháng virus kháng số loại ung thư (Kim Anh, Ngọc Vĩnh, 2010) Đỗ Huy Bích, Đặng Xuân Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phan Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Viện dược liệu, NXB Khoa Học Kỹ Thuật 4.2 Khuyến nghị Laidlaw R A., Morgaiz J W W (1963) The diterpenes of Xylia dolabriformis Journal of the Chemical Society 102: 644 – 650 Tiếp tục nghiên cứu phân lập hợp chất phân đoạn cao chưa khảo sát cao trích Chiêu liêu cườm Pouységu L., Sylla T., Garnier T., Rojas LB., Charris J., Deffieux D., Quideau S (2010) Hypervalent iodine-mediated oxygenative phenol dearomatization reactions Tetrahedron DOI: 5908 – 5917 Khảo sát hoạt tính ức chế enzyme acetylcholinesterase phân đoạn cao hợp chất tinh khiết lập nhằm góp phần đẩy mạnh ứng dụng thuốc vào ngành Y học Cổ truyền Prachayasittikul S., Suphapong S., Worachartcheewan A., Lawung R., Ruchirawat S., Prachayasittikul V (2009) Bioactive metabolites from Spilanthes acmella Murr Molecules 14: 850 – 867 TÀI LIỆU THAM KHẢO Cai X-h., Xie B., Guo H (2006) Synthesis and evaluation of methyl 2-methoxycarbonyl-3phenylpropionate derivatives as a new type of angiotensin converting enzyme inhibitors Can J Chem 84: 1110 – 1113 Siddhuraju P., Vijayakumari K., Janardhanan K.(1995) Nutrient and chemical evaluation of raw seeds of Xylia xylocarpa: an underutilized food source Food Chemistry 53: 299 – 304 Cao Thị Kim Anh, Lưu Thị Ngọc Vĩnh (2010) Tách, tổng hợp khảo sát hoạt tính sinh học dẫn xuất curcumin từ bột curcuminoid thương phẩm Trường Đại học Lạc Hồng, Biên Hòa Võ Văn Chi (1991) Cây thuốc An Giang Ủy ban Khoa học - Kỹ thuật An Giang An Giang Chatsumpun M., Sritularak B., Likhitwitayawuid K (2010) Phenolic compounds from stem wood of Millettia leucantha Chem Nat Compd 46: 634 – 635 74 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 PHỤ LỤC HỢP CHẤT (CD3OD) Phụ lục 1a Phổ 1H-NMR hợp chất Phụ lục 1b Phổ 13C-NMR hợp chất 75 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 HỢP CHẤT (CDCl3) Phụ lục 2a Phổ 1H-NMR hợp chất Phụ lục 2b Phổ 13C-NMR hợp chất 76 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 HỢP CHẤT (CDCl3) Phụ lục 3a Phổ 1H-NMR hợp chất Phụ lục 3b Phổ 13C-NMR hợp chất 77 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 HỢP CHẤT (CDCl3) Phụ lục 4a Phổ 1H-NMR hợp chất Phụ lục 4b Phổ 13C-NMR hợp chất 78 ... 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 Hình Các hợp chất polyphenol phân lập từ thân Chiêu liêu cườm PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Bếp cách thủy (Memmert) Mẫu thân Chiêu liêu cườm thu hái vào tháng 02/2012 định... 18 (6), 69 – 78 bốn hợp chất phân lập từ chi Xylia Bốn hợp chất hợp chất polyphenol, chúng có số hoạt tính sinh học thơng dụng kháng oxy hóa, kháng khuẩn, kháng virus kháng số loại ung thư (Kim... vết dung dịch H2SO4 30% nung nóng Từ cao ethyl acetate thân Chiêu liêu cườm 70 An Giang University Journal of Science – 2017, Vol 18 (6), 69 – 78 phân lập bốn hợp chất acid ferulic (1), methyl 3-(4-hydroxyphenyl)-2-methoxy