Nghiên cứu nuôi cấy rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) và khảo sát ảnh hưởng của một số elicitor lên sự tích lũy saponin

ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - NGUYỄN THỊ NHẬT LINH NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY RỄ THỨ CẤP SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) VÀ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ELICITOR LÊN SỰ TÍCH LŨY SAPONIN LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH SINH LÝ HỌC THỰC VẬT HUẾ - Năm 2017 ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - NGUYỄN THỊ NHẬT LINH NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY RỄ THỨ CẤP SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) VÀ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ELICITOR LÊN SỰ TÍCH LŨY SAPONIN Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Mã số: 62.42.01.12 Người hướng dẫn khoa học: GS TS Dương Tấn Nhựt GS TS Nguyễn Hoàng Lộc HUẾ - Năm 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án: “Nghiên cứu nuôi cấy rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) khảo sát ảnh hưởng số elicitor lên tích lũy saponin” cơng trình nghiên cứu tơi trợ giúp cộng hướng dẫn GS.TS Dương Tấn Nhựt GS.TS Nguyễn Hoàng Lộc Luận án hỗ trợ kinh phí điều kiện trang thiết bị từ đề tài phòng Sinh học Phân tử Chọn tạo giống trồng thuộc Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên, với hỗ trợ Trung tâm Sâm Dược liệu Thành phố Hồ Chí Minh Trường Đại học Khoa học – Đại học Huế Các số liệu luận án phần kết đề tài thực Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên Tôi xin cam đoan kết số liệu luận án hoàn toàn trung thực chưa cơng bố hình thức Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước Nhà trường lời cam đoan Đà Lạt, ngày 07 tháng 09 năm 2017 Tác giả Nguyễn Thị Nhật Linh ii LỜI CẢM ƠN Trong biển kiến thức bao la, tơi thực tìm thuyền lớn để theo đuổi đam mê nghiên cứu khoa học Với vai trò đầu tàu, Thầy, GS.TS Dương Tấn Nhựt chèo lái, hướng dẫn giúp đỡ biết hệ sinh viên tiến đến với ước mơ gặt hái thành công sống đường nghiên cứu khoa học phục vụ cho phát triển nước nhà Cảm ơn Thầy ln tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu, khơng ngừng giúp đỡ để tơi hồn thành luận án Để hồn thành luận án này, tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy GS.TS Nguyễn Hoàng Lộc gợi ý dẫn hướng cho nghiên cứu, ln nhắc nhở để tơi hồn thành tốt chương trình học luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn đến tất quý Thầy, Cô Khoa Sinh học phòng Đào tạo Sau Đại học, Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế tạo điều kiện giúp đỡ năm học vừa qua Xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo cô chú, anh chị Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên Trung tâm Sâm Dược liệu thành phố Hồ Chí Minh cho tơi hội thực nghiên cứu Đặc biệt, xin cảm ơn anh, chị Phòng Sinh học Phân tử Chọn tạo Giống Cây trồng trực tiếp hướng dẫn thời gian qua Tôi xin cảm ơn anh Nam, anh Luận, anh Huy, chị Hiền, chị Phượng, Tùng Chiến tận tình giúp đỡ tơi người thân gia đình Thời gian gặp ngắn ngủi bạn sinh viên, học viên thực tập Viện Nghiên cứu khoa học Tây Nguyên Trường Đại học Khoa học – Đại học Huế cho ấn tượng sâu sắc lịng nhiệt tình với công việc bạn tạo cho nhiều niềm phấn khởi để thực tốt luận án Tôi xin cảm ơn giúp đỡ bạn thời gian qua Để hồn thành tốt luận án này, xin gửi lời cảm ơn đến anh Thức, anh Hiếu, Kim Cương, Văn Cương Tâm sát cánh bên không ngừng hỗ trợ giúp đỡ tơi mặc cho khó khăn cách trở Dù có khó khăn hay thất bại đơi lúc nản lịng, gia đình ln điểm tựa vững giúp vượt qua khó khăn thử thách đời Con xin cảm ơn Bố, Mẹ, người Thầy đầu tiên, dìu dắt vào đời, cho dù khó nhọc đến đâu luôn tạo cho điều kiện tốt để không thua với bạn bè trang lứa Con xin cảm ơn nhà luôn ủng hộ, động viên đỡ đần cho con! Đà Lạt, ngày 09 tháng 07 năm 2017 Tác giả Nguyễn Thị Nhật Linh iii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT x DANH MỤC BẢNG xi DANH MỤC HÌNH ẢNH, BIỂU ĐỒ xiii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU GIỚI THIỆU VỀ SÂM NGỌC LINH 1.1 Nguồn gốc lịch sử phát triển 1.2 Đặc điểm hình thái sinh trưởng 1.3 Đặc điểm phân bố 1.4 Đặc điểm đa dạng di truyền 1.5 Tác dụng dược lý SƠ LƯỢC VỀ CÁC HỢP CHẤT SAPONIN 2.1 Cấu trúc saponin có sâm Ngọc Linh 2.2 Các tính chất hóa lý saponin sâm Ngọc Linh 10 2.3 Vai trò saponin 11 2.4 Con đường tổng hợp triterpene saponin 11 NUÔI CẤY IN VITRO SINH KHỐI RỄ BẤT ĐỊNH VÀ RỄ THỨ CẤP 13 3.1 Khái niệm rễ bất định 13 3.2 Khái niệm rễ thứ cấp 13 3.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy rễ thứ cấp rễ bất định 14 3.3.1 Loại mẫu cấy 14 3.3.2 Vị trí phát sinh 15 3.3.3 Vai trò điều hòa auxin 17 3.3.4 Tương tác auxin cytokinin 19 3.3.5 Nhiệt độ 20 3.3.6 Ánh sáng 20 3.3.7 Giá thể nuôi cấy 20 iv 3.3.8 Các hệ thống nuôi cấy 21 3.4 Một số nghiên cứu nuôi cấy thu nhận sinh khối rễ loài sâm 22 3.4.1 Một số nghiên cứu giới 22 3.4.2 Một số nghiên cứu nước rễ bất định sâm Ngọc Linh 24 ELICITOR VÀ SỰ KÍCH KHÁNG TRONG NUÔI CẤY IN VITRO 25 4.1 Khái niệm 25 4.2 Phân loại 25 4.3 Cơ chế tác động elicitor 27 1.1 Cách xử lý tác động elicitor 31 4.4.1 Nồng độ elicitor 31 4.4.2 Thời gian tiếp xúc với elicitor 31 4.4.3 Thời kỳ nuôi cấy 31 4.4.4 Thành phần dinh dưỡng 32 1.2 Một số elicitor phổ biến nuôi cấy nhân sâm 32 4.5.1 Chitosan 32 4.5.2 Dịch chiết nấm men 33 4.5.3 Elicitor có nguồn gốc từ chất điều hịa sinh trưởng thực vật 33 1.3 Ứng dụng elicitor ni lồi nhân sâm in vitro 35 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 39 1.1 Nguồn mẫu 39 1.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 39 1.3 Địa điểm thời gian thực luận án 40 PHƯƠNG PHÁP BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM 40 2.1 Tối ưu cách chọn mẫu môi trường nuôi cấy rễ thứ cấp từ nuôi cấy rễ bất định sâm Ngọc Linh in vitro 40 2.1.1 Khảo sát ảnh hưởng cách cắt mẫu rễ bất định lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 40 2.1.2 Khảo sát ảnh hưởng auxin lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 41 v 2.1.3 Khảo sát ảnh hưởng việc kết hợp auxin cytokinin lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ rễ bất định in vitro 42 2.1.4 Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 42 2.1.5 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ NH4+/NO3- môi trường MS lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ rễ bất định in vitro 42 2.1.6 Khảo sát ảnh hưởng loại đường carbohydrate lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 43 2.1.7 Khảo sát ảnh hưởng giá thể ni cấy lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 43 2.2 Tối ưu điều kiện nuôi cấy rễ bất định sâm Ngọc Linh để tăng cường hình thành rễ thứ cấp tích lũy saponin ni cấy in vitro 44 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng thời gian ni cấy lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 44 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 44 2.2.3 Khảo sát ảnh hưởng pH lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 44 2.2.4 Khảo sát ảnh hưởng giai đoạn nuôi cấy tối sáng lên tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 45 2.2.5 Khảo sát ảnh hưởng thể tích ni cấy lên tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 45 2.2.6 Khảo sát ảnh hưởng hệ thống nuôi cấy lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 46 2.3 Tối ưu khả tích lũy saponin rễ thứ cấp hình thành từ rễ bất định sâm Ngọc Linh nhờ tác động elicitor 48 2.3.1 Khảo sát ảnh hưởng chitosan lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 48 vi 2.3.2 Khảo sát ảnh hưởng dịch chiết nấm men lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 48 2.3.3 Khảo sát ảnh hưởng abscisic acid lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 49 2.3.4 Khảo sát ảnh hưởng salicylic acid lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 49 2.3.5 Khảo sát ảnh hưởng jasmonic acid lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 50 2.3.6 Khảo sát ảnh hưởng kết hợp elicitor ngoại sinh elicitor nội sinh lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro 50 2.3.7 Khảo sát ảnh hưởng thời gian xử lý elicitor lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 51 2.4 Phương pháp xác định số tăng trưởng, tỷ lệ chất khơ, tỷ lệ hình thành tăng sinh mẫu cấy 52 2.5 Môi trường nuôi cấy 52 2.6 Điều kiện nuôi cấy 52 PHƯƠNG PHÁP SINH HĨA ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG SAPONIN 52 3.1 Phương pháp định tính sắc ký lớp mỏng 52 3.2 Phương pháp định lượng sắc ký lỏng hiệu cao 53 3.3 Phương pháp xác định suất tổng hợp saponin 55 PHƯƠNG PHÁP QUAN SÁT TẾ BÀO HỌC 55 PHƯƠNG PHÁP THỐNG KÊ VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU 55 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 56 TỐI ƯU NUÔI CẤY RỄ THỨ CẤP SÂM NGỌC LINH TỪ NHỮNG MẪU RỄ BẤT ĐỊNH IN VITRO 56 1.1 Tối ưu cách chọn mẫu môi trường nuôi cấy rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh 56 1.1.1 Ảnh hưởng cách cắt mẫu rễ bất định lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 56 1.1.2 Ảnh hưởng auxin lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 59 vii 1.1.3 Ảnh hưởng việc kết hợp auxin với cytokinin lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 62 1.1.4 Ảnh hưởng mơi trường khống lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 65 1.1.5 Ảnh hưởng tỷ lệ NH4+/NO3- môi trường MS lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 66 1.1.6 Ảnh hưởng loại đường carbohydrate lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 68 1.1.7 Ảnh hưởng giá thể ni cấy lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 70 1.2 Tối ưu điều kiện nuôi cấy rễ thứ cấp từ rễ bất định sâm Ngọc Linh in vitro 71 1.2.1 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy lên tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 71 1.2.2 Ảnh hưởng nhiệt độ lên tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 72 1.2.3 Ảnh hưởng pH môi trường lên tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 73 1.2.4 Ảnh hưởng giai đoạn nuôi cấy tối sáng lên tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 75 1.2.5 Ảnh hưởng thể tích mơi trường nuôi cấy lên tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 76 1.2.6 Ảnh hưởng hệ thống ni cấy lên hình thành tăng trưởng rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 78 TĂNG CƯỜNG TÍCH LŨY SAPONIN CỦA RỄ THỨ CẤP SÂM NGỌC LINH NUÔI CẤY TỪ RỄ BẤT ĐỊNH IN VITRO 80 2.1 Ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy lên tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh từ nuôi cấy rễ bất định in vitro 80 2.1.1 Ảnh hưởng giai đoạn ni cấy lên tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất đinh in vitro 80 viii 2.1.2 Ảnh hưởng nhiệt độ lên tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 81 2.1.3 Ảnh hưởng pH lên tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 82 2.1.4 Ảnh hưởng hệ thống nuôi cấy lên tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 83 2.2 Ảnh hưởng số elicitor lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 85 2.2.1 Ảnh hưởng chitosan lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 85 2.2.2 Ảnh hưởng dịch chiết nấm men lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 86 2.2.3 Ảnh hưởng abscisic acid lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 88 2.2.4 Ảnh hưởng salicylic acid lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 89 2.2.5 Ảnh hưởng jasmonic acid lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 91 2.2.6 So sánh tác động elicitor đơn lẻ lên sư tổng hợp saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất định in vitro 92 2.2.7 Ảnh hưởng việc kết hợp đồng thời salicylic acid dịch chiết nấm men lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro 95 2.2.8 Ảnh hưởng thời gian bổ sung dịch chiết nấm men lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro 98 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 101 TỐI ƯU HĨA NI CẤY TẠO RỄ THỨ CẤP TỪ RỄ BẤT ĐỊNH IN VITRO SÂM NGỌC LINH 101 1.1 Ảnh hưởng cách chọn mẫu rễ bất định in vitro để tạo rễ thứ cấp 101 1.2 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy 102 156 1.13 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung elicitor lên tăng sinh tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh in vitro 157 Kết sắc ký lớp mỏng định tính saponin tác động đơn lẻ elicitor nuôi cấy RTC sâm Ngọc Linh Kết phân tích HPLC định lượng saponin tác động đơn lẻ elicitor nuôi cấy RTC sâm Ngọc Linh Mẫu 0: Đối chứng Mẫu 1: Ảnh hưởng 50 mg/L chitosan Mẫu 2: Ảnh hưởng 100 mg/L chitosan 158 Mẫu 3: Ảnh hưởng 150 mg/L chitosan Mẫu 4: Ảnh hưởng 200 mg/L chitosan Mẫu 5: Ảnh hưởng 50 mg/L dịch chiết nấm men Mẫu 6: Ảnh hưởng 100 mg/L dịch chiết nấm men 159 Mẫu 7: Ảnh hưởng 150 mg/L dịch chiết nấm men Mẫu 08: Ảnh hưởng 200 mg/L dịch chiết nấm men Mẫu 9: Ảnh hưởng 50 mg/L abscicic acid Mẫu 10: Ảnh hưởng 100 mg/L abscicic acid 160 Mẫu 11: Ảnh hưởng 150 mg/L abscicic acid Mẫu 12: Ảnh hưởng 200 mg/L abscicic acid 161 Mẫu 13: Ảnh hưởng 50 mg/L salicylic acid Mẫu 14: Ảnh hưởng 100 mg/L salicylic acid Mẫu 15: Ảnh hưởng 150 mg/L salicylic acid Mẫu 16: Ảnh hưởng 200 mg/L salicylic acid 162 Mẫu 17: Ảnh hưởng 50 mg/L jasmonic acid Mẫu 18: Ảnh hưởng 100 mg/L jasmonic acid Mẫu 19: Ảnh hưởng 150 mg/L jasmonic acid Mẫu 20: Ảnh hưởng 200 mg/L jasmonic acid 163 Kết sắc ký lớp mỏng định tính saponin tác động kết hợp thời gian xử lý nuôi cấy RTC sâm Ngọc Linh Sắc ký đồ mẫu khảo sát cho vết có giá trị Rf màu sắc tương đồng với vết chuẩn M-R2, G-Rb1, G-Rg1 n- butanol : acid acetic: nước (7:1:2) 2 10 11 12 Mẫu 01: 25 mg/L YE+25 µg/L SA Mẫu 02: 25 mg/L YE+50 µg/L SA Mẫu 03: 25 mg/L YE+100 µg/L SA Mẫu 04: 25 mg/L YE+150 µg/L SA Mẫu 05: 25 mg/L YE+200 µg/L SA Mẫu 06: 50 mg/L YE+25 µg/L SA Mẫu07: 50 mg/L YE+50 µg/L SA Mẫu 08: 50 mg/L YE+100 µg/L SA Mẫu09: 50 mg/L YE+150 µg/L SA Mẫu10: 50 mg/L YE+200µg/L SA Mẫu 11: 100 mg/L YE+25 µg/L SA Mẫu12: 100 mg/L YE+50 µg/L SA 2 7 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Mẫu 21: 200 mg/L YE+25 µg/L SA Mẫu 22: 200 mg/L YE+50 µg/L SA Mẫu 23: 200 mg/L YE+100 µg/L SA Mẫu 24: 200 mg/L YE+150 µg/L SA Mẫu 25: 200 mg/L YE+200 µg/L SA Mẫu 26: Thêm 150 mg/L YE sau 10 ngày nuôi cấy Sâm chuẩn Mẫu13: 100 mg/L YE+100 µg/L SA Mẫu14: 100 mg/L YE+150 µg/L SA Mẫu15: 100 mg/L YE+200 µg/L SA Mẫu16: 150 mg/L YE+25 µg/L SA Mẫu17: 150 mg/L YE+50 µg/L SA Mẫu18: 150 mg/L YE+100 µg/L SA Mẫu19: 150 mg/L YE+150 µg/L SA Mẫu20: 150 mg/L YE+200 µg/L SA Sâm chuẩn Chuẩn M-R2 Chuẩn G-Rb1 Chuẩn G-Rg1 10 11 12 13 14 Chuẩn M-R2 Chuẩn G-Rb1 10 Chuẩn G-Rg1 11 Mẫu 27: Thêm 150 mg/L YE sau 20 ngày nuôi cấy 12 Mẫu 28: Thêm 150 mg/L YE sau 30 ngày nuôi cấy 13 Mẫu 29: Thêm 150 mg/L YE sau 40 ngày nuôi cấy 14 Mẫu 30: Thêm 150 mg/L YE giai đoạn đầu nuôi cấy 164 Kết định lượng saponin tác động kết hợp thời gian xử lý nuôi cấy RTC sâm Ngọc Linh SẮC KÝ ĐỒ MẪU SÂM MẪU 1: mAU 203nm,4nm (1.00) 2500 /113000 2000 /1334983 /200515 1500 1000 500 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 MẪU 2: /473454 mAU 190nm,4nm (1.00) 1500 /456283 /3449515 1000 500 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 37.5 MẪU /3188067 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 1000 /193206 /3144099 1500 500 25.0 : MẪU 27.5 30.0 32.5 35.0 mAU 190nm,4nm (1.00) 2500 /786311 2000 1000 /533021 /1789854 1500 500 -500 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0min 165 MẪU /548718 mAU 2000 190nm,4nm (1.00) /963184 /437406 1500 1000 500 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 MẪU mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 /729429 /1593083 1000 /121275 1500 500 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 MẪU mAU 190nm,4nm (1.00) 1250 /458293 1000 750 /577202 /609274 500 250 -250 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 MẪU mAU 190nm,4nm (1.00) /823754 1750 1500 /583054 1000 750 /414354 1250 500 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 MẪU mAU 190nm,4nm (1.00) /323139 1000 /341574 /1770621 500 -500 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 166 MẪU 10 /2866479 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 1500 500 /461249 /1901111 1000 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 MẪU 11 mAU 190nm,4nm (1.00) /1989446 2000 1500 500 /314937 /1729069 1000 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 MẪU 12 mAU 190nm,4nm (1.00) /2429549 2000 1500 500 /310760 /2234533 1000 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 MẪU 13 /4317089 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 /765099 1000 500 /244860 1500 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0 MẪU 14 /571426 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 1000 /318392 /1692094 1500 500 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 167 MẪU 15 /1439004 mAU 2500 190nm,4nm (1.00) 2000 /1327598 /188901 1500 1000 500 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 MẪU 16 /2774790 mAU 190nm,4nm (1.00) 1500 /792038 500 /285747 1000 -500 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0 MÂU 17 /1661295 mAU 190nm,4nm (1.00) 1500 500 /240608 /835335 1000 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 MẪU 18 /2465329 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 1000 /400046 /876907 1500 500 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 168 MẪU 19 /1834751 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 1500 500 /365045 /644938 1000 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 MẪU 20 /464541 mAU 1500 190nm,4nm (1.00) /962050 500 /397513 1000 -500 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 MẪU 21 /1504098 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 1500 500 /298385 /1119155 1000 -500 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 MẪU 22 /2468416 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 1000 /496765 /1661916 1500 500 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 169 MẪU 23 mAU 2500 190nm,4nm (1.00) /2710762 2000 1500 500 /346974 /753259 1000 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0 50.0 55.0 MẪU 24 /1536798 mAU 190nm4nm (1.00) 2250 2000 /5399881 1500 /4484725 1750 1250 1000 750 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0min MẪU 25 /3028150 mAU 2000 190nm,4nm (1.00) 1500 /612587 500 22.5 25.0 27.5 /237138 1000 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 MẪU 26 /939995 mAU 190nm,4nm (1.00) 2000 1000 /351252 /2576412 1500 500 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 : 170 MẪU 27 mAU 203nm,4nm (1.00) 3000 2500 /135042 2000 1000 500 /93864 /496633 1500 25.0 30.0 35.0 40.0 MẪU 28 /1708923 mAU 190nm,4nm (1.00) 1500 /630324 /269672 1000 500 -500 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 MẪU 29 mAU 190nm,4nm (1.00) /938118 2000 1500 /391901 /255532 1000 500 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 MẪU 30 /1261723 mAU 190nm4nm (1.00) /1445225 1500 1000 /1768012 2000 500 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 ... NHẬT LINH NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY RỄ THỨ CẤP SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) VÀ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ELICITOR LÊN SỰ TÍCH LŨY SAPONIN Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Mã số: ... kháng elicitor ni cấy sâm Ngọc Linh chưa thực hiệu Chính thế, “ Nghiên cứu nuôi cấy rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) khảo sát ảnh hưởng số elicitor lên tích lũy saponin? ??... 2.1.1 Ảnh hưởng giai đoạn nuôi cấy lên tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh nuôi cấy từ rễ bất đinh in vitro 80 viii 2.1.2 Ảnh hưởng nhiệt độ lên tích lũy saponin rễ thứ cấp sâm Ngọc Linh