PHÚC TRÌNH thực tập kỹ thuật phân tích và thiết bị

Phúc trình thực tập kỹ thuật phân tích thiết bị. Trả lời câu hỏi các lưu ý khi sử dụng cân điện tử, tại sao phải tính Rf, lưu ý khi sử dụng tủ cấy, lưu ý khi sử dụng máy đo quang phổ, kỹ thuật pcr mẫu, kỹ thuật phân lập vi sinh vật đất, định tính một số hợp chất bằng phương pháp hóa học, sắc ký bản mỏng, đo quang phổ, chạy điện di, phương trình hồi quy

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÀI PHÚC TRÌNH THỰC TẬP KỸ THUẬT PHÂN TÍCH VÀ THIẾT BỊ MSHP: CS127 Cần Thơ 30/ 11/2019 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) PHẦN I: PHÚC TRÌNH KẾT QUẢ THỰC HÀNH BÀI 1: ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ HỢP CHẤT THIÊN NHIÊN TRONG THỰC VẬT BẰNG PHƯƠNG PHÁP HÓA HỌC Dụng cụ vật liệu hóa chất Dụng cụ - Ống nghiệm - Kẹp ống nghiệm - pipet - Đèn cồn - Găng tay cao su Vật liệu hóa chất 2.1 Vật liệu - Mẫu cao chiết từ thực vật ( nhóm 3: Cao cải trời) 2.2 Hóa chất -Thuốc thử Wagner - Chì acetate (Pb(OAc)4 10%) - Clorofom - (CH3CO)2O - FeCl3 5% -NaOH 10% II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ Thí nghiệm 1: Định tính Alkaloid I -Tiến hành: cho 1mL cao chiết vào ống nghiệm Sau nhỏ 2-4 giọt thuốc thử wagner -Kết quả: Có kết tủa đỏ nâu xuất -Kết luận: Có alkaloid cao cải trời Thí nghiêm 2: Định tính Coumarins -Tiến hành: Cho 2mL cao chiết vào ống nghiệm thêm 3mL NaOH 10% -Kết quả: Xuất màu vàng -Kết luận: Có Coumarins diện cao chiết CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Thí nghiệm 3: Định tính Flavonoid -Tiến hành: Cho 1mL cao chiết vào ống nghiệm thêm 1mL chì acetate vào -Kết quả: Có kết tủa màu vàng xuất -Kết luận: Có Flavonoid mẫu cao chiết Thí nghiệm 4: Định tính Phenol -Tiến hành: Cho 2mL cao chiết vào ống nghiệm thêm giọt FeCl3 5% vào -Kết quả: Xuất màu xanh dương sẫm đen (hoặc màu đen) -Kết luận: Có Phenol mẫu cao chiết Thí nghiệm 5: Định tính Saponin -Tiến hành: Cho 2mL cao chiết 4mL nước cất vào ống nghiệm Đun nóng nhẹ lắc mạnh khoảng 1-2 phút -Kết quả: Không xuất bọt -Kết luận: Khơng có Saponin cao chiết CS 127 Nhóm C7 (Tổ 3) TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Thí Nhóm C7 (Tổ 3) nghiệm 6: Định tính Steroid -Tiến hành: Cho 1mL cao chiết vào ống nghiệm thêm 2mL Clorofom Tiếp tục cho vào H2SO4 đậm đặc Thực tủ hút -Kết quả: Xuất vòng đỏ nâu hai lớp -Kết luận: Trong mẫu cao chiết có Steroid Thí nghiệm 7: Định tính Terpenoid -Tiến hành: Cho 2mL cao chiết vào ống nghiệm thêm 2mL anhydric vào, nhỏ 2-3 giọt H 2SO4 đậm đặc vào Thự tủ hút -Kết quả: Có màu đỏ nâu xuất -Kết luận: Có Terpenoid diện mẫu cao chiết Thí nghiệm 8: Định tính Tannin -Tiến hành : Cho 2mL cao chiết vào ống nghiệm thêm 2mL nước cất vào Sau đó, thêm 2-3 giọt FeCl 5% vào -Kết quả: Xuất kết tủa xanh xanh nâu -Kết luận: Có Tannin mẫu cao chiết Nguyên tắc việc định tính hợp chất thí nghiệm là: Dựa vào thay đổi màu sắc, tượng hóa học mẫu ban đầu với thuốc thử Từ xác định hợp chất hóa học tồn mẫu cao chiết CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) BÀI PHÂN TÍCH MỘT SỐ HỢP CHẤT BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG (TLC) I Dụng cụ, vật liệu hóa Dụng cụ Vật Liệu hóa chất 2.1 Vật - - - - chất liệu -Mẫu phân tích -Mẫu chuẩn 2.2 Hóa chất -Sodium phosphate -Acetone -Ethyl acetate -Petroleum ether -Nước cất II Tiến hành kết thí nghiệm Tiến hành sắc ký Chuẩn bị bình sắc ký: bình săc ký bình thủy tinh có nắp đậy kín, chuẩn bị bình hút ẩm nhỏ có nắp đậy kín bên bình chứa cốc thủy tinh có dung tích 100 mL Chuẩn bị dung môi: Sử dụng hỗn hợp dung môi gồm: Ethyl acetate : Petroleum ether (Tỷ lệ 3:1) chứa cốc thủy tinh, sau cho cốc chứa hỗn hợp dung mơi vào bình sắc ký, để yên khoảng 30 phút đến đến dung mơi bão hòa Chuẩn bị mỏng TLC: sử dụng mỏng TLC có tráng silica gel kích thước 20x20cm Cắt mỏng thành với kích thước 2,5x10cm Từ mép kẻ đường mảnh, với khoảng cách 1cm, để làm dừng q trình phân tích sắc ký Từ mép dưới, kẻ đường mảnh cách 1,5cm, cho vết chấm không bị ngập vào dung môi Trên đường chấm điểm điểm cách 0,4 cm, để nhỏ chất phân tích Chấm dung dịch phân tích lên mỏng: dùng ống mao quản (được kéo nhọn đầu kẹp lửa đèn cồn) Chấm nhiều lần lần chấm dung dịch chất cần sấy khô chấm tiếp Phân tích sắc ký: đặt thẳng đứng mỏng vào cốc dung môi, để yên đến dung môi chạy đến đường mép trên, lấy mỏng ra, sấy 500C , 3-5 phút Quan sát kết tính giá trị Rf: Rf tính tỉ số khoảng cách chất cần phân tích di chuyển khoảng cách dung mơi di chuyển Kết CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) Hình: Sắc ký lớp mỏng -Trong điều kiện định (dung môi, nhiệt độ…), chất đặc trưng trị số định gọi hệ số Rf Rf = A/B Trong đó: - A: khoảng cách di chuyển chất phân tích - B: khoảng cách di chuyển dung mơi Từ kết thí nghiệm ta tính giá trị Rf mẫu phân tích mẫu chuẩn Mẫu phân tích (Tảo) Rf= 4.45/4.65 = 0.957 Mẫu chuẩn (β- Carotene) Rf= 4.5/4.65 = 0.967  Kết luận: Điều chứng tỏ β- Carotene tan nhiều pha di động, hay tan nhiều dung mơi hữu nên có tốc độ di chuyển nhanh Chất có tảo có giá trị Rf gần với β- Carotene, bỏ qua sai số ta nhận định β- Carotene  Tại phải tín giá trị Rf -Giá trị Rf đại lượng đặc trưng cho mức độ di chuyển chất phân tích, tính tỷ lệ khoảng dịch chuyển chất thử khoảng dịch chuyển dung mơi -Giá trị Rf có tương quan chặt chẽ với hệ số phân bố chúng pha dung môi Giá trị Rf lớn cho thấy chất phân tích tan pha cố định (nước) lại tan nhiều pha di động (dung mơi hữu cơ), điều chứng tỏ tốc độ di chuyển mỏng nhanh Ngược lại, giá trị Rf nhỏ chứng tỏ chất phân tích tan nhiều pha cố định (nước) tan pha di động, tốc độ di chuyển mỏng chậm CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) BÀI 4: PHƯƠNG PHÁP XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN TINH BỘT – IOD BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO ĐỘ HẤP THU QUANG PHỔ 4.1 Ghi nhận kết xây dựng đường chuẩn tinh bột – iod phần mềm exel Hình 1: Mẫu sau pha lỗng với nồng độ từ – mg/mL Bảng 1: Kết đo độ hấp thu quang phổ Lần đo OD Lặp lại Nồng độ (mg/mL) Trung bình R1 R2 R3 Ống 0,024 0,016 0,019 0,020 Ống 0.2 0,074 0,098 0,188 0,120 Ống 0.4 0,185 0,197 0,188 0,190 Ống 0.6 0,19 0,188 0,189 0,189 Ống 0.8 0,277 0,281 0,294 0,284 Ống 0,311 0,324 0,338 0,324 CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) Hình 2: Kết xây dựng đường chuẩn tinh bột – Iod phần mềm exel 4.2 Nguyên lí hoạt động máy quang phổ - Nguyên lý hoạt động : dựa vào tượng phản xạ ánh sáng Nguồn sáng tới ánh sáng trắng gồm tia sáng đơn sắc với màu bước sóng khác Khi nguồn sáng chiếu vào hệ thống thấu kính hội tụ tạo chùm sáng trắng qua khe hẹp vào phận tán sắc Khi chùm sáng trắng chiếu vào lăng kính bị tán sắc thành tia sáng đơn sắc chiếu phía Tia sáng phản xạ qua thấu kính gương phẳng khỏi buồng tán sắc đến phận phân chia chùm sáng, phận hướng chùm sáng đến cuvet chứa mẫu nghiên cứu Detector tiếp nhận phân tích chùm sáng qua cuvet, chuyển tín hiệu ánh sáng thành tín hiệu điện cho lên máy tính kết đo CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) BÀI 5: PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP VI SINH VẬT I II  III CS 127 DỤNG CỤ, VẬT LIỆU VÀ HÓA CHẤT Dụng cụ - Bình tam giác 250 ml - Ống nghiệm khay đựng ống nghiệp - Đĩa petri - Đèn cồn, que cấy trải - Đầu cone loại Vật liệu Mẫu cần phân lập ( mẫu đất) Hóa chất - Hóa chất sử dụng để pha mơi trường - Nước cất khử trùng TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM -1 -5 - Chuẩn bị mẫu đất pha loãng nồng độ khác từ 10 đến 10 Hút 0,1 ml dung dịch mẫu pha loãng cho vào đĩa petri có mơi trường thích hợp - Dùng que cấy trải phân phối dịch mẫu trải khắp mặt thạch - Đặt đĩa petri cấy trãi nhiệt độ thích hợp sau thời gian định tùy giống vi sinh vật ta nhận khuẩn lạc riêng lẻ Sau đó, tiến hành chọn khuẩn lạc riêng lẻ để tách ròng dòng vi sinh vật - Kiểm tra hình thái khuẩn lạc kính hiển vi cho có loại tế bào có hình thái giống chọn dòng vi khuẩn Lưu ý: Trong thao tác tạo khuẩn lạc đơn cần lưu ý hạn chế thấp nguy bị nhiễm cách thực nghiêm túc yêu cầu thao thao tác vô trùng TRẢ LỜI CÂU HỎI Trình bày phương pháp phân lập vi sinh vật đất: - Hơ xung quanh đĩa petri lửa đèn cồn để tiêu duyệt vi sinh vật bên đĩa để tránh bị nhiễm - Mở nắp ống nghiệm chứa mẫu pha loãng cách dùng ngón mở mà giữ nắp ống nghiệm Dùng pipet hút 0,1mL dung dịch mẫu pha loãng cho vào đĩa petri có mơi trường thích hợp - Lấy que cấy ngâm cồn hơ lửa cho nóng, diệt vi sinh vật - Đợi que cấy nguội, dùng que cấy phân phối dịch mẫu trải khắp mặt thạch - Hơ xung quanh đĩa petri lần đóng nắp đĩa Cố định nắp đĩa thật kín dán nhãn - Đặt đĩa petri cấy trãi nhiệt độ thích hợp sau thời gian định tùy giống vi sinh vật ta nhận khuẩn lạc riêng lẻ Sau đó, tiến hành chọn khuẩn lạc riêng lẻ để tách ròng dòng vi sinh vật - Kiểm tra hình thái khuẩn lạc kính hiển vi cho có loại tế bào có hình thái giống chọn dòng vi khuẩn Nêu nguyên lý hoạt động tủ cấy bước thao tác cấy - Khơng khí phòng vào từ phía tủ qua lọc trước (ở hạt lớn giữ lại, việc gia tăng tuổi thọ cho lọc Vì lọc khơng cần phải lọc hạt lớn nữa) - Khơng khí bị ép đồng tồn màng lọc ULPA cho dòng khí thống Làm lỗng làm chất nhiễm khơng khí từ bên TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) Vận tốc bề mặt lọc 0-45m/s(90FPM) đảm bảo đủ số lượng thay đổi khơng khí để trì khu vực làm việc - Khơng khí xuống khu vực thao tác làm việc theo dòng chảy chiều thẳng đứng, thối khỏi khu vực làm việc tồn diện tích mở trước tủ sau làm việc chệch hướng khỏi bề mặt làm việc, - Lỗ tường phía sau thiết kế để làm giảm thiểu biến động bề mặt làm việc giảm thiếu khả khơng khí góc chết vừng làm việc Các bước thao tác cấy - Sát trùng tay dung dịch cồn 70%, sát trùng mặt bàn làm việc trước sau làm việc - Vô trùng que cấy, que trang - Vơ trùng pipet - Chuẩn bị, pha lỗng dịch huyền phù - Cấy truyền dịch huyền phù lên môi trường thạch đĩa petri - Đậy nắp hộp lồng, dán nhãn cho hộp lồng gồm ngày thực hiện, nồng độ pha lỗng dịch huyền phù, tên mơi trường - Gói hộp lồng đưa vào tủ ấm Báo cáo kết phân lập -  - 10 CS 127 Sau khoảng 48 cấy mẫu, phân lập dòng vi khuẩn Nó có dạng chấm nhỏ, màu trắng, có dạng hình tròn Phân lập nồng độ 10-5 cho kết khuẩn lạc rời rạc, dễ nhìn thấy TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) BÀI 6: KỸ THUẬT PCR DỤNG CỤ, VẬT LIỆU VÀ HĨA CHẤT Dụng cụ Eppendorf 100µl Pipet loại ( từ 0,5 đến 10 µl) Khay đựng ống nghiệm eppendorf Vật liệu Mẫu DNA vi khuẩn hay thực vật Hóa chất - Master mix cơng ty Sinh Hóa Phù Sa - Mồi xi 27F ( 27F: 5’- GAG AGT TTG ATC CTG GTC CAG – 3’) vi khuẩn - Mồi ngược 1495R(1495R 5’ – CTA CGG CTA CCT TGT TAC GA – 3’) vi khuẩn - Nước cất trùng II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM Thành phần hỗn hợp chuẩn bị cho PCR (50 µL): - 25 µl master mix cơng ty Sinh Hóa Phù Sa - µl mồi xi (27F) 10µM - µl mồi ngược (1495R) 10µM - µl mẫu DNA ( nồng độ - 100 µL) - 20 µL nước cất trùng Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR I   95oC 2m 95oC 72oC 1m 3m 50oC 2m 72oC 7m 4oC ∞ 35 chu kỳ III - 11 - CS 127 TRẢ LỜI CÂU HỎI Nêu bước phản ứng PCR Bước 1: Khởi đầu Đun hỗn hợp 95°C vòng phút để đảm bảo sợi DNA mồi làm nóng DNA-Polymerase có giai đoạn khởi đầu, thêm vào sau bước Bước 2: Biến tính (Melting) 95°C phút Đối với chu kì lượng thời gian đủ để biến tính DNA Bước 3: Gắn mồi (Annealing) 50°C phút Bước 4: Kéo dài (Elongation).72°C phút Bước 5: Các bước từ đến lặp lại 35 lần, nhiên với mồi polymerase tốt, có chu kì TT Kỹ thuật phân tích thiết bị - - - - 12 CS 127 Nhóm C7 (Tổ 3) Bước 6: Giữ hỗn hợp 4°C Tại nhiệt độ DNA không bị hư hại vòng đêm Tại có khác biệt nhiệt dộ trình PCR? Sự khác biệt nhiệt độ trình PCR trình PCR cần khuếch đại đoạn gen nên cần có nhiệt độ thích hợp cho giai đoạn để đoạn gen thực trình khác tháo xoắn, kéo dài, khuếch đại cách thích hợp, đáp ứng yêu cầu cần thiết người thực Master mix phù sa gồm thành phần nào? PHUSA Master Mix 2X hỗn hợp dung dịch có nồng độ 2X Taq DNA Polymerase, dNTPs thành phần cần thiết cho PCR ngoại trừ DNA template mồi Sản phẩm Master Mix 2X Tracking dye có chứa thêm chất có tỉ trọng cao màu thị giúp load trực tiếp sản phẩm sau PCR vào gel agarose mà phối trộn thêm với loading buffer khác Thành phần Buffer sử dụng: 10 mM Tris-HCl, 75 mM KoAC, mM MgCl (pH 8,5) TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) BÀI 8: KỸ THUẬT PHÂN TÍCH ĐIỆN DI Ghi nhận hình chụp gel phân tích kết thu Hình 1: Kết điện di gel (giếng 4) -Giếng 1: mẫu DNA chuẩn -Giếng 4: mẫu DNA nhóm Nhận xét: Dựa vào band DNA chuẩn, ban DNA nhóm nằm khoảng 1000bp, nằm khoảng vi khuẩn Band rõ dễ nhìn Safeview có tác dụng phân tích điện di? Dùng để nhuộm acid nhân giúp ADN phát sáng đèn UV, giúp dễ quan sát sau điện di Hơn hết Safeview độc hại thay cho Ethidium Bromide (trước gây ung thư) nên phù hợp với sinh viên công tác học tập  Tại phải chọn nồng độ agarose thích hợp cho đoạn gene có kích thước khác nhau? -Vì thực q trình điện di Gel agarose, tốc độ di chuyển đoạn gen khác Tốc độ di chuyển DNA phụ thuộc vào số thồng số sau: -Kích thước DNA: phân tử DNA thẳng có kích thước lớn di chuyển qua lỗ gel sẽbị cản trở nên chậm so với DNA có kích thước nhỏ -Nồng độ agarose: tùy kích thước DNA muốn phân tích mà ta chọn nồng độ agarose thích hợp Kích thước DNA nhỏ muốn dễ phân tích nên sử dụng nồng độ agarose phải cao ngược lại -Tùy kích thước DNA muốn phân tích mà ta chọn nồng độ agarose thích hợp Kích thước DNA nhỏ muốn dễ phân tích nên sử dụng nồng độ agarose phải cao ngược lại 13  Nêu nguyên lý kỹ thuật phân tích điện di? -Điện di kĩ thuật để phân tích phân tử DNA, RNA, Protein dựa đặc điểm vật lý chúng kích thước, hình dạng hay điểm đẳng điện  CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) -Kĩ thuật sử dụng dung dịch đệm để dẫn diện tạo điện trường đều, gel (thường agarose hay polyacrylamide) làm để phân tách phân tử, chất nhuộm khác (ethidium bromide, bạc, xanh Coomassie) để phát vị trí phân tử gel sau điện di -Kĩ thuật điện di hoạt động nhờ vào lực kéo điện trường tác động vào phân tử tích điện kích thước lỗ thể gel -Gel cấu tạo chuỗi cao phân tử polymer liên kết chéo với tạo thành hệ thống mạng lưới với kích thước mắc lưới tùy thuộc vào nồng độ chất cao phân tử (agarose, polyacrylamide) phản ứng tạo liên kết chéo Các phân tử phân tách di chuyển gel với vận tốc khác nhờ vào khác lực điện trường tác động lên chúng, kích thước phân tử so với kích thước lỗ gel hình dạng, độ cồng kềnh phân tử PHẦN II: TRẢ LỜI CÂU HỎI 1./ Những lưu ý sử dụng cân điện tử hay cân phân tích: - Đọc kỹ hướng dẫn sử dụng trước sử dụng cân điện tử hay cân phân tích - Không đặt vật /mẫu cần cân lên cân phân tích/điện tử đột ngột thả mạnh vật/mẫu lên mặt bàn cân cân Để vật/mẫu lên bàn cân cách nhẹ nhàng - Không đặt trực tiếp vật/mẫu, chất lỏng, bột trực tiếp tiếp xúc lên mặt bàn cân phân tích điện tử mà phải dùng chén, lọ,đĩa, giấy cân để đựng mẫu cân - Không cân mẫu nặng mức giới hạn quy định nhà sản xuất cân - Điều kiện môi trường cân: ẩm độ khơng khí: 45-55%, nhiệt độ 25-350C - Khơng thực cân môi trường khô (< 25%) ẩm (>70%) mẫu có nhiệt độ cao (> 650C) - Khi vệ sinh mặt bàn cân phân tích/điện tử cần phải tắt nguồn điện cân lấy mặt bàn cân khỏi đế đỡ mặt bàn cân thực việc lau chùi Yêu cầu tuyệt đối nhẹ nhàng cẩn thận - Khi không dùng cân điện tử phân tích, tuyệt đối khơng để trọng lượng lên mặt bàn cân làm cân phải chịu tải liên tục Cân cần che bụi hộp mica tương đương không phủ lên mặt bàn cân vải hay nylon Cân không phơi trực tiếp ánh nắng chịu tác động liên tục gió, quạt gió - Trong q trình cân, cần tắt, đóng hay cách ly tất thiết bị có ảnh hưởng gián tiếp lên mặt bàn cân quạt, máy lạnh, cửa sổ… - Khi cân, không thực thao tác khuấy, gõ lên chén cốc đựng mẫu Các thao tác nói tương tự cần phải thực bên cân thay thao tác khác không gây tác động trực tiếp lên mặt bàn cân - Để cân phân tích vị trí phẳng - Mỗi di dời cân phân tích, cần kiểm tra hiệu chỉnh độ thăng mặt bàn cân Tùy theo loại cân phân tích, kiểm tra độ lệch khỏi vị trí trung tâm giọt nước 2./ Mô tả cách sử dụng máy đo pH, cách chỉnh pH chuẩn, nêu loại pH chuẩn khoản pH pH chuẩn? 14 - CS 127 Các bước tiến hành chuẩn sau: Gắn điện cực vào máy đo bật công tắc bên hơng máy vị trí pH Tháo vỏ nhựa bao đầu điện cực (lưu ý bên có chứa dung dịch KCl 3M Rửa điện cực nước cất Dùng giấy thấm để thấm bớt nước đầu điện cực TT Kỹ thuật phân tích thiết bị - - - - - - - 15 - - CS 127 Nhóm C7 (Tổ 3) Chỉnh núm nhiệt độ nhiệt độ dung dịch chuẩn (thường nhiệt độ phòng khỏang 25-30oC) Cho điện cực vào dung dịch đệm pH 7, chờ cho trị số mặt hiển thị ổn định, chỉnh núm pH cho số đọc trị số 7,00 Lấy điện cực rửa nước cất Thấm bớt nước đầu điện cực giấy thấm Cho điện cực vào dung dịch đệm pH X ( pH hay pH 10) Nếu số đọc 4,00 (hay 10,00), dùng vít nhỏ chỉnh núm pH X cho số hiển thị máy đo 4,00 (hay 10,00) Lấy điện cực rửa điện cực nước cất Thấm bớt nước đầu điện cực Thực lại bước trị số hiển thị máy đo với trị số dung dịch đệm pH pH (hay pH10) Sau chuẩn, dùng máy để đo trị số pH dung dịch muốn đo Lưu ý: cho điện cực vào dung dịch, chờ trị số đo ổn định đọc Để chuẩn máy đo Hiệu chuẩn hai điểm – Trong phương pháp này, máy đo pH dựa vi xử lý tính tốn độ dốc thực sai số bù cho điện cực pH Dựa thơng tin này, phương trình mV / pH đồng hồ điều chỉnh để phù hợp với đặc tính điện cực pH sử dụng Hiệu chuẩn nhiều điểm – Với số mét pH, hiệu chuẩn thực cho hai giá trị pH hai mặt điểm zero, trường hợp pH 7,00 Hiệu chuẩn ba nhiều giá trị pH làm tăng phạm vi đo thiết bị mà không cần hiệu chuẩn lại Cần dùng dung dịch đệm có trị số pH pH X Khi dung dịch cần đo có pH < 7, chọn pH X pH Nếu dung dịch cần đo có pH > 7, chọn pH X pH 10, phép đo xác Các loại pH chuẩn: Quỳ tím Máy đo pH Bút đo pH: Bút đo pH đất, bút đo pH nước Test sera 3./ Những lưu ý sử dụng máy cô quay chân không (rotatory evaporator)? Đọc tìm hiểu kỹ bước vận hành sử dụng trước sử dụng máy Tìm hiểu trước đặc tính (ví dụ: nhiệt độ sơi, nhiệt độ nóng chảy, ) chất, dung môi đem quay Cơ quay hợp chất có tính ổn định q trình quay Kiểm tra phận thiết bị đảm bảo trạng thái hoạt động bình thường (ví dụ: bình thủy tinh chứa mẫu dung môi, ống sinh hàn không bị rạn nứt, máy hoạt động bình thường) Cẩn thận nâng đặt bình chứa bình bay vào máy, giữ bình chứa mẫu bật máy hút chân không cảm thấy bình mẫu bị hút chặt vào vị trí lắp Phải cẩn thận để tránh làm vỡ bình Khi lắp hệ thống xong, cần kiểm tra lại độ kín hệ thống quay Điều chỉnh độ mạnh chân không cách từ từ (hoặc nhiệt cung cấp từ nồi nước nóng) để điều chỉnh tốc độ bay hơi, thêm hóa chất boiling chíp (để hỗ trợ trình bay hơi) Cài đặt tốc độ quay vừa đủ Cài đặt máy cô quay theo bảng dung môi phù hợp với nhiệt độ Nếu dung môi không bay không gặp hệ thống sinh hàn, không thực tách dung môi TT Kỹ thuật phân tích thiết bị - - - - Nhóm C7 (Tổ 3) Người sử dụng thiết bị bay quay phải thận trọng để tránh tiếp xúc với phận quay, đặc biệt vướng víu quần áo, tóc, dây chuyền Khi quay xong ta muốn lấy bình chứa khỏi hệ thống phải thực hiên thao tác xả chân khơng cách mở khóa chân khơng để làm cân áp suất hệ thống với mơi trường bên ngồi Tuân thủ theo hướng dẫn giáo viên cán quản lý phòng thí nghiệm 4/ Những lưu ý sử dụng thiết bị Soxhlet? Các hợp chất chiết trữ bình cầu, đến lúc nồng độ chất đạt đến mức bảo hòa cần phải thay dung môi Tùy trường hợp, việc chiết kéo dài vài ngày Muốn nghỉ, cần phải tắt bếp trước, chờ thêm khoảng 30 phút tắt ống nước làm lạnh ống sinh hàn Khi thực chiết với dung mơi có nhiệt độ sơi thấp, phòng thí nghiệm xứ nóng, cần lưu ý xem ống sinh hàn có đủ sức làm ngưng tụ hay khơng, khơng, thấy bốc khí khỏi hệ thống từ đầu cao ống sinh hàn, trường hợp cần tìm cách nối dài thêm hệ thống sinh hàn Lưu ý hệ thống hở, phần bên hệ thống thông với khơng khí bên ngồi nhờ ống sinh hàn, nối dài ống sinh hàn không làm ống bị bít Sau chiết kiệt với loại dung mơi, muốn tiếp tục chiết với dung mơi có tính phân cực cao ta phải rút bao chứa nguyên liệu khỏi ống, mở miệng bao cho dung mơi bay hết, cho bao trở lại ống, rót dung mơi vào bắt đầu quy trình chiết 5./ Những lưu ý sử dụng tủ cấy? Cần phải vệ sinh tủ trước sau sử dụng dung dịch ethanol 70%, calcium hypochloride 10%, Sắp xếp dụng cụ, vật liệu cần thiết (trừ mẫu thí nghiệm) cho quy trình theo trật tự hợp lý phải làm với chất khử nhiểm (ethanol 70%),… Bật UV đủ thời gian cần thiết để đảm bảo vô trùng tủ trước sử dụng (thường 30 – 50 phút) tránh tiếp xúc với tủ bật UV Không để giấy, thiết bị,… chặn lỗ khí phía trước tủ (có thể gây xáo trộn khơng khí, mang nguồn khơng khí nhiễm vào tủ) thực cách lỗ khí 10cm 6/ Những lưu ý sử dụng sắc ký mỏng (TLC)? - 16 - Chú thích viết chì lên sắc ký Khi thích nhớ vạch nhẹ đừng đè mạnh, tránh làm hỏng lớp silica gel sắc kí Khi cầm sắc kí tránh dùng tay trực tiếp lên lớp silica gel, ảnh hưởng đến kết trình sắc ký Sử dụng máy sấy đợi cho khô chấm tiếp tục mẫu lên sắc ký Sau sắc ký xong nhớ dùng đánh dấu lại vạch màu, mực nước tránh sắc ký khô bay Khi đặt sắc ký vào dung mơi cần ý đặt thẳng đứng tránh nghiên ngã ảnh hưởng đến kết Trong trình làm cần theo dõi, quan sát mẫu chạy đến đâu để dừng lại lúc thời gian thời điểm, tránh để lâu 7/ Những lưu ý sử dụng máy đo quang phổ? - CS 127 Chỉ sử dụng cho phép hướng dẫn sử dụng cán phòng thí nghiệm TT Kỹ thuật phân tích thiết bị - Nhóm C7 (Tổ 3) Cần tìm hiểu rõ cách vận hành, thao tác với máy trước sử dụng Dung dịch mẫu phải đồng Chọn loại cuvet phù hợp với mẫu Đặt cuvet cách vào máy đo quang phổ Cần chọn bước sóng phù hợp Cầm cuvet, vệ sinh cuvet cách 8/ Những lưu ý sử dụng nồi hấp trùng? - - Chỉ sử dụng cho phép hướng dẫn sử dụng cán phòng thí nghiệm Cần tìm hiểu rõ cách vận hành, thao tác sử dụng nồi hấp trùng cách Đặt nồi hấp phẳng, cân giữ khoảng cách 6cm tường vỏ máy Kiểm tra gioăng cao su đặt vị trí chưa Trước sử dụng cần dùng khăn ẩm lau phía bên ngồi bề mặt tiếp xúc với nồi gioăng để tránh có vật thể lạ làm q trình tiệt trùng Chú ý: thao tác mở nắp nồi cần nhẹ nhàng, sau mở nắp không nên bỏ tay khỏi tay nắm để tránh trường hợp hỏng lò xo đàn hồi nắp nồi Đợi áp suất nồi mở nắp nồi Khi mở nắp cần thực để tránh bị thương Kiểm tra nguồn điện trước sử dụng Ngắt điện sau sử dụng Sau mở nắp nồi, lấy rổ lưới phụ kiện khỏi nồi sau dùng khăn tiến hành lau bên nồi Trước bật nồi, cần kiểm tra lượng nước nồi có cạn không ( tránh việc cháy role nồi) Nhớ canh thời gian khử trùng 9/ Những lưu ý sử dụng máy cất nước máy lọc nước RO? - Máy cất nước Phải khố vòi khơng có nước Máy lọc nước RO - Phải đăng kí sổ sử dụng Đối với máy lọc nước RO cần đăng ký sổ Đối với máy nước cất đăng ký sổ phải có xác nhận cán quản lý sử dụng - Máy nước cất có khố: khố đỏ (khố nguồn - nước nguồn) khố xanh (khố an tồn - chỉnh mức nước) Khi phép sử dụng số liệu máy điều chỉnh với lượng nước phù hợp, mở khố đỏ, khơng dùng khố 17 CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị xanh 18 CS 127 Nhóm C7 (Tổ 3) TT Kỹ thuật phân tích thiết bị 19 CS 127 Nhóm C7 (Tổ 3) ... lý kỹ thuật phân tích điện di? -Điện di kĩ thuật để phân tích phân tử DNA, RNA, Protein dựa đặc điểm vật lý chúng kích thước, hình dạng hay điểm đẳng điện  CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị. .. Tris-HCl, 75 mM KoAC, mM MgCl (pH 8,5) TT Kỹ thuật phân tích thiết bị Nhóm C7 (Tổ 3) BÀI 8: KỸ THUẬT PHÂN TÍCH ĐIỆN DI Ghi nhận hình chụp gel phân tích kết thu Hình 1: Kết điện di gel (giếng... nước phù hợp, mở khố đỏ, khơng dùng khố 17 CS 127 TT Kỹ thuật phân tích thiết bị xanh 18 CS 127 Nhóm C7 (Tổ 3) TT Kỹ thuật phân tích thiết bị 19 CS 127 Nhóm C7 (Tổ 3)