Đánh giá hoạt tính sinh học của một số nhóm chất tách chiết từ cây Tô mộc (Caesanpinia sapan L.)

Luận văn đã góp phần nghiên cứu hoạt tính sinh học của một số chiết xuất từ gỗ Tô mộc (Caesanpinia sapan L.). Nghiên cứu đã đánh giá và tìm ra được phân đoạn Ethyl acetat (EAF) chiết xuất từ lõi gỗ cây Tô mộc là phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn và chống oxi hóa tốt. Chiết xuất EAF đã được chứng minh có khả năng ức chế mạnh sự phát triển của nhiều vi sinh vật, đặc biệt là các chủng vi khuẩn Gram (+) và các chủng Vibrio gây bệnh hoại tử gan tụy cấp trên tôm.

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Đỗ Thị Huế ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ NHĨM CHẤT TÁCH CHIẾT TỪ CÂY TƠ MỘC (CAESALPINIA SAPPAN L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Đỗ Thị Huế ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ NHĨM CHẤT TÁCH CHIẾT TỪ CÂY TƠ MỘC (CAESALPINIA SAPPAN L.) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Hồng Điệp Hà Nội - 2018 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn thạc sĩ, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Lê Hồng Điệp - Bộ mơn Hóa sinh Sinh học phân tử, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội, người tận tình bảo, hướng dẫn tạo điều kiện tốt cho em suốt trình học tập nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS TS Nguyễn Quang Huy Trưởng khoa Sinh học, TS Trần Văn Tuấn - Bộ môn Vi sinh vật học, Trường ĐH Khoa học Tự nhiên giúp đỡ cho em nhiều lời khuyên quý báu trình thực luận văn Em xin cảm ơn thầy cô giáo, cán anh chị mơn Hóa sinh Sinh học phân tử, thầy cô khoa Sinh học trường ĐH Khoa học Tự nhiên tạo điều kiện giúp đỡ, truyền dạy cho em kiến thức, kỹ kinh nghiệm nghiên cứu khoa học để em hồn thành luận văn Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình, bạn bè, em sinh viên phòng thí nghiệm Hóa sinh Sinh học phân tử Lab 132T1 ln bên giúp đỡ, khích lệ động viên em lúc khó khăn đưa góp ý, chia sẻ kinh nghiệm học tập nghiên cứu Em xin trân trọng cảm ơn dự án Hợp tác Việt Bỉ (Exploring the Medical, (ECO)-Toxicological and Socio-Economic Potential of Natural Extracts in North Vietnam) hỗ trợ kinh phí nguồn mẫu để tiến hành thí nghiệm q trình thực đề tài luận văn Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 21 tháng 11 năm 2018 Học viên Đỗ Thị Huế Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ADN Axit Deoxyribonucleic AG Axit gallic American Type Culture Collection ATCC (Bảo tàng giống chuẩn Hoa kỳ) CAMHB Cation-adjusted Mueller-Hinton broth Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI (Viện Tiêu chuẩn lâm sàng xét nghiệm Hoa Kỳ) Dichloromethane fraction DMF (Phân đoạn dichloromethane ) DPPH 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl EAF Ethyl acetate fraction (Phân đoạn ethyl acetate ) EF Ethanol fraction (Phân đoạn ethanol) GAE Đương lượng axit gallic LB Luria- Bertani MAE Microwave assisted extraction Minimal bactericidal concentration MBC (Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu) MHA Mueller Hinton Agar Luận văn Thạc sỹ khoa học MHB Mueller Hinton Broth Minimal inhibitory concentration MIC (Nồng độ ức chế tối thiểu) nHF n-hexan fraction (Phân đoạn n-hexan) OD Optical Density (Mật độ quang học) PDA Potato dextrose agar SFE Supercritical fluid extraction SPME Solid Phase Microextraction TM Tô mộc UAE Ultrasound assisted extraction VH Vibrio harveyi VP Vibrio parahaemolyticus VSV Vi sinh vật Đỗ Thị Huế Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Độ hấp thụ quang phổ axit gallic bước sóng 765 nm .29 Bảng 3.1 Hiệu suất tách chiết gỗ Tô mộc 40 Bảng 3.2 Kết chiết phân đoạn gỗ Tô mộc 42 Bảng 3.3 Hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn gỗ Tô mộc chủng E coli 44 Bảng 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn gỗ Tô mộc chủng B subtilis 44 Bảng 3.5 Hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn EAF chủng S aureus B cereus 46 Bảng 3.6 Hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn EAF chủng S typhimurium P aeruginos 47 Bảng 3.7 Kết xác định MIC/MBC cao EAF chủng VSV .49 Bảng 3.8 Hoạt tính kháng khuẩn cao EAF chủng Vibrio 51 Bảng 3.9 Kết thử hoạt tính kháng nấm cao EAF 55 Bảng 3.10 Hoạt tính chống oxi hóa axit ascorbic cao EAF 57 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây Tơ mộc (Đỗ Xn Cẩm) Hình 1.2 Một số hợp chất từ Tơ mộc Hình 1.3 Một số phương pháp tách chiết thông thường [7] .19 Hình 1.4 Sơ đồ phương pháp tách chiết có hỗ trợ vi sóng [71] .20 Hình 1.5 Sơ đồ phương pháp chiết siêu tới hạn [37] .23 Hình 2.1 Mẫu gỗ Tơ mộc 27 Hình 2.2 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn gỗ Tô mộc .28 Hình 2.3 Đường chuẩn axit gallic 30 Hình 2.4 Cách xác định vòng kháng khuẩn .33 Hình 2.5 Sơ đồ phản ứng trung hòa gốc DPPH chất chống oxi hóa [40] 37 Hình 2.6 Phương trình đường chuẩn axit ascorbic 38 Hình 3.1 Sơ đồ hiệu suất tách chiết phân đoạn gỗ Tơ mộc 43 Hình 3.2 Hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn gỗ Tơ mộc chủng E coli B subtilis 45 Hình 3.3 Hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn EAF chủng S aureus B cereus 47 Hình 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn EAF chủng S typhimurium P aeruginosa 48 Hình 3.5 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết EAF chủng Vibrio 52 Hình 3.6 Kết khảo sát khả ức chế vi khuẩn Vibrio cao EAF .53 Hình 3.7 Kết thử hoạt tính kháng nấm cao EAF 56 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN .3 1.1 Giới thiệu chung Tô mộc 1.1.1 Sơ lược phân họ Vang 1.1.2 Giới thiệu chung Tô mộc 1.2 Tình hình nghiên cứu Tơ mộc 1.2.1 Các nghiên cứu Tô mộc giới 1.2.2 Tình hình nghiên cứu Tơ mộc Việt Nam .15 1.3 Khái quát phương pháp chiết cao dược liệu .16 1.3.1 Tổng quan chiết xuất dược liệu 16 1.3.2 Các phương pháp chiết xuất dược liệu 17 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 24 2.1 Vật liệu .24 2.1.1 Mẫu thực vật 24 2.1.2 Chủng vi sinh vật .24 2.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 26 2.1.4 Thiết bị hóa chất 26 2.1.5 Môi trường 26 2.2 Phương pháp 27 2.2.1 Phương pháp thu xử lý mẫu 27 2.2.2 Phương pháp chiết phân đoạn 27 2.2.3 Phương pháp định lượng Phenolic tổng số .28 2.2.4 Các phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn 31 2.2.5 Phương pháp xác định hoạt tính kháng nấm .35 2.2.6 Phương pháp xác định hoạt tính chống oxi hóa 36 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế 2.2.7 Phương pháp thống kê .38 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Đánh giá hiệu suất lựa chọn phương pháp tách chiết 39 3.2 Kết tách chiết thu phân đoạn 41 3.3 Khảo sát sơ hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn cao chiết Tô mộc 43 3.4 Đánh giá hoạt kháng khuẩn phân đoạn ethyl acetate (EAF) 46 3.4.1 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán giếng thạch 46 3.4.2 Kết xác định MIC/MBC phương pháp pha loãng 48 3.4.3 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn ethyl acetate chủng Vibrio .50 3.5 Đánh giá hoạt tính kháng nấm phân đoạn ethyl acetate 55 3.6 Đánh giá hoạt tính oxi hóa phân đoạn ethyl acetate 56 KẾT LUẬN 58 KIẾN NGHỊ .59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế MỞ ĐẦU Dược liệu đóng vai trò quan trọng đời sống người thuộc tính đặc biệt chúng nguồn cung cấp vô giá hoạt chất tự nhiên từ thực vật cho y học Năm 1985 Farnsworth cộng xác định 119 chất chuyển hóa thực vật sử dụng làm thuốc Trong số 255 loại thuốc coi cần thiết Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), 11% số dược chất thu từ thực vật tổng hợp từ tiền chất tự nhiên Các hợp chất tự nhiên từ thực vật biết đến với nhiều hoạt tính sinh học quan trọng chống oxi hóa, kháng khuẩn, kháng nấm, chống ung thư,…[16] Hiện không Việt Nam mà giới, nguyên liệu sản xuất dược phẩm có nguồn gốc từ thiên nhiên chiết xuất từ thực vật xu hướng nhằm tạo loại thuốc thân thiện với sức khỏe người tác dụng phụ Theo báo cáo tổ chức y tế giới (WHO), khoảng 80% dân số dựa vào loại thuốc có nguồn gốc tự nhiên chăm sóc sức khỏe cộng đồng, đặc biệt sử dụng chế phẩm, sản phẩm từ dược liệu, kể nước phát triển phát triển Các loại thuốc sử dụng phòng chữa bệnh hầu hết điều chế từ hai nguồn: dược liệu hóa dược Theo số liệu thống kê WHO (1985) có tới 20000 lồi thảo dược Khơng nước Á Đông mà nước phương Tây tiêu thụ lượng lớn dược liệu Người ta thống kê thấy nước có cơng nghiệp phát triển mạnh 1/4 số thuốc kê đơn có chứa hoạt chất từ thảo dược Tại Việt Nam, theo báo cáo Cục quản lý dược - Bộ Y tế, năm nước ta tiêu thụ khoảng 50 - 60 nghìn loại dược liệu khác nhau, sử dụng vào việc chế biến vị thuốc Y học cổ truyền, cung cấp nguyên liệu cho ngành công nghiệp dược xuất Ngày nay, việc tìm kiếm hoạt chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao để làm thuốc xu nhà khoa học quan tâm Nhiều dược liệu sử dụng để tách chiết hoạt chất làm thuốc như: chiết berberin từ vàng đắng (Coscinium fenestratum), rutin từ hoa hòe (Shophora japonica), morphin từ Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế có hoạt tính chống lại chủng nấm Aspergillus flavus, Aspergillus niger Fusarium [35, 57] Tuy nhiên nghiên cứu Rajendran cộng (2012), chiết xuất ethanol, nước petroleum ether gỗ Tô mộc lại báo cáo có hoạt tính chống lại chủng nấm C albicans A niger [53] Vì hoạt tính kháng nấm chiết xuất gỗ Tơ mộc cần nghiên cứu thêm Hình 3.7 Kết thử hoạt tính kháng nấm cao EAF (50-200: Nồng độ cao chiết (mg/ml); (-): Đối chứng âm) 3.6 Đánh giá hoạt tính oxi hóa phân đoạn ethyl acetate Các gốc tự sinh tích lũy q trình sống Tùy thuộc vào nồng độ mà gốc tự có tác động tốt hay xấu đến thể Ở nồng độ thấp, chúng tham gia vào nhiều q trình sinh hóa có tác dụng tốt cho thể Nhưng nồng độ cao gốc tự nguyên nhân gây đột biến ADN, biến tính protein, oxi hóa lipid từ gây nhiều bệnh nguy hiểm như: ung thư, lão hóa sớm, suy giảm hệ thần kinh; bệnh hệ tim mạch [34] Do dược phẩm với tác dụng chống oxi hóa có vai trò quan trọng việc chữa trị ngăn ngừa nhiều loại 56 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế bệnh khác Chính vậy, việc tìm kiếm sàng lọc hợp chất tự nhiên có hoạt tính chống oxi hóa đặc biệt quan tâm giá trị đời sống người Trong nghiên cứu tiếp tục đánh giá hoạt tính chống oxi hóa phân đoạn ethyl acetate (EAF) chiết xuất từ gỗ Tô mộc theo phương pháp loại bỏ gốc tự DPPH Patel cộng (2011) Hoạt tính chống oxi hóa cao EAF tính tương đương với hàm lượng chất chuẩn axit ascorbic (µg/ml) dựa vào phương trình đường chuẩn y = 0,09060 x - 1,40376 (mục 2.2.6) Kết thể bảng 3.10 Bảng 3.10 Hoạt tính chống oxi hóa axit ascorbic cao EAF Mẫu Axit ascorbic Cao EAF Nồng độ (µg/ml) OD517 ODTB % Hoạt động (*) 100 2,344 2,472 1,867 2,228 5,65 200 1,866 1,699 2,103 1,889 19,98 300 1,781 1,676 2,018 1,825 22,7 400 1,496 1,484 1,612 1,531 35,17 500 1,471 1,395 0,913 1,26 46,65 600 1,011 1,037 1,173 1,074 54,52 700 1,086 0,963 0,841 0,963 59,2 500 1,648 1,559 1,553 1,587 32,80 (*): Mẫu control (A control) = 1,476 Kết thử nghiệm cho thấy, khả loại bỏ gốc tự DPPH dung dịch cao chiết EAF 500 µg/ml đạt 32,8 % tương đương hoạt tính 377,49 µg/ml axit ascorbic Do đó, nhận thấy cao chiết EAF từ gỗ Tơ mộc có khả chống oxi hóa tốt, có tiềm phát triển thành sản phẩm chức năng, hỗ trợ cải thiện sức khỏe cho người 57 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế KẾT LUẬN Từ kết thu được, chúng tơi đưa kết luận sau: - Phương pháp tách chiết với hỗ trợ sóng siêu âm khuấy trộn tạo hiệu ứng dòng chảy hướng tâm góp phần nâng cao hiệu tách chiết hợp chất có hoạt sinh học từ gỗ Tô mộc - Phân đoạn ethyl acetate (EAF) chiết xuất từ gỗ Tô mộc phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn tốt số phân đoạn thử nghiệm - Cao chiết EAF có hoạt tính kháng khuẩn tốt chủng vi khuẩn thử nghiệm (E coli; S typhimurium; P aeruginosa; S aureus; B subtilis; B cereus) đặc biệt chủng vi khuẩn Gram dương (với giá trị MIC xác định khoảng 150 – 550 µg/ml) chủng Vibiro gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tôm (Vibrio parahaemolyticus Vibrio harveyi) - Cao chiết EAF hoạt tính kháng nấm chủng A niger C albicans, có khả ức chế yếu chủng P digitatum - Cao EAF cho thấy hoạt tính chống oxi hóa tốt Khả loại bỏ gốc tự DPPH dung dịch cao chiết EAF 500 µg/ml đạt 32,8 % tương đương hoạt tính 377,49 µg/ml axit ascorbic 58 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu hoạt tính sinh học khác cao chiết EAF (hoạt tính chống viêm, chống ung thư,…) - Nghiên cứu khả ứng dụng cao chiết EAF tạo chế phẩm sinh học giúp kiểm sốt phòng ngừa bệnh nhiễm khuẩn Vibrio thủy sản - Nghiên cứu thành phần hóa học cao EAF để định lượng đánh giá hoạt chất 59 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đào Hùng Cường, Giang Thị Kim Liên (2008), "Nghiên cứu xác định thành phần hóa học dịch chiết từ gỗ Vang Quảng Nam", Tạp chí Khoa học Cơng nghệ - Đại học Đà Nẵng p tr 64-68 Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học Hoàng Thu Hà, Phạm Thị Trân Châu (2008), "Nghiên cứu điều tra chất ức chế proteinase phần khác thân hạt Tơ mộc (Caesalpinia sappan L.)", Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 24: p tr 261-270 Hoàng Thị Sản (1998), Phân loại học thực vật, Nhà xuất Giáo dục Nguyễn Tấn Đạt, Nguyễn Bá Tiếp (2016), "Đánh giá hiệu suất chiết tác dụng cao chiết từ gỗ Tô mộc (Caesalpinia sappan L.) dung môi ethanol với vi khuẩn Escherichia coli", Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 14(9): p tr 1368-1376 Nguyễn Nghĩa Thìn, Đặng Thị Sy (2004), Hệ thống học thực vật, Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Viện dược liệu (2012), Kỹ thuật chiết xuất dược liệu, Bộ giáo dục đào tạo Tài liệu tiếng Anh Abu Bakar A., Mohd Rasol R., Nordin Y., Md Noor N., and bin Mohd Ali M K F "Turbidity Method to Measure the Growth of Anaerobic Bacteria Related to Microbiologically Influenced Corrosion", in Solid State Phenomena, (2015), Trans Tech Publ Azwanida N (2015), "A review on the extraction methods use in medicinal plants, principle, strength and limitation", Med Aromat Plants, 4(3): p 3-8 60 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế 10 Balouiri M., Sadiki M., and Ibnsouda S K (2016), "Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review", Journal of pharmaceutical analysis, 6(2): p 71-79 11 Brusotti G., Cesari I., Dentamaro A., Caccialanza G., and Massolini G (2014), "Isolation and characterization of bioactive compounds from plant resources: the role of analysis in the ethnopharmacological approach", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 87: p 218-228 12 Cuong T D., Hung T M., Kim J C., Kim E H., Woo M H., Choi J S., Lee J H., and Min B S (2012), "Phenolic compounds from Caesalpinia sappan heartwood and their anti-inflammatory activity", Journal of natural products, 75(12): p 2069-2075 13 Franz Hadacek H G (2000), 'Testing of antifungal natural products: methodologies, comparability of results and assay choice", Phytochemical analysis, 11(3): p 137-147 14 Fu L.-c., Huang X.-a., Lai Z.-y., Hu Y.-j., Liu H.-j., and Cai X.-l (2008), "A new 3-benzylchroman derivative from Sappan Lignum (Caesalpinia sappan)", Molecules, 13(8): p 1923-1930 15 Fuke C., Yamahara J., Shimokawa T., Kinjo J.-e., Tomimatsu T., and Nohara T (1985), "Two aromatic compounds related to brazilin from Caesalpinia sappan", Phytochemistry, 24(10): p 2403-2405 16 Gupta A., Naraniwal M., and Kothari V (2012), "Modern extraction methods for preparation of bioactive plant extracts", International journal of applied and natural sciences, 1(1): p 8-26 17 Hadacek F., and Greger H (2000), "Testing of antifungal natural products: methodologies, comparability of results and assay choice", Phytochemical analysis, 11(3): p 137-147 61 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế 18 Harjit K., Amini M., and Suttee A (2016), "Evaluation of antioxidant and anthelmintic properties of Caesalpinia sappan L leaves", Int J Pharmacogn Phytochem Res, 8: p 362-8 19 Hong C H., Hur S K., Oh O.-J., Kim S S., Nam K A., and Lee S K (2002), "Evaluation of natural products on inhibition of inducible cyclooxygenase (COX-2) and nitric oxide synthase (iNOS) in cultured mouse macrophage cells", Journal of Ethnopharmacology, 83(1-2): p 153-159 20 Hu J., Yan X., Wang W., Wu H., Hua L., and Du L (2008), "Antioxidant activity in vitro of three constituents from Caesalpinia sappan L.", Tsinghua Science and Technology, 13(4): p 474-479 21 Hung T M., Dang N H., and Dat N T (2014), "Methanol extract from Vietnamese Caesalpinia sappan induces apoptosis in HeLa cells", Biological research, 47(1): p 20 22 Ibrahim S (2016), "Screening for active agent to anti-diarrhea by an evaluation of antimicrobial activities from three fractions of sappan wood (Caesalpinia sappan L.)", Der Pharma Chemica, 8(19): p 114-117 23 Jia Y., Zhao J., Liu M., Li B., Song Y., Li Y., Wen A., and Shi L (2016), "Brazilin exerts protective effects against renal ischemia-reperfusion injury by inhibiting the NF-κB signaling pathway", International journal of molecular medicine, 38(1): p 210-216 24 Jun S H., Cha S.-H., Kim J.-H., Yoon M., Cho S., and Park Y (2015), "Silver nanoparticles synthesized using Caesalpinia sappan extract as potential novel nanoantibiotics against methicillin-resistant Staphylococcus aureus", Journal of nanoscience and nanotechnology, 15(8): p 5543-5552 25 Keramat H., Moaddabi A., and Ranjbari A (2014), "In vitro antimicrobial effects of aqueous extracts of Caesalpinia sappan Linn derivatives against oral pathogens", Indian J Sci Res, 7(1): p 342-347 62 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế 26 Kim S.-H., Lyu H.-N., Kim Y S., Jeon Y H., Kim W., Kim S., Lim J.-K., Lee H W., Baek N.-I., and Choi K.-Y (2015), "Brazilin Isolated from Caesalpinia sappan suppresses nuclear envelope reassembly by inhibiting barrier-toautointegration factor phosphorylation" Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 352(1): p 175-184 27 Kim Y.-S., Shim H.-M., and Kim K.-Y (2016), "Antimicrobial effect of Caesalpinia sappan L extract on foodborne bacteria", Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition, 45(7): p 1026-1034 28 Kondo S., Temrangsee P., Sattaponpan C., and Itharat A (2017), "Antibacterial Activity of Thai Herbal Plants and Development of Hand Washing Gel Product", Journal of the medical association of thailand, 100(6): p 18 29 Koushik Mekala R R (2015), "A Review on Sappan Wood-A Therapeutic Dye Yielding Tree", Research Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 7(4): p 227 30 Khamsita R., Hermawan A., Putri D D P., and Meiyanto E (2012), "Ethanolic Extract of Secang (Caesalpinia sappan L.) Wood Performs as Chemosensitizing Agent Through Apoptotic Induction on Breast Cancer MCF-7 Cells", Indonesian Journal of Cancer Chemoprevention, 3(3): p 444449 31 Lee J.-Y., and Min K.-J (2011), "Antimicrobial activity and bactericidal activity of Caesalpinia sappan L extract", Korean Journal of Environmental Health Sciences, 37(2): p 133-140 32 Lee J S., Kim J H., and Kim Y G (2007) "Anticancer effects of Caesalpinia sappan extracts on oral carcinoma and osteosarcoma cells" Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons, 33(6): p 583-590 63 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế 33 Lim M.-Y., Jeon J.-H., Jeong E.-Y., Lee C.-H., and Lee H.-S (2007), "Antimicrobial activity of 5-hydroxy-1, 4-naphthoquinone isolated from Caesalpinia sappan toward intestinal bacteria", Food chemistry, 100(3): p 1254-1258 34 Lobo V., Patil A., Phatak A., and Chandra N (2010), "Free radicals, antioxidants and functional foods: Impact on human health", Pharmacognosy reviews, 4(8): p 118 35 Madhubala S, Poongothai M, and E M K (2018), "Antibacterial and anti acne activity of Caesalpinia sappan L and Cinnamomum verum J Presl – A comparison" International Journal of Advanced Research in Biological Sciences, 5(4): p 118-122 36 Mekala K., and Radha R (2015) "A Review on Sappan Wood-A Therapeutic Dye Yielding Tree", Research Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 7(4): p 227 37 Michael E P V J K., Ronald T K., and Robert C R (1983), "Supercritical fluid extraction", Reviews in Chemical Engineering, 1(2): p 179-250 38 Moon C.-K., Park K.-S., Kim S.-G., Won H.-S., and Chung J.-H (1992), "Brazilin protects cultured rat hepatocytes from BrCCI3-induced toxicity", Drug and chemical toxicology, 15(1): p 81-91 39 Moorkoth S., and Naseer M (2013), "Evaluation of Anti-Cancer Properties of Heartwood of Caesalpinia sappan", Mintage Journal of Pharmaceutical and Medical Sciences, : p 22-25 40 Musa K H., Abdullah A., and Al-Haiqi A (2016), "Determination of DPPH free radical scavenging activity: application of artificial neural networks", Food chemistry, 194: p 705-711 64 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế 41 Nagai M., Nagumo S., Lee S.-M., Eguchi I., and Kawai K.-I (1986), "Protosappanin A, a novel biphenyl compound from Sappan Lignum", Chemical and pharmaceutical bulletin, 34(1): p 1-6 42 Namikoshi M., Nakata H., and Saitoh T (1987), "Homoisoflavonoids from Caesalpinia sappan", Phytochemistry, 26(6): p 1831-1833 43 Nirmal N P., and Panichayupakaranant P (2015), "Antioxidant, antibacterial, and anti-inflammatory activities of standardized brazilin-rich Caesalpinia sappan extract", Pharmaceutical biology, 53(9): p 1339-1343 44 Nirmal N P., Rajput M S., Prasad R G., and Ahmad M (2015), "Brazilin from Caesalpinia sappan heartwood and its pharmacological activities: A review", Asian Pacific journal of tropical medicine, 8(6): p 421-430 45 Nguyen M T T., Awale S., Tezuka Y., Le Tran Q., and Kadota S (2004), "Neosappanone A, a xanthine oxidase (XO) inhibitory dimeric methanodibenzoxocinone with a new carbon skeleton from Caesalpinia sappan", Tetrahedron letters, 45(46): p 8519-8522 46 Nguyen M T T., Awale S., Tezuka Y., Le Tran Q., and Kadota S (2005), "Xanthine oxidase inhibitors from the heartwood of Vietnamese Caesalpinia sappan", Chemical and pharmaceutical bulletin, 53(8): p 984-988 47 Patel Rajesh M., and Patel Natvar J (2011), "In vitro antioxidant activity of coumarin compounds by DPPH, Super oxide and nitric oxide free radical scavenging methods", Journal of Advanced Pharmacy Education & Research, 1: p 52-68 48 Pawar C R., Landge A D., and Surana S J (2008), "Phytochemical and pharmacological aspects of Caesalpinia sappan", Journal of Pharmacy Research, 1(2) 65 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế 49 Pratiwi S U (2015), Anti-microbial and anti-biofilm compounds from Indonesian medicinal plants, Institute Biology Leiden (IBL), Faculty of Science, Leiden University, 50 Puttipan R., Wanachantararak P., Khongkhunthian S., and Okonogi S (2017), "Effects of Caesalpinia sappan on pathogenic bacteria causing dental caries and gingivitis", Drug discoveries & therapeutics, 11(6): p 316-322 51 Phalanisong P., Vichitphan K., Han J., and Vichitphan S (2018), "High Antioxidant and Phenolic Contents Related to Antibacterial Activity against Gastrointestinal Pathogenic Bacteria of Some Thai Medicinal Plants", Pharmacognosy Journal, 10(2) 52 Rajbhar K., Dawda H., and Mukundan U (2015), "Polyphenols: Methods of extraction", Scientific Reviews and Chemical Communications, 5(1): p 1-6 53 Rajendran S., Govindarasu G S., Sakthivel K., Krishnamurthy M., Ramaiya B., Mariappan K., and Gopi M (2012), "In vitro antimicrobial activity of Caesalpinia sappan L.", Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, p 136-139 54 Saraya S., Temsiririrkkul R., Manamuti C., Wongkrajang Y., and Cheewansirisuk C (2009), "Sappan wood extract used as preservative in chili paste", Mahidol University Journal of Pharmaceutical Science, 36(1-4): p 3840 55 Sarker S D., Latif Z., and Gray A I (2006), Natural products isolation, Springer Science & Business Media 56 Sastri B (1950), "A Dictionary of Indian Raw Materials and Industrial Products: Raw Materials", The Wealth of India, 57 Senthilkumar N., Murugesan S., Banu N., Supriya S., and Rajeshkannan C (2011), "Biochemical estimation and antimicrobial activities of the extracts of 66 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế Caesalpinia sappan Linn", Bangladesh Journal of Scientific and Industrial Research, 46(4): p 429-436 58 Settharaksa S., Pathompak P., Madaka F., and Monton C (2016), "Antibacterial activity and forced degradation study of caesalpinia sappan l Heartwood extract for inhibiting pus-forming bacteria", Science and Technology, 14(2): p 64-69 59 Shen J., Zhang H., Lin H., Su H., Xing D., and Du L (2007), "Brazilein protects the brain against focal cerebral ischemia reperfusion injury correlating to inflammatory response suppression", European Journal of Pharmacology, 558(1-3): p 88-95 60 Shin W., Cuong T D., Lee J H., Min B., Jeon B H., Lim H K., and Ryoo S (2011), "Arginase inhibition by ethylacetate extract of Caesalpinia sappan lignum contributes to activation of endothelial nitric oxide synthase", The Korean Journal of Physiology & Pharmacology, 15(3): p 123-128 61 Singleton V L., Orthofer R., and Lamuela-Raventós R M (1999), "Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of folin-ciocalteu reagent", in Methods in enzymology, Elsevier p 152-178 62 Son E.-J., Kim J.-H., Kim H.-A., Baek S.-H., Kho Y.-H., Kim M.-R., and Lee C.-H (2003), "A caspase inducing inhibitor isolated from Caesalpinia sappan", Korean Journal of Food Science and Technology, 35(4): p 680-683 63 Sơn H L., Linh N L Q., and Minh T V (2015), "Isolation and in vitro anticancer activity of flavonoids from Tô Mộc (Caesalpinia sappan linn.)", Journal of Science, 3, (3): p 24 – 30 64 Sukhdev S., Suman P., Gennaro L., and Dev D (2008), "Extraction technologies for medicinal and aromatic plants" United Nation Industrial Development organization and the international center for Science and High Technology, 116 67 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế 65 Venkatasaikumar T (2011), "Effect of Caesalpinia sappan extracts on preservation of meat", Sri Venkateswara Veterinary University, TIRUPATI– 517 502, AP 66 Wang Y.-Z., Sun S.-Q., and Zhou Y.-B (2011), "Extract of the dried heartwood of Caesalpinia sappan L attenuates collagen-induced arthritis", Journal of ethnopharmacology, 136(1): p 271-278 67 Wang Z., Sun J.-B., Qu W., Guan F.-Q., Li L.-Z., and Liang J.-Y (2014), "Caesappin A and B, two novel protosappanins from Caesalpinia sappan L.", Fitoterapia, 92: p 280-284 68 Widigdyo A., Widodo E., and Djunaidi I H (2017), "Extract of Caesalpinia sappan L as Antibacterial Feed Additive on Intestinal Microflora of Laying Quail", The Journal of Experimental Life Science, 7(1): p 7-10 69 Wiegand I., Hilpert K., and Hancock R E (2008), "Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances", Nature protocols, 3(2): p 163 70 Wu S Q., Otero M., Unger F M., Goldring M B., Phrutivorapongkul A., Chiari C., Kolb A., Viernstein H., and Toegel S (2011), "Anti-inflammatory activity of an ethanolic Caesalpinia sappan extract in human chondrocytes and macrophages", Journal of ethnopharmacology, 138(2): p 364-372 71 Ye M., Xie W.-d., Lei F., Meng Z., Zhao Y.-n., Su H., and Du L.-j (2006), "Brazilein, an important immunosuppressive component from Caesalpinia sappan L", International immunopharmacology, 6(3): p 426-432 72 Yingming P., Ying L., Hengshan W., and Min L (2004), "Antioxidant activities of several Chinese medicine herbs", Food chemistry, 88(3): p 347350 73 You E.-J., Khil L.-Y., Kwak W.-J., Won H.-S., Chae S.-H., Lee B.-H., and Moon C.-K (2005), "Effects of brazilin on the production of fructose-2, 6- 68 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế bisphosphate in rat hepatocytes", Journal of ethnopharmacology, 102(1): p 53-57 74 Zhao H., Bai H., Wang Y., Li W., and Koike K (2008), "A new homoisoflavan from Caesalpinia sappan", Journal of natural medicines, 62(3): p 325-327 75 Zhao H., Wang X., Li W., Koike K., and Bai H (2014), "A new minor homoisoflavonoid from Caesalpinia sappan", Natural product research, 28(2): p 102-105 69 Luận văn Thạc sỹ khoa học Đỗ Thị Huế PHỤ LỤC - Môi trường LB lỏng pH 7,5: STT Thành phần Khối lượng (g/l) Cao nấm men Tryptone 10 NaCl 10 - Môi trường LB đặc pH 7,5: Là môi trường LB lỏng có bổ sung thêm agar (15g/l) - Mơi trường PDA: - - STT Thành phần Khối lượng (g/l) Khoai tây 200 Glucose 10 Agar 15 Môi trường MHB pH 7,2 - 7,4: STT Thành phần Khối lượng (g/l) Casein 17,5 Cao thịt bò Tinh bột 1,5 Môi trường MHA pH 7,2 - 7,4: Là mơi trường MHB lỏng có bổ sung thêm agar (15g/l) ... hiệu tách chiết hợp chất có hoạt tính sinh học gỗ Tô mộc - Sàng lọc sơ lựa chọn phân đoạn chiết xuất có hoạt tính sinh học tốt từ gỗ Tơ mộc - Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm cao chiết. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Đỗ Thị Huế ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ NHĨM CHẤT TÁCH CHIẾT TỪ CÂY TƠ MỘC (CAESALPINIA SAPPAN L.) Chuyên... [1] 1.2.2.2 Nghiên cứu hoạt tính sinh học Tô mộc Các nghiên cứu Việt Nam gần đánh giá số hoạt tính sinh học gỗ Tô mộc Chiết xuất số hợp chất phân lập từ Tô mộc chứng minh có khả ức chế mạnh xanthien