NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT AMYLASE TỪ ASPERGILLUS ORYZAE

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM CHIÊM THỊ BÍCH VÂN NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT AMYLASE TỪ Aspergillus oryzae LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Mã ngành: 08 Người hướng dẫn Ts LÝ NGUYỄN BÌNH NĂM 2007 Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô tận tình dạy dỗ truyền đạt kiến thức quý báu suốt năm năm đại học Xin chân thành cảm ơn q thầy Bộ mơn Cơng nghệ Thực phẩm truyền đạt hành trang kiến thức vốn sống tâm huyết Xin gửi lòng biết ơn đến thầy Lý Nguyễn Bình nhiệt tình hướng dẫn giúp đở tơi hồn thành luận văn Chân thành cảm ơn đoàn kết hổ trợ bạn lớp công nghệ thực phẩm khoá 28 suốt năm năm học trình thực luận văn Cảm ơn quan tâm, đóng góp ý kiến để luận văn hồn chỉnh Chân thành cảm ơn! Ngành Cơng nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng i Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 MỤC LỤC Trang LỜI CẢM TẠ i MỤC LỤC ii DANH SÁCH HÌNH iv DANH SÁCH BẢNG v TÓM LƯỢC vi CHƯƠNG I GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .2 CHƯƠNG II LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Cấu trúc phân tử amylase 2.1.1 Đặc tính chế tác dụng 2.1.2 Hoạt lực amylase 2.1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính amylase a Nồng độ chất b Nồng độ enzyme c Nhiệt độ 10 d pH môi trường 11 e Các chất kìm hãm 12 e Các chất hoạt hóa .13 2.2 Sản xuất amylase từ vi sinh vât 13 2.2.1 Sinh tổng hợp amylase vi sinh vật 13 2.2.2 Các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến tổng hợp amylase 15 a Ảnh hưởng nguồn nitơ dinh dưỡng 15 b Ảnh hưởng acid amin .16 c Ảnh hưởng nguồn khoáng dinh dưỡng 16 e Ảnh hưởng pH nguyên liệu 17 f Ảnh hưởng độ ẩm môi trường nuôi cấy 17 2.3 Kỹ thuật sản xuất amylase từ vi sinh vật .18 2.3.1 Sơ đồ kỹ thuật sản xuất chế phẩm amylase từ Asp oryzae 19 2.3.2 Thuyết minh quy trình .19 2.4 Một số ứng dụng amylase thực phẩm 22 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng ii Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ 2.4.1 Sản xuất rượu 22 2.4.2 Sản xuất bia .22 2.4.3 Sản xuất bánh mì .22 2.4.4 Sản xuất bánh kẹo .23 2.4.5 Sản xuất siro sản phẩm chứa đường 23 CHƯƠNG III PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .24 3.1 Vật liệu 25 3.2 Đối tượng nghiên cứu 24 3.3 Dụng cụ, hóa chất 24 3.4 Phương pháp thí nghiệm 26 3.4.1 Qui trình thí nghiệm tham khảo 26 3.4.2 Thí nghiệm 26 KẾT QUẢ THẢO LUẬN 30 4.1 Kết khảo sát ảnh hưởng thành phần môi trường khác thời gian nuôi cấy đến tạo thành amylase .30 4.2 Ảnh hưởng điều kiện môi trường đến tạo thành amylase 38 CHƯƠNG V KẾT LUẬN 51 CHƯƠNG VI KIẾN NGHỊ VÀ ĐỀ NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHỤ LỤC Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng iii Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 1: Cơ chế tác dụng α- amylase lên tinh bột Hình 2: Tác dụng glucoamylase lên tinh bột Hình 3: Tác dụng amylase lên tinh bột Hình 4: Ảnh hưởng nồng độ chất đến hoạt tính enzym Hình 5: Ảnh hưởng nồng độ chất đến thời gian phản ứng amylase .9 Hình 6: Ảnh hưởng nồng độ enzyme đến tốc độ phản ứng .9 Hình 7: Ảnh hưởng nồng độ amylase đến thời gian phản ứng 10 Hình 8: Ảnh hưởng nhiệt độ đến đến tốc độ phản ứng enzyme .10 Hình 9: Ảnh hưởng nhiệt độ đến thời gian phản ứng amylase .11 Hình 10: Ảnh hưởng pH đến hoạt động enzyme .11 Hình 11: Ảnh hưởng pH đến thời gian phản ứng enzyme .12 Hình 12: Máy đơng khơ .25 Hình 13: Máy phân tích ẩm 25 Hinh 14: Thiết bị đo mật độ quang .25 Hình 15: Máy đo pH 25 Hình 16: Tủ úm 25 Hình 17: Sơ đồ qui trình cơng nghệ tham khảo 26 Hình 18: Đồ thị biểu diễn hoạt tính amylase riêng 32 Hình 19: Đồ thị biểu diễn hoạt tính amylase tổng .34 Hình 20: Đồ thị biểu diễn hoạt tính glucoamylase riêng .36 Hình 21: Đồ thị biểu diễn hoạt tính glucoamylase tổng 38 Hình 22: Đồ thị biểu diễn hoạt tinh amylase riêng 41 Hình 23: Đồ thị biểu diễn hoạt tinh amylase tổng .44 Hình 24: Đồ thị biểu diễn hoạt tính glucoamylase riêng .47 Hình 25: Đồ thị biểu diễn hoạt tính glucoamylase tổng 50 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng iv Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Ảnh hưởng chất đến sinh tổng hợp amylase nấm mốc Asp oryzae 14 Bảng 2: Ảnh hưởng bột ngô tới sinh tổng hợp amylase chủng Asp.oryzea .15 Bảng 3: Ảnh hưởng nguồn nitơ tới sinh tổng hợp amylase 15 Bảng 4: Ảnh hưởng pH cám đến sinh tổng hợp amylase 17 Bảng Ảnh hưởng việc giữ ẩm trình sinh trưởng tới tạo amylase Asp oryzae nuôi phương pháp bề mặt 18 Bảng 6: Thành phần cám mì cám gạo 20 Bảng 7: Thời gian ni cấy thích hợp Asp oryzae 21 Bảng 8: Khối lượng môi trường ẩm nuôi cấy 28 Bảng 9: Ẩm nuôi cấy khối lượng môi trường thu 29 Bảng 10: Hoạt tính amylase riêng (đv/g) 31 Bảng 11: Hoạt tính amylase tổng (đv) 33 Bảng 12: Hoat tính glucoamylase riêng (đv/g) .35 Bảng 13: Hoạt tính glucoamylase tổng .37 Bảng 14: Hoạt tính amylase riêng trung bình theo độ ẩm môi trường nuôi cấy 39 Bảng 15: Hoạt tính α- amylase riêng trung bình theo nhiệt độ mơi trường nuôi cấy 39 Bảng 16: Hoạt tính amylase riêng trung bình theo pH mơi trường ni cấy 39 Bảng 17: Hoạt tính amylase riêng 40 Bảng 18: Hoạt tính amylase tổng trung bình theo độ ẩm môi trường nuôi cấy 41 Bảng 19: Hoạt tính amylase tổng trung bình theo nhiệt độ mơi trường ni cấy 42 Bảng 20: Hoạt tính amylase tổng trung bình theo pH mơi trường ni cấy 42 Bảng 21: Hoạt tính amylase tổng 43 Bảng 22: Hoạt tính glucoamylase riêng trung bình theo độ ẩm mơi trường ni cấy 44 Bảng 23: Hoạt tính glucoamylase riêng trung bình theo nhiệt độ mơi trường ni cấy .45 Bảng 24: Hoạt tính glucoamylase riêng trung bình theo pH mơi trường ni cấy.45 Bảng 25: Hoạt tính glucoamylase riêng 46 Bảng 26: Hoạt tính glucoamylase tổng trung bình theo độ ẩm mơi trường ni cấy 47 Bảng 27: Hoạt tính glucoamylase tổng trung bình theo nhiệt độ mơi trường ni cấy .48 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng v Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 28: Hoạt tính glucoamylase tổng trung bình theo pH mơi trường ni cấy 48 Bảng 29: Hoạt tính glucoamylase tổng .49 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng vi Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 TÓM LƯỢC Amylase enzyme sử dụng phổ biến chế biến thực phẩm rươu, bia, bánh mì, kẹo… Amylase sản xuất từ nhiều nguồn khác nhau, sản xuất từ vi sinh vật có nhiều thuận lợi thu hoạt tính cao Tên đề tài thực nghiên cứu nghiên cứu sản xuất amylase từ Aspergillus oryzae tiến hành nghiên cứu hoạt tính enzyme thu với hai thí nghiệm, - Thí nghiệm khảo sát thành phần môi trường: 75% cám + 20% trấu + 5% bột, 75% cám + 15% trấu + 10% bột; bột bổ sung: bột bắp, bột gạo, bột thời gian nuôi cấy: 30 giờ, 40 giờ, 50 giờ, 55 giờ, tiến hành với lần lặp lại - Thí nghiệm khảo sát nhân tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy gồm nhiệt độ nuôi cấy: 25oC, 30oC, 35oC; độ ẩm: 50%, 55%, 60%; pH: 4,5, 5, 5,5 tiến hành với lần lại Kết quả: - Thí nghiệm 1: hoạt tính amylase thu cao mơi trường ni cấy có thành phần 75% cám + 20% trấu + 5% bột với bột bổ sung bột gạo thời gian ni cấy 50 - Thí nghiệm 2: điều kiện mơi trường ni cấy tốt để có hoạt tính amylase cao mơi trường có độ ẩm 55%, pH nhiệt độ nuôi cấy 30oC Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng vii Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 CHƯƠNG I GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Enzyme chất xúc tác sinh học khơng có ý nghĩa cho trình sinh trưởng, sinh sản sinh vật mà đóng vai trò quan trọng công nghệ chế biến thực phẩm, y học, kỹ thuật phân tích, cơng nghệ gen bảo vệ môi trường Nghiên cứu, sản xuất ứng dụng enzyme phát triển mạnh từ đầu kỷ XX đến Công nghệ sản xuất enzyme đem lại lợi nhuận lớn cho nhiều nước Việt Nam nước có nhiều nghiên cứu ứng dụng enzyme Tuy nhiên, công nghệ enzyme ta chưa thực phát triển Trong tương lai, ngành công nghiệp đầu tư phát triển rộng rãi ứng dụng tính tiện lợi nhiều lĩnh vực sản xuất đời sống Sản xuất enzyme từ vi sinh vật có nhiều ưu điểm so với động vật thực vật là: - Tốc độ sinh sản vi sinh vật mạnh - Enzyme thu nhận từ vi sinh vật có hoạt tính cao - Vi sinh vật giới sinh vật thích hợp cho sản xuất theo qui mô công - Nguồn nguyên liệu dùng sản xuất enzyme rẽ tiền dễ kiếm - Vi sinh vật sinh tổng hợp lúc nhiều loại enzyme khác nghiệp Cùng với ứng dụng phổ biến quan trọng amylase việc tạo nguồn amylase cần thiết Amylase tồn động vật, thực vật vi sinh vật Ở động vật, amylase có tuyến nước bọt tuyến tụy Ở thực vật, amylase thu nhận từ hạt nẩy mầm từ malt với số lượng nhiều nhất, chủ yếu dùng để sản xuất bia Hiện tại, sản xuất amylase từ vi sinh vật phương pháp phổ biến, dễ thực Các chủng vi sinh vật thường sử dụng Bacillus subtilis, Aspergillus oryzae, Aspergillus awamori, Aspergillus niger… Với tiềm vậy, tiến hành nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh tổng hợp amylase từ vi sinh vật, cụ thể nghiên cứu đối tượng vi nấm Aspergillus oryzae để thu amylase với số lượng nhiều, hoạt độ cao giá thành rẻ…phục vụ sản xuất Amylase ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực Do đó, nghiên cứu sản xuất enzyme amylase, ta cải tiến nhiều qui trình chế biến, nâng cao chất lượng, hạ giá thành sản phẩm rút ngắn thời gian sản xuất Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Q trình ni cấy nấm mốc Aspergillus oryzea sản xuất amylase chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố với mức độ khác Nội dung nghiên cứu đề tài này: - Khảo sát ảnh hưởng mơi trường ni đến q trình sản xuất amylase - Xác định thời điểm vi sinh vật sản sinh amylase nhiều - Khảo sát điều kiện môi trường (nhiệt độ, pH, độ ẩm) ảnh hưởng đến sản sinh enzyme amylase Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Htinh rieng glucoamylase by Bot -Method: 95.0 percent LSD Bot Count LS Mean Homogeneous Groups -Bnang 16 998.875 X Bbap 16 1127.77 X Bgao 16 1322.82 X -Contrast Difference +/- Limits -Bbap - Bgao *-195.058 50.9897 Bbap - Bnang *128.89 50.9897 Bgao - Bnang *323.947 50.9897 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh rieng glucoamylase by Thanh phan MT nuoi cay -Method: 95.0 percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -10 24 1063.16 X 24 1236.49 X -Contrast Difference +/- Limits -5 - 10 *173.332 41.6329 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh rieng glucoamylase by Thoi gian nuoi cay -Method: 95.0 percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -30 12 575.877 X 55 12 823.525 X 40 12 1392.81 X 50 12 1807.07 X -Contrast Difference +/- Limits -30 - 40 *-816.934 58.8779 30 - 50 *-1231.2 58.8779 30 - 55 *-247.648 58.8779 40 - 50 *-414.262 58.8779 40 - 55 *569.286 58.8779 50 - 55 *983.548 58.8779 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xv Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ ANOVA Table for Htinh glucoamylase rieng by Kieu MT_Tgian nuoi_Bot Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1.33316E7 23 579633.0 118.71 0.0000 Within groups 117189.0 24 4882.89 Total (Corr.) 1.34488E7 47 Multiple Range Tests for Htinh glucoamylase rieng by Kieu MT_Tgian nuoi_Bot -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -A2/30/Bnang 252.84 X A1/30/Bnang 376.531 XX A2/30/Bbap 469.011 XX A1/55/Bnang 557.118 XX A1/30/Bbap 627.735 XX A2/55/Bbap 669.234 XX A2/55/Bnang 767.411 XX A1/30/Bgao 858.509 XX A2/30/Bgao 870.635 XXX A2/55/Bgao 939.897 XX A1/55/Bgao 944.2 XX A1/55/Bbap 1080.8 XX A2/40/Bgao 1161.46 X A1/40/Bnang 1363.37 X A2/40/Bnang 1396.62 XX A2/50/Bnang 1539.9 XX A1/40/Bbap 1573.29 X A2/40/Bbap 1749.54 X A2/50/Bbap 1749.55 X A1/50/Bnang 1754.18 X A1/50/Bbap 1843.85 XX A1/40/Bgao 1853.47 XX A2/50/Bgao 1953.52 XX A1/50/Bgao 2004.25 X Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xvi Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Hoạt tính glucoamylase tổng Analysis of Variance for Htinh tong glucoamylase - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Bot 6.31326E9 3.15663E9 109.77 0.0000 B:Thanh phan MT nu 9.05585E8 9.05585E8 31.49 0.0000 C:Thoi gian nuoi c 9.52439E10 3.1748E10 1103.99 0.0000 INTERACTIONS AB AC BC ABC 2.7091E8 4.62708E9 1.11908E9 5.03522E9 6 1.35455E8 7.7118E8 3.73026E8 8.39203E8 4.71 26.82 12.97 29.18 0.0188 0.0000 0.0000 0.0000 RESIDUAL 6.90182E8 24 2.87576E7 -TOTAL (CORRECTED) 1.14205E11 47 -All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Htinh tong glucoamylase by Bot -Method: 95.0 percent LSD Bot Count LS Mean Homogeneous Groups -Bnang 16 89749.0 X Bbap 16 109549.0 X Bgao 16 116907.0 X -Contrast Difference +/- Limits -Bbap - Bgao *-7357.34 3913.1 Bbap - Bnang *19800.5 3913.1 Bgao - Bnang *27157.8 3913.1 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh tong glucoamylase by Thanh phan MT nuoi cay -Method: 95.0 percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -10 24 101058.0 X 24 109745.0 X -Contrast Difference +/- Limits -5 - 10 *8687.08 3195.03 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xvii Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Htinh tong glucoamylase by Thoi gian nuoi cay -Method: 95.0 percent LSD Level Count LS Mean Homogeneous Groups -30 12 50521.6 X 55 12 73541.3 X 40 12 140166.0 X 50 12 157378.0 X -Contrast Difference +/- Limits -30 - 40 *-89644.6 4518.45 30 - 50 *-106856.0 4518.45 30 - 55 *-23019.7 4518.45 40 - 50 *-17211.5 4518.45 40 - 55 *66624.9 4518.45 50 - 55 *83836.4 4518.45 -* denotes a statistically significant difference ANOVA Table for Htinh glucoamylase tong by Kieu MT_Tgian nuoi_Bot Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1.13515E11 23 4.93544E9 171.62 0.0000 Within groups 6.90182E8 24 2.87576E7 Total (Corr.) 1.14205E11 47 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xviii Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Htinh glucoamylase tong by Kieu MT_Tgian nuoi_Bot -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -A2/30/Bnang 22717.7 X A1/30/Bnang 33831.3 X A2/30/Bbap 40663.3 XX A1/55/Bnang 50057.1 XX A1/30/Bbap 56370.6 XX A2/55/Bbap 60318.0 XX A2/55/Bnang 67378.8 XX A1/30/Bgao 73505.5 XX A2/30/Bgao 76041.3 XX A2/55/Bgao 82673.3 X A1/55/Bgao 83051.8 X A1/55/Bbap 97768.8 X A2/40/Bgao 101744.0 X A1/40/Bnang 122498.0 X A2/40/Bnang 125486.0 XX A1/50/Bbap 136169.0 XX A2/50/Bnang 138360.0 X A1/50/Bnang 157662.0 X A2/40/Bbap 158106.0 X A2/50/Bbap 160223.0 X A1/40/Bgao 166386.0 XX A1/40/Bbap 166776.0 XX A2/50/Bgao 172866.0 XX A1/50/Bgao 178986.0 X Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xix Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng điều kiện môi trường đến tạo thành amylase Hoạt tính α- amylase riêng Analysis of Variance for Htinh rieng amylase - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Am nuoi cay 478.566 239.283 527.84 0.0000 B:Nhiet 186.478 93.2388 205.68 0.0000 C:pH 165.254 82.6269 182.27 0.0000 INTERACTIONS AB AC BC ABC 181.806 270.439 160.944 99.8336 4 45.4515 67.6099 40.2359 12.4792 100.26 149.14 88.76 27.53 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 RESIDUAL 12.2399 27 0.453329 -TOTAL (CORRECTED) 1555.56 53 -All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Htinh rieng amylase by Am nuoi cay -Method: 95.0 percent LSD Am nuoi cay Count LS Mean Homogeneous Groups -60 18 77.8522 X 50 18 82.0013 X 55 18 85.1199 X -Contrast Difference +/- Limits -50 - 55 *-3.11866 0.460498 50 - 60 *4.14908 0.460498 55 - 60 *7.26774 0.460498 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xx Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Htinh rieng amylase by Nhiet -Method: 95.0 percent LSD Nhiet Count LS Mean Homogeneous Groups -35 18 79.6053 X 25 18 81.2627 X 30 18 84.1054 X -Contrast Difference +/- Limits -25 - 30 *-2.84271 0.460498 25 - 35 *1.65745 0.460498 30 - 35 *4.50016 0.460498 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh rieng amylase by pH -Method: 95.0 percent LSD pH Count LS Mean Homogeneous Groups -4.5 18 79.1929 X 5.5 18 82.7066 X 18 83.0739 X -Contrast Difference +/- Limits -4.5 - *-3.88096 0.460498 4.5 - 5.5 *-3.51362 0.460498 - 5.5 0.367344 0.460498 -* denotes a statistically significant difference ANOVA Table for Htinh rieng amylase by Nhiet do_Do am_pH Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1670.21 26 64.239 141.69 0.0000 Within groups 12.2411 27 0.453375 Total (Corr.) 1682.45 53 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxi Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Multiple Range Tests for Htinh rieng amylase by Nhiet do_Do am_pH -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -35/60/4.5 71.7054 X 35/50/4.5 74.1788 X 25/60/5.5 74.5226 X 35/50/5.0 75.1978 XX 25/55/4.5 76.4635 XX 30/60/5.5 76.5788 XXX 35/60/5.0 77.3342 XX 25/60/5.0 77.4379 XX 35/60/5.5 77.8615 XX 30/60/4.5 79.1195 XX 25/50/5.0 80.2553 XX 30/50/4.5 80.7491 X 30/60/5.0 81.5112 XX 30/55/4.5 81.5914 XX 35/50/5.5 82.2342 XX 25/55/5.5 82.5573 XX 25/50/4.5 83.4292 XX 35/55/4.5 84.3295 XX 25/60/4.5 84.5986 XX 25/50/5.5 84.836 X 30/55/5.5 86.9791 X 25/55/5.0 87.2639 X 30/50/5.0 87.7546 X 30/50/5.5 89.3764 X 35/55/5.5 89.4131 X 35/55/5.0 91.3714 X 30/55/5.0 93.2887 X Hoạt tính α- amylase tổng Analysis of Variance for Htinh tong amylase - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Am nuoi cay 1.04731E7 5.23656E6 2480.25 0.0000 B:Nhiet 1.19208E7 5.96041E6 2823.10 0.0000 C:pH 673867.0 336934.0 159.59 0.0000 INTERACTIONS AB AC BC ABC 1.8612E6 1.38297E6 354742.0 738560.0 4 465301.0 345742.0 88685.5 92320.0 220.39 163.76 42.01 43.73 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 RESIDUAL 57005.1 27 2111.3 -TOTAL (CORRECTED) 2.74623E7 53 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxii Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Htinh tong amylase by Am nuoi cay -Method: 95.0 percent LSD Am nuoi cay Count LS Mean Homogeneous Groups -50 18 5951.56 X 60 18 6811.86 X 55 18 6945.33 X -Contrast Difference +/- Limits -50 - 55 *-993.774 31.4265 50 - 60 *-860.301 31.4265 55 - 60 *133.474 31.4265 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh tong amylase by Nhiet -Method: 95.0 percent LSD Nhiet Count LS Mean Homogeneous Groups -25 18 5931.39 X 35 18 6728.44 X 30 18 7048.9 X -Contrast Difference +/- Limits -25 - 30 *-1117.51 205.048 25 - 35 *-797.049 205.048 30 - 35 *320.459 205.048 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh tong amylase by pH -Method: 95.0 percent LSD pH Count LS Mean Homogeneous Groups -4.5 18 6420.43 X 5.5 18 6599.05 XX 18 6689.26 X -Contrast Difference +/- Limits -4.5 - *-268.828 205.048 4.5 - 5.5 -178.62 205.048 - 5.5 90.2084 205.048 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxiii Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ ANOVA Table for Htinh tong amylase by Nhiet do_Do am_pH Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2.65563E7 26 1.02139E6 483.81 0.0000 Within groups 57001.1 27 2111.15 Total (Corr.) 2.66133E7 53 Multiple Range Tests for Htinh tong amylase by Nhiet do_Do am_pH -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -25/50/5.0 5358.64 X 25/50/4.5 5504.66 X 25/55/4.5 5546.67 XX 25/50/5.5 5605.96 X 35/50/4.5 5874.22 X 35/50/5.0 5903.78 X 25/60/5.5 6001.31 X 35/50/5.5 6021.18 X 30/50/4.5 6044.88 X 25/55/5.5 6094.38 XX 25/60/5.0 6143.15 X 25/55/5.0 6363.29 X 30/50/5.0 6543.86 X 35/60/4.5 6604.78 X 30/50/5.5 6706.81 X 25/60/4.5 6764.5 X 35/60/5.0 6907.5 X 35/55/4.5 6929.36 X 35/60/5.5 6930.45 X 30/55/4.5 7057.65 X 30/60/5.5 7112.64 X 30/60/4.5 7334.38 X 30/55/5.5 7439.32 X 35/55/5.5 7479.41 X 30/60/5.0 7508.0 X 35/55/5.0 7643.21 X 30/55/5.0 7692.59 X Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxiv Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Hoạt tính glucoamylase riêng Analysis of Variance for Htinh rieng glucoamylase - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Am nuoi cay 912248.0 456124.0 94.28 0.0000 B:Nhiet 1.07572E6 537861.0 111.18 0.0000 C:pH 812073.0 406037.0 83.93 0.0000 INTERACTIONS AB AC BC ABC 355312.0 122062.0 663169.0 226238.0 4 88828.0 30515.6 165792.0 28279.8 18.36 6.31 34.27 5.85 0.0000 0.0010 0.0000 0.0002 RESIDUAL 130620.0 27 4837.79 -TOTAL (CORRECTED) 4.29745E6 53 -All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Htinh rieng glucoamylase by Am nuoi cay -Method: 95.0 percent LSD Am nuoi cay Count LS Mean Homogeneous Groups -50 18 835.976 X 60 18 895.153 X 55 18 1136.48 X -Contrast Difference +/- Limits -50 - 55 *-300.502 47.5712 50 - 60 *-59.1762 47.5712 55 - 60 *241.326 47.5712 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh rieng glucoamylase by Nhiet -Method: 95.0 percent LSD Nhiet Count LS Mean Homogeneous Groups -35 18 792.746 X 25 18 937.811 X 30 18 1137.05 X -Contrast Difference +/- Limits -25 - 30 *-199.241 47.5712 25 - 35 *145.065 47.5712 30 - 35 *344.306 47.5712 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxv Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Htinh rieng glucoamylase by pH -Method: 95.0 percent LSD pH Count LS Mean Homogeneous Groups -4.5 18 793.878 X 5.5 18 983.229 X 18 1090.5 X -Contrast Difference +/- Limits -4.5 - *-296.622 47.5712 4.5 - 5.5 *-189.35 47.5712 - 5.5 *107.272 47.5712 -* denotes a statistically significant difference ANOVA Table for Htinh rieng glucoamylase by Nhiet do_Do am_pH Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4.13689E6 26 159111.0 32.84 0.0000 Within groups 130804.0 27 4844.61 Total (Corr.) 4.26769E6 53 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxvi Trường Đại học Cần Thơ Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Multiple Range Tests for Htinh rieng glucoamylase by Nhiet do_Do am_pH -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -25/50/4.5 598.636 X 25/50/5.5 637.819 XX 35/50/4.5 663.16 XXX 35/60/4.5 690.713 XXX 35/50/5.0 702.394 XXXX 25/60/4.5 762.572 XXXX 35/60/5.0 769.62 XXXX 35/55/4.5 781.917 XXX 25/60/5.0 801.758 XXXX 30/50/4.5 836.036 XXX 30/55/4.5 852.545 XX 25/50/5.0 870.189 XX 30/50/5.5 870.862 XX 35/55/5.5 872.821 XX 30/60/4.5 875.258 XX 35/50/5.5 886.603 XX 35/60/5.5 897.89 XXX 30/60/5.5 905.317 XXX 35/55/5.0 939.962 XX 25/60/5.5 1034.61 XX 25/55/4.5 1115.86 X 25/55/5.0 1296.86 X 30/60/5.0 1318.63 XX 25/55/5.5 1321.99 XX 30/55/5.5 1421.14 XX 30/50/5.0 1458.09 X 30/55/5.0 1695.58 X Hoạt tính glucoamylase tổng Analysis of Variance for Htinh tong glucoamylase - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Am nuoi cay 8.62128E9 4.31064E9 147.27 0.0000 B:Nhiet 9.03008E9 4.51504E9 154.26 0.0000 C:pH 4.99606E9 2.49803E9 85.35 0.0000 INTERACTIONS AB AC BC ABC 1.365E9 7.80199E8 4.10342E9 1.45708E9 4 3.4125E8 1.9505E8 1.02585E9 1.82135E8 11.66 6.66 35.05 6.22 0.0000 0.0007 0.0000 0.0001 RESIDUAL 7.90273E8 27 2.92694E7 -TOTAL (CORRECTED) 3.11434E10 53 Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxvii Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Htinh tong glucoamylase by Am nuoi cay -Method: 95.0 percent LSD Am nuoi cay Count LS Mean Homogeneous Groups -50 18 60998.9 X 60 18 78540.3 X 55 18 91852.7 X -Contrast Difference +/- Limits -50 - 55 *-30853.8 3700.22 50 - 60 *-17541.4 3700.22 55 - 60 *13312.4 3700.22 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh tong glucoamylase by Nhiet -Method: 95.0 percent LSD Nhiet Count LS Mean Homogeneous Groups -35 18 67036.0 X 25 18 68971.6 X 30 18 95384.4 X -Contrast Difference +/- Limits -25 - 30 *-26412.8 3700.22 25 - 35 1935.61 3700.22 30 - 35 *28348.4 3700.22 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Htinh tong glucoamylase by pH -Method: 95.0 percent LSD pH Count LS Mean Homogeneous Groups -4.5 18 64490.1 X 5.5 18 79098.8 X 18 87803.1 X -Contrast Difference +/- Limits -4.5 - *-23313.0 3700.22 4.5 - 5.5 *-14608.7 3700.22 - 5.5 *8704.3 3700.22 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxviii Luận văn Tốt nghiệp khóa 28 năm 2007 Trường Đại học Cần Thơ ANOVA Table for Htinh tong glucoamylase by Nhiet do_Do am_pH Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3.13044E10 26 1.20401E9 41.01 0.0000 Within groups 7.92787E8 27 2.93625E7 Total (Corr.) 3.20971E10 53 Multiple Range Tests for Htinh tong glucoamylase by Nhiet do_Do am_pH -Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -25/50/4.5 39498.0 X 25/50/5.5 42147.1 XX 35/50/4.5 52515.6 XX 35/50/5.0 55145.0 XX 25/50/5.0 58102.5 XXX 25/60/4.5 60975.3 XXX 30/50/4.5 62585.6 XXXX 25/60/5.0 63603.4 XXXXX 35/60/4.5 63621.6 XXXXX 35/55/4.5 64250.1 XXXX 35/50/5.5 64917.1 XXXX 30/50/5.5 65349.5 XXXX 35/60/5.0 68742.4 XXX 35/55/5.5 73011.5 XXX 30/55/4.5 73745.1 XX 35/60/5.5 79921.2 X 25/55/4.5 80944.4 X 30/60/4.5 81136.4 X 35/55/5.0 81607.5 X 25/60/5.5 83317.4 X 30/60/5.5 84085.8 XX 25/55/5.0 94566.8 XX 25/55/5.5 97589.4 X 30/50/5.0 108730.0 X 30/60/5.0 121459.0 X 30/55/5.5 121550.0 X 30/55/5.0 143209.0 X Ngành Công nghệ Thực phẩm – Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng xxix ... vật có nhiều thuận lợi thu hoạt tính cao Tên đề tài thực nghiên cứu nghiên cứu sản xuất amylase từ Aspergillus oryzae tiến hành nghiên cứu hoạt tính enzyme thu với hai thí nghiệm, - Thí nghiệm... học Cần Thơ 2.4.1 Sản xuất rượu 22 2.4.2 Sản xuất bia .22 2.4.3 Sản xuất bánh mì .22 2.4.4 Sản xuất bánh kẹo .23 2.4.5 Sản xuất siro sản phẩm chứa đường... nhiên, chúng sản xuất hai phương pháp nuôi cấy bề mặt ni cấy bề sâu Amylase sản xuất từ nhiều nguồn nấm mốc vi khuẩn Trong Asp oryzae chủng nấm mốc sử dụng phổ biến để sản xuất amylase Asp oryzae thuộc