NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CỐM MỘT PHƯƠNG THUỐC TIÊU ĐỘC

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ HỒNG OANH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CỐM MỘT PHƯƠNG THUỐC TIÊU ĐỘC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2018 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ HỒNG OANH Mã sinh viên: 1301312 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CỐM MỘT PHƯƠNG THUỐC TIÊU ĐỘC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Bùi Hồng Cường HVCH Vũ Bạch Linh Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền HÀ NỘI – 2018 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực hồn thành khóa luận, tơi nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ nhiệt tình từ thầy cơ, gia đình, bạn bè Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Bùi Hồng Cường - người thầy ln nhiệt tình giúp đỡ, hết lòng bảo trực tiếp hướng dẫn tơi suốt q trình tơi thực khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn chị Vũ Bạch Linh, học viên cao học khóa 22, Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ, tận tình bảo tơi thời gian làm thực nghiệm nghiên cứu đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến PGS.TS Cao Văn Thu, môn Vi sinh – Sinh học, nhiệt tình giúp đỡ để tơi hồn thành khóa luận Tôi xin trân trọng cảm ơn Công ty Cổ phần Dược phẩm VCP Công ty Cổ phần Thương mại Dược phẩm Quốc Tế tạo điều kiện để tơi hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn đến Thầy Cô giáo, chị kĩ thuật viên, cán công tác Bộ môn Dược học cổ truyền giúp đỡ nhiều q trình thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu toàn thể Thầy Cô giáo Trường Đại học Dược Hà Nội tận tình dạy dỗ bảo tơi suốt năm học qua Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè động viên, khích lệ tơi suốt q trình học tập Do thời gian làm thực nghiê ̣m cũng kiế n thức của bản thân có ̣n, khóa luâ ̣n này còn có nhiề u thiế u sót Tôi rấ t mong nhâ ̣n đươ ̣c sự góp ý của các thầ y cô, ba ̣n bè để khóa luâ ̣n đươ ̣c hoàn thiê ̣n Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2018 Sinh viên Lê Hồng Oanh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh mụn nhọt, trứng cá 1.1.1 Theo quan điểm y học đại 1.1.2 Theo quan điểm y học cổ truyền 1.2 Phương thuốc “Tòa sang tiễn tễ” 1.2.1 Xuất xứ: “ Trung Quốc trung y bí phương đại tồn” 1.2.2 Thành phần 1.2.3 Công năng, chủ trị phương thuốc 1.2.4 Giải thích phương thuốc 1.3 Thông tin vị thuốc 1.3.1 Kim ngân hoa 1.3.2 Liên kiều 1.3.3 Hoàng cầm 1.3.4 Xuyên khung 1.3.5 Đương quy 1.3.6 Cát cánh 12 1.3.7 Dã cúc hoa 13 1.3.8 Ngưu tất 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 16 2.1.1 Dược liệu 16 2.1.2 Dược liệu chuẩn 16 2.1.3 Cốm 16 2.1.4 Vi sinh vật 16 2.1.5 Thiết bị, máy móc 16 2.1.6 Hóa chất, chất chuẩn 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.2.1 Nghiên cứu điều chế cao đặc thuốc 17 2.2.2 Nghiên cứu định tính số thành phần hóa học cao đặc thuốc, cốm thuốc, dược liệu cốm thành phần 17 2.2.3 Nghiên cứu thử tác dụng kháng khuẩn cao đặc cốm thuốc 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Bào chế cao đặc thuốc 17 2.3.2 Định tính số thành phần hóa học cao đặc thuốc, cốm thuốc, dược liệu cốm thành phần 18 2.3.3 Thử tác dụng kháng khuẩn cao đặc cốm thuốc 24 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 Kết thực nghiệm 26 3.1.1 Bào chế cao đặc 26 3.1.2 Định tính số thành phần hóa học cao đặc thuốc, cốm thuốc, dược liệu cốm thành phần 26 3.1.3 Thử tác dụng kháng khuẩn cao đặc cốm thuốc 38 3.2 Bàn luận 40 3.2.1 Về điều chế dạng cao đặc 40 3.2.2 Về thành phần hóa học 41 3.2.3 Về tác dụng kháng khuẩn 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT a.Ch Acid chlorogenic BT Bài thuốc CC Cát cánh CH Cúc hoa ̅ D Đường kính trung bình vòng vơ khuẩn DC Dịch chiết DĐVN V Dược điển Việt Nam – lần xuất thứ DLC Dược liệu chuẩn ĐQ Đương quy EtOAc Ethyl acetat ̅ H Hiệu suất trung bình HC Hồng cầm KNH Kim ngân hoa KSC Kháng sinh chứng chuẩn LK Liên kiều MNC Mẫu nghiên cứu MT Môi trường NT Ngưu tất Pư Phản ứng s Độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh SKLM Sắc kí lớp mỏng TNHH Trách nhiệm hữu hạn TT Thuốc thử VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật 𝑋 Độ ẩm trung bình XK Xuyên khung DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 3.1 Hiệu suất bào chế, độ ẩm cảm quan cao chiết nước 26 Bảng 3.2 Kết định tính thành phần hóa học cao đặc dược liệu 27 Bảng 3.3 Kết định tính thành phần hóa học cốm thuốc cốm thành phần Bảng 3.4 Kết SKLM định tính cắn EtOAc từ cao đặc, cốm thuốc CH chuẩn bước sóng 254 nm Bảng 3.5 Kết SKLM định tính cắn EtOAc từ cao đặc, cốm thuốc HC chuẩn bước sóng 254 nm Bảng 3.6 Kết SKLM định tính cắn n-butanol từ cao đặc, cốm thuốc DLC (KNH, XK) bước sóng 254 nm Bảng 3.7 Kết SKLM định tính cắn n-butanol từ cao đặc, cốm thuốc DLC (CC, NT) bước sóng 254 nm Bảng 3.8 Kết SKLM định tính cắn ethanol từ cao đặc, cốm thuốc ĐQ chuẩn bước sóng 254 nm Bảng 3.9 Kết SKLM định tính cắn diethyl ether từ cao đặc, cốm thuốc XK chuẩn bước sóng 254 nm Bảng 3.10 Kết SKLM định tính cắn diethyl ether từ cao đặc, cốm thuốc LK chuẩn bước sóng 254 nm Bảng 3.11 Kết SKLM định tính cắn methanol từ cao đặc, cốm thuốc, KNH chuẩn a.Ch chuẩn bước sóng 254 nm 28 30 31 32 33 34 35 36 37 Bảng 3.12 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn mẫu cao 38 Bảng 3.13 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn mẫu cốm 39 Bảng 3.14 Một số tiêu đề xuất tiêu chuẩn kĩ thuật cao đặc cốm thuốc Tiêu độc 43 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Tên hình vẽ, đồ thị Hình 3.1 Sắc kí đồ định tính cắn EtOAc từ cao đặc, cốm thuốc CH chuẩn bước sóng 254 nm Hình 3.2 Sắc kí đồ định tính cắn EtOAc từ cao đặc, cốm thuốc HC chuẩn bước sóng 254 nm Hình 3.3 Sắc kí đồ định tính cắn n-butanol từ cao đặc, cốm thuốc DLC (KNH, XK) bước sóng 254 nm Hình 3.4 Sắc kí đồ định tính cắn n-butanol từ cao đặc, cốm thuốc DLC (CC, NT) bước sóng 254 nm Hình 3.5 Sắc kí đồ định tính cắn ethanol từ cao đặc, cốm thuốc ĐQ chuẩn bước sóng 254 nm Hình 3.6 Sắc kí đồ định tính cắn diethyl ether từ cao đặc, cốm thuốc XK chuẩn bước sóng 254 nm Hình 3.7 Sắc kí đồ định tính cắn diethyl ether từ cao đặc, cốm thuốc LK chuẩn bước sóng 254 nm Hình 3.8 Sắc kí đồ định tính cắn methanol từ cao đặc, cốm thuốc, KNH chuẩn a.Ch chuẩn bước sóng 254 nm Trang 30 31 32 33 34 35 36 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Trứng cá, mụn nhọt bệnh phổ biến nay, đặc biệt thiếu niên Bệnh biểu tổn thương khác sẩn đỏ, mụn đỏ, mụn cám,… ảnh hưởng đến thẩm mỹ chất lượng sống người bệnh [6] Trên thị trường có nhiều sản phẩm thuốc tân dược mỹ phẩm để điều trị trứng cá, mụn nhọt Việc sử dụng thuốc tân dược, mỹ phẩm có tác dụng nhanh, mạnh có nhiều tác dụng phụ Ngược lại, điều trị thuốc cổ truyền khơng có tác dụng tốt mà khắc phục nhược điểm thuốc tân dược, mỹ phẩm; mang lại ý nghĩa thiết thực người bệnh góp phần phát triển Đông dược Việt Nam Bài thuốc Tiêu độc (Tòa sang) gồm vị Kim ngân hoa, Liên kiều, Hoàng cầm, Xuyên khung, Đương quy, Cát cánh, Cúc hoa, Ngưu tất thuốc cổ phương có tác dụng nhiệt giải độc, điều trị mụn trứng cá lương y dùng để điều trị cho bệnh nhân Tuy nhiên việc dùng thuốc sắc cổ phương không tiện dùng, làm nhiều thời gian cho bệnh nhân Mong muốn phát huy tính ưu việt thuốc cổ truyền an tồn, tác dụng phụ đặc biệt tiện dùng cho người bệnh, việc nghiên cứu bào chế phương thuốc thành dạng bào chế đại cần thiết, dạng cao đặc bán thành phẩm để tiếp tục chuyển sang dạng bào chế khác, cốm dạng bào chế dễ sử dụng, dùng bệnh nhân khó nuốt, không dùng thuốc dạng viên Công ty Cổ phần Dược phẩm VCP bào chế dạng cốm từ thuốc Tiêu độc cần tiêu chuẩn hóa dạng bào chế Từ lý trên, đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng kháng khuẩn cốm phương thuốc Tiêu độc” thực với mục tiêu cụ thể: - Định tính, so sánh số thành phần hóa học cốm thuốc, cao đặc thuốc vị thuốc phản ứng hóa học sắc kí lớp mỏng - Thử tác dụng kháng khuẩn cao đặc cốm thuốc PHỤ LỤC Phụ lục Bài thuốc “Tiêu độc”: Dược liệu, dược liệu chuẩn, cốm thành phần cốm thuốc Phụ lục 2: Cơng thức phương pháp chiết xuất gói cốm thành phần cốm thuốc Phụ lục Hệ thống thiết bị sắc kí lớp mỏng hiệu cao Linomat (Camag Switzeland) Phụ lục 4: Sơ đồ bào chế cao đặc chiết nước Phụ lục 5: Định tính số thành phần hóa học cao đặc, cốm thuốc, dược liệu cốm thành phần phản ứng hóa học Phụ lục 6: Ảnh kết nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn cao đặc cốm thuốc Phụ lục Bài thuốc “Tiêu độc”: Dược liệu, dược liệu chuẩn, cốm thành phần cốm thuốc - Dược liệu: Ngưu tất Cúc hoa vàng Liên kiều Đương quy Kim ngân hoa Xuyên khung - Dược liệu chuẩn: Kim ngân hoa Liên kiều Cát cánh Hoàng cầm Hoàng Cầm Đương quy Cúc hoa Xuyên khung Cát cánh Ngưu tất - Cốm: Ngưu tất Liên kiều Kim ngân hoa Cát cánh Cúc hoa Đương quy Xuyên khung Hoàng cầm Cốm thuốc Phụ lục 2: Cơng thức phương pháp chiết xuất gói cốm thành phần cốm thuốc Cốm thuốc: g/1 gói cốm Cơng thức cho gói cốm thành phần Cốm thành Lượng Lượng dược phần cốm/ gói liệu/1 gói cốm Tá dược Chiết xuất Chiết nước lần; lần - gấp Kim ngân hoa 22 lần dược liệu - chiết giờ, 2g 10 g Lactose lần - gấp 16 lần dược liệu chiết → cô đặc → phun sấy khô Chiết lấy tinh dầu (dự trữ) → chiết nước lần; lần - gấp Liên kiều 0,5 g 10 g Lactose lần dược liệu - chiết giờ, lần - gấp lần dược liệu - chiết → cô đặc → phun sấy khô Chiết nước lần; lần - gấp lần dược liệu - ngâm 40 Cát cánh 1,5 g 6g Lactose phút - chiết giờ, lần - gấp lần dược liệu - chiết → cô đặc → phun sấy khô Chiết nước lần; lần - gấp lần dược liệu - ngâm 40 Đương quy 4g 10 g Lactose phút - chiết 2,5 giờ, lần gấp lần dược liệu - chiết 2,5 → cô đặc → phun sấy khô Chiết nước lần, lần Hoàng cầm 2g 10 g Lactose lượng nước gấp lần dược liệu - chiết 1,5 → cô đặc → phun sấy khô Chiết nước lần; lần - gấp lần dược liệu - chiết giờ, Ngưu tất 3g 10 g Lactose lần - gấp lần dược liệu chiết 1,5 → cô đặc → phun sấy khô Chiết nước lần; lần - gấp 14 lần dược liệu - chiết 2,5 Cúc hoa 2g 10 g Lactose giờ, lần - gấp 11 lần dược liệu - chiết 2,5 → cô đặc → phun sấy khô Chiết nước lần; lần - gấp 10 lần dược liệu - chiết tinh dầu → Tạo phức Xuyên khung 2g 6g Lactose hợp tinh dầu bay β – cyclodextrin, đồng thời rút dịch chiết lần 1; lần - gấp lần dược liệu - chiết → cô đặc → phun sấy khô Phụ lục Hệ thống thiết bị sắc kí lớp mỏng hiệu cao Linomat (Camag Switzeland) (1) (2) Hệ thống thiết bị sắc kí lớp mỏng hiệu cao Linomat (1): Thiết bị phun mẫu Linomat (2): Thiết bị chụp ảnh Camag Phụ lục 4: Sơ đồ bào chế cao đặc chiết nước Dược liệu Nước Sắc Bã dược liệu Dịch chiết nước Cơ dịch lỗng trước, dịch đặc sau Hàm ẩ m dưới 20 % Cao đặc Phụ lục 5: Định tính số thành phần hóa học cao đặc, cốm thuốc, dược liệu cốm thành phần phản ứng hóa học ❖ Lượng cốm thành phần lấy cho phản ứng định tính phản ứng hóa học : Kim ngân hoa 1g Đương quy 2g Liên kiều 0,25 g Cát cánh 1,5 g Hoàng cầm 1g Cúc hoa 1g Xuyên khung 1g Ngưu tất 1,5 g • Định tính flavonoid: ✓ Mẫu nghiên cứu: Cao đặc, cốm thuốc: Cân g cao đặc, g cốm thuốc cho vào bình nón, pha lỗng 50 ml nước cất Đun bếp cách thủy cho tan hết, để lắng, lọc Dịch lọc đem lắc với n-hexan để loại tạp, lắc lần, lần 15 ml n-hexan Dịch chiết nước thu lắc với EtOAc lần, lần 15 ml Gộp dịch chiết EtOAc lại, bốc dung mơi, cắn thu hòa tan 10 ml ethanol 90o làm phản ứng định tính Dược liệu, cốm thành phần: Cân g dược liệu loại, cốm loại với khối lượng xác định cho vào bình nón, thêm 50 ml EtOH 90o Đun cách thủy sơi vài phút Lọc nóng Dịch lọc tiến hành phản ứng định tính ✓ Tiến hành: - Phản ứng Cyanidin: Cho vào ống nghiệm ml dịch chiết, thêm bột Mg kim loại (khoảng 20 mg) Nhỏ giọt HCl đậm đặc (3 - giọt), để yên vài phút Phản ứng dương tính dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu đỏ - Phản ứng với kiềm: Cho vào ống nghiệm ml dịch chiết, thêm vài giọt dung dịch NaOH 10% Phản ứng dương tính thấy xuất tủa vàng, thêm ml nước cất, tủa tan màu vàng dung dịch tăng thêm - Phản ứng với amoniac: Nhỏ giọt dịch chiết lên giấy lọc Hơ khô để lên miệng lọ ammoniac đặc mở nút Phản ứng dương tính thấy màu vàng vết dịch chiết tăng lên - Phản ứng với FeCl3: Cho vào ống nghiệm ml dịch chiết Thêm vài giọt dung dịch FeCl3 5% Phản ứng dương tính xuất tủa xanh đen - Phản ứng diazo hóa: Cho ml dịch chiết vào ống nghiệm, kiềm hóa dung dịch kiềm (NaOH), thêm vài giọt thuốc thử diazo pha, lắc (hoặc đun nóng nồi cách thủy vài phút) Phản ứng dương tính xuất màu đỏ • Định tính saponin: ✓ Mẫu nghiên cứu: Cao đặc, cốm thuốc: Cân g cao đặc, g cốm thuốc cho vào bình nón, pha loãng 20 ml nước cất Đun bếp cách thủy cho tan hết, để lắng, lọc Dịch lọc đem lắc với n-hexan để loại tạp, lắc lần, lần 10 ml n-hexan Dịch chiết nước thu lắc với n-butanol lần, lần 10 ml Gộp dịch chiết n-butanol lại, bốc dung môi, cắn thu hòa tan 10 ml ethanol 90o làm phản ứng định tính Dược liệu, cốm thành phần: Cân g dược liệu loại, cốm loại với khối lượng xác định cho vào bình nón, thêm 50 ml EtOH 90% Đun cách thủy sơi vài phút Lọc nóng Dịch lọc tiến hành phản ứng định tính ✓ Tiến hành: - Hiện tượng tạo bọt: Cho MNC vào ống nghiệm lớn, thêm khoảng 10 ml nước cất, lắc mạnh theo chiều dọc ống nghiệm khoảng phút Để yên quan sát tượng tạo bọt Phản ứng dương tính cột bọt bền vững sau 15 phút - Phản ứng Salkowski: Lấy ml DC vào ống nghiệm, bốc đến cắn, hòa tan cắn ml cloroform Nghiêng ống nghiệm 45°, nhỏ từ từ đồng lượng dung dịch acid sulfuric đặc theo thành ống Phản ứng dương tính xuất vùng màu đỏ tím hai lớp • Định tính coumarin: ✓ Mẫu nghiên cứu: Cân g cao đặc, g cốm thuốc, g dược liệu loại, cốm thành phần với khối lượng xác định cho vào bình nón, thêm 30 ml ethanol 90o Đun cách thủy đến sơi vài phút Lọc nóng qua giấy lọc Dịch chiết thu làm phản ứng định tính ✓ Tiến hành: - Phản ứng đóng mở vòng lacton: Cho vào ống nghiệm, ống ml dịch chiết: ▪ Ống thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10% ▪ Ống để nguyên Đun ống nghiệm đến sôi Để nguội quan sát: ▪ Ống có màu vàng tủa đục màu vàng ▪ Ống Thêm vào ống nghiệm ống ml nước cất Lắc quan sát: ▪ Ống suốt ▪ Ống tủa đục Acid hóa ống vài giọt HCl đặc, ống trở lại tủa đục ống (phản ứng dương tính) - Phản ứng diazo hóa: Cho vào ống nghiêm ml dịch chiết Thêm vào 2ml dung dịch NaOH 10% Đun cách thủy đến sôi để nguội, nhỏ vài giọt thuốc thử diazo pha Phản ứng dương tính xuất màu đỏ gạch - Quan sát huỳnh quang vết coumarin ánh sáng tử ngoại tác dụng với kiềm: Nhỏ vài giọt dịch chiết coumarin lên giấy thấm Nhỏ tiếp vài giọt dung dịch NaOH 5% Sấy nhẹ Che phần diện tích dịch chiết giấy lọc miếng kim loại chiếu tia tử ngoại vài phút Bỏ miếng kim loại ra, quan sát đèn tử ngoại Phản ứng dương tính phần khơng che có huỳnh quang sáng phần bị che, tiếp tục chiếu tử ngoại, phần bị che sáng dần lên, sau vài phút hai phần phát quang • Định tính tanin: ✓ Mẫu nghiên cứu: Cân g cao đặc, g cốm thuốc, g dược liệu loại, cốm thành phần với khối lượng xác định cho vào bình nón, thêm 30 ml nước cất Đun sơi phút Để nguội, lọc Dịch chiết thu làm phản ứng định tính ✓ Tiến hành: - Ống 1: Lấy ml dịch lọc, thêm giọt dung dịch FeCl3 5% Phản ứng dương tính xuất màu tủa màu xanh đen xanh nâu nhạt - Ống 2: Lấy ml dịch lọc, thêm giọt chì acetat 10% Phản ứng dương tính xuất tủa - Ống 3: Lấy ml dịch lọc, thêm giọt dung dịch gelatin 1% Phản ứng dương tính xuất tủa bơng trắng • Định tính alkaloid: ✓ Mẫu nghiên cứu: Cân g cao đặc, g cốm thuốc, g dược liệu cốm thành phần với khối lượng xác định cho vào bình nón dung tích 50 ml có nút mài Thêm 25 ml dung dịch H2SO4 1N, đun đến sôi, để nguội, lọc lấy dịch lọc Cho dịch lọc vào bình gạn 100 ml Kiềm hóa dịch lọc dung dịch amoniac đặc đến pH = - 10 (thử thị màu vạn năng) Chiết alkaloid base CHCl3 (3 lần x 10 ml), gạn lấy lớp CHCl3, bốc đến cách thủy tới khơ, thu cắn Hòa tan cắn ml H2SO4 1N Chia dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ ✓ Tiến hành: - Ống 1: Nhỏ - giọt TT Mayer Phản ứng dương tính xuất kết tủa trắng đến vàng - Ống 2: Nhỏ - giọt TT Dragendorff Phản ứng dương tính xuất tủa vàng cam đến đỏ - Ống 3: Nhỏ 2- giọt TT Bouchardat Phản ứng dương tính xuất tủa nâu đến đỏ nâu • Định tính polysaccharid, acid amin, acid hữu cơ, đường khử: ✓ Mẫu nghiên cứu: Cân g cao đặc, g cốm thuốc, g dược liệu loại, cốm thành phần với khối lượng xác định cho vào bình nón riêng biệt, thêm 30 ml nước cất Đun sôi 10 phút Để nguội, lọc Dịch chiết thu làm phản ứng định tính ✓ Tiến hành: - Định tính polysaccharid: Đun cách thủy ml dịch lọc với 0,5 ml dung dịch Lugol (TT) vài phút Phản ứng dương tính dung dịch chuyển sang màu tím đỏ xanh tím - Định tính acid hữu cơ: Cho ml dịch lọc vào ống nghiệm, thêm vào bột Na2CO3 Phản ứng dương tính thấy có bọt khí bay lên - Định tính acid amin: Đun cách thủy ml dịch lọc với giọt TT Ninhydrin - phút Phản ứng dương tính xuất màu tím - Định tính đường khử: Đun cách thủy ml dịch lọc với 0,5 ml TT Fehling A 0,5 ml Fehling B vài phút Phản ứng dương tính xuất tủa đỏ gạch Phụ lục 6: Ảnh kết nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn cao đặc cốm thuốc ❖ Cao đặc: o Vi khuẩn Gram âm: o Vi khuẩn Gram dương: ❖ Cốm thuốc: o Vi khuẩn Gram âm: o Vi khuẩn Gram dương: ... Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng kháng khuẩn cốm phương thuốc Tiêu độc thực với mục tiêu cụ thể: - Định tính, so sánh số thành phần hóa học cốm thuốc, cao đặc thuốc vị thuốc phản ứng hóa. ..BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ HỒNG OANH Mã sinh viên: 1301312 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CỐM MỘT PHƯƠNG THUỐC TIÊU ĐỘC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ... đặc 2.2.2 Nghiên cứu định tính số thành phần hóa học cao đặc thuốc, cốm thuốc, dược liệu cốm thành phần: - Định tính nhóm chất cao đặc, cốm thuốc, dược liệu cốm thành phần phản ứng hóa học - Định