Nghiên cứu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Mũi mác Tadehagi triquetrum (L.) H. Ohashi, Họ đậu (Fabaceae) ở Bắc Kạn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU NÔNG THỊ ANH THƯ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY MŨI MÁC - Tadehagi triquetrum (L.) H Ohashi, HỌ ĐẬU (Fabaceae) Ở BẮC KẠN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, 2019 HÀ NỘI, 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU NÔNG THỊ ANH THƯ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY MŨI MÁC - Tadehagi triquetrum (L.) H Ohashi, HỌ ĐẬU (Fabaceae) Ở BẮC KẠN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU - DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 9720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Bích Thu PGS.TS Nguyễn Trọng Thông HÀ NỘI, 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học PGS.TS Nguyễn Thị Bích Thu, PGS.TS Nguyễn Trọng Thông Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin chịu trách nhiệm nghiên cứu Tác giả luận án NCS Nông Thị Anh Thư LỜI CẢM ƠN Luận án tiến sĩ thực Viện Dược liệu hướng dẫn khoa học PGS.TS Nguyễn Thị Bích Thu PGS.TS Nguyễn Trọng Thơng Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy định hướng khoa học, tận tình hỗ trợ, bảo, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi để hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo, Khoa, Phòng đồng nghiệp Viện Dược liệu; Trường Đại học Dược Hà Nội; Viện Hóa học, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam; Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện cộng tác để giúp tơi hồn thành cơng trình Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới:  GS Phạm Thanh Kỳ, Trường Đại học Dược Hà Nội  PGS.TS Nguyễn Văn Tập, Khoa Tài nguyên Dược liệu - Viện Dược liệu  PGS.TS Phương Thiện Thương, Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu  PGS.TS Phạm Thị Vân Anh, Trưởng Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội  TS Nguyễn Thị Phương, Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu  Ths Nguyễn Tiến Phượng, Trưởng Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y dược Thái Nguyên có ý kiến đóng góp quý báu giúp tơi hồn thiện luận án Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới người thân gia đình bạn bè động viên, chia sẻ giúp đỡ suốt thời gian qua NCS Nông Thị Anh Thư MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CÁM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 THỰC VẬT HỌC 1.1.1 Vị trí phân loại chi Desmodium Desv chi Tadehagi H Ohashi 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Desmodium Desv chi Tadehagi H Ohashi 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 15 1.2.1 Thành phần hóa học chi Desmodium Desv 15 1.2.2 Thành phần hóa học chi Tadehagi H Ohashi 21 1.3 TÁC DỤNG SINH HỌC, CÔNG DỤNG 26 1.3.1 Tác dụng sinh học công dụng chi Desmodium 26 1.3.2 Tác dụng sinh học cơng dụng lồi thuộc chi Tadehagi H Ohashi.31 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 35 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 35 2.1.2 Động vật thực nghiệm 35 2.1.3 Thuốc thử, dung môi, hoá chất 35 2.1.4 Trang thiết bị nghiên cứu 36 2.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 37 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.3.1 Về thực vật 37 2.3.2 Về hóa học 37 2.3.4 Xử lý số liệu 45 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .47 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT 47 3.1.1 Đặc điểm hình thái thực vật M i mác 47 3.1.2 Đặc điểm vi học 48 3.1.3 Thẩm định tên khoa học mẫu nghiên cứu 52 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC 53 3.2.1 Định tính nhóm chất hữu 53 3.2.2 Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 54 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG SINH HỌC 93 3.3.1 Tác dụng chống oxy hóa in vitro 93 3.3.2 Tác dụng chống viêm 95 3.3.3 Tác dụng phục hồi tổn thương gan 98 CHƯƠNG BÀN LUẬN 106 4.1 VỀ THỰC VẬT 106 4.2 VỀ HÓA HỌC 106 4.2.1 Về định tính nhóm chất .107 4.2.2 Về chiết xuất phân lập hợp chất 107 4.3 VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC 118 4.3.1 Tác dụng chống oxy hóa in vitro 118 4.3.2 Tác dụng chống viêm 118 4.3.3 Về tác tác dụng tăng phục hồi tổn thương gan 120 4.4 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN 121 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .123 KẾT LUẬN 123 KIẾN NGHỊ 124 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Tên viết đầy đủ BPD Bộ phận dùng BuOH Butanol CC Column Chromatography (Sắc ký cột) COSY Correlation Spectroscopy CMC Carboxyl Methyl Cellulose cs Cộng DĐVN Dược điển Việt Nam D Desmodium DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer dl Dược liệu DM Dung môi DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium DMSO Dimethylsulfoxid DPPH 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl ESI-MS Electron Spray Ionization Mass Spectrometry (Phổ khối lượng ion hóa phun mù điện tử) EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol FOC Flora of China (Thực vật chí Trung Quốc) HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation (Phổ tương quan dị nhân đa liên kết) HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence HPLC High Perfomance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) HR-ESI-MS High Resolution Electron Spray Ionization Mass Spectrometry (Phổ khối lượng ion hóa phun mù điện tử phân giải cao) HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence (Phổ tương tác dị nhân lượng tử đơn) Hx n-Hexan Tên viết tắt Tên viết đầy đủ IC50 Inhibitory Concentration 50% (Nồng độ ức chế 50%) IR Infra Red (Hồng ngoại) IU International Unit (Đơn vị quốc tế) MeOH Methanol MM M i mác NBT Nitro blue Tetrazolium NMR Nuclear Magnetic Resonance (Cộng hưởng từ hạt nhân) NOESY Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy NP Pha thường OD Optical Density (Mật độ quang) p Probability (Xác suất) PTMĐ Phần mặt đất SD Standard Deviation (Độ lệch chuẩn) TLC Thin Layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng) TLTK Tài liệu tham khảo T Tadehagi UV Ultraviolet (Tử ngoại) Vis Visible (Khả kiến) XO Xanthin Oxidase YHCT Y học cổ truyền DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Sự khác đặc điểm hoa chi Desmodium Tadehagi Bảng 1.2 Sự phân bố số loài thuộc chi Desmodium Bảng 1.3 Phân bố sinh thái loài thuộc chi Tadehagi H Ohashi 14 Bảng 1.4 Các hợp chất flavonoid phân lập từ loài thuộc chi Desmodium 15 Bảng 1.5 Các alcaloid từ loài thuộc chi Desmodium .19 Bảng 1.6 Các hợp chất steroid phân lập từ chi Desmodium 20 Bảng 1.7 Các hợp chất phân lập từ chi Tadehagi H Ohashi 23 Bảng 1.8 Tác dụng sinh học số loài thuộc chi Desmodium 27 Bảng 1.9 Công dụng số loài thuộc chi Desmodium 28 Bảng 1.10 Một số kinh nghiệm sử dụng dân gian chi Desmodium 30 Bảng 1.11 Tác dụng sinh học số hợp chất có chi Tadehagi 31 Bảng 1.12 Công dụng loài thuộc chi Tadehagi H Ohashi 32 Bảng 1.13 Một số kinh nghiệm sử dụng dân gian M i mác 33 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu có dược liệu M i mác 53 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT1 59 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT2 60 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT3 62 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT4 63 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT5 66 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT6 67 Bảng 3.8 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT7 69 Bảng 3.9 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT8 71 Bảng 3.10 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT9 72 Bảng 3.11 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT10 74 Bảng 3.12 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT11 76 Bảng 3.13 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT12 78 Bảng 3.14 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT13 79 Bảng 3.15 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT14 80 Bảng 3.16 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT15 82 Bảng 3.17 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT16 84 Bảng 3.18 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT17 86 Bảng 3.19 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT18 88 Bảng 3.20 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT19 89 Bảng 3.21 Dữ liệu phổ NMR hợp chất TT20 90 Bảng 3.22 Tác dụng dọn gốc tự DPPH cao EtOH EtOAc 94 Bảng 3.23 Tác dụng dọn gốc tự superoxid anion (O2-.) cao EtOH EtOAc 94 Bảng 3.24 Kết dọn gốc tự đối chứng dương quercetin 90 Bảng 3.25 Tác dụng chống viêm cấp cao M i mác mơ hình gây phù chân chuột 91 Bảng 3.26 Ảnh hưởng cao M i mác đến thể tích dịch rỉ viêm, số lượng bạch cầu hàm lượng protein dịch rỉ viêm 92 Bảng 3.27 Tác dụng cao M i mác trọng lượng u hạt cân tươi (n=10) 97 Bảng 3.28 Tác dụng cao M i mác trọng lượng u hạt sấy khô 98 Bảng 3.29 Ảnh hưởng cao M i mác lên trọng lượng gan chuột 100 Bảng 3.30 Ảnh hưởng cao M i mác lên hoạt độ transaminase huyết chuột 96 Bảng 3.31 Ảnh hưởng M i mác lên số MDA gan chuột 101 Bảng 3.32 Ảnh hưởng cao M i mác lên đại thể gan chuột 102 Bảng 3.33 Ảnh hưởng cao M i mác lên vi thể gan chuột 104 Bảng 4.1 Các chất phân lập từ M i mác…………………….………………107 PHỤ LỤC 18 CÁC PHỔ CỦA HỢP CHẤT TT18 Cấu trúc hóa học hợp chất TT18 (MM18, 6′-O-cis-p-coumaroyl-3,5-dihydroxyphenyl-β-ᴅ -glucopyranosid) Phụ lục 18.1 Phổ IR hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.2 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.3 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.4 Phổ DEPT hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.5 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.6 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.7 Phổ ESI-MS hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.1 Phổ IR hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.2 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.3 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.4 Phổ DEPT hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.5 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.6 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT18 (MM18) Phụ lục 18.7 Phổ ESI-MS hợp chất TT18 (MM18) PHỤ LỤC 19 CÁC PHỔ CỦA HỢP CHẤT TT19 Cấu trúc hóa học hợp chất TT19 (MM19, tadehaginosid E) Phụ lục 19.1 Phổ IR hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.2 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.3 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.4 Phổ DEPT hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.5 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.6 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.7 Phổ ESI-MS hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.1 Phổ IR hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.2 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.3 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.4 Phổ DEPT hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.5 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.6 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT19 (MM19) Phụ lục 19.7 Phổ ESI-MS hợp chất TT19 (MM19) PHỤ LỤC 20 CÁC PHỔ CỦA HỢP CHẤT TT20 (MM20) Cấu trúc hóa học hợp chất TT20 (MM20, tadehaginosid K; chất mới) Phụ lục 20.1 Phổ IR hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.2 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.3 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.4 Phổ DEPT hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.5 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.6 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.7 Phổ COSY (500/500 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.8 Phổ HR-ESI-MS hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.1 Phổ IR hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.2 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.3 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.4 Phổ DEPT hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.5 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.6 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) Phụ lục 20.7 Phổ COSY (500/500 MHz, CD3OD) hợp chất TT20 (MM20) 20161214_PD4D2_CNU_HP 59 (1.116) AM2 (Ar,30000.0,0.00,0.00); ABS; Cm (59:75) 1: TOF MS ES+ 1.73e6 635.1738 100 % 301.1420 636.1772 630.2180 149.0244 613.1918 302.1454 637.1797 205.0867 579.2934 326.0736 338.3424 147.0450 651.1474 522.5977 777.3270 796.2626 1247.3560 1060.4344 1249.3630 1242.4009 1075.4163 938.7577 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 Phụ lục 20.8 Phổ HR-ESI-MS hợp chất TT20 (MM20) 1433.5811 1461.6113 1400 m/z ... 1.1) Hình 1.1 Tadehagi pseudotriquetrum (Candolle) H Ohashi  Loài Tadehagi triquetrum M i mác (Tadehagi triquetrum (Linnaeus) H Ohashi, Hedysarum triquetrum L., Pteroloma triquetrum (L.) Desv ex... Desmodium triquetrum (L.) DC M i mác) từ chi Desmodium thành chi Tadehagi Như vậy, loài Desmodium triquetrum (L.) DC đổi tên thành Tadehagi triquetrum (Linnaeus) H Ohashi M i mác (Tadehagi triquetrum. .. 12 Triquetrumon A (T12) [113] 13 Triquetrumon B (T13) [113] 14 Triquetrumon C (T14) [113] 15 (R)-Triquetrumon D (T15) [113] 16 Triquetrumon E (T16) [116] 17 Triquetrumon F (T17) [116] 25 18 Triquetrumon