Nghiên cứu nhân giống cây chuối đỏ Dacca (Musa acuminata) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MÔI TRƯỜNG NGUYỄN THỊ NGỌC THƯƠNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY CHUỐI ĐỎ DACCA (MUSA ACUMINATA) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO Đà Nẵng – Năm 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MÔI TRƯỜNG NGUYỄN THỊ NGỌC THƯƠNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY CHUỐI ĐỎ DACCA (MUSA ACUMINATA) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO Ngành: Công nghệ sinh học Người hướng dẫn: TS Võ Châu Tuấn Đà Nẵng – Năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết khóa luận trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Nguyễn Thị Ngọc Thương LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực khoá luận tốt nghiệp này, xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Bộ môn Công nghệ Sinh học, Khoa Sinh – Môi trường, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Võ Châu Tuấn – thầy giáo tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình tơi thực đề tài Tôi xin đặc biệt gửi lời cảm ơn chân thành đến Ths Vũ Đức Hoàng, người giúp đỡ nhiều việc trau dồi kiến thức kĩ thực hành thí nghiệm Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Sinh - Môi trường giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình tơi thực đề tài khố luận Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn gia đình, bạn bè ln động viên, khích lệ tơi vật chất lẫn tinh thần để tơi đạt kết tốt Đà Nẵng, tháng năm 2018 Sinh viên thực Nguyễn Thị Ngọc Thương MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề: Mục tiêu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG 1.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG IN VITRO Ở THỰC VẬT .3 1.1.1 Sơ lược kỹ thuật nhân giống in vitro thực vật 1.1.2 Cơ sở khoa học 1.1.3 Các bước nhân giống in vitro 1.1.4 Ưu, nhược điểm nhân giống vơ tính kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào 1.1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến nhân giống in vitro 1.2 NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÁC LOÀI CHUỐI BẰNG KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG IN VITRO 12 1.2.1 Các nghiên cứu giới 12 1.2.2 Các nghiên cứu nước 14 3.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY CHUỐI ĐỎ DACCA 17 3.1.1 Đặc điểm sinh học 17 3.1.2 Giá trị sử dụng 17 3.1.3 Các nghiên cứu đối tượng nghiên cứu 17 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 19 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 19 2.3 PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN 19 2.3.1 Phương pháp khử trùng mẫu vật tái sinh chồi 20 2.3.2 Phương pháp nhân nhanh chồi in vitro 20 2.3.3 Phương pháp tạo rễ in vitro – tạo hoàn chỉnh 21 2.3.4 Phương pháp xử lí thống kê 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ KHỬ TRÙNG MẪU VẬT VÀ TÁI SINH CHỒI IN VITRO .22 3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐHST ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO CÂY CHUỐI ĐỎ DACCA .24 3.2.1 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi in vitro chuối đỏ Dacca 25 3.2.2 Ảnh hưởng BA, IBA phối hợp đến khả nhân nhanh chồi in vitro chuối đỏ Dacca 27 3.2.3 Ảnh hưởng BA, NAA phối hợp đến khả nhân nhanh chồi in vitro chuối đỏ Dacca 29 3.3 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐHST IBA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH RỄ IN VITRO CÂY CHUỐI ĐỎ DACCA .32 3.4 SƠ ĐỒ QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY CHUỐI ĐỎ DACCA 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 * Kết luận 37 * Đề nghị 37 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 *Tiếng Việt 38 *Tiếng Anh 39 PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : Diclorophenoxyacetic acid AC : Active carbon (than hoạt tính) BA : 6-benzyl adenine BAP : 6-benzylaminopurine B5 : Gamborg (1968) Cs : Cộng CW : Coconut water (nước dừa) ĐHST : Điều hòa sinh trưởng IAA : Indole 3-acetic acid IBA : Indole 3-butyric acid KIN : Kinetin L : Lít MS : Murashige Skoog (1962) NAA : α-naphthalen acetic acid SH : Schenk Hildebrandt (1972) TDZ : Thidiazuron DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến hiệu khử trùng 3.1 3.2 chuối đỏ Dacca tháng tuổi sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến hiệu khử trùng chuối đỏ Dacca tháng tuổi sau tuần nuôi cấy 22 23 Ảnh hưởng BA đến khả nhân chồi in vitro 3.3 chuối đỏ Dacca sau tuần nuôi cấy 25 Ảnh cấy hưởng BA IBA kết hợp đến khả nhân 3.4 3.5 3.6 chồi in vitro chuối đỏ Dacca sau tuần nuôi cấy in vitro chuối mốc sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng BA NAA kết hợp đến khả in vitro chuối mốc sau tuần nuôi cấy nhân chồi in vitro chuối đỏ Dacca sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng IBA đến khả nhân nhanh rễ in vitro chuối đỏ Dacca sau 20 ngày ni cấy sóc chuối mốc sau tuần nuôi cấy 28 29 32 DANH MỤC HÌNH ẢNH Số hiệu hình Tên hình 2.1 Cây chuối đỏ Dacca ngồi tự nhiên 2.2 Sơ đồ thí nghiệm Trang 20 23 Chồi chuối đỏ Dacca tháng tuổi sau hiệu khử 3.1 trùng cồn 70o sau tuần nuôi cấy 22 3.2 Chồi chuối đỏ Dacca tháng tuổi sau hiệu khử in vitro chuối mốc sau tuần nuôi cấy trùng cồn 70o sau tuần nuôi cấy 23 3.3 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi in vitro chuối đỏ Dacca sau tuần nuôi cấy cấy 26 Ảnh hưởng BA IBA đến khả nhân nhanh 3.4 chồi in vitro chuối đỏ Dacca sau tuần nuôi cấy 29 cấy 3.5 Ảnh hưởng BA IBA đến khả nhân nhanh chồi in vitro chuối đỏ Dacca sau tuần nuôi cấy 30 Ảnh hưởng IBA đến khả nhân nhanh rễ in 3.6 vitro chuối đỏ Dacca 33 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Từ xưa đến chuối ăn trồng phổ biến nhất, hay gặp vườn gia đình Chuối cung cấp cho hàng triệu người khắp vùng nhiệt đới cận nhiệt với thực phẩm chủ yếu cho loại trái xuất rộng lớn giới Hiện chuối trồng 150 quốc gia giới khu vực 4.84 triệu ha, cung cấp 95.6 triệu [50] Chuối chiếm xấp xỉ 44% sản lượng trái tươi ăn trái quan trọng thứ hai giới, Châu Phi chiếm khoảng 35% sản lượng giới [53] Ở nước ta, khu vực miền Nam Việt Nam, nơi có điều kiện trồng chuối thuận lợi, sản lượng chuối đạt triệu năm, diện tích vạn số vạn nước [14] Mặt khác, phận chuối sử dụng vào nhiều mục đích khác mang lại lợi ích thiết thực cho người, đặc biệt làm thuốc chữa bệnh khác nõn chuối có tác dụng cầm máu nhanh [37] Quả chuối có giá trị dinh dưỡng cao chế biến nhiều sản phẩm khác chuối sấy, mứt chuối, bánh chuối, kem chuối… đa dạng phục vụ cho giá trị dinh dưỡng tín ngưỡng người Việt Nam nói riêng giới nói chung Cây chuối đỏ Dacca có tên khoa học Musa acuminata ‘Red Dacca’ thuộc chi Musa tìm thấy Úc Trung, Nam Mỹ [53], [39] (đề tài nghiên cứu giống chuối đỏ Dacca nguồn gốc từ Úc) Chúng nhỏ có vỏ dày so với loại thơng thường, thịt chuối có màu trắng kem màu hồng với hương vị chuối thường đặc trưng hòa lẫn vị mâm xơi Đây ăn u thích vùng Trung Mỹ với 6,4 tỉ đô la tiêu thụ năm Chuối đỏ tốt cho sức khỏe với hàm lượng 100 calo 10gr, đáp ứng 16% chất xơ (4gr), giàu Kali, vitamin B6 vitamin C Ngồi chuối đỏ giảm nguy mắc bệnh tim, tiểu đường type [51] Trong tự nhiên, chuối nói chung nhân giống theo phương pháp nhân giống sinh dưỡng, nghĩa cách dùng chuối vốn phát triển từ chồi bên có nguồn gốc từ thân hành với hay nhiều chồi sử dụng [32] Cây chuối nhân giống theo phương pháp nhân giống sinh dưỡng có mức nhân giống thấp, thường sinh trưởng kém, phát triển chậm, khơng đồng đều, 30 Chú thích: Các chữ khác cột sai khác có ý nghĩa thống kê với p