Nghiên cứu, kỹ thuật nhân nhanh, giống lan Kim Tuyến,Anoectochilus roxburghii, bằng phương pháp, nuôi cấy in vitro
LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhịêm khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm em tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh giống lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) phương pháp nuôi cấy in vitro” Qua thời gian làm việc phòng nuôi cấy mô Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm đến em hoàn thành đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa thầy cô giáo môn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: ThS Nguyễn Thị Tình, CN Vi Đại Lâm tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè hết lòng động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2013 Sinh viên thực Hoàng Thị Hiên DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT ADN : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng IAA : Indol axetic acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s NAA : α - Naphlene axetic acid TN : Thí nghiệm WPM : Woody Plant Medium DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng NaClO 1%, HgCl2 0,1% đến hiệu vô trùng vật liệu nuôi cấy chồi lan Kim Tuyến (sau 10 ngày nuôi cấy) Bảng 4.2 Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến (sau 20 ngày nuôi cấy) Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy) Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy) Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy) Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả rễ lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy) Bảng 4.7 Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng, phát triển lan Kim Tuyến giai đoạn sau nuôi cấy mơ ngồi vườn ươm (sau 30 ngày) DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 4.1 Biểu đồ thể ảnh hưởng thời gian khử trùng NaClO 1%, HgCl2 0,1% đến hiệu vô trùng vật liệu nuôi cấy chồi lan Kim Tuyến (sau 10 ngày nuôi cấy) Hình 4.2 Biểu đồ thể ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến (sau 20 ngày ni cấy) Hình 4.3 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau 30 ngày ni cấy) Hình 4.4 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ BA Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau 30 ngày ni cấy) Hình 4.5 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ lan Kim Tuyến (sau 30 ngày ni cấy) Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ NAA IAA đến khả rễ lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy) Hình 4.7 Biểu đồ thể ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng, phát triển lan Kim Tuyến giai đoạn sau nuôi cấy mơ ngồi vườn ươm (sau 30 ngày) MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC BẢNG Trang DANH MỤC CÁC HÌNH Trang MỤC LỤC Trang PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa đề tài PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu lan Kim Tuyến 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Đặc điểm phân bố 2.1.4 Số lượng quần thể 2.1.5 Giá trị lan Kim Tuyến 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3 Một số chất điều hòa sinh trưởng ni cấy mơ tế bào thực vật 2.3.1 Auxin 2.3.2 Cytokinin 2.4 Tình hình nghiên cứu giới nước 2.4.1 Tình hình nghiên cứu lan Kim Tuyến giới 2.4.2 Tình hình nghiên cứu lan Kim Tuyến Việt Nam PHẦN ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 3.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 3.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu 3.4.1 Nội dung nghiên cứu 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng NaClO 1%, HgCl2 0,1% đến hiệu vô trùng vật liệu nuôi cấy chồi lan Kim Tuyến 4.2 Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến (sau 20 ngày nuôi cấy) 4.3 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng (BA, Kinetin) đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến 4.3.1 Kết ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy) 4.3.2 Kết ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy) 4.4 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng (NAA, IAA) đến khả rễ lan Kim Tuyến 4.4.1 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy ) 4.4.2 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả rễ lan Kim Tuyến (sau 30 ngày nuôi cấy ) 4.5 Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng, phát triển lan Kim Tuyến giai đoạn sau ni cấy mơ ngồi vườn ươm (sau 30 ngày) PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận 5.2 Kiến nghị TÀI LIỆU THAM KHẢO Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng NaClO 1%, HgCl2 0,1% đến hiệu vô trùng vật liệu nuôi cấy chồi lan Kim Tuyến PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Họ lan (Orchidaceae) số họ thực vật lớn Việt Nam, với tổng số 865 loài thuộc 154 chi [6] Lan Kim Tuyến-Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl thuộc họ Lan - Orchidaceae, có phân bố rộng hầu hết tỉnh Việt Nam [2] Chi lan Kim Tuyến Anoectochilus Việt Nam thống kê 12 lồi, có lồi lan Kim Tuyến Anoectochilus roxburghii biết đến nhiều giá trị làm cảnh giá trị làm thuốc Lan Kim Tuyến lồi dược liệu q, gặp thuộc loại dùng để điều trị bệnh tim mạch [11], [13] bồi bổ sức khỏe cho phụ nữ sau sinh [12] Đặt biệt dược liệu lan Kim Tuyến có khả tiêu diệt khối u [16], [19] Hiện với nhu cầu sử dụng ngày tăng việc khai thác liên tục nhiều năm không ý tới bảo vệ, tái sinh cộng với nạn khai thác rừng bừa bãi làm lan Kim Tuyến vốn phân bố phổ biến tỉnh miền núi phía Bắc số tỉnh miền Nam bị suy giảm nghiêm trọng Lan Kim Tuyến cấp báo Nghị định số 32/2006/NĐ – CP thuộc nhóm IA, nghiêm cấm khai thác sử dụng mục đích thương mại sách đỏ Việt Nam (2007), phân hạng EN A1a,c,d [2], [3] Cùng với phát triển khoa học kỹ thuật việc ứng dụng nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống trở nên phổ biến Nuôi cấy mô tế bào tạo trồng bệnh, chất lượng tốt, độ đồng cao, hệ số nhân lớn giữ đặc tính di truyền mẹ Nhận thức vấn đề bảo tồn phát triển loài dược liệu quý - lan Kim Tuyến, tiến hành đề tài “Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh giống lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) phương pháp in vitro” 1.2 Mục đích đề tài Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh giống lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) phương pháp in vitro 1.3 Yêu cầu đề tài Xác định ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch NaClO 1%, HgCl2 0,1% đến hiệu vô trùng vật liệu nuôi cấy chồi lan Kim Tuyến Xác định ảnh hưởng môi trường nuôi cấy (MS, B5, WPM) đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến Xác định ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng (BA, Kinetin) đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến Xác định ảnh hưởng chất kích sinh trưởng (NAA, IAA) đến khả rễ lan Kim Tuyến Xác định ảnh hưởng loại giá thể đến sinh trưởng, phát triển lan Kim Tuyến gian đoạn sau ni cấy mơ ngồi vườn ươm 1.4 Ý nghĩa đề tài Ý nghĩa học tập nghiên cứu khoa học - Kết nghiên cứu đề tài đưa biện pháp nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến phương pháp in vitro phục vụ cho nghiên cứu - Giúp sinh viên củng cố hệ thống hoá lại kiến thức học vào nghiên cứu khoa học - Biết phương pháp nghiên cứu vấn đề khoa học, xử lý, phân tích số liệu, trình bày báo cáo khoa học Ý nghĩa thực tiễn - Đề xuất quy trình nhân nhanh giống lan Kim Tuyến phương pháp nuôi cấy in vitro, để đảm bảo cung cấp số lượng lớn giống có chất lượng cao, đồng cho sản xuất - Bảo tồn loại dược liệu quý có nguy tuyệt chủng PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu lan Kim Tuyến 2.1.1 Phân loại Theo hệ thống thực vật [5] lan Kim Tuyến phân loại sau: Giới (regnum) : Plantae Ngành (Phylum) : Magnoliophyta Lớp (Class) : Liliospida Bộ (ordo) : Asparagales Họ (Family) : Orchidaceae Chi (genus) : Anoectochilus Loài (species) : roxburghii 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.2.1 Đặc điểm nhận dạng Cây thảo, mọc đất, có thân rễ mọc dài mặt đất mọng nước có nhiều lơng mềm, mang 2-4 mọc xòe sát đất Lá hình trứng, gần tròn gốc, chóp nhọn có mũi ngắn, cỡ 3-4 x 2-3cm, có màu khác với dạng gân thường nhạt (màu lục sẫm với mạng gân màu lục nhạt hay màu nâu đỏ với mạng gân màu vàng lục hay hồng) cuống dài 2-3cm [2] 2.1.2.2 Đặc điểm thân rễ Thân rễ nằm ngang sát mặt đất, đơi nghiêng, bò dài Chiều dài thân rễ từ 5-12cm, trung bình 7,87cm Đường kính thân rễ từ 3-4mm, trung bình 3,17mm Số lóng thân rễ từ 3-7 lóng, trung bình 4,03 lóng Chiều dài lóng từ 1-6cm, trung bình 1,99cm Thân rễ thường có màu xanh trắng, đơi có màu nâu đỏ, thường nhẵn, không phủ lông [6] 2.1.2.3 Đặc điểm rễ 0mg/l 0,1mg/l 0,3mg/l 0,5mg/l 1,0mg/l Hình ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến 0mg/l 0,1mg/l 0,3mg/l 0,5mg/l Hình ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến 0mg/l 0,5mg/l 1,0mg/l 1,5mg/l 2,0mg/l Hình Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ lan Kim Tuyến 0mg/l 0,5mg/l 1,0mg/l 1,5mg/l 2,0mg/l Hình Ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả rễ lan Kim Tuyến Than Sơ dừa Đất Rớn Cây bị chết thối gốc Hình ảnh hưởng loại giá thể đến khả sinh trưởng, phát triển lan Kim Tuyến giai đoạn sau ni cấy mơ ngồi vườn ươm Phụ lục : Kết xử lý số liệu Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng NaClO 1%, HgCl 0,1% đến hiệu vô trùng vật liệu nuôi cấy chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE MSN FILE M 17/ 6/13 9:17 :PAGE anh huong cua thoi gian khu trung bang dung dich HgCl2,NaOCl den hieu qua tao mau sach VARIATE V003 MSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 36932.3 5276.04 ****** 0.000 * RESIDUAL 16 83.3336 5.20835 * TOTAL (CORRECTED) 23 37015.6 1609.38 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MSKN FILE M 17/ 6/13 9:17 :PAGE anh huong cua thoi gian khu trung bang dung dich HgCl2,NaOCl den hieu qua tao mau sach VARIATE V004 MSKN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 16616.7 2373.81 ****** 0.000 * RESIDUAL 16 33.3340 2.08337 * TOTAL (CORRECTED) 23 16650.0 723.913 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE M 17/ 6/13 9:17 :PAGE anh huong cua thoi gian khu trung bang dung dich HgCl2,NaOCl den hieu qua tao mau sach MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 3 MSN 100.000 80.0000 38.3333 25.0000 100.000 21.6667 0.000000 0.000000 MSKN 0.000000 20.0000 61.6667 30.0000 0.000000 80.0000 30.0000 18.3333 SE(N= 3) 1.31762 0.833342 5%LSD 16DF 3.95024 2.49837 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE M 17/ 6/13 9:17 :PAGE anh huong cua thoi gian khu trung bang dung dich HgCl2,NaOCl den hieu qua tao mau sach F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MSN MSKN GRAND MEAN (N= 24) NO OBS 24 45.625 24 30.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 40.117 2.2822 5.0 0.0000 26.906 1.4434 4.8 0.0000 | | | | Bảng 4.2 Ảnh hưởng số môi trường đến khả tái sinh chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE HIEN 24/ 4/13 15: :PAGE anh huong cua moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi lan Kim Tuyen VARIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1172.79 586.395 19.01 0.003 * RESIDUAL 185.037 30.8395 * TOTAL (CORRECTED) 1357.83 169.728 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HIEN 24/ 4/13 15: :PAGE anh huong cua moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi lan Kim Tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 TLTS 77.7767 66.6700 50.0000 SE(N= 3) 3.20622 5%LSD 6DF 11.0908 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HIEN 24/ 4/13 15: :PAGE anh huong cua moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi lan Kim Tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLTS GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 64.816 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 13.028 5.5533 8.6 0.0030 | | | | 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA đến hệ số nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE HS FILE BBBBBBA 24/ 4/13 21:16 :PAGE Anh huong cua nong BA den he so nhan nhanh choi lan Kim Tuyen VARIATE V003 HS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.84267 1.21067 82.54 0.000 * RESIDUAL 10 146668 146668E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.98933 356381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BBBBBBA 24/ 4/13 21:16 :PAGE Anh huong cua nong BA den he so nhan nhanh choi lan Kim Tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HS 2.23333 2.50000 2.73333 3.83333 3.23333 SE(N= 3) 0.699208E-01 5%LSD 10DF 0.220323 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BBBBBBA 24/ 4/13 21:16 :PAGE Anh huong cua nong BA den he so nhan nhanh choi lan Kim Tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.9067 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.59698 0.12111 4.2 0.0000 | | | | 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin BA đến hệ số nhân nhanh chồi lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE HS FILE BOOK5 24/ 4/13 21:21 :PAGE Anh huong cua nong BA va Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cua lan Kim Tuyen VARIATE V003 HS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 982667 245667 6.70 0.007 * RESIDUAL 10 366667 366667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.34933 963810E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK5 24/ 4/13 21:21 :PAGE Anh huong cua nong BA va Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cua lan Kim Tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HS 3.86667 4.16667 4.60000 4.36667 4.03333 SE(N= 3) 0.110554 5%LSD 10DF 0.348360 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK5 24/ 4/13 21:21 :PAGE Anh huong cua nong BA va Kinetin den kha nang nhan nhanh choi cua lan Kim Tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 4.2067 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.31045 0.19149 4.6 0.0071 | | | | 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả rễ lan Kim Tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE NAA 24/ 4/13 21:26 :PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re cua lan Kim Tuyen VARIATE V003 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.88400 721000 33.80 0.000 * RESIDUAL 10 213333 213333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.09733 221238 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 24/ 4/13 21:26 :PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re cua lan Kim Tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 SR 2.83333 3.33333 3.83333 3.56667 2.66667 SE(N= 3) 0.843273E-01 5%LSD 10DF 0.265719 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 24/ 4/13 21:26 :PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re cua lan Kim Tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SR GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.2467 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.47036 0.14606 4.5 0.0000 | | | | 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA kết hợp với IAA đến khả rễ lan Kim tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE BOOK7 30/ 4/13 21:30 :PAGE Anh huong cua nong NAA va IAA den kha nang re cua lan Kim Tuyen VARIATE V003 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5.10000 1.27500 54.64 0.000 * RESIDUAL 10 233334 233334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.33333 380952 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK7 30/ 4/13 21:30 :PAGE Anh huong cua nong NAA va IAA den kha nang re cua lan Kim Tuyen MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 SR 3.83333 4.16667 3.66667 2.83333 2.66667 SE(N= 3) 0.881918E-01 5%LSD 10DF 0.277896 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK7 30/ 4/13 21:30 :PAGE Anh huong cua nong NAA va IAA den kha nang re cua lan Kim Tuyen F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SR GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.4333 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.61721 0.15275 4.4 0.0000 | | | | Bảng 4.7 Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng, phát triển lan Kim Tuyến giai đoạn sau nuôi cấy mơ ngồi vườn ươm BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLS FILE HOàNG 12/ 5/13 17:59 :PAGE anh huong cua gia the den kha nang sinh truong cua cay in vitro ngoai vuon u VARIATE V003 TLS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3116.67 1038.89 83.11 0.000 * RESIDUAL 100.000 12.5000 * TOTAL (CORRECTED) 11 3216.67 292.424 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLC FILE HOàNG 12/ 5/13 17:59 :PAGE anh huong cua gia the den kha nang sinh truong cua cay in vitro ngoai vuon VARIATE V004 TLC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3116.67 1038.89 83.11 0.000 * RESIDUAL 100.000 12.5000 * TOTAL (CORRECTED) 11 3216.67 292.424 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HOàNG 12/ 5/13 17:59 :PAGE anh huong cua gia the den kha nang sinh truong cua cay in vitro ngoai vuon MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 TLS 30.0000 71.6667 43.3333 61.6667 TLC 70.0000 28.3333 56.6667 38.3333 SE(N= 3) 2.04125 2.04125 5%LSD 8DF 6.65629 6.65629 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HOàNG 12/ 5/13 17:59 :PAGE anh huong cua gia the den kha nang sinh truong cua cay in vitro ngoai vuon F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLS TLC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 51.667 12 48.333 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 17.100 3.5355 6.8 0.0000 17.100 3.5355 7.3 0.0000 | | | | Phụ lục 3: Môi trường Table 1: Preparation of modified Murashige AND Skoog’s MS medium Component Stock Solution (g/l) I NH4NO3 KNO3 82,5 95 II MgSO4 7H2O MgSO4 4H2O ZnSO4 7H2O CuSO4 5H2O 37,0 2,23 1,058 0,0025 III CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O 44,0 0,083 0,0025 Bottle IV V KH2PO4 H3BO3 Na2MoO4.2H2O FeSO4 7H2O Na2EDTA 2H2O 17,0 0,62 0,025 2,784 3,724 Amount to take preparation (ml) 20 Final concentratic (mg/ l) 1.650,0 1.900,0 10 370,0 22,3 10,6 0,025 10 440,0 0,83 0,025 10 170,0 6,2 0,25 10 27,85 37,25 0,5 2,0 0,1 0,5 0,5 2,0 0,1 0,5 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid Glycine ThiamineHCl PyridoxineHCl 100 100 100 100 Inositol 100,0 Sucrose 30.000,0 Agar 8.000,0 PH 5,8 Table 2: Preparation of modified Gamborg’s B5 medium (E-24medium ) Bottle Component Stock Solution (g/l) Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/ l) KNO3 250 20 2500,0 (NH4)2SO4 13,4 10 134,0 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.H2O 15 10 150,0 MnSO4.H2O 1,0 10 10,0 H3BO3 0,3 3,0 ZnSO4.7H2O 0,2 2,0 KI 0,075 10 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,025 10 0,25 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 FeSO4.7H2O 2,785 Na2EDTA 3,725 37,25 CaCl2.2H2O 15,0 150,0 10 Inositol 27,85 160 mg/100ml Vitamins Nicotinic acid 100 1,0 Thiamine HCL 100 10 10,0 Pyridoxine HCL 100 1,0 Sucrose 8000,0 Agar PH 5,6 - 5,8 Table 3: Môi trường WPM - Woody Plant Medium Muối khoáng Nồng độ (mg/l) Muối khoáng Nồng độ (mg/l) NH4NO3 400 H3BO3 6,2 Ca(NO3)2.4H2O 556 ZnSO4.7H2O 8,6 CaCl2.2H2O 96 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.5H2O 0,25 K2SO4 990 FeSO4.7H2O 27,8 KH2PO4 170 MgSO4.4H2O 22,3 Na2MoO4.2H2O 0,25 Na2EDTA.2 H2O 37,2 Các chất hữu Myo-inositol 100 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxine HCL 0,5 Thiamine HCL 1,0 Glycine 2,0 Agar 6,0 Sucrose 20 pH 5,6 - 5,8