Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây chua me đất hoa vàng (oxalis corniculata l )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘIKHOA Y DƢỢC LÊ THỊ NGUYỆT NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG Oxalis corniculata L.. ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘIKHOA Y DƢỢC LÊ

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

KHOA Y DƢỢC

LÊ THỊ NGUYỆT

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT

VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG

(Oxalis corniculata L.)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC

Hà Nội – 2017

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

KHOA Y DƢỢC

LÊ THỊ NGUYỆT

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT

VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG

(Oxalis corniculata L.)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌCNGÀNH DƢỢC HỌC

Khóa: QH.2012.Y

Người hướng dẫn: 1.TS VŨ ĐỨC LỢI

2.PGS.TS NGUYỄN QUỐC HUY

Hà Nội – 2017

LỜI CẢM ƠN

Để hoàn thành tốt khóa luận này, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành và

lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Quốc Huy, Cục Khoa học công nghệ và Đào tạo, Bộ Y tế; TS.Vũ Đức Lợi, Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu và

Dược cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội; hai người thầy đã tận tâm hướng dẫn, hết lòng chỉ bảo và tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành khoá luận này.

Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến các giảng viên thuộc Bộ môn Dược liệu và Dược cổ truyền, Bộ môn Bào chế và Công nghệ dược phẩm, Bộ môn Hóa dược và Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội; các cán bộ Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình thực hiện khóa luận.

Tôi xin gửi lời tri ân sâu sắc đến tập thể quý thầy cô giáo trong Khoa Y Dược đã hết sức tận tình dạy dỗ, trang bị kiến thức cho tôi trong suốt 5 năm theo học tại trường.

Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Lãnh đạo Khoa Y Dược- Đại học Quốc gia Hà Nội đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu tại trường.

Và cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè đã luôn theo sát động viên, quan tâm và tạo mọi điều kiện giúp tôi có thể hoàn thành khóa luận này.

Một lần nữa tôi xin chân thành cảm ơn những giúp đỡ quý báu đó!

Hà Nội, ngày 10 tháng 06 năm 2017

Sinh viên

Lê Thị Nguyệt

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

vàng

vàng

MỤC LỤC

Trang

MỞ ĐẦU 8

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1

1.1 Tổng quan về chi Oxalis 2

1.1.1 Vị trí phân loại chi Oxalis. 2

1.1.2 Đặc điểm thực vật, phân bố của chi Oxalis. 2

1.1.3 Thành phần hóa học của chi Oxalis. 3

1.2 Tổng quan về loài Oxalis corniculata L 3

1.2.1 Giới thiệu thực vật. 3

1.2.2 Đặc điểm thực vật 4

1.2.3 Phân bố 4

1.2.4 Thành phần hóa học 4

1.2.5 Tác dụng sinh học và độc tính 9

1.2.6 Tác dụng và công dụng theo y học cổ truyền 11

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.1 Đối tượng nghiên cứu 13

2.1.1 Nguyên liệu 13

2.1.2 Hóa chất và trang thiết bị 13

2.2 Nội dung nghiên cứu 14

2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 14

2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 14

2.3 Phương pháp nghiên cứu 14

2.3.1 Xử lí và bảo quản mẫu 14

2.3.2 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 15

2.3.3 Nghiên cứu thành phần hóa học 16

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18

3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật của loài Oxalis corniculata L 18

3.1.1 Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu 18

3.1.2 Đặc điểm vi phẫu thân 20

3.1.3 Đặc điểm vi phẫu lá 21

3.1.4 Đặc điểm bột dược liệu 22

3.2 Nghiên cứu về hóa học 23

3.2.1 Định tính thành phần hóa học trong cây Chua me đất hoa vàng 23

3.2.2 Chiết xuất, phân lập hợp chất và xác định cấu trúc 30

3.3 Bàn luận 33

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

MỞ ĐẦU

Với điều kiện khí hậu nhiệt đới gió mùa thay đổi theo địa hình, đã làmcho nước ta có hệ thực vật vô cùng phong phú và đa dạng Thế giới cây cỏthiên nhiên có muôn vàn bí ẩn với khả năng chữa bệnh diệu kỳ Từ xa xưa,nhân dân ta đã biết sử dụng cây cỏ để chữa bệnh và phòng bệnh, nhưng chủyếu theo kinh nghiệm dân gian tùy vào từng địa phương Phần lớn các câythuốc chưa được nghiên cứu một cách đầy đủ, nhất là về thành phần hóa học

và tác dụng sinh học.Với ưu điểm chứa nhiều loại biệt dược quý và hầu nhưkhông gây tác dụng phụ, nên xu hướng quay trở về với các dược phẩm cónguồn gốc thiên nhiên đang ngày càng phát triển

Chua me đất là một loại cỏ mọc lan bò trên mặt đất, thường gặp ởnhững nơi ẩm ướt Có rất nhiều loại Chua me đất, tuy nhiên loại Chua me đấthoa vàng thường hay gặp nhất, cũng như hay được sử dụng làm thuốc nhất [9,11]

Cây Chua me đất hoa vàng (Oxalis corniculata L.) hay Chua me ba chìa, Tạc tương thảo…thuộc chi Oxalis là một dược liệu quý được sử dụng

nhiều trong Y học cổ truyền [8] Phân bố ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới,mọc hoang ở khắp nơi trong nước ta Ngoài ra, nó còn mọc hoang ở châu Âu

và nhiều nước thuộc châu Á như Ấn Độ, Trung Quốc, Philipin…[9] Cho đếnnay, các công trình nghiên cứu đã công bố về đặc điểm hình thái, thành phầnhóa học cũng như tác dụng sinh học của cây Chua me đất hoa vàng ở ViệtNam còn rất ít Để góp phần cung cấp những cơ sở tiền đề cho việc sử dụng,bảo tồn và phát triển loài Chua me đất hoa vàng làm thuốc ở Việt Nam, đề tài:

“Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây Chua me đất

hoa vàng (Oxalis corniculata L.)” được thực hiện nhằm mục tiêu như sau:

1 Nghiên cứu được các đặc điểm thực vật và xác định được tên khoa học của mẫu cây Chua me đất hoa vàng.

2 Định tính được các nhóm chất có trong cây Chua me đất hoa vàng.

3 Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc một số chất từ cây Chua me đất hoa vàng.

1

CHƯƠNG 1 - TỔNG QUAN

1.1 Tổng quan về chi Oxalis

1.1.1 Vị trí phân loại chi Oxalis

Theo hệ thống phân loại thực vật APG III (2009), vị trí phân loại chi

Oxalis được tóm tắt như sau:

Các loài thuộc chi Oxalis là những cây thảo, sống một năm hay nhiều

năm Thân hình trụ tròn, toàn thân hơi có lông; cũng có một số loài thân tiếnhóa thành củ nằm dưới mặt đất [34] Các thành viên của chi này đều có cuống

lá hình trụ dài; đỉnh mang 3 lá chét mỏng đều nhau, có thể hơn, hình timngược Lá tạo nên hiện tượng "chuyển động ngủ", do đặc điểm khác biệt củachúng là mở ra khi có ánh sáng và khép lại khi tối trời Hoa đơn độc hay mọcthành cụm dạng xim hay tán Cụm hoa có cuống dài, mọc ở kẽ lá Hoa nhỏ,màu hoa từ trắng sang hồng, đỏ hoặc vàng, hoặc hoa nhiều màu, gồm 5 lá đàixếp đè lên nhau; 5 tràng hoa xếp đè lên nhau, nhị hoa 10, bộ nhụy gồm 5 ô,mỗi ô có 1 đến nhiều noãn Quả chủ yếu thuộc dạng quả nang: quả thuôn dài,

đỉnh nhọn, vỏ quả mỏng, chứa rất nhiều hạt Các loài thuộc chi Oxalis tái tạo

mỗi năm từ hạt giống Hơn nữa, chúng cũng có thể dễ dàng tái phát triển vàsinh trưởng bởi hệ thống rễ ngầm của chúng [24, 33, 40- 42]

1.1.2.2 Phân bố

Chi Oxalis là chi lớn nhất và đa dạng nhất trong họ Chua me đất, gồm

hơn 900 loài, phân bố ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới thuộc miền nam ChâuPhi cả Madagasca, Brazil, Mexico, Hoa Kỳ, châu Úc, châu Á, châu Âu và

Châu Mỹ…[9, 31] Tại miền nam châu Phi, Oxalis gồm 270 loài, phần lớn

xảy ra ở khu vực Cape Flora [34, 39] Một số ít loài còn thấy ở vùng ôn đới

ấm [9, 42]

Ở Việt Nam hiện nay đã phát hiện có 4 loài thuộc chi Oxalis, bao gồm:

Chua me núi (Oxalis acetosella L.) có hoa màu trắng vân hồng, Chua me đấthoa hồng (Oxalis corymbosa L.), Chua me đất hoa vàng (Oxalis corniculata

L.) và Me đất đỏ (Oxalis deppei L.), trong đó có 3 loài được dùng làm thuốc.

Cây Chua me đất hoa vàng là loài hay gặp nhất ở Việt Nam [9]

Hình 1.1: Hình ảnh hoa của 4 loài thuộc chi Oxalis tại Việt Nam [41].

1.1.3 Thành phần hóa học của chi Oxalis

Thành phần hóa học có trong chi Oxalis chủ yếu là acid oxalic,

carotenoid; acid ascorbic; tanin; alkaloid; steroid; acid phenolic; flavonoid(malvidin-3-O-acetylglucoside-5-O-glucosid, glycosides flavonol, flavan-3-ols, malvidin-3-rutinoside-5-glucosid, flavon và các dẫn xuất flavanon,anthocyanin monomeric; tocopherol; malic; chlorophyl; các acid tartric;protein; 3-heptadecyl-5-methoxy-phenol; phylloquinon [9, 14, 17, 22, 23,

26, 32, 35, 36] Ngoài ra, chi Oxalis còn chứa: Ca, Mg, Na, acid caffeic, dẫn

xuất của acid vanillic và cinnamic, 2-heptanal, 2-pentylfuran, 3,7,11,15- tetramethyl-2-hexadecenol [19, 29 36]

t-phytol-1.2 Tổng quan về loài Oxalis corniculata L.

1.2.1 Giới thiệu thực vật

Tên khoa học: Oxalis corniculata L [11].

3

Tên nước ngoài: Yellow oxalis, Indian sorrel, Procumbent oxalis [11].

Tên tiếng việt: Chua me đất hoa vàng, Chua me ba chìa, Tạc tương thảo [9, 11]

Họ Chua me đất (Oxalidaceae) [9]

1.2.2 Đặc điểm thực vật

Chua me đất hoa vàng (Tạc tương thảo, Chua me ba chìa) là loại cỏmọc lan bò trên mặt đất Thân mảnh hình trụ tròn, dài 10-35 cm, màu xanhhoặc đỏ nhạt, đa nhánh, có lông trắng mịn Lá mọc cách, kép chân vịt; cuống

lá hình trụ dài 1-13cm, gầy, hơi có lông, mang ở đỉnh 3 lá chét, mỏng, đềunhau, đáy cuống bè ra tạo thành bẹ ôm thân Mỗi lá chét có một vết hõm trênđầu, tạo thành hình tim ngược Hoa mọc đơn độc hoặc thành tán gồm nhiềuhoa, màu vàng; gồm 5 lá đài hình mũi mác, dài 3-5 mm; 5 tràng hoa thuôn dài6-8 mm; nhị hoa 10, sợi mờ trắng; nhụy có 5 ô chứa nhiều noãn Quả thuôndài, hình nang Hạt hình trứng 1 đầu nhọn, hơi dẹt, màu nâu đỏ, mọc đềuthành hàng Hằng năm, cây non mọc từ hạt xuất hiện vào cuối xuân, sinhtrưởng nhanh trong mùa hè và có thể lụi tàn vào mùa thu, sau khi đã ra hoakết quả Tuy nhiên, đối với những cây mọc muộn vào cuối mùa hè và đầu thu

sẽ không lụi tàn mà tồn tại qua đông [7, 9-11, 40- 42]

Chú thích:

a, Cây chua me đất hoa vàng; b, Cụm hoa; c, Hoa; d, Bộ nhị; e, Bộ nhụy; f, Quả; g, Hạt non; h, Hạt già.

Hình 1.2: Hình vẽ các đặc điểm của cây Chua me đất hoa vàng [41]

1.2.3 Phân bố

Chua me đất hoa vàng phân bố rộng rãi khắp nơi, từ vùng núi xuốngđến trung du, đồng bằng; ưa sống nơi đất ẩm và hơi chịu bóng; có mặt ở hầuhết các nước châu Phi, Hoa Kỳ, Trung Mỹ (quần đảo Cayman) và Bắc Mỹ(Canada), Polynesia thuộc Pháp, châu Á, ở vùng Đông Nam Á, Ấn Độ, TrungQuốc, Philipin và một số nước khác [9, 24, 31, 42]

2006, Raghvendra cùng cộng sự đã phát hiện sự hiện diện của các chất acidpalmitic; một hỗn hợp của oleic, linoleic, linolenic và axit stearic [31] Ngoài

ra, lá cây này còn chứa nhiều lipid trung hòa (1,47%), qua kính hiển vi điện tửcòn cho thấy vỏ tế bào chứa khối ferritin là nguồn sắt ở phôi cây [14]

1.2.4.1 Acid oxalic

Công thức phân tử acid oxalic: H2C2O4 [3]

Công thức cấu tạo dạng đơn giản: HOOC-COOH

Hình1.3: Cấu trúc hóa học của acid oxalic

Danh pháp quốc tế (IUPAC): acid etanedioic

Ở điều kiện thường: tinh thể màu trắng, có tính chất thăng hoa, dễ tantrong nước tạo dung dịch không màu, vị chua, chát [3] Acid oxalic là mộtacid hữu cơ tương đối mạnh (mạnh gấp khoảng 10.000 lần so với acid axetic)

5

Dung dịch acid làm đổi màu chất chỉ thị và phản ứng được với các chất:base, oxid base, kim loại, muối, phản ứng ester với rượu, bị oxi hóa hoàn toàntrong phản ứng đốt cháy Đặc biệt, acid oxalic có thể kết hợp với ion kimloại tạo muối oxalat [3] Ví dụ:

H2C2O4 + Ca2+ → CaC2O4 (muối calci oxalat)

Các muối oxalat đều độc, có thể gây bỏng ở miệng, họng và dạ dày,nôn ra máu, đau đầu, chuột rút, co giật, hạ huyết áp, suy tim, suy thận, sốc,hôn mê và có thể gây tử vong Liều gây chết trung bình theo đường bụng là10-15 gam [3]

1.2.4.2 Acid ascorbic (Vitamin C)

Công thức phân tử: C6H8O6 [3, 4]

Tên theo IUPAC: 2-oxo-L-threo-hexono-1,4- lactone-2,3-enediol.

Công thức cấu tạo:

Hình 1.4: Cấu trúc hóa học của acid ascorbic

Acid ascorbic: chất kết tinh không màu hoặc hơi vàng, không mùi; dễtan trong nước (300g/lít), ethanol; không tan trong chloroform, eter, benzen;khi tiếp xúc với ánh sáng bị vàng dần Dung dịch nước 5% có pH=3 [2, 5]

Acid ascorbic tính axit tương tự các axit thông thường: bị oxi hóa và bịphân hủy thành CO2 và nước ở 193oC…Acid ascorbic bị oxy hóa cho aciddehydroascorbic; phản ứng oxy hóa khử thuận nghịch, qua đó vitamin C thamgia vào nhiều phản ứng hóa sinh trong cơ thể, như [2, 5]:

 Hydroxyl hóa; amid hóa; giúp dopamin hydroxyl hoá thành nor-

adrenalin; giúp chuyển acid folic thành acid folinic trong tổng hợp carnitin; dễ hấp thu sắt do khử Fe3+ thành Fe2+ ở dạ dày;

 Tham gia xúc tác oxy hóa thuốc qua microsom (cytochromP450) gan; tổng hợp các hocmon steroid, các catecholamin; tổnghợp collagen, proteoglycan và các thành phần hữu cơ khác ở răng,xương, nội mô mao mạch.

- Bảo vệ cấu trúc tế bào: flavonoid có khả năng phân hủy các gốc

tự do như HO-, ROO-…, chống oxy hóa, làm giảm nguy cơ mắc cácbệnh: ung thư, thoái hóa gan, lão hóa…

- Hỗ trợ công dụng của Vitamin C: tham gia vào quá trình hoạt động của enzym oxy hóa - khử

- Kiểm soát hội chứng viêm: dùng để điều trị các bệnh viêm da

dị ứng, nhiễm candida, ban đỏ…

- Tác dụng tốt trên tim mạch, làm giảm tổn thương gan, giải độc gan, chữa trĩ, các bệnh nhãn khoa, tiểu đường, dạ dày…

- Đặc tính kháng sinh: có khả năng phá vỡ cấu trúc chức năng của một số vi sinh vật; từ đó tiêu diệt, kìm hãm sự phát triển của chúng

1.2.4.4 β-caroten

β-caroten thuộc carotenoid [3, 4] là một dạng sắc tố hữu cơ có trongthực vật và một số loài sinh vật quang hợp như: tảo, nấm, vi khuẩn

Công thức phân tử : C40H56 [3]

Công thức cấu tạo:

Hình 1.6: Cấu trúc hóa học của β-caroten

Trong cấu trúc hóa học của β-caroten có 11 liên kết đôi xen kẽ với cácliên kết đơn tạo thành chromophore làm cho β-caroten có màu đỏ cam hoặcvàng, thấy nhiều trong cà rốt, các trái cây có màu vàng và các loại rau màuxanh đậm [3]

 Tính chất:

β-caroten: kết tinh ở dạng tinh thể [3]

Nhiệt độ nóng chảy cao: 130- 2200C

Dễ bị oxi hóa ngoài không khí.

Hòatan trong chất béo, các dung môi không phân cực khác, không tantrong nước [3, 4]

Không hòa tan trong nước, rất nhạy đối với axit và chất oxi hóa, bềnvững với kiềm Do có hệ thống nối đôi liên hợp nên nó dễ bị oxi hóa mất màuhoặc đồng phân hóa, hydro hóa tạo màu khác Các tác nhân ảnh hưởng đến độbền màu: nhiệt độ, ánh sáng, phản ứng oxi hóa trực tiếp, tác dụng của ion kimloại, enzym, nước [4]

β-caroten khi bị oxy hoá tạo hợp chất có mùi thơm như các andehydkhông no hoặc keton đóng vai trò tạo hương thơm cho trà [3, 4]

 β-caroten làm sạch các nguyên tử oxy tự do dư thừa điện tử(hình thành khi da bị phá huỷ bởi tia cực tím) trong da, chống oxyhóa, lão hóa da

1.2.5 Tác dụng sinh học và độc tính

Hầu hết, các thành phần hóa học có mặt trong loài Oxalis corniculata

L đều có hoạt tính sinh học đáng kể Các nhà khoa học đã đi sâu nghiên cứu

và chứng thực được các tác dụng sinh học điển hình:

 Tác dụng chống oxy hóa: Oxalis corniculata L chứa các hoạt

chất như flavonoid, vitamin C, β-caroten …có tác dụng chống oxyhóa, loại bỏ các gốc tự do, thúc đẩy các phản ứng sinh hóa có lợi cho

cơ thể, ngăn ngừa quá trình lão hóa, ung thư [32, 37]

 Tác dụng hoạt huyết, bổ huyết: làm giãn mạch, tan các khối máu

đông, lưu thông máu trong hành kinh, giúp cơ thể hấp thu sắt thông

9

qua xúc tác phản ứng Fe+++ thành Fe++ ở tá tràng nhờ có hàm lượng acid ascorbic cao [2, 5, 31].

 Tác dụng kháng khuẩn: dịch chiết Chua me đất hoa vàng cóhoạt tính kháng lại các chủng vi khuẩn gram dương (ít nhạy với vikhuẩn gram âm), các loại nấm và diệt côn trùng [9, 32] Hoạt tínhkháng khuẩn được đặc trưng bởi hai chất thuộc nhóm flavon: 5-

hydroxy-6,7,8,4‟-tetramethoxyflavon (1) và 6,8dimethoxyflavon (2), đã được sàng lọc chống lại bốn chủng vi

5,7,4‟-trihydroxy-khuẩn gây bệnh trên da: Staph aureus, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli [18, 27, 30, 31].

 Tác dụng làm đẹp da: vitamin C làm đầy lớp biểu bì của da,giúp bổ sung lượng collagen thiếu hụt, kiểm soát lượng nhờn dư ởmức cân bằng, thu nhỏ lỗ chân lông giúp da mịn màng hơn Với liềuvừa đủ, nó sẽ ngăn chặn sự hình thành và làm mờ các hắc sắc tốmelanin hiệu quả, chống tạo tàn nhang, làm trắng da [2, 5]

 Tác dụng an thần: flavonoid giảm lo âu, mệt mỏi, căng thẳng, suy nhược thần kinh [1, 31]

 Tác dụng bảo vệ gan: chống độc, làm giảm các tổn thương trên gan, bảo vệ chức năng gan [1, 31]

 Tác dụng bảo vệ tim mạch: dịch chiết nước Chua me đất hoavàng giúp chống lại isoproterenol (ISO) gây ra nhồi máu cơ tim, từ đóbảo vệ cơ tim tránh hiện tượng thiếu máu cục bộ, cao huyết áp, làmbền thành mạch, giảm nồng độ cholesterol toàn phần máu…[15, 31]

 Tác dụng tốt trên bệnh nhân tiểu đường: do Chua me đất hoavàng có tác dụng cải thiện họat động của các enzym chống oxy hóa,

ổn định hoạt động enzym α-amylase, cũng như giảm nồng độtriglyceride, lipoprotein và cholesterol, glucose huyết thanh và nồng

độ glucose máu [21]

 Tác dụng chống rối loạn tiêu hóa: dịch chiết của Chua me đấthoa vàng với methanol có tác dụng chống tiêu chảy, giúp ổn địnhđường ruột, làm giảm các triệu chứng của viêm loét dạ dày [38]

10

 Tác dụng chống viêm: dùng để điều trị các chứng viêm họng, viêm xương [2, 9].

 Ngoài ra, nó còn có tác dụng làm sáng mắt, lợi tiểu, tốt cho răng miệng…[2, 8, 31]

Do chứa oxalat nên Chua me đất hoa vàng có khả năng gây độc hại ởliều cao cho động vật và người sử dụng Do muối oxalat của nó chủ yếu dướidạng muối kali tan, kết hợp với calci ở huyết thanh hay nước tiểu tại thận đểtạo thành calci oxalat không tan, do đó làm giảm calci máu dẫn tới kích thích

cơ mạnh gây ra co giật, trụy tim mạch; ngăn chặn dòng chảy nước tiểu và gây

ra các cơn đau quặn thận, suy thận cấp, sỏi thận Ngoài ra, các tinh thể nàycũng có thể hình thành trong xương, khớp, mạch máu, phổi và thậm chí cảnão Vì thế, PFAF khuyến cáo rằng: Những người có xu hướng thấp khớp,viêm khớp, bệnh gút, sỏi thận nên thận trọng đặc biệt khi dùng cây này trongchế độ ăn uống [9, 41]

1.2.6 Tác dụng và công dụng theo y học cổ truyền

Dưỡng tâm, an thần: dùng trong các trường hợp lo âu, căng thẳng, suynhược thần kinh, mất ngủ, mệt mỏi [8, 16, 30]

Thanh nhiệt, giải độc: Chua me có tính chất chua (toan), lạnh (hàn),thường được dùng làm thuốc thanh nhiệt, mát máu, loại bỏ các gốc tự do,giảm sự nhiễm độc do cây cà độc dược hoặc thủy ngân, chữa sốt lỵ, viêm gan,viêm ruột, viêm niệu đạo, xích bạch đới, chuột rút, sốt và buồn nôn [8, 23,

31, 41]

Kháng khuẩn: điều trị các bệnh nhiễm khuẩn, nấm, các bệnh về da,kiểm soát côn trùng, chữa rôm sảy ngứa ngáy, mụn nhọt, lở ngứa chảy nướcvàng, chữa khí hư, viêm họng, nhiễm trùng đường tiết niệu…[8, 23, 27, 30,

31, 41]

Làm đẹp da: do có tác dụng kháng khuẩn nên lá Chua me đất được sửdụng để làm mặt nạ dưỡng da, trị mụn [8, 23, 41]; dùng làm trắng da, ngăncản sự hiện diện của những khiếm khuyết trên da như: sạm da, nám da, tànnhang, làm tăng độ đàn hồi và săn chắc cho da, khiến da luôn căng mịn trànđầy sức sống …do có sự hiện diện của vitamin C với hàm lượng cao cùng vớicác hoạt chất có tác dụng chống oxy hóa [2, 5]

Hoạt huyết, bổ huyết: dùng khi thiếu máu, da dẻ xanh xao, điều trị cácchứng hành kinh không đều, đau bụng kinh, bế kinh; các trường hợp do chấnthương mà cơ gân sưng tấy đau đớn [30]

Trên tim mạch, dùng để chữa các bệnh: nhồi máu cơ tim, đau thắt ngực,giúp chống tăng đường huyết, giảm nồng độ cholesterol toàn phần máu, giảmrối loạn lipid máu đồng thời giảm nguy cơ mắc bệnh đái tháo đường [21, 31]

Gần đây hoạt động chống ung thư của nó đã được báo cáo [31]

Lá được dùng để chữa cảm lạnh, sốt, ho, đau dạ dày, cầm máu, trừ giunsán, chữu trĩ, điều trị aphthae, cải thiện thị lực, rắn cắn …[2, 5, 8, 23, 30, 31]

Trong kỹ nghệ, dựa trên tính chất của aicd oxalic khi kết hợp với nhữngion kim loại và kiềm thổ (cấu thành oxalat), người ta dùng nó để xử lý bề mặtkim loại, đánh sạch và mài nhẵn cẩm thạch, tẩy trắng bột giấy, sợi vải, dathuộc, làm thuốc cắn màu trong ngành nhuộm lông len [14]

12

CHƯƠNG 2 - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu

2.1.1 Nguyên liệu

Chua me đất hoa vàng được thu hái (đầy đủ các bộ phận của cây) tại xãCẩm Sơn, huyện Cẩm Xuyên, tĩnh Hà Tĩnh vào tháng 07 năm 2016 Mẫu câytươi thu hái, làm tiêu bản (có đầy đủ bộ phận sinh sản), bảo quản, lưu mẫu tại:Khoa Y Dược, Đại học quốc gia Hà Nội (số hiệu tiêu bản: Vũ Đức Lợi 11);Viện sinh thái và Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm và Khoa học công nghệViệt Nam (số hiệu tiêu bản: Vũ Đức Lợi 11)

2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị

2.1.2.1 Hóa chất

- Hóa chất dùng trong tẩy nhuộm vi phẫu: javen, acid acetic, xanh metylen, glycerin, đỏ son phèn và nước cất

- Các dung môi dùng để chiết xuất và phân lập: ethanol (EtOH), ethyl

acetat (EtOAc), aceton, chloroform, benzen, n-hexan, methanol

0,063- Các hóa chất đạt tiêu chuẩn phân tích

2.1.2.2 Trang thiết bị

- Kính lúp soi nổi, kính hiển vi có gắn camera tại Bộ môn Hóa dược và Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

- Sắc ký cột: sắc ký cột sử dụng silicagel cỡ hạt 0,063-0,200 mm(Merck) và cỡ hạt 0,040- 0,063 mm (Merck) với các loại cột sắc ký cókích cỡ khác nhau

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: NMR được ghi trên máy Bruker Avance500MHz tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ ViệtNam.

- Phổ khối ESI-MS: đo trên máy AGILENT 1260 Series LC-MS ion Trap (Agilent Technologies, Hoa Kỳ)

- Nhiệt độ nóng chảy: đo trên máy SMP10 BioCote, Khoa Y Dược,ĐHQGHN

- Góc quay cực riêng: đo trên máy PLR-4, MRC scientific instruments,Khoa Y Dược, ĐHQGHN

- Dụng cụ thí nghiệm: Pipet, ống nghiệm, bình nón, bình chiết…

2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật

- Mẫu cây Chua me đất hoa vàng sau khi thu hái xử lí sơ bộ, tiến hànhphân tích, mô tả các đặc điểm hình thái đặc trưng của loài, giám địnhtên khoa học

- Nghiên cứu, mô tả đặc điểm bột và vi phẫu thân, lá của cây Chua me đất hoa vàng

2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học

- Định tính các nhóm chất trong cây Chua me đất hoa vàng bằng các phản ứng hóa học

- Chiết xuất và phân lập lập và nhận dạng cấu trúc hợp chất có trong cây Chua me đất hoa vàng

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Xử lí và bảo quản mẫu

Mẫu dược liệu gồm dược liệu tươi và dược liệu đã phơi khô sau khi thuhái Dược liệu được bảo quản như sau:

Mẫu dược liệu cắt làm vi phẫu là mẫu tươi, sau khi có mẫu tiến hànhlàm ngay Trường hợp chưa thể làm kịp thì tiến hành bảo quản mẫu trong hỗnhợp cồn:nước (1:1)

14

Mẫu dược liệu dùng để soi bột được sấy khô, nghiền thành bột, bảoquản trong lọ có nút kín, có ghi nhãn và để nơi khô ráo.

Mẫu dược liệu dùng để định tính, chiết xuất, phân lập, nhận dạng cấutrúc hóa học được sấy ở nhiệt độ <50oC trong tủ sấy, bảo quản trong túi nilông kín, để nơi khô ráo, tránh ánh sáng mặt trời

2.3.2 Nghiên cứu đặc điểm thực vật

- Phân tích hình thái thực vật: mô tả đặc điểm hình thái theo phương pháp mô tả phân tích

- Làm tiêu bản mẫu khô theo phương pháp làm tiêu bản cây khô

- Giám định tên khoa học của mẫu nghiên cứu: đối chiếu đặc điểm mô

tả được với đặc điểm thực vật đã được công bố trong các tài liệu [9, 10, 11,

40] về loài Oxalis corniculata L và một số loài thuộc chi Oxalis.

Nghiên cứu đặc điểm vi học của mẫu nghiên cứu theo tài liệu [10, 13],

cụ thể: mẫu sau thu hái được đem xử lí theo phương pháp thích hợp rồi tiếnhành nghiên cứu

 Đặc điểm vi phẫu

+ Chọn mẫu có kích thước lá và thân thích hợp

+ Cắt mẫu làm tiêu bản: tiêu bản vi phẫu thân được cắt ngang ở đoạnthân thứ 4 tính từ đầu cành Tiêu bản vi phẫu lá được cắt ngang ở vị trí khoảng1/4-1/3 từ dưới gần gốc của lá trưởng thành

+ Xử lý lát cắt: chọn những lát cắt mỏng đem nhuộm và làm tiêu bản

vi phẫu theo quy trình chuẩn [13]

+ Quan sát, mô tả và chụp ảnh: quan sát các đặc điểm vi phẫu, chụpảnh bằng kính hiển vi có gắn camera tại Bộ môn Hóa dược và Kiểm nghiệmthuốc, Khoa Y Dược, Đại học quốc gia Hà Nội

- Mẫu nghiên cứu được sấy khô, nghiền thành bột.

- Quan sát trực tiếp, nếm, gửi, xác định màu, mùi, vị

- Làm tiêu bản bột dược liệu bằng phương pháp giọt ép, quan sát, mô tả

và chụp ảnh những đặc điểm điển hình của bột trên nền kính hiển vi có gắncamera Ảnh các đặc điểm bột được đưa vào máy tính sau đó ghép thành ảnhhoàn chỉnh

2.3.3 Nghiên cứu thành phần hóa học

2.3.3.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ

Chiết xuất lấy dịch chiết bằng các dung môi có độ phân cực khác nhau

(nước, ethanol, n-hexan…), sau đó định sơ bộ một số nhóm chất hữu cơ trong

dược liệu bằng các phản ứng hóa học thích hợp, theo quy trình chuẩn ghitrong tài liệu [1, 12]

2.3.3.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập và nhận dạng cấu trúc

Mẫu cây Chua me đất hoa vàng sau khi đã rửa sạch, phơi khô, thái nhỏđược ngâm chiết kỹ bằng dung môi methanol (3 lần, mỗi lần 3L), sử dụngthiết bị chiết siêu âm ở 40oC trong vòng 3 giờ Dịch chiết thu được lọc quagiấy lọc, gộp dịch lọc và cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được caochiết tổng màu xanh lá cây

Phân tán cao chiết này trong 1,5 lít hỗn hợp MeOH : nước (1/1) rồi

chiết phân bố lần lượt bằng các dung môi n-hexan, dicloromethan, ethyl axetat Các phân đoạn n-hexan, dicloromethan, ethyl acetat được cất loại dung

môi dưới áp suất giảm để thu được từng phân đoạn tương ứng

chất

Để phân tích và phân tách các phần chiết của cây cũng như phân lậpcác hợp chất, các phương pháp sắc ký đã được sử dụng như: sắc ký lớp mỏng(TLC, dùng để khảo sát), sắc ký cột (CC), sắc ký pha đảo

16

Sắc ký lớp mỏng (TLC): được thực hiện trên bản mỏng đế nhômKieselgel 60 F254 (Merck) và bản mỏng pha đảo RP18 F254s (Merck, 0,25mm) Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 366 nmhoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% được phun đều lên bản mỏng,sấy khô rồi hơ nóng trên bếp điện từ từ đến khi hiện màu.

Sắc ký lớp mỏng điều chế (pTLC): được thực hiện trên bản mỏng trángsẵn Silicagel 60G F254 1.0 mm (Merck), phát hiện vệt chất bằng đèn tử ngoại

ở hai bước sóng 254 nm và 366 nm, hoặc cắt rìa bản mỏng để phun thuốc thử

là dung dịch H2SO4 10% hơ nóng để phát hiện chất, ghép lại bản mỏng như

cũ để xác định vùng chất bằng dung môi thích hợp

Sắc ký cột (CC): được tiến hành với chất hấp phụ là silicagel phathường và pha đảo, lựa chọn hệ dung môi có độ phân cực tăng dần Silicagelpha thường có cỡ hạt là 0,063-0,200 mm (Merck) và cỡ hạt 0,040- 0,063 mm(Merck) với các loại cột sắc ký có kích cỡ khác nhau

Sử dụng các loại phổ hiện đại: ESI-MS, NMR; xác định cấu trúc hóahọc của các hợp chất đã phân lập được bằng cách giải phổ thông qua các tínhiệu, thông số:

- Điểm nóng chảy

- Phổ khối ESI-MS

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR)

CHƯƠNG 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật của loài Oxalis corniculata L.

3.1.1 Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu

a.Cụm cây b Mẫu cây tươi c Mẫu tiêu bản cây khô

Hình 3.1: Một số hình ảnh cây Chua me đất hoa vàng

Cây thảo, mọc lan bò trên mặt đất, có lông, sống hàng năm Rễ chínhngắn, thẳng, có nhiều rễ phụ mọc xung quanh Thân hình trụ tròn, nhiều lông,dài 10-50 cm, rộng 0,1-0,3 cm, màu xanh hoặc màu đỏ nhạt, chia nhiều nhánhnhỏ Lá mọc cách, kép chân vịt; cuống lá hình trụ dài 2-14 cm, màu xanh, cólông màu trắng mịn, đáy cuống bè ra tạo thành bẹ ôm thân Đỉnh cuống mang

3 lá chét hình tim ngược, đều nhau; ngọn lá chia 2 thùy bằng nhau, gốc láhình chót buồm nông Mặt trên lá màu xanh lục, mặt dưới lá màu xanh lamvới 5 gân chính, nổi rõ, tỏa đều xuất phát từ đỉnh cuống lá; lông chỉ có ở mặtdưới và bìa phiến Cây không có lá kèm Lá mở ra khi có ánh sáng và khép lạikhi tối trời - hiện tượng chuyển động ngủ của lá Hoa mọc đơn độc hoặc thànhtán gồm 2-4 hoa màu vàng Hoa nhỏ, đều, lưỡng tính; cuống hoa dài 0,5-2 cm,mang 2 bắc hình tam giác nhọn, mọc đối nhau Mỗi hoa có 5 lá đài đều, rời,màu xanh, mặt ngoài có lông, hình mũi mác dài 2-5 mm; 5 cánh hoa, đều, xếp

đè lên nhau, phía trên màu vàng, hình bầu dục, phía dưới màu trắng xanh Nhịhoa xếp thành 2 vòng không đều, vòng ngoài gồm 5 nhị lép đối diện với

18

cánh hoa, vòng trong gồm 5 nhị thụ xen kẽ với cánh hoa; chỉ nhị dạng sợimàu trắng dài 0,15-0,25 cm; bao phấn hình thuôn dài gồm 2 ngăn Nhụy hoa:bầu trên hình trụ đỉnh thuôn, có lông, dài 0,1-0,15 cm, 5 ô, mỗi ô 1 hàng noãn,đính trung trụ; đầu nhụy màu vàng, mỗi đầu chia nhiều tua nhỏ Quả thuôn dàiđỉnh nhọn, nang nứt lưng tung hạt ra xa, vỏ quả mỏng nhăn nheo, màu xanh,

có lông Hạt hình trứng 1 đầu nhọn hơi dẹt dài 1 mm, màu nâu hoặc nâu đỏ,

Hình 3.2: Hình ảnh các đặc điểm chi tiết cây Chua me đất hoa vàng

Chú thích: 1.Thân cây; 2.Lá cây; 3.Mặt trên lá; 4.Mặt dưới lá; 5.Phiến lá;

6.Cụm hoa; 7.Hoa; 8.Tràng hoa; 9.Bộ nhị, nhụy; 10.Nhị hoa;11.Nhụy hoa; 12.Cụm quả; 13.Quả; 14.Hạt

 Qua phân tích các đặc điểm hình thái của loài nghiên cứu; có sự so

sánh, đối chiếu với các tài liệu, nhất là khóa phân loại chi Oxalis trong thực

vật chí Trung Quốc [40] và tham khảo các chuyên gia, mẫu nghiên cứu thu háitại xã Cẩm Sơn, huyện Cẩm Xuyên, tỉnh Hà Tĩnh mang số hiệu: Vũ Đức Lợi

11 được giám định tên khoa học là Oxalis corniculata L., họ Chua me đất

(Oxalidaceae) (Phiếu Giám định ngày 22/12/2016)

3.1.2 Đặc điểm vi phẫu thân

Tiến hành trên mẫu tươi, cắt sao cho mặt cắt ngang thân dược liệu cóhình tròn, tẩy, nhuộm theo phương pháp nhuộm kép, soi dưới kính hiển vithấy các đặc điểm sau:

Biểu bì (1) chứa nhiều tế bào hình đa giác, to nhỏ kích thước khôngđều, vách ngoài và trong dày, tầng cutin mỏng, có nhiều lỗ khí để thông hơi.Ngoài ra, biểu bì của thân còn mang nhiều lông (2) che chở đơn bào Mô mềm

vỏ (3) gồm 4-5 lớp tế bào hình nhiều cạnh xếp sát nhau, kích thước khôngđều, phần lớn lớp tế bào ở giữa to hơn rất nhiều so với các tế bào xung quanh;các tế bào có góc tròn, tại góc tròn có những khoảng gian bào nhỏ Ở giữa trụ

bì và phần vỏ thân có thể có rải rác các bó libe – gỗ (6) với phần gỗ ở phíatrong và phần libe ở phía ngoài; bao ngoài chúng là lớp trụ bì khuyết (5) Nội

bì gồm một hàng tế bào xếp sát nhau thành vòng không tròn đều, vách tế bàonội bì mang khung hóa bần, gọi là đai Caspary Trụ bì (4) gồm 2-3 lớp tế bào

đa giác đã hóa thành mô cứng tạo nên những sợi trụ bì, kích thước tương đốiđều, xếp luân phiên với tế bào nội bì Hệ thống dẫn gồm các bó libe gỗ (7) lớnnhỏ không đều, rời nhau, tạo thành một vòng tròn Libe cấp một: những lớp tếbào nằm sát trụ bì, không nhìn rõ hình dạng tế bào Libe cấp hai: tế bào đagiác vách uốn lượn xếp thành dãy hay xếp lộn xộn Mạch gỗ cấp một ít hình

đa giác tròn, xếp thành dãy nằm dưới mạch gỗ cấp hai Mạch gỗ cấp hai

(8)hình đa giác tròn, kích thước không đều, phân bố đều trong vùng mô mềm

gỗ Mô mềm gỗ bao quanh mạch, tế bào hình đa giác kích thước không đều

Mô mềm ruột (9) gồm nhiều tế bào hình đa giác, gần như tròn, số lượng lớnhơn rất nhiều so với mô mềm vỏ, kích thước không đồng đều, các góc cókhoảng gian bào nhỏ Hình ảnh vi phẫu thân cây Chua me đất hoa vàng đượctrình bày ở hình 3.3

20