15.31 XÁC ĐỊNH HIỆU LỰC VẮC XIN DẠI THEO PHƯƠNG PHÁP NIH Nguyên lý Thử nghiệm NIH (National Institute of Health - USA ) Tổ chức y tế giới thức cơng nhận để kiểm tra cơng hiệu vắc xin dại bất hoạt Công hiệu vắc xin dại xác định cách so sánh liều hữu hiệu bảo vệ chuột chống lại liều gây chết virus dại với vắc xin dại mẫu chuẩn biết trước công hiệu (IU/ml ) Thử nghiệm tiến hành song song vắc xin (mẫu thử mẫu chuẩn), sau 14 ngày thử thách với liều chủng virus thử thách CVS Nguyên vật liệu Chuột nhắt trắng 4-5 tuần tuổi, trọng lượng 13-16g Vắc xin dại mẫu chuẩn Vắc xin dại mẫu thử Nước muối sinh lý dung dịch đệm PBS pH 7,2-7,4 vô khuẩn Nước vô khuẩn để tiêm Huyết ngựa thường Chủng virus thử thách CVS ( hiệu giá từ 10-6 đến 10-8) Phương pháp tiến hành Pha vắc xin gây miễn dịch Pha vắc xin mẫu chuẩn nước vô khuẩn để tiêm (hoặc PBS) để có độ pha có chứa IU/ml Phân chia vào ống lượng vắc xin đủ dùng cho lần pha tiêm miễn dịch Bảo quản -200C Pha vắc xin thử: Nếu vắc xin đơng khơ phải hồn ngun nước hồi chỉnh nồng độ liều tiêm cho người Dung dịch vắc xin mẫu chuẩn(1 I.U/ml) dung dịch vắc xin mẫu thử hoàn nguyên tiếp tục pha thành độ pha bậc dung dịch nước muối sinh lý (hoặc PBS) Các độ pha chọn cho có ED50 trung bình khơng nằm ngồi độ pha lỗng vắc xin Ví dụ: - Vắc xin mẫu chuẩn I.U pha thành độ pha 1/5, 1/25và 1/125 - Vắc xin thử pha thành độ pha 1/20, 1/100 1/500 Gây miễn dịch: Mỗi độ pha loãng vắc xin gây miễn dịch cho 16 chuột Mỗi chuột tiêm 0,5 ml vào phúc mạc Tiêm mũi vào ngày ngày Nhóm chuột đối chứng gồm 40 ni song song điều kiện với nhóm chuột miễn dịch Chuột đối chứng dùng để chuẩn độ hiệu giá chủng virus thử thách, độ pha loãng tiêm 10 chuột Pha chủng CVS thử thách Nhóm chuột miễn dịch tiêm thử thách với liều khoảng từ 10 đến 100 LD 50 Thường dùng liều thử thách có chứa 25-50 LD50 Ví dụ : sau lần chuẩn độ hiệu giá chủng CVS 10 -6,81 Như để có liều 25 LD 50 phải dùng độ pha đậm đặc 1,4 log tức độ pha 10-5,4 Cách pha cụ thể : Dùng huyết ngựa 2% pha hỗn dịch CVS 20% để có hỗn dịch 10% ( hỗn dịch A) Sau pha tiếp : Độ pha lỗng Ký hiệu 0,3 ml A + 2,7 ml huyết 2% 10-2 B 0,3 ml B + 2,7 ml huyết 2% 10-3 C 0,3 ml C + 2,7 ml huyết 2% 10-4 D ml D + 24 ml huyết 2% 10 -5,4 E Lấy độ pha E tiêm cho tất nhóm chuột miễn dịch, chuột tiêm 0,03 ml vào não Để chuẩn độ hiệu giá chủng CVS thử thách thực tế thử nghiệm, tiếp tục pha loãng bậc 10 từ hỗn dịch E (10 -5,4 ) để có độ pha 10-6,4 , 10-7,4, 10-8,4 Mỗi độ pha chủng CVS tiêm vào não cho 10 chuột, chuột 0,03 ml Theo dõi đọc kết Sau tiêm thử thách, theo dõi nhóm chuột vòng 14 ngày Những chuột liệt chết sau ngày thứ tính vào kết Những chuột có dấu hiệu co giật, liệt, rối loạn vận động coi chết bệnh dại Cần ghi chép kết hàng ngày Đọc kết cuối vào ngày thứ 14 sau tiêm thử thách Tính kết Hiệu giá chủng thử thách CVS tính theo phương pháp Reed- Muench Cơng hiệu (ED50) tính theo chương trình Probit Analysis WHO Tiêu chuẩn chấp thuận: Vắc xin dại phải đạt công hiệu ≥ 2,5 IU/liều ... 10-7,4, 10-8,4 Mỗi độ pha chủng CVS tiêm vào não cho 10 chuột, chuột 0,03 ml Theo dõi đọc kết Sau tiêm thử thách, theo dõi nhóm chuột vòng 14 ngày Những chuột liệt chết sau ngày thứ tính vào... thứ 14 sau tiêm thử thách Tính kết Hiệu giá chủng thử thách CVS tính theo phương pháp Reed- Muench Cơng hiệu (ED50) tính theo chương trình Probit Analysis WHO Tiêu chuẩn chấp thuận: Vắc xin dại