15.30 Xác định hiệu lực vắc xin dại theo phương pháp Habel Nguyên lý Gây miễn dịch cho chuột nhắt trắng với độ pha loãng vắc xin Sau 14 ngày thử thách chủng thử thách CVS với nhiều độ pha loãng khác Nguyên vật liệu Chuột nhắt trắng 4-6 tuần tuổi, trọng lượng 13-16 g Vắc xin dại thử nghiệm Chủng CVS Huyết ngựa thường Nước vô khuẩn để tiêm Nước muối sinh lý Phương pháp tiến hành Pha vắc xin gây miễn dịch Từ ống nghiệm có ml hỗn dịch vắc xin dại lấy ml trộn với 39 ml nước muối sinh lý (đã làm lạnh), lắc để điều kiện lạnh Tiêm miễn dịch cho 60 chuột, chuột 0,25 ml vào phúc mạc Tiêm mũi, mũi cách ngày Song song nuôi lô chuột đối chứng gồm 40 Đến ngày thứ 14 kể từ tiêm miễn dịch mũi tiến hành tiêm thử thách Pha chủng CVS thử thách Hỗn dịch 20% chủng CVS bảo quản nhiệt độ -70OC làm tan nhanh vòi nước chảy Pha lỗng từ 10-1 đến 10-7 dung dịch huyết ngựa 2% (98 ml nước cất lần vô khuẩn + ml huyết ngựa thường bất hoạt 56OC 30 phút) Tiêm vào não chuột 0,03 ml Đối với lô chuột miễn dịch, tiêm độ pha: 10-5, 10-4, 10-3, 10-2, 10-1 Đối với lô chuột đối chứng, tiêm độ pha: 10-7, 10-6, 10-5 Theo dõi tính kết Sau tiêm thử thách, hàng ngày theo dõi lô chuột ghi kết đầy đủ Những chuột chết trước ngày thứ sau ngày thử thách khơng tính kết Những chuột chết, liệt dại sau ngày thứ coi chết bệnh dại Đọc kết cuối vào ngày thứ 14 sau tiêm thử thách Kết tính theo phương pháp Reed-Muench LD50 bảo vệ = LD50 chuột đối chứng - LD50 chuột miễn dịch Trong LD50 chuột đói chứng chuột miễn dịch tính theo cơng thức : 50 - a log LD50 = log A - x k b-a A : Độ pha loãng CVS gây chết chuột sát 50% a: % chuột chết sát 50% b : % chuột chết sát 50% k : log bậc pha lỗng Ví dụ tính kết theo phương pháp Reed- Muench: Lô đối chứng Độ pha CVS Chuột chứng Tổng số tích luỹ Sống Chết Sống Chết 10-5 10 17 -6 10 10-7 13 50% - 7% 43 LD50 = = - = 0,75 64% - 7% 57 Số %chuột chết 17/17=100 7/11=64 1/14 = LD50 đối chứng = 7- 0,75 = 6,25 Từ đó: Log (50% độ pha loãng cuối cùng) = -6,25 50% độ pha loãng cuối (hiệu giá LD50) = 10 -6.25 Lô chuột miễn dịch Độ pha CVS Chuột miễn dịch Sống Chết 10 -1 -2 10 5 10 -3 10 -4 10 -5 10 Tổng số tích luỹ Sống Chết 20 14 12 20 30 Số % chuột chết 20/24=83,83 14/23=61 9/21=43 2/22=9 50% - 43% LD50 = - = - = 0,39 61% -43% 18 Từ đó: Log (50% độ pha lỗng cuối cùng) = -2,61 50% độ pha loãng cuối = 10-2,61 Vậy: LD50 bảo vệ = 6,25 - 2,61= 3,64 Vắc xin bảo vệ được: 10-3,64 LD50 Tính bằng: 364 LD50 ; Lấy tròn: 400 LD50 bảo vệ Kết luận: Theo tiêu chuẩn LD50 bảo vệ tối thiểu phải 1000, vắc xin đạt yêu cầu hiệu lực ... Chuột miễn dịch Sống Chết 10 -1 -2 10 5 10 -3 10 -4 10 -5 10 Tổng số tích luỹ Sống Chết 20 14 12 20 30 Số % chuột chết 20/24=83,83 14/23=61 9/21=43 2/22=9 50% - 43% LD50 = - = - = 0,39 61%... 3,64 Vắc xin bảo vệ được: 10-3,64 LD50 Tính bằng: 364 LD50 ; Lấy tròn: 400 LD50 bảo vệ Kết luận: Theo tiêu chuẩn LD50 bảo vệ tối thiểu phải 1000, vắc xin đạt yêu cầu hiệu lực