13.3 Phép thử chất hạ áp Thử chất hạ áp phơng pháp sinh học dựa vào tác dụng hạ huyết áp thuốc đem thử mèo đợc gây mê so với hoạt lực thuốc histamin chuẩn Chuẩn bị thí nghiệm Động vật: Mèo khoẻ mạnh, trởng thành, đực (không mang thai), cân nặng từ 1,8 kg trở lên Nớc muối heparin: Dung dịch chứa 50 đơn vị heparin 1ml dung dịch natri clorid 0,9% dùng để chống đông máu Có thể dùng dung dịch chống đông thích hợp thay Dung dịch histamin chuẩn: Dùng histamin dihydroclorid histamin hydrophosphat bảo quản lọ kín, làm khô silicagel trớc cân Hoà tan nớc cất lợng histamin đợc cân xác, sau pha loãng dung dịch natri clorid 0,9% tiệt khuẩn thành dung dịch có nồng độ 0,1 g/ml tính theo histamin base Mẫu thử: Pha theo chuyên luận tơng ứng dung dịch natri clorid 0,9% tiệt khuẩn dung môi thích hợp, đến nồng độ cần thiết Tiến hành Mèo đợc gây mê cloralose loại barbiturat thích hợp nh phenobarbital v.v để trì đợc huyết áp đồng suốt thời gian thí nghiệm Cố định động vật bàn mổ, cần làm nhẹ nhàng cho mèo không bị kích thích Có biện pháp giữ để thân nhiệt mèo không giảm giới hạn sinh lý đèn lò sởi Thông khí quản canun thuỷ tinh Bộc lộ động mạch cảnh, lồng canun có chứa đầy nớc muối heparin (hoặc dung dịch chống đông khác) vào động mạch cảnh Nối canun với huyết áp kế thuỷ ngân thiết bị ghi huyết áp khác đạt yêu cầu độ nhạy Bộc lộ tĩnh mạch đùi, luồn vào kim tiêm đầu tù có chứa nớc muối heparin, buộc cố định lại để tiêm mẫu thử histamin chuẩn Xác định độ nhạy động vật với histamin cách tiêm tĩnh mạch liều ml (0,1g 1,5 ml (0,15 g) dung dịch histamin chuẩn cho kg thể trọng Khoảng cách thời gian lần tiêm phút sau huyết áp trở lại mức bình thờng Bình thờng liều histamin 0,1g/kg thể trọng mèo làm huyết áp hạ khoảng 20 mmHg Lặp lại liều thấp histamin chuẩn (1 ml/ kg) lần Động vật đợc dùng vào thí nghiệm giảm huyết áp định liều ml/ kg với liều 1,5 ml/ kg phải có độ hạ áp lớn Sau đạt yêu cầu thử độ nhạy với histamin, tiêm tĩnh mạch cho kg mèo ml dung dịch histamin chuẩn Tiếp theo tiêm liều liªn tơc cđa mÉu thư theo chØ dÉn cđa tõng chuyên luận cuối lại tiêm dung dịch histamin chuẩn với liều ml/ kg Thời gian lần tiêm định nh nêu Nhắc lại chuỗi tiêm nh lần kÕt thóc b»ng 1,5 ml dung dÞch histamin chn cho kg mèo Đánh giá kết a Nếu độ hạ áp dung dịch histamin chuẩn liều 1,5 ml/ kg không lớn liều ml/ kg thí nghiệm giá trị b Chế phẩm đạt yêu cầu thử chất hạ áp đạt điều kiện sau: Giá trị trung bình độ hạ áp tiêm mẫu thử không lớn giá trị trung bình độ hạ áp tiêm dung dịch histamin chuẩn liều ml/ kg thể trọng mèo Mức hạ áp lần tiêm mẫu thử không cao mức hạ áp dung dÞch histamin chn liỊu kÕt thóc 1,5 ml/kg c ChÕ phẩm không đạt yêu cầu điều kiện không đạt Chú ý: Động vật không đợc dùng để thử tác dụng hạ áp trình thử, có lần mẫu thử gây hạ áp lớn mức hạ áp liều kết thúc 1,5 ml dung dÞch histamin chn cho kg mÌo, giá trị hạ áp dung dịch histamin chuẩn liều kết thúc 1,5 ml/ kg nhỏ giá trị trung bình liều ml/ kg tiêm trớc