13.1 PhÐp thư histamin Dïng cht lang nỈng 250 - 350 g Để chuột nhịn đói 24 giờ, cho ng níc theo nhu cÇu cđa cht GiÕt cht đột ngột phơng pháp thích hợp Mổ bụng chuột, dùng kẹp, kẹp vào manh tràng, nâng lên kéo phÝa tríc, sÏ thÊy håi trµng nèi vµo manh tràng Cắt lấy đoạn hồi tràng dài khoảng cm, cho vào khay đựng dung dịch B (nếu làm chậm phải sục khí carbogen) Loại bỏ chất đoạn ruột cách dùng pipet có dung dịch B lồng vào đầu đoạn ruột dung dịch B pipet chảy tự nhiên qua đoạn ruột Cần để pipet t nghiêng cho mặt thoáng dung dịch B không cao cm so với đoạn ruột khay Thay dung dịch B vào khay Buộc vào đầu đoạn ruột sợi mảnh rạch đờng ngang nhỏ đoạn ruột Cho đoạn ruột vào bình nuôi quan cô lập có dung tích 10 - 20 ml, chứa dung dịch B, giữ nhiệt độ định 34 - 36 oC Sục hỗn hợp khí có 95 thể tích oxygen thể tích carbon dioxyd qua bình nuôi Một đầu sợi buộc vào gần đáy bình nuôi, đầu nối với đầu ghi kimograph thiết bị thích hợp ®Ĩ ghi sù co bãp cđa rt NÕu dïng bót ghi giấy điều chỉnh cho biên độ khuếch đại lên khoảng 20 lần Sức căng ruột nên vào khoảng 9,8 mN điều chỉnh theo độ nhạy ruột Thay dung dịch B bình nuôi quan Để yên 10 phút Tiếp tục thay dung dịch B - lần nh Thêm vào bình nuôi quan, xác khoảng 0,2 - 0,5 ml dung dÞch histamin dihydroclorid cã nång độ định để gây nên đáp ứng gần tối đa lặp lại đợc Liều gọi liều "cao" Thay dung dịch B bình nuôi lần trớc lần thêm histamin Nên thêm histamin vào khoảng thời gian cách để ruột giãn hoàn toàn lần thêm (khoảng phút) Tơng tự, thêm thể tích dung dịch có nồng độ histamin thấp đáp ứng có biên độ khoảng nửa biên độ liều "cao" lặp lại đợc Liều gọi liều "thấp" Tiếp tục thêm đặn liều "cao" liều "thấp" histamin nh nêu xen kẽ thêm thể tích dung dịch pha từ mẫu thử Điều chỉnh độ pha loãng dung dịch thử sức co ruột nhỏ h¬n søc co cđa liỊu "cao" KiĨm tra xem søc co dung dịch thử có lặp lại không xem đáp ứng với liều cao liều thấp có nh trớc không Tính hoạt lực chất thử microgam histamin base vào độ pha loãng xác định Lợng histamin xác định đợc không đợc vợt lợng ghi chuyên luận Nếu chất thử không gây co bóp ruột, pha dung dịch khác cho thêm lợng histamin tối đa dung nạp đợc ghi chuyên luận thử với dung dịch Theo dõi xem co dung dịch có tơng ứng với lợng histamin thêm không Nếu dung dịch không gây co tơng ứng co dung dịch thử không lặp lại đợc, sau thử chất thử rồi, thử lại với histamin chuẩn liều "cao" liều "thấp" mà đáp ứng co giảm kết thử giá trị phải thử chất hạ áp thuốc theo chuyên luận "Phép thử chất hạ áp" Dung dịch A: Natri clorid Kali clorid Calci clorid khan 160 g 4,0 g 2,0 g Magnesi clorid khan Dinatri hydrophosphat Níc cÊt pha tiªm 1,0 g 50 mg vừa đủ 1000 ml Dung dịch B: Dung dÞch A 50 ml Atropin sulfat 0,5 mg Natri hydrocarbonat 1,0 g D - glucose 0,5 g Níc cÊt pha tiêm vừa đủ 1000 ml Dung dịch B phải pha trớc dùng phải dùng vòng 24 giê