Nghiên cứu sự hấp thụ thuốc Neomycin sulfate của vật liệu cellulose tạo ra từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy trong môi trường nước vo gạo

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ====== NGUYỄN THU TRANG NGHIÊN CỨU SỰ HẤP THỤ THUỐC NEOMYCIN SULFATE CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS NUÔI CẤY TRONG MÔI TRƯỜNG NƯỚC VO GẠO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động vật HÀ NỘI - 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ====== NGUYỄN THU TRANG NGHIÊN CỨU SỰ HẤP THỤ THUỐC NEOMYCIN SULFATE CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS NUÔI CẤY TRONG MÔI TRƯỜNG NƯỚC VO GẠO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động vật Người hướng dẫn khoa học: TS CAO BÁ CƯỜNG HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Bằng tất tình cảm em xin gửi lời biết ơn đến thầy giáo Cao Bá Cường, người khơng quản khó khăn vất vả nhiệt tình dẫn em suốt q trình hồn thành khóa luận Em muốn gửu lời cám ơn đến thầy khoa Sinh – KTNN nói chung thầy, Viện Nghiên cứu Khoa học Ứng dụng nói riêng tạo điều kiện tốt tận tình dẫn em để em thực hành bước thí nghiệm để hồn thiện khóa luận Vì lần thực nghiên cứu khoa học, tri thức nhiều yếu nên khơng thể khơng gặp phải sai sót Em mong muốn nhận thật nhiều dạy hữu ích từ thầy, bạn để khóa luận tốt nghiệp em chau chuốt tốt Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thu Trang LỜI CAM ĐOAN Tôi xin khẳng định rằng: đề tài dó thân thực giúp đỡ TS Cao Bá Cường Những trích dẫn khóa luận lấy từ cơng bố thức ghi rõ ràng, mạch lạc Các số liệu kết ghi khóa luận xác, khơng giả dối, khơng giống so kết công bố Hà Nội, tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thu Trang DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT VLC Vật liệu cellulose G xylinus Gluconacetobacter HS Hestrin - Schramm MT1 Môi trường (môi trường chuẩn) MT2 Môi trường (môi trường nước dừa) MT3 Môi trường (môi trường nước vo gạo) NS Neomycin sunfate PBS Phosphate buffered saline MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu 3 Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Ý nghiã khoa ho ̣c và ý nghiã thực tiễn Dự kiến kết nghiên cứu NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu tổng quan đối tượng, lĩnh vực nghiên cứu 1.1.1 Cấu trúc vật liệu cellulose (VLC) 1.1.2 Tính chất màng từ VLC 1.1.3 Ứng dụng màng từ VLC 1.2 Vi sinh vật tổng hợp cellulose 1.2.1 Vi khuẩn G xylinus 1.2.2 Đặc điểm hình thái G xylinus 1.2.3 Đặc điểm sinh trưởng G xylinus 1.2.4 Môi trường nuôi cấy G xylinus 1.3 Thuốc Neomycin sunfate 1.3.1 Công thức cấu tạo 1.3.2 Tính chất lý học hóa học 1.3.3 Chỉ định chống định 1.4 Tổng quan tình hình nghiên cứu ngồi nước 10 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 10 1.4.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 11 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Vật liệu nghiên cứu 12 2.2 Phương pháp nghiên cứu 12 2.2.1 Chuẩn bị màng từ VLC 12 2.2.2 Chế tạo màng từ VLC nạp thuốc Neomycin sunfate 16 2.2.3 Phương pháp xử lý thống kê 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 3.1 Thu màng từ VLC tinh chế màng 18 3.1.1 Thu màng từ VLC từ môi trường lên men 18 3.1.2 Tinh chế màng từ VLC 18 3.2 Phương trình đường chuẩn Neomycin sunfate PBS (pH= 7,4) 19 3.3 Xác định lượng thuốc NS nạp vào màng từ VLC 19 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 22 TÀI LIỆU THAM KHẢO 23 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần môi trường lên men thu màng từ VLC Bảng 2.1 Môi trường nuôi cấy G Xylinus 13 Bảng 2.2 Môi trường đệm PBS với pH = 7,4 16 Bảng 3.1 Kết thu màng từ VLC tươi (n = 3) 18 Bảng 3.2 Tỷ lệ hấp thụ thuốc NS vào màng từ VLC lên men môi trường nước vo gạo 20 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo neomycin sunfate Hình 2.1 Quy trình tạo màng từ VLC tinh khiết 14 Hình 3.1 Hình ảnh màng từ VLC sau ni cấy phòng thí nghiệm trung tâm NCKH & CGCN trường ĐHSP Hà Nội 18 Hình 3.2 Phương trình đường chuẩn 19 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ở năm trở lại đây, theo nhiều nghiên cứu người ta có quan tâm đến vấn đề dùng nguyên vật liệu sinh học loại sản phẩm chăm sóc sức khỏe nhờ khả tái tạo, phân hủy sinh học tương thích sinh học chúng Một số có khả đáp ứng ưu điểm dần phổ biến tới cellulose Vật liệu có điểm ưu việt so với polyme tự nhiên tổng hợp khác [12] Vì vậy, màng từ vật liệu cellulose (VLC) đối tượng nhà khoa học nước nước nhiều nghiên cứu ứng dụng khoa học công nghệ khác Đây loại nguyên liệu mới, áp dụng rộng rãi tương đối nhiều lĩnh vực khác Nổi bật lĩnh vực y học, màng từ VLC ứng dụng làm thuốc chống viêm giảm đau, ví dụ bị phong thấp, bị thâm tím, căng bắp thịt, đau thắt lưng cấp thối hố khớp Khơng vậy, sử dụng nhằm chấm dứt đau bụng kinh Tại nước ta, nghiên cứu ứng dụng màng từ VLC đời sống mẻ Cellulose vi khuẩn (CV) tạo từ Gluconacetobacter xylinum có cấu trúc hóa học khơng có nhiều điểm khác biệt cellulose thực vật xét số tính chất hóa lý đặc biệt như: độ bền học, khả thấm hút nước cao, đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, độ polymer hóa lớn, có khả phục hồi độ ẩm ban đầu, Vì vậy, VLC ứng dụng nhiều lĩnh vực như: thực phẩm, công nghiệp dệt, công nghiệp giấy, mỹ phẩm, y học, đáng quan tâm kiểm soát hệ thống vận chuyển thuốc VLC dùng số hệ thống để phân phối thuốc Amin et al báo cáo việc sử dụng màng từ VLC làm màng bọc cho paracetamol cách sử dụng kĩ thuật phun phủ Kết nhận màng từ VLC giúp cho thuốc giải phóng cách liên tục điều giúp hiệu dùng thuốc cao Gần hơn, Huang et al nghiên cứu việc dùng màng từ VLC cho việc kiểm sốt in vitro berberine Ngồi thẩm thấu qua da, thí nghiệm điều khiển khả giải phóng thuốc qua màng từ VLC thử nghiệm mô dày, ruột Những kết nhận thuốc giải phóng không nhanh Neomycin Sulfate chất ưa nước tan nước aminoglycoside kháng sinh canxi kênh protein chất ức chế liên kết với ức chế ribosome prokaryotic dịch, có hiệu cao chống lại Gram dương Vi khuẩn Gram âm (Waksman, 1950; Xue cộng sự, 2010) Nó thường sử dụng để phòng ngừa vi khuẩn ô nhiễm tế bào nuôi cấy để điều trị nhiều nhiễm trùng mắt, da đường tiêu hóa (Zejc & Gorczyca, 2002; Patel, Dave, 2015; Darwhekar, Jain, Choudhary, 2012) Neomycin sulfate ức chế DNase I gây DNA suy thoái (Xue cộng sự, 2010) Nước vo gạo loại chất quen thuộc đời sống người Ngồi nước vo gạo có giá thành rẻ dễ tìm kiếm Do vậy, ta nên dùng nước vo gạo để làm môi trường lên men vi khuẩn quan trọng cho trình nghiên cứu Với mục tiêu nghiên cứu xây dựng hệ thống VLC nạp thuốc thuốc giúp Neomycin sunfate nguyên vẹn môi trường acid, làm hạn chế tác dụng không mong muốn thuốc việc chữa bệnh Vì tơi định lựa chọn đề tài để nghiên cứu: “Nghiên cứu hấp thụ thuốc Neomycin sulfate vật liệu cellulose tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường nước vo gạo” + Khả di chuyển, giữ thăng + Tê ngứa ran da + Co giật cơ, động kinh ( co giật ) + Đi tiểu so với thường ngày hay tiểu khơng + Thèm ngủ, đầu óc hay qn, cảm xúc vui buồn thất thường, hay uống nước, không muốn ăn, buồn nôn + Sưng, khối lượng thể tăng , cảm thấy khó thở + Thở + Đau dày nghiêm trọng, tiểu chảy nước có máu.[7] 1.4 Tổng quan tình hình nghiên cứu ngồi nước 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới VLC sản phẩm tạo từ loài vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus (G xylinus) Vi khuẩn G xylinus thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm hiếu khí bắt buộc, hóa dưỡng thuộc chi Acertobacter, họ Acetobacteraceae Chúng tìm thấy giấm, dịch rượu, nước ép hoa Khi nuôi cấy vi khuẩn môi trường dịch lỏng, chúng hình thành bề mặt lớp màng cellulose khiết gọi màng Bacterial Cellulose Màng từ VLC G xylinus tạo có cấu trúc hóa học đặc tính hoc với cellulose thực vật có thêm số tính chất lý hóa đặc biệt như: độ bền, đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, tính đàn hồi lớn, khả thấm hút nước cao, khả polymer hóa lớn Vì vây, màng từ VLC coi nguồn polymer mới, giải pháp đường tìm nguồn nguyên liệu Trên giới màng Bacterial cellulose ứng dụng nhiều lĩnh vực công nghệ khác Tác giả Brown, 1989, dùng màng từ VLC làm môi trường phân tách cho trình xử lí nước, dùng làm chất mang đặc biệt cho pin lượng cho tế bào Brown (1989), Jonas Farad 10 (1998) dùng màng chất để chất biến đổi độ nhớt sản xuất sợi truyền quang, làm môi trường chất sinh học, thực phẩm hay thay thực phẩm Đặc biệt lĩnh vực y học, màng từ VLC ứng dụng làm da tạm thời thay da trình điều trị bỏng, loét da, làm mạch máu nhân tạo điếu trị bệnh tim mạch, làm mặt nạ dưỡng da cho người 1.4.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam Ở Việt Nam, việc nghiên cứu ứng dụng màng từ VLC mức độ khiêm tốn, nghiên cứu ứng dụng dừng lại bước đầu nghiên cứu Các kết ứng dụng màng từ VLC dừng lại điều kiện thí nghiệm Trong năm gần Phòng thí nghiệm Thực vật - Vi sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội phân lập tuyển chọn G xylinus BHN có khả tạo màng từ VLC nghiên cứu cho thấy màng từ VLC từ chủng G xylinus BHN có khả ứng dụng cho trị bỏng cho thỏ sở để tạo màng trị bỏng cho người Tại Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh, Nguyễn Văn Thanh nhóm nghiên cứu thành cơng với đề tài “Nghiên cứu chế tạo màng cellulose trị bỏng từ Acetobacter xylinum” 11 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu - Neomycin sunfate ( 98%) xuất sứ từ Trung Quốc - Dung môi NaOH 0,1M chất phản ứng khác cung cấp từ Viện Nghiên cứu Khoa học Ứng dụng – Trường ĐHSP Hà Nội - Màng từ VLC lên men từ môi trường nước vo gạo - Buồng cấy vô trùng (Haraeus) - Cân kỹ thuật (Sartorius - TE612) - Cân phân tích (Sartorius - Thụy sỹ) - Khuấy từ gia nhiệt (IKA - Đức) - Máy đo quang phổ UV - 2450 (Shimadzu - Nhật Bản) - Máy lắc tròn tốc độ chậm (Orbital Shakergallenkump - Anh) - Nồi hấp khử trùng HV - 110/HIRAIAMA - Tủ sấy, tủ ấm (Binder - Đức) nhiều dụng cụ hóa sinh thơng dụng khác - Vật liệu làm mơi trường nuôi cấy vi sinh vật tạo màng từ VLC: Đường glucose, Peton, Diamoni photphat, Amoni sunfat, axit citric, NaOH, HCL, … Đạt tiêu chuẩn phân tích 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Chuẩn bị màng từ VLC 2.2.1.1 Tạo màng VLC thô Tạo màng từ VLC từ môi trường HS Q trình lên men thu màng từ VLC thơ thực theo bước sau: [6], [9] Bước 1: Chuẩn bị môi trường theo bảng 2.1 12 Bảng 2.1 Môi trường nuôi cấy G Xylinus Thành phần Khối lượng Nước vo gạo 1000 ml Glucose 20 g KH2PO4 2g (NH4)2SO4 3g Pepton 4g Acid acetic ml 10% dịch giống G xylinus Bước 2: Hấp khử trùng môi trường 113°C 15 phút Bước 3: Lấy môi trường nước vo gạo khử trùng tia cực tím 15 phút để nguội môi trường Bước 4: Bổ sung tối thiểu 10% dịch giống 2% axit acetic, lắc cho giống phân bố dung dịch Bước 5: Dùng gạc vơ trùng bịt miệng bình, ủ tĩnh khoảng – ngày 26°C Bước 6: Thu màng từ VLC thô 2.2.1.2 Tạo màng từ VLC tinh khiết Xử lý màng từ VLC thô để thu màng từ VLC tinh khiết theo quy trình hình 2.1 13 Tách màng từ VLC thô Ép loại nước Ngâm NAOH 3% 48 giờ, rửa ép Ngâm HCL 3% 48 giờ, rửa ép VLC tinh khiết Hình 2.1 Quy trình tạo màng từ VLC tinh khiết 2.2.1.3 Kiểm tra độ tinh khiết màng VLC tinh chế Kiểm tra mức độ tinh khiết màng nhằm để chắn màng từ VLC sau xử lý loại tạp chất Những tạp chất khảo sát glucose, protein vi khuẩn dư lượng pepton môi trường nuôi cấy 2.2.1.4 Xác định tiêu chuẩn màng từ VLC tinh chế sử dụng chế tạo màng nạp thuốc Màng từ VLC tinh chế dùng để tạo màng nạp thuốc neomycin phải đạt tính chất sau: Quan sát ta thấy: mềm mại, dẻo dai, mỏng, có khả áp sát vào da, có tính che phủ tốt có khả cản khuẩn Độ ẩm phù hợp, hút nước dịch mô 14 Để đạt tiêu chuẩn cần khảo sát: Độ dày thích hợp lớp màng từ VLC thơ Độ ẩm thích hợp màng từ VLC sau đạt tiêu chuẩn độ tinh khiết Tất thông số khảo sát đồng thời để xác định thông số thích hợp nhất, Khảo sát khả cản vi khuẩn màng từ VLC tinh chế Khảo sát khả cản khuẩn màng từ VLC so sánh với vải gạc vô trùng Dùng thạch dinh dưỡng môi trường phù hợp cho vi khuẩn nấm mốc phát triển Chia hộp petri chứa môi trường thạch dinh dưỡng tiêu chuẩn (môi trường Soybean - casein) thành lô Chọn màng từ VLC tinh chế ngẫu nhiên từ lơ thí nghiệm khác Dùng loại màng thử nghiệm che phủ bề mặt thạch: Lô 1: sử dụng gạc vô trùng Lô 2: sử dụng màng từ VLC Lô 3: lô đối chứng, khơng phủ màng Sau đó, thạch phủ màng dùng thử nghiệm điều kiện: Thử nghiệm 1: sử dụng 1ml huyền trọc vi khuẩn Streptococcus hemolyticus, E coli trải lên bề mặt loại màng lô giữ tủ ấm 370C 24 Sau màng lấy quan sát lượng vi khuẩn mọc bên màng Thử nghiệm 2: để hở hộp thạch có phủ màng ngồi khơng khí 24 giờ, nơi có nhiều người qua lại, sau nửa số hộp đưa vào tủ ấm 37oC ủ 48 Quan sát kết cách lật màng quan sát phát triển vi khuẩn thạch Một nửa số thạch lại để nhiệt độ phòng ngày để quan sát khả phát triển nấm mốc 15 2.2.2 Chế tạo màng từ VLC nạp thuốc Neomycin sunfate 2.2.2.1 Chuẩn bị đệm Môi trường đệm Phosphate buffered saline (PBS) [7] chuẩn bị với thành phần cách pha trình bày bảng 2.2 Bảng 2.2 Mơi trường đệm PBS với pH = 7,4 Hóa chất Thành phần Khối lượng NaCl 0,8 g KCl 0,2 g Na2HPO4.12H2O 1,44 g Cách pha Cho hóa chất vào cốc đong Thêm đến mức 800 ml nước cất Điều chỉnh pH tới 7,4 HCl Bổ sung nước tới 1000 ml Khử trùng Na2HPO4 0,22 g 2.2.2.2 Xây dựng đường chuẩn NS Sử dụng hệ thống quang phổ tử ngoại UV để ghi mật độ quang hấp thụ thuốc NS Sử dụng màng gạo với độ dày khác 0,3; 0,5 ( cm) Với độ dày khác màng lại hấp thụ 1giờ; 1,5 giờ; Sử dụng dung môi PBS (pH = 7,4) Đo UV bước sóng 277 nm (bước sóng hấp thụ cực đại NS) Ghi kết thu dựng đường chuẩn mẫu 2.2.2.3 Xác định lượng NS nạp vào màng từ VLC Dùng máy đo quang phổ UV – 2450 xác định lượng thuốc có dung dịch sau khoảng thời gian khác nhau, từ xác định lượng thuốc nạp vào màng cách: mht = m1 – m2 (mg) 16 (1) Trong đó: mht: khối lượng thuốc hấp thu vào màng m1: khối lượng thuốc ban đầu dung dịch m2: khối lượng thuốc có dung dịch sau khoảng thời gian định màng hấp thu thuốc Đánh giá hiệu thuốc nạp vào màng tính theo công thức: mht (mg/ cm3 ) EE (%) = x 100% (2) m0 (mg/ cm3 ) Trong đó: EE (%) hiệu nạp thuốc NS màng BC mht (mg/cm3) khối lượng thuốc hấp thụ đơn vị thể tích màng M0 (mg/cm3) khối lượng thuốc có đơn vị thể tích dung dịch ban đầu Mỗi thí nghiệm lặp lại ba lần 2.2.3 Phương pháp xử lý thống kê Phân tích thống kê khác biệt tính chất xác định nhóm thực qua việc sử dụng Excel với phân tích chiều phương sai việc xác định khoảng tin cậy Các kết nghiên cứu trình bày dạng “số trung bình ± SD” Những khác biệt coi có ý nghĩa thống kê giá trị p =< 0,05 Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Sử dụng phần mềm DDsolver để sử lý số liệu, phần mềm Excel giúp xử lý hình ảnh sơ đồ [5] 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thu màng từ VLC tinh chế màng 3.1.1 Thu màng từ VLC từ môi trường lên men Muốn thu màng từ VLC với độ dày 0,3 - 0,5 cm ta tiến hành từ dịch nuôi cấy tĩnh G xylinus sau khoảng 6, ngày ( hình 3.1) Hình 3.1 Hình ảnh màng từ VLC sau ni cấy phòng thí nghiệm trung tâm NCKH & CGCN trường ĐHSP Hà Nội Màng từ VLC thơ tạo với màu trắng ngà, khơng khó để tách khỏi môi trường nuôi cấy, nhiều nước, chất dẻo dai Tiến hành đo kích thước độ dày đường kính loại màng thước kẻ, ta thu kết kích thước màng theo bảng 3.1 Bảng 3.1 Kết thu màng từ VLC tươi (n = 3) Thời gian nuôi Độ dày môi Độ dày màng thu cấy (ngày) trường (ml) (cm) Màng số 200 0,3 ± 0,0006 Màng số 200 0,5 ± 0,0012 Lơ Kí hiệu 3.1.2 Tinh chế màng từ VLC Màng từ VLC thơ chứa khơng vi khuẩn G xylinus mơi trường ni cấy chất chuyển hóa trình lên men Quá trình tinh 18 chế nhằm phân tách tạp chất pepton, đường lại mơi trường ni cấy vi khuẩn nằm màng để thu màng từ VLC tinh chế Hiệu trình tinh chế đánh giá dựa vào phản ứng hóa học xác định có mặt đường, protein quan sát kính hiển vi quang học kính hiển vi điện tử cho thấy khơng có mặt vi khuẩn màng Màng từ VLC tinh chế phải có màu trắng không bị thay đổi màu xử lý nhiệt độ cao 3.2 Phương trình đường chuẩn Neomycin sunfate PBS (pH= 7,4) Đo mật độ quang nồng độ NS khác máy quang phổ UV – 2450 (Shimadzu – Nhật Bản) phòng thí nghiệm Trung tâm NCKH & CGCN trường ĐHSP Hà Nội 2, sau xử lý phần mềm Excel cho kết phương trình đường chuẩn NS (hình 3.2): y =0,1574x – 0,0027 R2 = 0,9995 Nồng độ thuốc neomycin sulfate (mg/ml) OD277nm 0.05 y = 0.1574x - 0.0027 R² = 0.9995 0.04 0.03 OD277nm 0.02 Linear (OD277nm) 0.01 0 0.1 0.2 0.3 0.4 Mật độ hấp thụ OD 277nm Hình 3.2 Phương trình đường chuẩn 3.3 Xác định lượng thuốc NS nạp vào màng từ VLC Tỷ lệ hấp thụ NS vào màng từ VLC tính theo cơng thức (3) kết trình bày vào bảng 3.3 19 Bảng 3.2 Tỷ lệ hấp thụ thuốc NS vào màng từ VLC lên men môi trường nước vo gạo Thời Thông số gian màng nuôi cấy Thời Độ dày gian màng hấp (cm) thụ (ngày) 0,2831 d: 9,5cm S: 70,846cm2 mht (mg/cm3) EE (%) (giờ) h: 0,5cm V: 35,423cm3 m2 (mg) 6 ± 0,0010 0.2495 1,5 0,3 ± 0,0009 0,2476 ± 0,0006 0,2457 0,5 ± 0,0008 0,2537 1,5 ± 0,00052 0,2522 ± 0,00064 Chú thích: h: Chiều dày màng d: đường kính màng 20 1,7169 85,84 ± 0,0010 ± 0,0485 1,7505 87.53 ± 0,0009 ± 0,0451 1,7524 87,62 ± 0,0010 ± 0,03 1,7543 87,72 ± 0,0008 ± 0,0412 1,7463 87,31 ± 0,0005 ± 0,0261 1,7478 87,39 ± 0,00064 ± 0,031 S: diện tích màng V: thể tích màng Kết cho thấy màng lên men từ mơi trường có cao nấm men có tỷ lệ hấp thụ thuốc cao loại màng lên men từ môi trường nước dừa nước gạo Kết thấy tương tự nghiên cứu tác giả Diêm Thị Thùy Dung [2], Ngơ Thị Dun [3] Bên cạnh đó, ngun cứu Nguyễn Văn Thanh cộng [10] cho thấy cấu trúc mạng VCL lên men từ mơi trường cao nấm men có tỷ lệ đồng cao màng VCL lên men từ môi trường nước dừa môi trường nước gạo Do môi trường cao nấm men có đầy đủ dinh dưỡng thích hợp cho vi khuẩn G xylinus sinh trưởng, nước dừa có nhiều tạp chất khác, mơi trường nước vo gạo thiếu số chất thiết yếu nên vi khuẩn sinh trưởng tạo màng có cấu trúc sợi xellulose vặn xoắn hay vón cục, dẫn đến khả hấp thụ thuốc thấp màng CNM kích cỡ Đối với màng lên men môi trường nước vo gạo có độ dày 0,5cm có tỷ lệ hấp thụ thuốc thấp màng có độ dày 0,3cm tất loại màng Điều giải thích rằng: màng có dày đường thuốc vào màng dài nên khoảng thời gian hấp thụ màng có độ dày 0,3cm hấp thụ thuốc nhanh hơn, đạt tỷ lệ cao 21 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết thu qua nghiên cứu, thu kết sau: - Thu màng từ VLC tinh khiết với độ dày 0,3 cm 0,5 cm thích hợp với thí nghiệm đắp da - Màng từ VLC lên men môi trường nước vo gạo có độ dày 0.3cm có khả hấp thụ thuốc tốt Kiến nghị Mở rộng nghiên cứu tiềm màng từ VLC lĩnh vực hấp thụ thuốc qua da số loại dược phẩm khác 22 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Bộ Y tế (2009), “Dược Điển Việt Nam IV”, NXB Hà Nội 2009 [2] Bộ Y tế (2013), “Danh mục thuốc tân dược thiết yếu lần thứ VI”, pp.18 [3] Phan Thị Thu Hồng cộng (2015),“Sử dụng cellulose tổng hợp vi khuẩn Acetobacter xylinum để chế tạo vật liệu nhựa composite sinh học nhựa polyvinyl alcohol”, Tạp chí phát triển KH&CN, 18 (4): 114-124 [4] Nguyễn Thuý Hương, Trần Thị Tường An (2008), “ Thu nhận Bacteriocin phương pháp lên men tế bào Lactococcus lactic cố định chất mang Cellulose vi kuẩn (BC) ứng dụng bảo quản thịt tươi sơ chế tối thiểu, tạp chí Scien & Technology Development, 11 (9) [5] Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh “Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng” Tạp chí Dược học số 361/2006, trang 18-20 [6] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Trần Như Quỳnh (2012), “Nghiên cứu vi khuẩn A xylinum tạo màng Bacteril Cellulose ứng dụng điều trị bỏng”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, 50 (4), 453-462 [7] Đinh Thị Kim Nhung (1998), “Tối ưu hóa thành phần mơi trường dinh dưỡng cho Acetobacter xylinum phương pháp quy hoạch thực nghiệm” Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 36(1), 10 – 12 [8] Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu chế tạo màng cellulose trị bỏng từ Acetobactor xylinum”, đềtài KH&CN cấp Bộ Y tế [9] Nguyễn Xuân Thành, “Đánh giá hấp thu Famotidine Cellulose tạo từ Acetorbacter Xylinum số mơi trường ni cấy” Tạp chí Khoa học & Công nghệ, 180(04), 199 – 204 23 2.Tài liệu tiếng Anh [10] Anjali et al (2016), “ A study of chitosan nanofibers containing neomycin sulfate for wound healing activity”, 8(11), 128 – 139 [11] A suprriya, J Sundaraseelan, BR Srini Murthy and M Bindu Priya, (2018), “Formulation and Invitro Characterization of Neomycin Loaded Chitosan Nanoparticles”, Acta scientific pharmaceutical sciences [12] Amin M.C.I.M et al (2012), "Bacterial cellulose film coating as drug delivery system: physicochemical, thermal and drug release properties", Journal of Sain Malaysiana, 41, 561-568 [13] Ataklti Abraha, AV Gholap, Abebe Belay, (2016), “Study Selfassociation, Optical Transition Properties and Thermodynamic Properties of Neomycin Sulfate Using UV-Visible Spectroscopy”, Intermational Journal of Biophysics, 6(2), 16-20 [14] Hanif Ullah, He ́lder A Santos, Taous Khan, (2016), “Applications of bacterial cellulose in food, cosmetics and drug delivery” 24 ... muốn thuốc việc chữa bệnh Vì tơi định lựa chọn đề tài để nghiên cứu: Nghiên cứu hấp thụ thuốc Neomycin sulfate vật liệu cellulose tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường nước vo gạo ... VLC Vật liệu cellulose G xylinus Gluconacetobacter HS Hestrin - Schramm MT1 Môi trường (môi trường chuẩn) MT2 Môi trường (môi trường nước dừa) MT3 Môi trường (môi trường nước vo gạo) NS Neomycin. ..TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ====== NGUYỄN THU TRANG NGHIÊN CỨU SỰ HẤP THỤ THUỐC NEOMYCIN SULFATE CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS NUÔI CẤY TRONG