Nghiên cứu khả năng hấp thụ thuốc diclofenac của màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường nước vo gạo

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC2 SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA 2SINH – KTNN KHOA SINH – KTNN NGÔ DIỆU LINH NGÔ DIỆU LINH NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG HẤP THỤ NGHIÊN KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC THUỐCCỨU DICLOFENAC CỦA MÀNG DICLOFENAC CELLULOSE VI CELLULOSECỦA VI MÀNG KHUẨN LÊN MEN LÊN MEN TỪ MÔI TRƯỜNG TỪKHUẨN MƠI TRƯỜNG NƯỚC VO GẠO NƯỚC VO GẠO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI vật HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động vật Người hướng dẫn khoa học TS NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC HÀ NỘI, 2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN NGÔ DIỆU LINH NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC DICLOFENAC CỦA MÀNG CELLULOSE VI KHUẨN LÊN MEN TỪ MƠI TRƯỜNG NƯỚC VO GẠO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học người động vật Người hướng dẫn khoa học TS NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC HÀ NỘI, 2018 LỜI CẢM ƠN Trong thực tế khơng có thành cơng mà khơng gắn liền với hỗ trợ người khác Trong thời gian làm khóa luận tốt nghiệp mình, bước đầu nhiều bỡ ngỡ nên em gặp khơng khó khăn Tuy nhiên giúp đỡ tận tình thầy hướng dẫn nên em hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn tới Ban Giám hiệu Trường ĐHSP Hà Nội 2; thầy, cô khoa Sinh-KTNN; thầy, cô Viện NCKH & ƯD Trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ em hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Đặc biệt, em xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Bích Ngọc người theo sát hướng dẫn em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Do lần vào làm nghiên cứu khoa học, mặt kiến thức em nhiều hạn chế Do vậy, thiếu sót điều khơng thể tránh khỏi, em mong nhận góp ý quý thầy cô bạn sinh viên để đề tài khóa luận tốt nghiệp em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2018 Sinh viên Ngô Diệu Linh LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học TS Nguyễn Thị Bích Ngọc Những số liệu kết khóa luận trung thực, khơng có trùng lặp chép đề tài khác Nếu sai tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Hà Nội, Ngày 18 tháng năm 2018 Sinh viên Ngô Diệu Linh DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT A A l xylinu c l m: e u CVk: t l CMN o o ĐHSP b s : a e KTN c N: t PBS: e NCK H&Ư D: r Nxb: mht: x y l C a o n ấ m y m n e u n m Đại học sư phạm B Kỹ thuật nông nghiệp a c t e r i a l c e Phosphate buffered saline Nghiên cứu Khoa học Ứng dụng Nhà xuất Khối lượng thuốc hấp thụ MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục đích nghiên cứu 3 Phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn Kết nghiên cứu .4 NỘI DUNG Chương Tổng quan tài liệu .5 Tổng quan đối tượng, lĩnh vực nghiên cứu .5 1.1 Tổng quan CVK 1.1.1 Vị trí phân loại Acetobacter xylinum 1.1.2 Đặc điểm A Xylinum 1.1.3 Môi trường nuôi cấy A xylinum 1.1.4 Đặc điểm cấu trúc màng CVK tạo A xylinum .6 1.1.5 Tính chất độc đáo màng CVK .7 1.1.6 Các phương pháp sản màng CVK từ A xylinum 1.1.7 Ứng dụng màng CVK 1.2 Tổng quan Diclofenac 10 1.2.1 Sơ lược thuốc Diclofenac 10 Tổng quan tình hình nghiên cứu nước 11 2.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước: .11 2.2 Tình hình nghiên cứu nước : .12 Chương Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu 13 Đối tượng nghiên cứu 13 2.Vật liệu nghiên cứu .14 2.2 Thiết bị dụng cụ 14 2.2.1 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 14 2.2.2 Dụng cụ sử dụng nghiên cứu 14 Nội dung nghiên cứu 15 Phương pháp nghiên cứu 15 4.2 Phương pháp đánh giá độ tinh khiết màng CVK 17 4.3 Đo bề dày màng CVK .17 4.4 Xây dựng đường chuẩn Diclofenac 17 4.5 Phương pháp xác định lượng thuốc hấp thu vào màng CVK 18 4.6 Phương pháp xử lý thống kê 19 Địa điểm tiến hành nghiên cứu .19 Chương Kết thảo luận 19 3.1 Màng CVk nuôi cấy từ môi trường chuẩn .19 3.2 Phương trình đường chuẩn Diclofenac 23 3.3 Khối lượng Diclofenac hấp thu vào màng CVk 27 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 Màng CVk nuối cấy môi trường chuẩn sau ngày thu màng có độ dày 0,5cm (hình 3.1) Sau 14 ngày thu màng có độ dày 1cm Tại thời gian khác ta thu màng có độ dày mỏng khác môi trường chứa chất dinh dưỡng vi khuẩn A xylinum tiếp tục phát triển tạo lớp màng dày Dưới số hình ảnh chụp lại trình làm thực nghiệm: Hình 3.1 Màng CVk dày 0,5cm 35 Hình 3.2 Màng CVk nuôi cấy môi trường gạo Hình 3.3 Màng CVk dày 1cm Màng CVk ni cấy từ môi trường gạo sau tinh chế đáp ứng yêu cầu thể chất mềm mại, linh hoạt, dễ gấp mà không cần thêm vật liệu dẻo nào, độ bền kéo độ đàn hồi tốt, không bị khơ để ngồi khơng khí Hình ảnh màng CVk tinh chế trình bày hình 3.4 36 Hình 3.4.Màng CVk tinh chế Để dễ dàng việc nghiên cứu hấp thụ thuốc ta dùng khuôn đục màng thành màng nhỏ có đường kính 1,5cm hình 3.5 đây: 37 Hình 3.5: Màng gạo tinh khiết 0,5cm, d= 1,5cm 3.2 Phương trình đường chuẩn Diclofenac Kết trung bình quang diclofenac bước sóng 278nm trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Bảng nồng độ Diclofenac giá trị OD278 nm (n = 3) Nồn g 0 0 0 độ % % % % %0 OD % 278n m Lần 0 0 1 , , , , , , Lần 0 0 1 , , , , , , Lần 0 0 1 , , , , , , G trị 0 0 1, iá , , , , , tr 0 0 0 u , , , , , , 38 bì n 39 Hình 3.6: Đường chuẩn diclofenac Trong : y giá trị OD tương ứng với nồng độ x X nồng độ %(g/ml) R2: Hệ số tương quan Đo mật độ quang nồng độ Diclofenac khác máy quang phổ UV – 2450 (Shimadzu – Nhật Bản) phòng thí nghiệm Viện NCKH&ƯD trường ĐHSP Hà Nội 2, sau xử lí phần mềm Excel cho kết phương trình đường chuẩn Diclofenac là: y = 0,1932x + 0,1921 ( R2 = 0,9996) Sau đo nồng độ OD ban đầu ta cho màng vào tiến hành hấp thụ rút mẫu để tiến hành đo sau khoảng thời gian 0,5 giờ, giờ, 1,5 giờ, Ta sử dụng lọ thủy tinh nhỏ để rút mẫu hình 3.7 đây: 40 Hình 3.7 Rút mẫu đo 25 Giá trị OD sau lần rút mẫu đo được trình bày bảng 3.2 đây: Bảng 3.2 : Bảng đo giá trị OD sau khoảng thời gian Đ ộ d c c m c m Đ ặ c đ i , M 1, , n 00 g , , u 10 0, M , l 00 o , , M 0, , n 00 g 0, u 10 M 0, , l 00 o , , , , , 00 , , T h i g2 g , ± ,0 , , , , 0 , , , , 0 , , 26 3.3 Khối lượng Diclofenac hấp thu vào màng CVk Từ kết đo mà ta thu được, nhận thấy kết đo sau tối ưu nhất, từ ta tiến hành tính khối lượng thuốc hấp thụ vào màng sau Bảng 3.3 cho thấy khối lượng diclofenac hấp thụ vào màng sau Bảng 3.3: Lượng thuốc hấp thụ vào màng gạo sau m M g M g 0, cm 2 2 2, Bảng 3.3 cho thấy màng ép loại nước 50% loại 0,5cm hấp thụ 22,24±0,0019 nhiều nhất, sau đến màng 0,5cm giữ nguyên hấp thụ 22,21 ± 0,0018 Tiếp theo đền màng ép loại nước 50% 1cm hấp thụ 21,9 ± 0,0022 cuối màng giữ nguyên loại 1cm hấp thụ cụ thể 21,85 ± 0,0017 Màng ép 0,5cm hấp thụ nhiều màng giữ nguyên 0.05mg Màng ép 1cm hấp thụ nhiều màng giữ nguyên 1cm 0,05mg Tiếp theo ta tính hiệu suất hấp thụ thuốc loại màng trình bày bảng Bảng 3.4: Hiệu suất hấp thụ vào màng gạo M n c 8 8 M 27 - 28 Màng ép loại nước 50% loại 0,5cm có hiệu suất hấp thụ cao 88,96% sau đến màng giữ nguyên loại 0,5cm Màng ép loại nước 50% có hiệu suất hấp thụ cao màng 0,5 giữ nguyên 0,12% Màng ép loại nước 1cm có hiệu suất hấp thụ cao màng loại 1cm giữ nguyên Màng ép loại nước 1cm có hiệu suất hấp thụ cao màng 1cm giữ nguyên 0,2%.Từ kết ta có nhận xét sau: - Hiệu suất hấp thụ tỉ lệ thuận với khối lượng hấp thụ thuốc - Xét loại màng, có độ dày khác nhau, hấp thụ thuốc thời gian màng có độ dày 0,5cm hấp thu thuốc Diclofenac cao so với màng có độ dày 1cm màng dày đường thuốc vào màng dài khoảng thời gian hấp thu 29 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ - Khả hấp thụ thuốc diclofenac màng CVK lên men từ mơi trường gạo Màng mỏng khả hấp thụ thuốc cao Màng ép loại bớt nước hấp thụ nhiều thuốc màng chưa ép Cụ thể: màng 0,5cm ép nước 50% hấp thụ nhiều thuốc sau đến màng 0,5cm giữ nguyên Tiếp theo đến màng 1cm ép loại nước 50% cuối màng 1cm giữ nguyên - Định hướng sử dụng thuốc mơi trường thích hợp để tăng hiệu điều trị thuốc 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt 31 [1] Hà Nguyên Phương Anh, Trần Hậu Khang, Nguyễn Duy Hưng (2014), “Đánh giá hiệu Cimetidin phòng tái phát bệnh sùimào gà Bệnh viện Da liễu Trung ương”, Tạp chí Da liễu học Việt Nam, số 16(7/2014), trang - 10 [2].Đặng Thị Hồng “ Phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Acetobacter xylinum chế tạp màng sinh học (CVK)”.Luận án thạc sỹ Sinh học ĐHSP Hà Nội, 2007 [3] Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng”, Tạp chí Dược học số 361/2006, trang 18-20 [4] Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong (2013), Phương pháp nghiên cứu sinh lí học thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội [5] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Trần Như Quỳnh (1996), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum tạo màng Bacterial Cellulose ứng dụng điều trị bỏng”, Tạp chí khoa học công nghệ, 50 (4), trang 453 - 462 [6] Đinh Thị Kim Nhung (1996), “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Acetobacter ứng dụng chúng lên men axetic theophương pháp chìm” Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học [7] Thuốc kháng thụ thể histamin H2 (2012) - Bộ y tế viện kiểm Tài liệu tiếng anh Walker, SR (2012) Xu hướng thay đổi nghiên cứu phát triển thuốc Springer Khoa học & Kinh doanh Truyền thông p 109 32 Ondetti, M ; Rubin, B; Cushman, D (1977) "Thiết kế chất ức chế đặc hiệu enzym chuyển đổi angiotensin: Loại thuốc chống cao huyết áp hoạt động đường uống" Khoa học 196 (4288) Nam, Doo H; Lee, Choon S; Ryu, Dewey DY (1984) "Tổng hợp cải tiến captopril" Tạp chí Khoa học Dược 73 (12) 33 ... phẩm màng CVK từ chủng Acetobacter xylium - Nghiên cứu khả hấp thụ thuốc diclofenac màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường nước vo gạo Phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: khả hấp thụ. .. khả hấp thụ thuốc diclofenac màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường nước vo gạo - Vật liệu nghiên cứu: Màng CVK làm từ môi trường nước vo gạo - Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu thực quy... sinh học CVK vi c điều trị bệnh Đó lý chọn đề tài: Nghiên cứu khả hấp thụ thuốc diclofenac màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường nước vo gạo Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu quy trình