Chương 1: GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết của luận án Cây dừa (Cocos nucifera L.) là một trong những cây lấy dầu quan trọng với tổng diện tích 12 triệu ha được trồng tại 90 quốc gia trên thế giới. Dừa được ghi nhận là loại cây cung cấp nguồn thực phẩm (chủ yếu là chất béo), nguyên liệu cho công nghiệp chế biến hàng tiêu dùng, xuất khẩu và là cây trồng có ý nghĩa về kinh tế, xã hội và sinh thái (Võ Văn Long, 2007). Theo Cao Quốc Hưng (2015) thì dừa là loại cây trồng có tiềm năng kinh tế cao, đặc biệt phù hợp cho các vùng đất nghèo dinh dưỡng ven biển, nhiễm mặn và bị ảnh hưởng bởi bão lụt. Các sản phẩm chính từ dừa được xuất khẩu sang thị trường các nước Châu Âu, Trung Đông, Châu Phi, Bắc Mỹ đã đem lại lợi nhuận cao. Diện tích dừa của Việt Nam năm 2015 khoảng 160 ngàn ha, phân bố chủ yếu ở đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL) với 82,6% diện tích và đã tạo nên giá trị kinh tế đáng kể. Đặc biệt, tại tỉnh Bến Tre, ngành công nghiệp chế biến dừa phát triển nhanh, là ngành kinh tế mũi nhọn và góp phần tạo việc làm cho nhiều lao động, tăng thu nhập cho người nông dân tai địa phương. Tuy nhiên, giá trị kinh tế của cây dừa có nguy cơ bị giảm do các côn trùng gây hại đặc biệt là các loài thuộc bộ Cánh cứng như đuông dừa Rhynchophorus ferrugineus, kiến vương Oryctes rhinoceros, bọ dừa Brontispa longissimi… trong đó có loài Diocalandra frumenti gây thiệt hại đáng kể. Trước đó, D. frumenti còn được ghi nhận gây hại trên cau, dừa nước và nhiều loài cây thuộc họ cọ dầu khác ở nhiều nơi trên thế giới (CABI, 2009; EPPO, 2012). Theo Nguyễn Thị Thu Cúc (2015), bọ vòi voi hại dừa có tên khoa học là Diocalandra frumenti Fabricius (Coleoptera: Curculionidae). Loài côn trùng này được phát hiện đầu tiên ở tỉnh Kiên Giang vào năm 2012 và nhanh chóng được xác định hiện diện tại nhiều tỉnh thuộc vùng ĐBSCL, Đông Nam Bộ và miền Trung. Sự gây hại của D. frumenti có thể làm trái biến dạng, kích thước nhỏ. Năm 2012, bọ vòi voi được xác định đã gây hại tại 11 tỉnh thành với tỉ lệ vườn bị nhiễm từ 1-5%, nơi bị nhiễm nặng có thể lên đến 80% số trái bị hại (Thanh Sơn, 2012). Qua đó cho thấy, bọ vòi voi D. frumenti có nguy cơ ảnh hưởng nghiêm trọng đến năng suất và chất lượng dừa của người nông dân. Do dừa là loại cây lâu năm nên việc xử lý thuốc hóa học thường gặp rất nhiều khó khăn, gây ô nhiễm môi trường và tổn hại đến sức khỏe con người. Hiện tại, chưa có kết quả nghiên cứu chính thức nào được công bố về việc áp dụng các giải pháp quản lý đối tượng này theo hướng an toàn. Do đó, luận án “Nghiên cứu đặc tính sinh học và biện pháp phòng trừ bọ vòi voi Diocalandra frumenti Fabricius (Coleoptera: Curculionidae) hại dừa tại Đồng bằng sông Cửu Long” được thực hiện nhằm xác định những thông tin liên quan đến D. frumenti, làm cơ sở cho việc xây dựng chiến lược quản lý đối tượng này bằng các giải pháp an toàn. 1.2 Mục tiêu và yêu cầu nghiên cứu - Xác định được khả năng gây hại của bọ vòi voi hại dừa tại 3 tỉnh Bến Tre, Vĩnh Long và Trà Vinh. - Xác định được đặc điểm hình thái, sinh học và gây hại của bọ vòi voi hại cây dừa. - Khảo sát sự đa dạng di truyền của các dòng bọ vòi voi D. frumenti bằng các chỉ thị phân tử ISSR. - Xác định đối tượng nấm ký sinh trong tự nhiên của bọ vòi voi và hiệu quả của một số chế phẩm sinh học (nấm ký sinh, thuốc trừ sâu sinh học...) trên bọ vòi voi hại dừa. - Xây dựng mô hình quản lý bọ vòi voi bằng các giải pháp an toàn, thân thiện với môi trường.
MỤC LỤC Lời cảm tạ i Tóm tắt ii Summary v Lời cam đoan viii Mục lục ix Danh sách bảng xiii Danh sách hình xvi Danh mục từ viết tắt xxi Chương 1: Giới thiệu 1.1 Tính cấp thiết luận án 1.2 Mục tiêu yêu cầu nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa khoa học luận án 1.4 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.4.1 Đối tượng nghiên cứu 1.4.2 Phạm vi nghiên cứu 1.4.3 Những đóng góp luận án Chương 2: Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu dừa 2.1.1 Nguồn gốc phân bố 2.1.2 Đặc tính thực vật 2.1.3 Các yếu tố ngoại cảnh ảnh hưởng đến phát triển dừa 2.1.4 Một số giống dừa phổ biến Việt Nam 2.1.5 Một số dịch hại chủ yếu dừa biện pháp phòng trừ 2.2 Tổng quan bọ vòi voi Diocalandra frumenti (Fabricius, 1801) 11 2.2.1 Phân loại bọ vòi voi D frumenti (Fabricius, 1801) 11 2.2.2 Phân bố ký chủ D frumenti 11 2.2.3 Đặc điểm hình thái, sinh học bọ vòi voi D frumenti 12 2.2.4 Tập quán sinh sống gây hại bọ vòi voi D frumenti 21 ix 2.2.5 Biện pháp quản lý 24 2.3 Ứng dụng công nghệ sinh học phân tử nghiên cứu đa dạng di truyền côn trùng 26 2.3.1 Khái niệm đa dạng di truyền 26 2.3.2 Chỉ thị phân tử dùng nghiên cứu đa dạng di truyền 27 2.3.3 Ứng dụng ISSR COI nghiên cứu đa dạng di truyền côn trùng 29 2.4 Giới thiệu nấm xanh Metarhizium anisopliae ứng dụng nấm xanh để phòng trừ trùng gây hại 31 2.4.1 Giới thiệu nấm xanh M anisopliae 31 2.4.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển nấm xanh M anisopliae 32 2.4.3 Cơ chế tác động khả sử dụng nấm xanh M anisopliae phòng trị trùng gây hại trồng 32 2.4.4 Khả sử dụng nấm xanh M anisopliae phòng trị côn trùng gây hại trồng 33 Chương 3: Phương pháp nghiên cứu 35 3.1 Thời gian địa điểm thực luận án 35 3.1.1 Thời gian thực nội dung 35 3.1.2 Địa điểm thực 35 3.2 Vật liệu và trang thiết bị nghiên cứu 35 3.2.1 Vật liệu nghiên cứu 35 3.2.2 Thiết bị dụng cụ 38 3.2.3 Hóa chất 38 3.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 39 3.3.1 Nội dung 1: Đánh giá trạng gây hại bọ vòi voi tỉnh Bến Tre, tỉnh Vĩnh Long và tỉnh Trà Vinh 39 3.3.2 Nội dung 2: Khảo sát đặc điểm hình thái, sinh học gây hại bọ vòi voi D frumenti phòng thí nghiệm và các vườn dừa tỉnh Bến Tre, tỉnh Vĩnh Long và tỉnh Trà Vinh 41 x 3.3.3 Nội dung 3: Đánh giá đa dạng di truyền dòng bọ vòi voi D frumenti) thị phân tử ISSR 45 3.3.4 Nội dung 4: Thu thập, phân lập, nhân nuôi và đánh giá hiệu nấm ký sinh bọ vòi voi D frumenti 50 3.3.5 Nội dung 5: Xây dựng mơ hình quản lý bọ vòi voi giải pháp an tồn, thân thiện với mơi trường 56 Chương 4: Kết thảo luận 59 4.1 Tình hình gây hại bọ vòi voi D frumenti tỉnh Bến Tre, tỉnh Vĩnh Long và tỉnh Trà Vinh 59 4.1.1 Kết điều tra nông dân nhận biết cách phòng trị bọ vòi voi D frumenti tỉnh Bến Tre, tỉnh Vĩnh Long và tỉnh Trà Vinh 59 4.1.2 Tình hình gây hại bọ vòi voi D fumenti tỉnh Bến Tre, tỉnh Vĩnh Long và tỉnh Trà Vinh theo khảo sát vườn dừa 65 4.2 Đặc điểm hình thái, sinh học gây hại bọ vòi voi D frumenti 75 4.2.1 Đặc điểm hình thái bọ vòi voi D frumenti 75 4.2.2 Đặc điểm sinh học khả gây hại bọ vòi voi D frumenti 82 4.3 Sự đa dạng di truyền mẫu bọ vòi voi D frumenti thu tỉnh ĐBSCL bốn tỉnh thuộc miền Đông Nam Bộ 93 4.3.1 Xếp nhóm dựa kiểu hình bọ vòi voi D frumenti 93 4.3.2 Kết ly trích DNA 94 4.3.3 Khảo sát đa dạng kiểu gen kiểu hình dựa vào trình tự đoạn gen COI 95 4.3.4 Kết khảo sát đa dạng di truyền bọ vòi voi dấu thị phân tử ISSR 97 4.4 Kết thu thập, phân lập, nhân nuôi và đánh giá hiệu nấm ký sinh bọ vòi voi 103 4.4.1 Thu thập, phân lập nhân ni nấm ký sinh bọ vòi voi D frumenti 103 4.4.2 Kết đánh giá hiệu lực chủng nấm xanh M anisopliae thu thập bọ vòi voi D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm 105 xi 4.4.3 Kết đánh giá hiệu lực số chủng nấm xanh M anisopliae thuốc bảo vệ thực vật thành trùng bọ vòi voi D frumenti 107 4.4.4 Kết đánh giá hiệu lực nồng độ nấm xanh M anisopliae thành trùng bọ vòi voi D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm 110 4.4.5 Kết đánh giá hiệu giảm tỉ lệ gây hại nấm xanh M anisopliae số thuốc bảo vệ thực vật thành trùng bọ vòi voi D frumenti điều kiện ngoài đồng 112 4.5 Kết xây dựng mơ hình quản lý bọ vòi voi D frumenti giải pháp an tồn, thân thiện với mơi trường 115 4.5.1 Kết xây dựng mơ hình quản lý bọ vòi voi D frumenti tỉnh Bến Tre 115 4.5.2 Kết xây dựng mơ hình quản lý bọ vòi voi D frumenti tỉnh Trà Vinh 117 Chương 5: Kết luận đề xuất 120 5.1 Kết luận 120 5.2 Đề xuất 121 Tài liệu tham khảo 122 Phụ lục 136 xii DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 Ảnh hưởng chế độ ăn khác thời gian phát triển ấu trùng loài R ferrugineus điều kiện phòng thí nghiệm 16 2.2 Sự phát triển ấu trùng, tỉ lệ hóa nhộng chiều dài Z atratus điều kiện phòng thí nghiệm 18 2.3 Thời gian phát triển chiều dài thể ấu trùng T molitor 25oC 19 3.1 Trình tự mồi ISSR sử dụng phân tích đa dạng di truyền bọ vòi voi D frumenti 37 3.2 Danh sách mẫu bọ vòi voi D frumenti mã hóa theo địa phương và kiểu hình 46 3.3 Thành phần thể tích hóa chất tiến hành cho phản ứng PCR 49 3.4 Thành phần thể tích hóa chất tiến hành cho phản ứng PCR-ISSR 49 3.5 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát hiệu chủng nấm ký sinh bọ vòi voi D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ĐHCT, năm 2015 51 3.6 Các nghiệm thức thí nghiệm đánh giá hiệu lực chủng nấm xanh số thuốc bảo vệ thực vật thành trùng bọ vòi voi điều kiện phòng thí nghiệm ĐHCT, năm 2015 53 3.7 Các nghiệm thức thí nghiệm đánh giá hiệu mật số bào tử nấm xanh thành trùng bọ vòi voi điều kiện phòng thí nghiệm ĐHCT, năm 2015 54 3.8 Thông tin các vườn thực mơ hình và đối chứng tỉnh Bến Tre từ tháng đến tháng 12 năm 2016 56 3.9 Thông tin các vườn thực mô hình và đối chứng tỉnh Trà Vinh từ tháng 01 đến tháng 06 năm 2017 57 4.1 Thông tin ghi nhận biện pháp quản lý dịch hại vườn nông dân huyện tỉnh Bến Tre, tỉnh Vĩnh Long và tỉnh Trà Vinh 64 xiii 4.2 Tỉ lệ gây hại bọ vòi voi D fumenti ba tỉnh Trà Vinh, Vĩnh Long và Bến Tre khảo sát năm 2015 và năm 2017 4.3 Kích thước ấu trùng bọ vòi voi D frumenti ni phòng thí nghiệm Đại học Trà Vinh, 2017 77 4.4 Thời gian pha phát triển bọ vòi voi điều kiện phòng thí nghiệm Đại học Trà Vinh, 2017 83 4.5 Kết phân tích đa hình các phân đoạn DNA khuếch đại từ 10 thị ISSR 40 mẫu bọ vòi voi D frumenti khảo sát 97 4.6 Sự xếp nhóm mẫu bọ vòi voi D frumenti theo khu vực địa lý 99 4.7 Tóm tắt ma trận khoảng cách di truyền 40 mẫu bọ vòi voi D frumenti 101 4.8 Kết thu thập nguồn nấm ký sinh bọ vòi voi D frumenti tỉnh Bến Tre và các nơi khác ĐBCSL, 2015 104 4.9 Độ hữu hiệu chủng nấm xanh M anisopliae nồng độ 108 bào tử/ml thành trùng bọ vòi voi D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ĐHCT, năm 2015 106 4.10 Độ hữu hiệu chủng nấm xanh M anisopliae số thuốc bảo vệ thực vật thành trùng bọ vòi voi D frumenti thời điểm xử lý điều kiện phòng thí nghiệm ĐHCT, năm 2015 108 4.11 Độ hữu hiệu mật số bào tử nấm xanh thành trùng bọ vòi voi D frumenti ngày sau xử lý điều kiện phòng thí nghiệm ĐHCT, năm 2015 111 4.12 Hiệu phòng trị chủng nấm xanh số thuốc bảo vệ thực vật thành trùng bọ vòi voi D frumenti ngày sau xử lý điều kiện ngoài đồng huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre, 2016 113 4.13 Tỉ lệ bọ vòi voi bị nhiễm nấm xanh M anisopliae trở lại nghiệm thức thí nghiệm phun nấm xanh huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre, 2016 xiv 66 114 4.14 Tỉ lệ buồng dừa bị hại vườn mơ hình và vườn đối chứng huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre, 2016 115 4.15 Tỉ lệ trái dừa bị hại vườn mơ hình và vườn đối chứng huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre, 2016 116 4.16 Tỉ lệ buồng dừa bị hại vườn mơ hình và vườn đối chứng huyện Càng Long, tỉnh Trà Vinh, 2017 118 4.17 Tỉ lệ trái dừa bị hại vườn mơ hình và vườn đối chứng huyện Càng Long, tỉnh Trà Vinh, 2017 118 xv DANH SÁCH HÌNH Hình Tên hình Trang 2.1 Một số giống dừa phổ biến Việt Nam: Dừa Ta (A) , dừa Dâu (B), dừa Xiêm (C), dừa Ẻo (D) 2.2 Thành trùng kiến vương hai sừng X gideon Linneus (A), đuông dừa R ferrugineus Oliver (B), bọ dừa B longissima Gestro (C) sâu sừng A phidippus Linnaeus (D) 10 2.3 Trứng (A), ấu trùng (B), nhộng (C) thành trùng (D) D frumenti 13 2.4 Sự khác thành trùng đực thành trùng D frumenti 14 2.5 Đặc điểm hình thái ấu trùng, tiền nhộng nhộng Zophobas atratus 18 2.6 Ấu trùng tuổi đến tuổi 20 T molitor 20 2.7 Triệu chứng gây hại D frumenti bẹ chà Canary (A,B) ấu trùng bên mô 22 2.8 Sự gây hại D frumenti làm chết ký chủ 22 2.9 Triệu chứng gây hại D frumenti trái dừa: tượng chảy nhựa (A,D) vết nứt (B,C,E) 23 2.10 Triệu chứng gây hại D frumenti rễ dừa (A, B) lỗ vũ hóa gốc dừa (C) 18 2.11 Cơ quan sinh bào tử nấm Metarhizium anisopliae: cuống bào tử đính (A), bào tử đính (B) 31 3.1 Thí nghiệm khảo sát trứng (A) ấu trùng bọ vòi voi D frumenti (B) với thức ăn là bẹ dừa Ta 42 3.2 Nhộng bọ vòi voi D frumenti nuôi bẹ dừa Ta phòng thí nghiệm 43 3.3 Thành trùng bọ vòi voi D frumenti nuôi hộp nhựa (A) thành trùng với thức ăn là bẹ dừa Ta (B) 43 3.4 Q trình ni khảo sát đặc điểm hình thái sinh học bọ vòi voi D frumenti: thành trùng ngoài đồng (A), cho đẻ trứng (B), nuôi ấu trùng nhộng (C, D) cho ghép cặp thành trùng sau vũ hóa (E) 44 xvi 3.5 Các kiểu hình mẫu bọ vòi voi: kiểu hình (A), kiểu hình (B), kiểu hình (C) kiểu hình (D) 47 3.6 Sơ đồ minh họa chu trình phản ứng PCR 48 3.7 Bố trí thí nghiệm đánh giá hiệu nấm ký sinh bọ vòi voi D frumenti phòng thí nghiệm 52 3.8 Sơ đồ mơ tả thí nghiệm phân lập, đánh giá hiệu sử dụng nấm ký sinh phòng thí nghiệm và ngoài đồng 55 4.1 Thông tin ghi nhận thời gian phát gây hại bọ vòi voi D frumenti vườn dừa 59 4.2 Thơng tin ghi nhận nông hộ mức độ gây hại bọ vòi voi D frumenti dừa năm 2014 60 4.3 Thông tin ghi nhận nông hộ mức độ gây hại bọ vòi voi D frumenti dừa năm 2015 61 4.4 Thông tin ghi nhận thời điểm gây hại bọ vòi voi D frumenti dừa theo điều tra nông dân năm 2015 62 4.5 Thông tin ghi nhận vị trí gây hại bọ vòi voi D frumenti dừa theo điều tra nông dân năm 2015 62 4.6 Thông tin ghi nhận thiệt hại kinh tế bọ vòi voi D frumenti gây theo điều tra nông dân năm 2015 64 4.7 Tỉ lệ buồng dừa bị hại D frumenti huyện Bình Đại, huyện Giồng Trôm huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre từ 7/2015 đến 6/2016 67 4.8 Trung bình buồng dừa bị hại D frumenti huyện Bình Đại, huyện Giồng Trôm huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre từ 8/2015 đến 6/2016 68 4.9 Tỉ lệ trái dừa bị hại D frumenti huyện Bình Đại, huyện Giồng Trôm huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre từ 7/2015 đến 6/2016 69 4.10 Trung bình số trái dừa bị hại D frumenti huyện Bình Đại, huyện Giồng Trơm huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre từ 8/2015 đến 6/2016 69 4.11 Tỉ lệ buồng dừa bị hại D frumenti huyện Tam Bình, huyện Vũng Liêm và huyện Trà Ơn, tỉnh Vĩnh Long từ 7/2015 đến 6/2016 70 xvii 4.12 Trung bình số buồng dừa bị hại D frumenti huyện Tam Bình, huyện Vũng Liêm và huyện Trà Ôn, tỉnh Vĩnh Long từ 8/2015 đến 6/2016 71 4.13 Tỉ lệ trái bị hại D frumenti huyện Tam Bình, huyện Vũng Liêm và huyện Trà Ơn, tỉnh Vĩnh Long từ 7/2015 đến 6/2016 71 4.14 Trung bình số trái dừa bị hại D frumenti huyện Tam Bình, huyện Vũng Liêm và huyện Trà Ôn, tỉnh Vĩnh Long từ 8/2015 đến 6/2016 72 4.15 Tỉ lệ buồng dừa bị hại D frumenti huyện Cầu Kè, huyện Càng Long huyện Tiểu Cần, tỉnh Trà Vinh từ 7/2015 đến 6/2016 73 4.16 Trung bình số buồng dừa bị hại D frumenti huyện Cầu Kè, huyện Càng Long huyện Tiểu Cần, tỉnh Trà Vinh từ 8/2015 đến 6/2016 73 4.17 Tỉ lệ trái dừa bị hại D frumenti huyện Cầu Kè, huyện Càng Long huyện Tiểu Cần, tỉnh Trà Vinh từ 7/2015 đến 6/2016 4.18 Trung bình số trái dừa bị hại D frumenti huyện Cầu Kè, huyện Càng Long huyện Tiểu Cần, tỉnh Trà Vinh từ 8/2015 đến 6/2016 75 4.19 Trứng bọ vòi voi D frumenti: đẻ (A) nở (B) 76 4.20 Đặc điểm hình thái ấu trùng bọ vòi voi D frumenti từ tuổi đến tuổi 19 78 4.21 Vỏ đầu ấu trùng bọ vời voi D frumenti từ tuổi đến tuổi 18 79 4.22 Ấu trùng bọ vòi voi D frumenti thu ngoài đồng với chiều dài khoảng 10 mm (A) ấu trùng hóa nhộng (B) 80 4.23 Nhộng bọ vòi voi D frumenti hóa nhộng (A) vũ hóa (B) 80 4.24 Thành trùng bọ vòi voi D frumenti: vũ hóa (A, B), phát triển hồn tồn (C), vòi thành trùng đực, (D) gai sinh dục thành trùng đực (E) 81 xviii 74 PHỤ LỤC DỮ LIỆU ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA D frumenti Phụ lục 4.1: Địa điểm thời gian thu mẫu bọ vòi voi D frumenti STT Thời gian thu mẫu Địa điểm thu mẫu (Tỉnh, Quận/Huyện) Huyện Mỏ Cày Nam, tỉnh Bến Tre Quận Ninh Kiều, Thành phố Cần Thơ 24/02/2016 Huyện Châu Thành, tỉnh Hậu Giang Huyện Cần Giuộc, tỉnh Long An 24/02/2016 Huyện Mỹ Tho, tỉnh Tiền Giang Huyện Càng Long, tỉnh Trà Vinh 24/02/2016 Huyện Ngã Năm, tỉnh Sóc Trăng Huyện Trà Ôn , tỉnh Vĩnh Long 31/03/2016 29/03/2016 24/02/2016 29/03/2016 05/03/2016 Huyện Nhơn Trạch, tỉnh Đồng Nai 10 Thị Xã Thuận An, tỉnh Bình Dương 13/04/2016 11 Huyện Bình Chánh, Thành phố Hồ Chí Minh 12 Thành Phố Bà Rịa, tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu 30/03/2016 13/04/2016 05/03/2016 Phụ lục 4.2: Kết đo DNA của mẫu D frumenti máy quang phổ STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Tên mẫu BT1 BT2 BT3 CT1 CT2 CT3 CT4 HG1 HG2 HG3 LA1 LA2 LA3 LA4 TG1 TG2 TG3 TV1 TV2 TV3 µg/ml 240 150,1 61,2 150,9 164,8 11,8 298,3 36,9 33,5 45,2 182,7 33 74,2 5,3 223,6 19,9 17,6 223,4 233,5 166,8 A260/280 1,73 1,81 1,82 1,79 1,8 1,9 1,82 1,88 1,97 1,91 1,79 1,89 1,86 3,11 1,74 1,99 2,06 1,76 1,79 1,81 141 STT 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 Tên mẫu ST1 ST2 ST3 VL1 VL2 VL3 ĐN1 ĐN2 ĐN3 ĐN4 BD1 BD2 BD3 TP1 TP2 TP3 VT1 VT2 VT3 VT4 µg/ml 170,1 177,7 161,8 76,7 228,4 98 57,2 81,1 133,4 17,5 54,1 159,4 62,5 252,4 289,1 91,5 96,7 74,9 58,0 92,6 A260/280 1,81 1,79 1,77 1,82 1,81 1,79 1,76 1,79 1,79 1,72 1,76 1,81 1,82 1,82 1,79 1,75 1,82 1,85 1,86 1,81 Phụ lục 4.3: Phổ điện di sản phẩm PCR-ISSR mẫu D frumenti từ 1-40 ISSR1 ISSR2 ISSR3_A ISSR3_B ISSR4 ISSR5 142 ISSR6 ISSR7 ISSR8 ISSR9 ISSR10 143 PHỤ LỤC CÁC BẢNG THỐNG KÊ (BẢNG ANOVA) Phụ bảng 5.1: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 0.041 0.010 0.5598 Sai số 15 0.275 0.018 Tổng 19 0.316 Phụ bảng 5.2: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 1.004 0.251 7.4881 0.0016 Sai số 15 0.503 0.034 Tổng 19 1.507 Phụ bảng 5.3: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 0.826 0.206 5.6417 0.0056 Sai số 15 0.549 0.037 Tổng 19 1.375 Phụ bảng 5.4: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 0.876 0.219 6.4745 0.0031 Sai số 15 0.507 0.034 Tổng 19 1.383 Phụ bảng 5.5: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm 11 ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 0.761 0.190 7.9175 0.0012 Sai số 15 0.360 0.024 Tổng 19 1.122 144 Phụ bảng 5.6: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm 13 ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 0.813 0.203 13.0331 0.0001 Sai số 15 0.234 0.016 Tổng 19 1.047 Phụ bảng 5.7: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm 15 ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 0.702 0.175 13.485 0.0001 Sai số 15 0.195 0.013 Tổng 19 0.897 Phụ bảng 5.8: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium loại thuốc bảo vệ thực vật thành trùng D frumenti phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 3.229 0.646 81.5004 0.0000 Sai số 18 0.143 0.008 Tổng 23 3.372 Phụ bảng 5.9: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium loại thuốc bảo vệ thực vật thành trùng D frumenti phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 7.685 1.537 41.1498 0.0000 Sai số 18 0.672 0.037 Tổng 23 8.357 Phụ bảng 5.10: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium loại thuốc bảo vệ thực vật thành trùng D frumenti phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 4.609 0.922 26.2255 0.0000 Sai số 18 0.633 0.035 Tổng 23 5.241 145 Phụ bảng 5.11: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium loại thuốc bảo vệ thực vật thành trùng D frumenti phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 3.327 0.665 13.5904 0.0000 Sai số 18 0.881 0.049 Tổng 23 4.208 Phụ bảng 5.12: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium loại thuốc bảo vệ thực vật thành trùng D frumenti phòng thí nghiệm 11 ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 2.371 0.474 12.1143 0.0000 Sai số 18 0.705 0.039 Tổng 23 3.075 Phụ bảng 5.13: Độ hữu hiệu của chủng nấm xanh Metarhizium loại thuốc bảo vệ thực vật thành trùng D frumenti phòng thí nghiệm 15 ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình bình F tính Mức ý động phương phương nghĩa Nghiệm thức 1.571 0.314 4.0512 0.0122 Sai số 18 1.396 0.078 Tổng 23 2.966 Phụ bảng 5.14: Độ hữu hiệu nồng độ của nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 0.076 0.019 2.0117 0.0000 Sai số 12 0.142 0.009 Tổng 15 0.218 Phụ bảng 5.15: Độ hữu hiệu nồng độ của nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 1.964 0.419 33.7372 0.0000 Sai số 12 0.218 0.015 Tổng 15 2.182 146 Phụ bảng 5.16: Độ hữu hiệu nồng độ của nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 2.291 0.573 29.4385 0.0000 Sai số 12 0.292 0.019 Tổng 15 2.583 Phụ bảng 5.17: Độ hữu hiệu nồng độ của nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 7.717 0.429 18.3600 0.0000 Sai số 12 0.351 0.023 Tổng 15 2.068 Phụ bảng 5.18: Độ hữu hiệu nồng độ của nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm thời điểm 11 ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 1.720 0.430 11.7916 0.0002 Sai số 12 0.547 0.036 Tổng 15 2.267 Phụ bảng 5.19: Độ hữu hiệu nồng độ của nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm 13 ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình bình F tính Mức ý động phương phương nghĩa Nghiệm thức 1.400 0.350 11.7789 0.0002 Sai số 12 0.446 0.030 Tổng 15 1.846 Phụ bảng 5.20: Độ hữu hiệu nồng độ của nấm xanh Metarhizium thành trùng D frumenti điều kiện phòng thí nghiệm thời điểm 15 ngày sau nhúng Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình F tính Mức ý động phương bình phương nghĩa Nghiệm thức 1.554 0.389 12.6711 0.0001 Sai số 12 0.460 0.031 Tổng 15 2.014 147 Phụ bảng 5.21: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu trước phun nấm Phương sai 0.0084 Độ lệch chuẩn 0.0919 Giá trị t 0.5225 Độ tự Xác xuất của t 0.6289 Phụ bảng 5.22: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện đồng đợt sau phun nấm Phương sai 0.0036 Độ lệch chuẩn 0.0603 Giá trị t -0.1857 Độ tự Xác xuất của t 0.8617 Phụ bảng 5.23: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện đồng đợt sau phun nấm Phương sai 0.0035 Độ lệch chuẩn 0.0589 Giá trị t 0.0645 Độ tự Xác xuất của t 0.9517 Phụ bảng 5.24: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện đồng đợt sau phun nấm Phương sai 0.0162 Độ lệch chuẩn 0.1275 Giá trị t 0.4173 Độ tự Xác xuất của t 0.0279 Phụ bảng 5.25: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện đồng đợt sau phun nấm Phương sai 0.0062 Độ lệch chuẩn 0.0788 Giá trị t 0.3605 Độ tự Xác xuất của t 0.0367 Phụ bảng 5.26: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 31.4446 Độ lệch chuẩn 5.6075 Giá trị t -4.3156 Độ tự 14 Xác xuất của t 0.0007 148 Phụ bảng 5.27: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 30.8528 Độ lệch chuẩn 5.5545 Giá trị t -5.3110 Độ tự 14 Xác xuất của t 0.0001 Phụ bảng 5.28: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 50.6070 Độ lệch chuẩn 7.1139 Giá trị t -4.8010 Độ tự 14 Xác xuất của t 0.0003 Phụ bảng 5.29: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 34.1549 Độ lệch chuẩn 5.8442 Giá trị t -5.3882 Độ tự 14 Xác xuất của t 0.0001 Phụ bảng 5.30: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện đồng thời điểm trước phun nấm Phương sai 0.0015 Độ lệch chuẩn 0.0382 Giá trị t 0.8910 Độ tự Xác xuất của t 0.4233 Phụ bảng 5.31: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện đồng đợt sau phun nấm Phương sai 0.0004 Độ lệch chuẩn 0.0202 Giá trị t 0.3669 Độ tự Xác xuất của t 0.7323 Phụ bảng 5.32: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện ngồi đồng đợt sau phun nấm Phương sai 0.0008 Độ lệch chuẩn 0.0277 Giá trị t -1.1133 Độ tự Xác xuất của t 0.3280 149 Phụ bảng 5.33: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện đồng đợt sau phun nấm Phương sai 0.0108 Độ lệch chuẩn 0.1039 Giá trị t 0.3869 Độ tự Xác xuất của t 0.0185 Phụ bảng 5.34: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại điều kiện ngồi đồng đợt sau phun nấm Phương sai 0.0019 Độ lệch chuẩn 0.0441 Giá trị t 1.3287 Độ tự Xác xuất của t 0.0247 Phụ bảng 5.35: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 1.9347 Độ lệch chuẩn 1.3909 Giá trị t -2.6266 Độ tự 14 Xác xuất của t 0.0199 Phụ bảng 5.36: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 6.7696 Độ lệch chuẩn 2.6018 Giá trị t -3.1491 Độ tự 14 Xác xuất của t 0.0071 Phụ bảng 5.37: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 15.4149 Độ lệch chuẩn 3.9262 Giá trị t -3.4418 Độ tự 14 Xác xuất của t 0.0040 Phụ bảng 5.38: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Bến Tre thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 12.7186 Độ lệch chuẩn 3.5663 Giá trị t -2.4844 Độ tự 14 Xác xuất của t 0.0262 150 Phụ bảng 5.39: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu trước xử lý Phương sai 71.8618 8.4771 Độ lệch chuẩn -0.0715 Giá trị t 10 Độ tự 0.9444 Phụ bảng 5.40: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 68.6208 Độ lệch chuẩn 8.2838 Giá trị của t -0.0061 Độ tự 10 Xác suất của t 0.9952 Phụ bảng 5.41: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 31.3101 Độ lệch chuẩn 5.5955 Giá trị của t -0.4650 Độ tự 10 Xác suất của t 0.6519 Phụ bảng 5.42: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 47.4029 Độ lệch chuẩn 6.8850 Giá trị của t -0.2952 Độ tự 10 Xác suất của t 0.7738 Phụ bảng 5.43: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 31.0021 Độ lệch chuẩn 5.5680 Giá trị của t -0.7682 Độ tự 10 Xác suất của t 0.4601 Phụ bảng 5.44: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 38.0514 Độ lệch chuẩn 6.1686 Giá trị của t -0.9280 Độ tự 10 Xác suất của t 0.3753 Xác xuất của t 151 Phụ bảng 5.45: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 82.1497 Độ lệch chuẩn 9.0636 Giá trị của t -2.0895 Độ tự 10 Xác suất của t 0.0632 Phụ bảng 5.46: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 76.9192 Độ lệch chuẩn 8.7704 Giá trị của t -2.2911 Độ tự 10 Xác suất của t 0.0449 Phụ bảng 5.47: Tỷ lệ (%) buồng dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 57.9897 Độ lệch chuẩn 7.6151 Giá trị của t -2.4898 Độ tự 10 Xác suất của t 0.0320 Phụ bảng 5.48: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu trước xử lý Phương sai 30.0289 Độ lệch chuẩn 5.4799 Giá trị của t 0.5226 Độ tự 10 Xác suất của t 0.6127 Phụ bảng 5.49: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 29.9709 Độ lệch chuẩn 5.4746 Giá trị của t 0.4163 Độ tự 10 Xác suất của t 0.6860 Phụ bảng 5.50: Tỷ lệ (%) trái dừa bị bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai 8.3399 Độ lệch chuẩn 2.8879 Giá trị của t -0.6456 Độ tự 10 Xác suất của t 0.5330 152 Phụ bảng 5.51: Tỷ lệ (%) trái dừa bị thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai Độ lệch chuẩn Giá trị của t Độ tự Xác suất của t Phụ bảng 5.52: Tỷ lệ (%) trái dừa bị thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai Độ lệch chuẩn Giá trị của t Độ tự Xác suất của t Phụ bảng 5.53: Tỷ lệ (%) trái dừa bị thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai Độ lệch chuẩn Giá trị của t Độ tự Xác suất của t Phụ bảng 5.54: Tỷ lệ (%) trái dừa bị thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai Độ lệch chuẩn Giá trị của t Độ tự Xác suất của t Phụ bảng 5.55: Tỷ lệ (%) trái dừa bị thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai Độ lệch chuẩn Giá trị của t Độ tự Xác suất của t Phụ bảng 5.56: Tỷ lệ (%) trái dừa bị thời điểm ghi nhận số liệu đợt Phương sai Độ lệch chuẩn Giá trị của t Độ tự Xác suất của t bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh 19.6541 4.4333 -0.7901 10 0.4478 bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh 20.8218 4.5631 -1.0043 10 0.3389 bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh 38.0210 6.1661 -1.2483 10 0.2404 bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh 50.6582 7.1175 -2.5284 10 0.0300 bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh 91.7676 9.5795 -2.2197 10 0.0410 bọ vòi voi gây hại mơ hình tỉnh Trà Vinh 60.8633 7.8015 -2.4598 10 0.0337 153 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH THỰC HIỆN Điều tra tình hình gây hại của D frumenti vườn dừa Thu mẫu thành trùng D frumenti đồng Khảo sát đặc điểm hình thái, sinh học của D frumenti phòng thí nghiệm Chuẩn bị chế phẩm nấm xanh M anisopliae phun nấm xanh đồng 154 D frumenti nhiễm nấm xanh M anisopliae thí nghiệm khảo sát phòng thí nghiệm Các phận mang nguồn D frumenti loại trừ khỏi vườn dừa mơ hình Buồng dừa đánh số bẹ dừa nước để thu hút thành trùng D frumenti Khảo sát D frumenti phòng thí nghiệm mơ hình tỉnh Bến Tre 155 ... giải pháp an toàn 1.2 Mục tiêu yêu cầu nghiên cứu - Xác định khả gây hại bọ vòi voi hại dừa tỉnh Bến Tre, Vĩnh Long Trà Vinh - Xác định đặc điểm hình thái, sinh học gây hại bọ vòi voi hại dừa -. .. truyền dòng bọ vòi voi D frumenti thị phân tử ISSR - Xác định đối tượng nấm ký sinh tự nhiên bọ vòi voi hiệu số chế phẩm sinh học (nấm ký sinh, thuốc trừ sâu sinh học ) bọ vòi voi hại dừa - Xây dựng... chứng gây hại bọ vòi voi D frumenti 92 4.34 Bọ vòi voi D frumenti có xu hướng tập trung nhiều dừa nước (A) vết thương ký chủ (B 93 4.35 Bốn kiểu hình bọ vòi voi thu thập tỉnh đồng sông Cửu Long và