Đánh giá hiệu quả của methotrexat trong điều trị chửa ngoài tử cung chưa vỡ tại khoa sản bệnh viện đa khoa tuyên quang

Ưu nhược điểm của dạng thuốc tác dụng kéo dài  Ưu điểm: - Duy trì được nồng độ điều trị trong một khoảng thời gian dài, cho phép cải thiện điều trị các bệnh mạn tính hay có cơn bột ph

BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ HẰNG

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ

BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ HẰNG

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc của mình tới :

GS TS Võ Xuân Minh

TS Nguyễn Thị Thanh Duyên

Là thầy cô đã tận tình chỉ bảo và hết lòng giúp đỡ tôi trong suốt quá trình

thực hiện khóa luận, nhờ đó tôi có thể hoàn thành được khóa luận tốt nghiệp

này

Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành của mình tới các thầy cô giáo bộ môn

Công nghiệp Dược, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Công nghiệp Dược đã tạo

điều kiện thuận lợi giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận này

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô trong ban giám hiệu, phòng đào

tạo cùng toàn thể các thầy cô, cán bộ trường đại học Dược Hà Nội đã luôn quan

tâm, tận tình dạy dỗ tôi trong suốt những năm tháng học tập và nghiên cứu tại

trường

Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn của mình đến gia đình, bạn bè và người

thân đã hỗ trợ và động viên tôi hoàn thành tốt khóa luận này

Hà Nội, tháng 05 năm 2011 Sinh viên

Nguyễn Thị Hằng

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ………1

PHẦN 1: TỔNG QUAN 6

1 1.ĐẠI CƯƠNG VỀ THUỐC TÁC DỤNG KÉO DÀI 6

1.1.1.Khái niệm 6

1.1.2 Ưu nhược điểm của dạng thuốc tác dụng kéo dài 6

1.1.3 Phân loại 7

1.1.4 Cấu tạo của hệ cốt tác dụng kéo dài và cơ chế giải phóng 7

1.1.5 Một số tá dược kéo dài dùng trong thực nghiệm 10

1.1.6 Một số vấn đề đánh giá giải phóng dược chất in vitro của thuốc TDKD 11

1.2 SƠ LƯỢC VỀ TRIMETAZIDIN DIHYDROCLORID 12

1.2.1 Công thức cấu tạo và tính chất lí hóa 12

1.2.2 Dược động học 12

1.2.3 Dược lực học 13

1.2.4 Chỉ định và liều dùng 13

1.2.5 Tác dụng không mong muốn 14

1.2.6 Chống chỉ định và tương tác thuốc 14

1.2.7 Phương pháp định lượng 14

1.2.8 Một số chế phẩm chứa trimetazidin tác dụng kéo dài có trên thị trường 16

1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ THUỐC TÁC DỤNG KÉO DÀI 16

PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 22

2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22

2.1.1 Nguyên liệu và thiết bị nghiên cứu 22

2.1.2 Phương pháp nghiên cứu 23

2.2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 29

2.2.1 Xây dựng đường chuẩn biểu thị tương quan giữa hiệu số mật độ quang và nồng độ dung dịch TRI trong phương pháp đo quang vi sai 29

2.2.2 Xây dựng đường chuẩn biểu thị tương quan giữa diện tích pic và nồng độ dung dịch TRI trong phương pháp định lượng bằng HPLC 30

2.2.3 Khảo sát độ hòa tan trimetazidin từ viên đối chiếu Vastarel MR 35 mg 31

2.2.4 Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình giải phóng dược chất của

viên nén trimetazidin GPKD ở quy mô phòng thí nghiệm 32

2.2.5 Xây dựng công thức và bước đầu xây dựng tiêu chuẩn bào chế viên nén trimetazidin GPKD 41

2.2.6 Khảo sát mô hình động học giải phóng từ viên nén thực nghiệm 45

2.3 BÀN LUẬN 46

2.3.1 Về phương pháp định lượng trimetazidin bằng đo quang vi sai 46

2.3.2 Về khảo sát các yếu tố ảnh hưởng tới giải phóng trimetazidin trong chế phẩm 47

2.3.4 Về mô hình động học giải phóng dược chất của viên TRI GPKD 49

PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 50

3.1 KẾT LUẬN 50

3.2 ĐỀ XUẤT 51

CHÚ GIẢI CÁC CHỮ VIẾT TẮT

CT : Công thức CROS : Croscarmellose DCP : Dicalci phosphat

DĐVN : Dược điển Việt Nam

ĐC : đối chiếu

EP : Dược điển châu Âu

F : Lực dập viên GPKD : Giải phóng kéo dài HCMC : Hydroxypropyl methyl cellulose KLPT : Khối lượng phân tử

MgS : Magnesi stearat TDKD : Tác dụng kéo dài TRI : Trimetazidin dihydroclorid PVP : Polyvinyl pyrrolidon PVP : Polyvinyl pyrolidon K30 SKD : Sinh khả dụng

STT : Số thứ tự USP : Dược điển Mỹ

ĐẶT VẤN ĐỀ

Đau thắt ngực là một bệnh đặc trưng bởi các cơn đau thắt từng cơn ở vùng tim, gây ra do sự mất thăng bằng giữa nhu cầu oxy của cơ tim và sự cung cấp không

đủ oxy của mạch vành Hiện nay trên thế giới cũng như ở Việt Nam, bệnh đau thắt

ngực có xu hướng ngày càng gia tăng Trong các nhóm thuốc điều trị, trimetazidin được coi là thuốc điều trị cơ bản chống các cơn đau thắt ngực ở mọi thể bệnh, do có vai trò bảo vệ trực tiếp tế bào cơ tim khi bị thiếu máu Ngoài ra, trimetazidin còn được chỉ định dùng sau nhồi máu cơ tim cấp và điều trị chứng chóng mặt, ù tai do nguyên nhân hệ mạch, tổn thương mạch máu võng mạc Trimetazidin là thuốc hấp thu tốt qua đường uống (sinh khả dụng khoảng 90 %), có độ an toàn cao nên được chỉ định rộng rãi ở Việt Nam cũng như trên thế giới

Tuy nhiên, trimetazidin đạt nồng độ tối đa rất nhanh (2 giờ sau khi uống) và thời gian bán thải ngắn (t1/2= 4-5 giờ), với các dạng thuốc quy ước thì nồng độ thuốc trong máu trước khi uống liều tiếp theo thường thấp và dao động, thuốc phải uống nhiều lần trong ngày gây khó khăn cho người bệnh

Trong những năm gần đây, dạng thuốc tác dụng kéo dài đã khắc phục được

những nhược điểm trên của trimetazidin, đồng thời làm tăng sinh khả dụng nâng cao hiệu quả điều trị bệnh Trên thế giới đã có nhiều nghiên cứu về dạng thuốc tác

dụng kéo dài của trimetazidin Tuy nhiên, ở Việt Nam các công trình nghiên cứu còn hạn chế, vì vậy chúng tôi thực hiện đề tài:“Nghiên cứu bào chế viên nén Trimetazidin giải phóng kéo dài” với các mục tiêu sau:

1 Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến sự giải phóng dược chất của viên nén trimetazidin 35 mg giải phóng kéo dài trong 12 giờ

2 Bước đầu xây dựng công thức và tiêu chuẩn cơ sở cho viên nén bào chế được

Hình 1: Đồ thị giải phóng dược chất từ dạng thuốc tác dụng kéo dài

Trong đó: Cp là nồng độ thuốc trong máu; MEC là nồng độ tối thiểu có tác

dụng điều trị; MTC là nồng độ tối thiểu gây độc

A: Thuốc quy ước B : Dạng nhắc lại

C: Dạng giải phóng có kiểm soát D: Dạng giải phóng kéo dài

1.1.2 Ưu nhược điểm của dạng thuốc tác dụng kéo dài

 Ưu điểm:

- Duy trì được nồng độ điều trị trong một khoảng thời gian dài, cho phép cải thiện điều trị các bệnh mạn tính hay có cơn bột phát mỗi khi nồng độ dược chất trong máu hạ thấp

- Giảm được số lần dùng thuốc cho người bệnh, đảm bảo được sự tuân thủ của người bệnh theo chế độ điều trị, góp phần nâng cao hiệu quả điều trị của thuốc

- Nâng cao được SKD của thuốc do thuốc được hấp thu đều đặn, triệt để hơn

- Giảm được lượng thuốc dùng cho cả đợt điều trị, giảm chi phí cho bệnh nhân [2], [8]

1.1.4 Cấu tạo của hệ cốt tác dụng kéo dài và cơ chế giải phóng

Có nhiều phương pháp để kiểm soát giải phóng dược chất như: hệ cốt (cốt thân nước, cốt sơ nước ăn mòn, cốt trơ khuếch tán), hệ màng bao, màng bán thấm, hệ hỗn hợp…Trong phạm vi khóa luận này, chúng tôi tập trung vào hệ cốt hòa tan ăn mòn và hệ cốt trơ khuếch tán

1.1.4.1 Hệ cốt hòa tan hoặc ăn mòn

 Nguyên tắc cấu tạo: Dược chất được phân tán trong cốt, cốt sẽ hòa tan hoặc ăn

mòn từ từ trong đường tiêu hóa để kéo dài sự giải phóng dược chất [1]

Hình 2: Mô hình hệ cốt ăn mòn

 Nguyên liệu tạo cốt

Với cốt thân nước, nguyên liệu tạo cốt là những tá dược có phân tử lượng lớn trương nở và hòa tan trong nước: HPMC, alginat, gôm xanthan, gôm adragant…[1]

 Quá trình giải phóng dược chất

Sau khi uống, dược chất trong cốt được giải phóng qua các bước sau:

- Cốt thấm nước và hòa tan lớp dược chất trên bề mặt cốt

- Polyme trương nở tạo thành hàng rào gel kiểm soát quá trình giải phóng dược

chất

- Môi trường hòa tan khuếch tán qua lớp gel thấm vào trong cốt hòa tan dược chất

và cốt

- Dung dịch dược chất khuếch tán qua lớp gel ra môi trường bên ngoài

Như vậy, quá trình giải phóng dược chất của hệ không chỉ phụ thuộc vào sự hòa tan của cốt mà còn phụ thuộc rất nhiều vào sự khuếch tán dược chất từ lớp gel Sự khuếch tán dược chất biểu thị theo phương trình Noyes- Whitney:

)

A h

D dt

Trong đó: D là hệ số khuếch tán dược chất; h là bề dày khuếch tán; A là diện

tích bề mặt tiếp xúc của dược chất với môi trường hòa tan; Cs là nồng độ bão hòa dược chất; C là nồng độ dược chất trong môi trường [2]

 Phương pháp bào chế

Dược chất được trộn với tá dược, xát hạt, dập thành viên nén [2]

 Một số yếu tố ảnh hưởng đến sự giải phóng dược chất:

Sự giải phóng dược chất của cốt thân nước chủ yếu phụ thuộc vào bản chất polyme, tỷ lệ dược chất- tá dược, polyme có độ nhớt càng cao càng làm chậm tốc độ giải phóng thuốc Ngoài ra, do sự hút nước của cốt không phụ thuộc vào độ xốp của cốt mà phụ thuộc chủ yếu vào bản chất polyme, do đó lực nén ít ảnh hưởng đến tốc

độ giải phóng dược chất [2]

1.1.4.2 Hệ cốt trơ khuếch tán

 Nguyên tắc cấu tạo:

Dược chất được phân tán vào một cốt trơ xốp, không tan trong đường tiêu hóa, cốt này đóng vai trò như một bộ khung mang thuốc Sau khi uống, thuốc giải phóng khỏi cốt bằng cách khuếch tán từ cốt ra dịch tiêu hóa và cốt được đào thải nguyên vẹn ra ngoài [2]

 Nguyên liệu tạo cốt

Là các polyme không tan trong nước như ethyl cellulose, polyvinyl clorid, polyme methyl methacrylat…Đồng thời người ta còn dùng một số tá dược vô cơ như dicalci phosphat, calci sulfat…Ngoài ra, có thể thêm các chất diện hoạt để tăng tính thân nước của bề mặt cốt, các chất tan trong nước để tạo ra các kênh khuếch tán mới cho cốt sau khi các chất này bị hòa tan [2]

 Quá trình giải phóng dược chất:

Quá trình giải phóng dược chất của hệ xảy ra theo các bước sau:

- Cốt thấm vào môi trường khuếch tán, hòa tan lớp dược chất ở bề mặt hệ

- Dung môi (dịch tiêu hóa) thấm sâu vào phía trong cốt thông qua hệ thống vi mao quản của cốt, tiếp tục hòa tan các lớp dược chất nằm sâu trong cốt

- Dung dịch dược chất khuếch tán từ cốt ra dịch tiêu hóa

- Cốt đã giải phóng hết dược chất và được đào thải ra khỏi đường tiêu hóa

Đặc điểm giải phóng dược chất của hệ cốt trơ khuếch tán:

Theo Higuchi, lượng dược chất được giải phóng trên một đơn vị diện tích từ cốt

có hình trụ dẹt được mô tả bởi phương trình:

 Phương pháp bào chế

Hệ cốt được bào chế tạo dưới dạng hạt, pellet để đóng nang hay dập viên hoặc dưới dạng viên nén dập thẳng [2]

 Các yếu tố ảnh hưởng đến sự giải phóng dược chất từ cốt trơ khuếch tán:

- Bản chất của dược chất, cấu trúc hóa học, độ tan, kích thước tiểu phân phân tán,

nồng độ phân tán trong cốt

- Bản chất của cốt: loại nguyên liệu tạo cốt, hình dáng, khối lượng cốt, mật độ và

kích thước hệ thống vi mao quản (tức là độ xốp của cốt), tỷ lệ dược chất – tá dược

- Bản chất và lượng dung môi tạo hạt, phương pháp tạo hạt, phân bố kích thước hạt,

lực dập viên, công thức viên [2]

1.1.5 Một số tá dược kiểm soát giải phóng dùng trong thực nghiệm

1.1.5.1 Hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC)

 Cấu trúc phân tử và đặc điểm lí hóa

 Ứng dụng trong bào chế thuốc

HPMC được sử dụng rộng rãi trong ngành dược vì nó không độc, tương đối rẻ, lại có nhiều độ nhớt khác nhau, được sử dụng với nhiều vai trò khác nhau (tá dược bao, tá dược dính, tá dược kiểm soát giải phóng, chất nhũ hóa, chất làm tăng độ nhớt…) HPMC có độ nhớt cao thường sử dụng làm tá dược kiểm soát giải phóng với tỷ lệ là 10-80% so với khối lượng viên (kl/kl) [11]

1.1.5.2 Dicalci phosphat (DCP)

 Cấu trúc và đặc điểm lí hóa

- Công thức hóa học là CaHPO4 có KLPT là 136,06

- Là tá dược vô cơ bền về mặt lí hóa, không mùi, không vị, không độc, không gây kích ứng, không hút ẩm, trơn chảy tốt Độ trơn chảy là 27,3 g/s (Di-tab) và 11,4 g/s (Emcompress) DCP thực tế không tan trong ethanol, ether và nước, tan trong các acid loãng

- DCP có tính kiềm nhẹ (pH 7,0 – 7,3) do đó không dùng cho các dược chất không bền trong môi trường kiềm Ở đường tiêu hóa, tá dược này có thể tạo phức làm giảm hấp thu một số dược chất như tetracyclin, phenytoin…[2], [11]

 Ứng dụng trong bào chế thuốc

- DCP được sử dụng rộng rãi trong các sản phẩm bào chế bởi đặc tính chịu nén và trơn chảy tốt Viên dập với DCP có độ bền cơ học cao, rã chậm Trong các công thức viên nén, DCP thường có vai trò là tá dược độn Ngoài ra, DCP còn đóng vai trò là nguyên liệu tạo cốt trơ khuếch tán, thường được bào chế theo phương pháp dập thẳng

- Có 2 loại DCP được sử dụng rộng rãi trong bào chế là: DCP mịn (Emcompress) được sử dụng trong các công thức tạo hạt ướt và tạo hạt khô; DCP thô (Di- tab) được sử dụng trong các công thức dập thẳng [1], [2]

1.1.6 Một số vấn đề đánh giá giải phóng dược chất in vitro của thuốc

TDKD

Trong những năm 1960-1970, có nhiều công trình nghiên cứu sinh dược học đã chỉ ra rằng, tác dụng sinh học của thuốc phụ thuộc vào khả năng hòa tan của dược chất từ dạng bào chế Các thuốc TDKD sử dụng qua đường uống thường được bào chế dưới dạng viên nén hay nang cứng Đặc điểm khác nhau quan trọng nhất giữa hai dạng bào chế quy ước và dạng TDKD là ở tốc độ giải phóng dược chất Với dạng bào chế quy ước, một tiêu chuẩn giới hạn về độ hòa tan có thể áp dụng cho nhiều chất, hay nhiều dạng bào chế Nhưng đối với dạng bào chế TDKD, do khi chế

tạo nhà sản xuất đã thiết lập cho sản phẩm của mình một tốc độ giải phóng dược chất riêng nên mỗi chế phẩm đều phải có tiêu chuẩn thử riêng

Ý nghĩa quan trọng nhất của việc nghiên cứu và đánh giá tốc độ giải phóng in

vitro là cơ sở định hướng trong nghiên cứu công thức, phương pháp sản xuất và sau khi sản phẩm lưu hành trên thị trường, nó trở thành tiêu chuẩn đánh giá sự đồng đều trong cùng một lô và giữa các lô mẻ sản xuất

USP 23 mô tả 7 loại thiết bị để đánh giá độ hòa tan cho các loại chế phẩm khác nhau, trong đó có 4 loại có thể sử dụng cho các dạng bào chế TDKD dùng theo đường uống [8]

1.2 SƠ LƯỢC VỀ TRIMETAZIDIN DIHYDROCLORID

1.2.1 Công thức cấu tạo và tính chất lí hóa

 Công thức cấu tạo và tên khoa học

- Tên khoa học: 1-(2,3,4-Trimethoxybenzyl)piperazine dihydroclorid

- Dung dịch trimetazidin dihydrochlorid trong nước (tỉ lệ 1:20) có pH=2,2-3,3

tương sau khi dùng một liều duy nhất trimetazidin 20 mg đạt khoảng 50 ng/ml Thuốc khuếchh tán tốt trên các mô với thể tích phân bố là 4,8 lít/kg Thuốc liên kết

với protein huyết tương với tỉ lệ thấp, giá trị đo được in vitro là 16 % Trimetazidin

được thải trừ nhanh, chủ yếu qua nước tiểu dưới dạng chưa chuyển hóa, với thời gian bán thải là 4-5 giờ [4], [5]

1.2.3 Dược lực học

Trên tim: Thuốc có tác dụng bảo vệ tế bào cơ tim khi bị thiếu máu do duy trì chuyển hóa năng lượng, bảo vệ chức năng của ty lạp thể để cung cấp ATP cho chuyển hóa tế bào, cho các bơm ion ở màng tế bào hoạt động Do đó, trimetazidin làm hạn chế nhiễm acid lactic cơ tim và tác hại của gốc tự do trong tế bào, kéo dài được thời gian chịu đựng thiếu oxy của cơ tim Hiệu lực của trimetazidin về giảm số cơn đau và tăng khả năng gắng sức của cơ thể tương tự như nifedipin và

propranolol

Trên mắt và tai: Cải thiện hoạt động của võng mạc và làm tăng thính lực

Những nghiên cứu có đối chứng trên bệnh nhân bị đau thắt ngực cho thấy TRI làm tăng khả năng gắng sức của mạch vành ngay từ ngày thứ 15 điều trị:

- Làm giảm những thay đổi đột ngột về huyết áp khi gắng sức mà không làm thay đổi nhiều tần số tim

- Làm giảm rõ rệt tần suất các cơn đau thắt ngực và như vậy giảm nhu cầu về nitroglycerin sử dụng [4], [5]

1.2.4 Chỉ định và liều dùng

 Chỉ định

- Điều trị dự phòng cơn đau thắt ngực ở các thể bệnh

- Điều trị chứng chóng mặt, tổn thương mạch máu võng mạc [4]

 Liều dùng

Liều thông thường 40 mg hoặc 60 mg trong 24 giờ

- Dạng viên bao 20 mg: Uống 1 viên/lần, 2-3 lần/ngày, uống cùng bữa ăn

- Viên dạng MR 35 mg: Uống 1 viên/lần, 2 lần/ngày, uống cùng bữa ăn

- Dạng siro 20 mg/ml: Uống bằng bơm hút định liều 20 giọt/lần (1 ml/lần), 2-3 lần/ngày, uống cùng bữa ăn [5]

1.2.5 Tác dụng không mong muốn

Tác dụng không mong muốn của TRI là hiếm gặp (ADR < 1/1000) chủ yếu là rối loạn tiêu hóa: buồn nôn, nôn Xử lí ADR bằng cách uống thuốc vào bữa ăn [5]

1.2 6 Chống chỉ định và tương tác thuốc

 Chống chỉ định:

Thuốc chống chỉ định trong các trường hợp mẫn cảm hoặc không dung nạp với trimetazidin Khi dùng cho phụ nữ mang thai hoặc đang cho con bú, nên cân nhắc giữa hiệu quả và hậu quả Chưa có đủ bằng chứng lâm sàng để loại trừ nguy cơ gây

dị tật thai nhi, tốt nhất không dùng trimetazidin trong khi mang thai [5], [6]

 Tương tác thuốc

Hiện nay chưa thấy có tương tác của trimetazidin với thuốc nào TRI không phải

là một thuốc gây cảm ứng, cũng không phải là một thuốc gây ức chế enzym chuyển hóa thuốc ở gan và như vậy có nhiều khả năng trimetazidin không tương tác với nhiều thuốc chuyển hóa ở gan Dù sao vẫn cần thận trọng theo dõi khi phối hợp với

một thuốc khác [5], [6]

1.2 7 Phương pháp định lượng

 Định lượng nguyên liệu

Theo dược điển Anh (BP 2008) và dược điển châu Âu (EP 6.0) trimetazidin được định lượng theo phương pháp chuẩn độ đo thế bằng dung dịch AgNO3 0,1M [12], [14]

Theo dược điển Hàn (KP 2007) quy định trimetazidin được định lượng theo phương pháp acid-base trong dung môi acid acetic băng, với dung dịch chuẩn độ là acid HClO4 0,1 M [17]

 Định lượng trimetazidin trong chế phẩm

Simmy O và cộng sự [23] đã nghiên cứu phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu

nâng cao pha đảo (HPTLC) để định lượng trimetazidin dihydroclorid dạng nguyên liệu và chế phẩm bào chế Pha động gồm n- butanol : nước : methanol : amoniac (20%) với tỉ lệ 2 : 0,2 : 0,2 : 2 Bước sóng phát hiện là 254 nm Đường cong hiệu

chuẩn của trimetazidin hydroclorid trong methanol có độ tuyến tính trong khoảng 400– 2400 ng Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng tương ứng là 50 ng và 80

ng Tỷ lệ thu hồi là 98– 100% Phương pháp này đã được sử dụng để phân tích trimetazidin trong cả dạng viên quy ước và pellet kiểm soát giải phóng

Cũng theo một nghiên cứu khác của Simmy O và cộng sự [22] đã nghiên cứu

phương pháp sắc ký lỏng pha đảo để định lượng trimetazidin dihydroclorid và tạp phân hủy Pha động gồm: nước: acetonitril: triethylamin (90: 10: 0,1, v/v/v) được điều chỉnh với acid phosphoric đến pH 3,3 Cột C18, tốc độ dòng 1,0 ml/phút, dược chất và tạp phân hủy được phát hiện ở bước sóng 270 nm Khoảng tuyến tính của trimetazidin dihyroclorid trong methanol từ 500-3000 ng/ml, tỷ lệ thu hồi: 98-100%

Naushad M.A và cộng sự [21] đã nghiên cứu phương pháp HPLC để định

lượng trimetazidin là cả dạng nguyên liệu và các chế phẩm bào chế Pha động bao gồm: Nước : Methanol : Triethylamin theo tỉ lệ 75:25:0,1 (v/v/v) và điều chỉnh pH

= 3,3 bằng acid phosphoric Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Bước sóng phát hiện: 232

nm Hệ này cho 1 peak có thời gian lưu là 3,375 ± 0,04 phút Khoảng tuyến trong khoảng nồng độ từ 5- 90µg/m (hệ số r = 0,997) Phương trình hồi quy tuyến tính thu được là Y = 35362 X- 8964,2 Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) được tìm thấy là 3,6 và 10,9 µg/ml

Adriana A C và cộng sự [9] đã nghiên cứu phương pháp đo quang dựa vào

phản ứng thế ái nhân của TRI với 2,4-dinitro fluorobenzen với mục đích xây dựng một quang phổ mới để định lượng trimetazidin trong các chế phẩm bào chế Tác giả

đã nghiên cứu các điều kiện vật lí và hóa học của phản ứng, xác định được λmax

=385 nm, khoảng nồng độ tuyến tính là 0,4-2,56 μg/ml, đánh giá ảnh hưởng của nồng độ của chất phản ứng, pH, nhiệt độ, tỷ lệ các chất trong phản ứng Phương pháp đã được thẩm định đạt yêu cầu về độ đúng, độ chính xác, khoảng tuyến tính Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) được tìm thấy lần lượt là 12,714 ng/mL và 38,528 ng/mL

Ngoài ra, có thể định lượng trimetazidin trong viên nén bằng phương pháp đo quang vi sai trong môi trường đệm phosphat pH 6,8

1.2.8 Một số chế phẩm chứa trimetazidin tác dụng kéo dài có trên thị trường

Trimetazidine

Winthrop

Sanofi-Synthelabo Việt Nam

Trimetazidin

Stada

20 mg

Công ty liên doanh TNHH Stada Việt Nam

Derpharma

Viên

GPKD

Derpharma

1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ THUỐC TÁC DỤNG KÉO DÀI

 Viên nén trimetazidin GPKD

- Krishnaiah Y.S.R và cộng sự [18] đã nghiên cứu bào chế viên nén

trimetazidin dihydroclorid 3 lớp kiểm soát giải phóng với hệ cốt chứa gôm guar Viên nén được bào chế như sau: Tạo hạt 3 công thức có chứa gôm guar với tỉ lệ là 30% (M1); 40% (M2) và 50% (M3) bằng phương pháp xát hạt ướt với tá dược dính

là hồ tinh bột Viên nén 3 lớp tạo ra do dập hạt M1, M2 hoặc M3 làm lớp giữa và

200 mg hạt gôm guar làm 2 lớp ngoài kéo dài giải phóng dược chất tương ứng chứa 65% gôm guar tạo mẫu viên T1M1, T1M2, T1M3; 75% gôm guar tạo mẫu viên T2M1, T2M2, T2M3; hạt chứa 85% gôm guar tạo mẫu viên T3M1, T3M2, T3M3

Viên nén tạo ra được đánh giá độ cứng, độ dày, đồng đều hàm lượng và nghiên cứu

giải phóng dược chất in- vitro Lượng trimetazidin dihydroclorid giải phóng từ viên

cốt 3 lớp ở các thời điểm khác nhau được định lượng bằng phương pháp HPLC Kết quả nghiên cứu cho thấy: Mẫu viên T3M3 cho giải phóng đạt theo yêu cầu lý thuyết cho viên chỉ định dùng 2 lần/ngày Mẫu viên T3M3, khi nghiên cứu lão hóa cấp tốc ở điều kiện 400C, độ ẩm 75% trong 6 tháng, không có sự thay đổi về vật lý, hàm lượng dược chất hay mô hình giải phóng Nghiên cứu DSC cho thấy không có

sự tương tác nào giữa trimetazidin dihydroclorid và gôm guar hoặc tá dược khác trong công thức Tác giả kết luận: Gôm guar sử dụng trong viên nén 3 lớp là một chất mang tiềm năng để thiết kế dạng thuốc kiểm soát giải phóng đường uống đặc biệt là các chất dễ tan trong nước như trimetazidin dihydroclorid

- Marikanti K.R và cộng sự [19] đã nghiên cứu bào chế viên nén trimetazidin

dihydroclorid với hệ cốt chứa polysaccharid với tỷ lệ 14-38% để kiểm soát giải phóng Viên nén được bào chế bằng phương pháp dập thẳng với khối lượng trung bình là 210 mg với chày Ф= 8 mm và được bao phim bằng một lớp polyme bảo vệ

6 công thức được bào chế sử dụng các tá dược là: polysaccharid (PS), dicalci phosphat, polyethylen oxid (PEO), Aerosil, magnesi stearat với các tỷ lệ khác nhau

Chế phẩm tạo thành được đánh giá giải phóng in vitro từ 30 phút đến 10 giờ bằng

thiết bị USP II (cánh khuấy) trong 900 ml môi trường acid HCl 0,1 N pH 1,2 ở nhiệt

độ 37± 0,5oC và định lượng dược chất giải phóng bằng phương pháp HPLC

Kết quả nghiên cứu cho thấy công thức F6 có tỷ lệ PS/PEO là 1,08 : 2 sau 10 giờ giải phóng 100% dược chất, hệ số tương đồng của F6 so với chế phẩm trên thị trường đạt f2 =70 Tác giả kết luận: khi phối hợp polysaccharid và polyethylen oxid

ở tỷ lệ phù hợp có khả năng kiểm soát giải phóng dược chất thành công cho viên nén trimetazidin GPKD

- Gidwani và cộng sự [15] đã nghiên cứu thành công viên nén trimetazidin giải

phóng kéo dài hệ cốt Sử dụng nguyên liệu tạo keo, sử dụng các polyme sơ nước kết hợp hoặc không kết hợp với một tá dược sơ nước khác để kéo dài giải phóng trimetazidin trong 24 giờ với liều chỉ định chứa 60 mg trimetazidin dihyroclorid Các nguyên liệu tạo keo như: hydroxy propyl methylcellulose (ví dụ Methocel),

hydroxyl propylcellulose (ví dụ Klucel), polyethylene oxid, natri cacboxy methylcellulose, kali alginat, calci alginat, propylen glycol alginat, acid alginic, polyvinyl alcohol, povidon, gôm guar, gôm xanthan…Các tá dược sơ nước như: acid stearic, glycerylmonostearat, glycerylmonooleat, microcrystallin wax, stearyl alcohol, cetyl alcohol, cetostearyl alcohol, sáp, polyvinyl alcohol, bột polyethylen, polyvinyl clorid, shellac Các tá dược độn như: lactose, dibasic calci phosphat, tribasic calci phosphat, calci carbonat, lactose Các tá dược dính như: polyvinyl pyrrolidon, gelatin, gôm acacia, Klucel EF, natri cacboxy methyl cellulose Tá dược trơn như: Aerosol, talc, magnesi stearat, kẽm stearat

Viên nén được bào chế như sau: trộn khô dược chất và các thành phần khác, tạo hạt với polyme bằng kỹ thuật tạo hạt nóng chảy sử dụng máy tạo hạt cao tốc có hai

vỏ gia nhiệt ở nhiệt độ từ 60-800C, sau đó làm nguội khối hạt đến nhiệt độ phòng Khối hạt thu được tiếp tục tạo hạt với dung dịch tá dược dính trong dung môi hữu

cơ hoặc nước, sấy khô hạt, lựa chọn hạt có kích thước khoảng từ 100 µm- 1,0 mm bằng cách nghiền và rây Hạt được trộn với tá dược trơn và đem dập viên Viên nén

được bao phim bảo vệ Các mẫu viên được nghiên cứu giải phóng dược chất in vitro

12 giờ và sinh khả dụng in vivo tác dụng 24 giờ

- Huet và cộng sự [27] nghiên cứu bào chế dạng cốt giải phóng kéo dài của

trimetazidin chỉ định dùng đường uống Nghiên cứu viên nén trimetazidin 35 mg sử dụng các tá dược dẫn chất của cellulose như hydroxypropyl methylcellulose (loại

100000 cp; 1000 cp; 100 cp), polyvidon, calci hydroxyphosphat, magnesi stearat,

silic colloid Các mẫu viên cho giải phóng dược chất in vitro 12 giờ

- Huet và cộng sự [29] đã nghiên cứu bào chế viên nén TDKD trimetazidin 80

mg Viên nén được bào chế với hệ cốt trơ là calci hydrophosphat kiểm soát giải phóng, sau đó bao màng ethylcellulose với chất hóa dẻo là acetyltributylcitrat cũng góp phần kéo dài giải phóng dược chất hoặc sử dụng dạng hỗn dịch nước Aquacoat với dibutyl sebacat làm chất hóa dẻo

- Varshney và cộng sự [25] đã nghiên cứu thành công viên nén TRI TDKD chỉ

định 1 lần/ngày Công thức bào chế gồm dược chất (5-50%), một polyme kị nước kiểm soát giải phóng (20- 60%) kết hợp với một hoặc nhiều polyme trương nở tạo

gel hoặc polyme kị nước khác (7-60%), các tá dược cần thiết khác Polyme kị nước

sử dụng: ethyl cellulose, cellulose acetat, poly vinyl acetat, polyme của acrylat hoặc methacrylat; polyme trương nở tạo gel có thể: hydroxy propyl methylcellulose, hydroxy propyl cellulose, hydrdroxypropyl ethyl cellulose, gôm, tinh bột, alginat, gelatin, polyethylen oxid…

Viên nén được bào chế bằng phương pháp xát hạt ướt hoặc dập thẳng và được

bao phim bảo vệ Chế phẩm tạo ra được đánh giá giải phóng in vitro bằng thiết bị

USP I, tốc độ 100 vòng/phút, thể tích 500 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,8 ở

37oC trong môi trường đệm phosphat pH 6,8 và đạt yêu cầu không dưới 75% dược chất giải phóng sau 16 giờ

- Pareckh D và cộng sự [24] đã nghiên cứu xây dựng và đánh giá viên nén

TDKD trimetazidin với tá dược là các polyme Các polyme được sử dụng là HPMC, sáp (Compritol ATO 888 và Precirol ATO 5), gôm xanthan Viên nén được bào chế như sau: Chuẩn bị hỗn hợp bột cho các công thức khác nhau như sau: Sử dụng 3 loại HPMC là HPMC K4M, K15M, K100M với tỉ lệ khác nhau (10%, 20%, và 30%

so với tổng khối lượng viên), gôm xanthan sử dụng ở cùng một tỉ lệ Tạo hạt bằng cách trộn hỗn hợp với tá dược đun chảy Compritol hoặc Precirol được sử dụng với

tỉ lệ tương ứng là 1:1, 1:2 và 1:3 (dược chất: polyme) hoặc hỗn hợp đồng thời gồm Compritol và Precirol theo tỉ lệ dược chất: Compritol: Precirol trộn với nhau theo tỉ

lệ 1:1:1, 1:1:2, 1:2:1 Hỗn hợp bột này sau đó đem dập trên máy dập viên quay tròn với các tá dược cần thiết Các viên sau đó được đánh giá độ cứng, bề dày, đồng đều khối lượng, và xác định % giải phóng TRI trong 12 giờ với thiết bị thử USP II trong dung dịch đệm phosphat 7,4 tốc độ 75 vòng/phút, nhiệt độ là 37 ± 0,5oC, định lượng TRI giải phóng bằng phương pháp đo quang tại bước sóng 270,5 nm

Kết quả nghiên cứu cho thấy: HPMC K15M (30%), HPMC K100M (20%), Compritol (1:2), Precirol (1:1), hỗn hợp Compritol và Precirol (1:1:2) và gôm xanthan (20%) đều có thể làm chậm sự giải phóng TRI lên tới 24 giờ Nghiên cứu

IR cho thấy không có sự tương tác nào giữa TRI và polyme và tá dược sử dụng Tác giả kết luận: HPMC, Compritol ATO 888, Precirol ATO 5 và gôm xanthan có thể được sử dụng để bào chế viên nén TRI TDKD

 Pellet trimetazidin GPKD:

- Antarkar và cộng sự [10] nghiên cứu sản xuất dạng thuốc chứa pellet TRI

GPKD với liều 60 mg, chỉ định đường uống 1 lần/ngày Pellet nhân TRI được bào chế theo phương pháp bồi dần từng lớp dược chất từ dung dịch nước chứa dược chất và tá dược dính, tá dược chống dính và tá dược trơn lên nhân trơ (hạt đường), sau đó pellet nhân được bao màng kiểm soát giải phóng với một hoặc hỗn hợp nhiều polyme không tan trong nước trong thiết bị bao tầng sôi, chất hóa dẻo được lựa chọn như triacetin và triethylcitrat Các pellet này có thể đóng trong cỡ nang số 3, với hàm lượng dược chất 60 mg/nang, thuận tiện cho người sử dụng Ưu điểm của dạng thuốc này là cho nồng độ thuốc trong máu ổn định, có hiệu quả điều trị tốt khi

sử dụng 1 lần/ngày, chống lại sự bùng liều, giải phóng không phụ thuộc pH ở in

vitro ít nhất 8-10 giờ

- Huet và cộng sự [30] nghiên cứu bào chế dạng thuốc GPKD của trimetazidin

liều 80 mg chỉ định đường uống Bào chế pellet TRI bằng phương pháp đùn- tạo cầu Công thức gồm TRI và cellulose vi tinh thể, ủ ẩm bằng nước để tạo pellet nhân, sau đó bao màng kiểm soát giải phóng bằng ethylcellulose, chất hóa dẻo acetyltributylcitrat

 Một số nghiên cứu khác về viên nén TDKD sử dụng tá dược là HPMC K4M

- Anroop B Nai r và cộng sự [20] nghiên cứu bào chế viên nén enalapril TDKD với tá dược là 2 loại HPMC (K100 và K4M) làm tá dược kiểm soát giải phóng Viên nén được bào chế bằng phương pháp dập thẳng, với 4 công thức khác nhau như sau Enalapril (40mg), HPMC K100/HPMC K4M theo tỉ lệ 25:5; 5:25; 25:15;15:25 (mg/viên), tá dược khác (lactose phun sấy, MgS, PVP K30)

Kết quả cho thấy: Cả 4 công thức đều cho đạt yêu cầu về kiểm soát giải phóng enalapril với hệ số r2 cao, sơ đồ giải phóng tuân theo mô hình động học bậc O và

mô hình giải phóng của Higuchi CT 4 với tỉ lệ HPMC K100/HPMC K4M (25mg: 15mg) đạt % giải phóng là 2,97 mg/giờ trong vòng 14 giờ Tác giả kết luận: Sử dụng HPMC với nhiều loại khác nhau làm giảm nồng độ sử dụng khi dùng một mình mà vẫn tạo được dạng cốt kiểm soát tốt giải phóng enalapril maleat

- Dabbagh A M và cộng sự [13] nghiên cứu bào chế viên nén propranolol

TDKD với hệ cốt sử dụng tá dược là natri carboxymethy cellulose (NaCMC) và HPMC K4M theo các tỷ lệ khác nhau Viên nén được bào chế bằng phương pháp xát hạt ướt và tiến hành thử hòa tan theo USP 22 Kết quả nghiên cứu cho thấy có thể sử dụng NaCMC và HPMC K4M theo các tỷ lệ khác nhau làm tá dược kiểm soát giải phóng trong viên nén propranolol TDKD hệ cốt

PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1.1 Nguyên liệu và thiết bị nghiên cứu

 Nguyên liệu hóa chất:

Bảng 1 Nguyên liệu và hóa chất nghiên cứu

1 Trimetazidin dihydroclorid Ấn Độ TCNSX

6 Polyvinyl pyrolidon K30 Trung Quốc DĐVN IV

8 Kali dihydro phosphat Trung Quốc DĐVN IV

Viên đối chiếu: Vastarel MR sản xuất bởi công ty Les Laboraroires Servier (Pháp) Số lô 869483 VN 7243-08, hạn dùng 07/2013

 Thiết bị nghiên cứu

Bảng 2 Thiết bị nghiên cứu

2 Máy thử độ hòa tan ERWERKA DT 60 Đức

5 Máy đo độ cứng của viên nén ERWEKA Đức

7 Cân phân tích METTLER TOLEDO Thụy Sĩ

8 Máy đo độ mài mòn ERWEKA TA 10 Đức

9 Máy đo quang phổ UV-VIS Cary 100 Varian Mỹ

11 Cân xác định hàm ẩm SATORIUS MA Đức

12 Máy đo độ trơn chảy ERWEKA GMF Đức

13 Máy đo tỷ trọng biểu kiến ERWEKA SVM Đức

2.1.2 Phương pháp nghiên cứu

2.1.2.1 Phương pháp bào chế viên nén

 Thành phần cơ bản và vai trò các thành phần

Dựa vào một số tài liệu tham khảo chúng tôi đã lựa chọn các tá dược sau để nghiên cứu bào chế viên nén trimetazidin GPKD

- Trimetazidin dihydroclorid: Dược chất

- HPMC K4M: Tá dược kiểm soát giải phóng TRI theo cơ chế trương nở tạo hàng rào gel, làm chậm tốc độ giải phóng dược chất

- Dicalci phosphat: Tá dược độn đảm bảo khối lượng viên đồng thời kiểm soát giải phóng dược chất theo cơ chế tạo hệ cốt trơ không tan, làm chậm tốc độ giải phóng dược chất

- Avicel PH 101: Tá dược rã theo cơ chế trương nở tạo kênh dẫn giúp giải phóng dược chất từ trong ra ngoài

- Aerosil và magnesi stearat: Tá dược trơn nhằm cải thiện độ trơn chảy của khối hạt, giảm ma sát, chống dính chày cối, làm bề mặt viên bóng đẹp

- Polyvinyl pyrolidon K30: Tá dược dính để tạo hạt

- Ethanol 96o: Dung môi hòa tan PVP làm dung dịch tá dược dính tạo hạt

 Quy trình bào chế

Viên nén TRI được bào chế theo phương pháp xát hạt ướt: Cân các thành phần trong công thức (trừ tá dược trơn) trộn đều theo nguyên tắc đồng lượng Tạo hạt bằng dung dịch PVP trong ethanol 960 Xát hạt qua rây số 1000 Sau đó, sấy ở nhiệt

độ 55-60oC đến khi hạt đạt độ ẩm 3-4 % Trong quá trình sấy thỉnh thoảng đảo hạt, tách cục vón Sửa hạt qua rây số 1000 Trộn tá dược trơn Dập viên, đường kính Ф=9 mm với lực dập 2 tấn [1]

Ghi chú: quy mô phòng thí nghiệm là 50 viên/mẻ, khi nâng cấp quy mô là 1000 viên/mẻ

2.1.2.2 Phương pháp đánh giá tiêu chuẩn chất lượng

ra, rây sạch bụi và cân lại (m2) Độ mài mòn X (%) được tính theo công thức:

Yêu cầu: độ mài mòn không được vượt quá 3%

 Độ đồng đều khối lượng

Đánh giá sự đồng đều khối lượng giữa các viên bằng cách cân khối lượng từng viên (thử với 20 viên bất kì), so sánh với khối lượng trung bình Độ lệch cho phép với viên có khối lượng trung bình < 80 mg là ± 10 %; từ 80 – 250 mg là ± 7,5 % và

> 250 mg là ± 5 % Đối với viên TRI thực nghiệm có khối lượng trung bình khoảng

Yêu cầu: Không quá 2 viên có khối lượng lệch quá khoảng giới hạn của khối

lượng trung bình và không có viên nào có chênh lệch quá gấp đôi độ lệch tính theo

tỷ lệ %

 Định lượng

- Phương pháp đo quang vi sai theo bước sóng

Dung dịch thử: Cân 20 viên, xác định khối lượng trung bình viên, nghiền thành

bột mịn và trộn đều Cân chính xác một lượng tương ứng 35,0 mg TRI cho vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 40 ml dung dịch đệm phossphat 6,8 siêu âm để hòa tan Bổ sung dd đệm phosphat pH 6,8 vừa đủ đến vạch, lắc đều, li tâm Dịch lọc thu được đem lọc, bỏ 10 ml dịch lọc đầu, hút chính xác 10 ml pha loãng thành 50 ml dung dịch bằng bình định mức 50 ml, lắc đều

1

.100

Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 35,0 mg trimetazidine dihydroclorid

chuẩn cho vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 40 ml dung dịch đệm phossphat 6,8 siêu âm để hòa tan Bổ sung dd đệm phosphat pH 6,8 vừa đủ đến vạch, lắc đều,

li tâm Dịch lọc thu được đem lọc, bỏ 10 ml dịch lọc đầu, hút chính xác 10 ml pha loãng thành 50 ml dung dịch bằng bình định mức 50 ml, lắc đều

Đo độ hấp thụ của dung dịch chuẩn và dung dịch thử ở bước sóng 270 nm và

300 nm với mẫu trắng là dung dịch đệm phosphat pH 6,8 Hàm lượng % trimetazidin dihydroclorid có trong viên tính theo lượng ghi trên nhãn tính theo công thức sau:

35)

(

100

%

300 270

300 270

C

TB c

T T

m A

A

M P m A

A X

Trong đó: AT270, AT300, AC270, AC300 lần lượt là độ hấp thụ của dd thử và dd chuẩn ở bước sóng 270 nm và 300 nm; mt, mc lần lượt là khối lượng mẫu thử và chuẩn (mg); P là hàm lượng % của chất chuẩn; MTB là khối lượng trung bình viên

- Định lượng bằng phương pháp HPLC

Dựa theo một số tài liệu tham khảo, chúng tôi xây dựng phương pháp định lượng trimetazidin bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu nâng cao (HPLC) với điều kiện như sau:

Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút

Bước sóng phát hiện: 231 nm

Thể tích tiêm: 20 µl

Cột : Phenomenex C18 (4,5 x 250 mm x 5 μm)

Pha động: Acetonitril : dung dịch đệm (50:50)

Cách pha dung dịch đệm như sau: Cân 2,72 g KH2PO4 hòa tan trong nước cất, thêm 0,2 g Trietylamine thêm nước vừa đủ 1 lít Lọc qua màng 0,45 µm, lắc đều

Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 35,0 mg trimetazidin dihydroclorid

chuẩn vào bình định mức 100 ml Thêm nước cất đến vạch, siêu âm cho tan hoàn toàn Lấy chính xác 5 ml dung dịch này vào bình định mức 50 ml, thêm pha động vừa đủ 50 ml, lắc đều Lọc qua giấy lọc 0,45 µm

Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng một lượng bột thuốc đã được nghiền mịn

từ 20 viên tương ứng với 35,0 mg TRI vào bình định mức 100 ml, thêm 80 ml nước

cất, siêu âm 30 phút, để nguội thêm nước cất vừa đủ 100 ml, lắc đều Lọc, loại bỏ

10 ml dung dịch đầu Lấy chính xác 5 ml dịch lọc vào bình định mức 50 ml, thêm pha động vừa đủ 50 ml, lắc đều Lọc qua màng lọc 0,45 µm

Tiến hành chạy sắc kí các mẫu trên, ghi lại diện tích pic Hàm lượng % trimetazidin dihydroclorid có trong viên so với lượng ghi trên nhãn tính theo công thức sau:

TB c

T

m A

M P m A X

Trong đó: At, Ac: lần lượt là diện tích pic dung dịch thử và dung dịch chuẩn;

mt, mc lần lượt là khối lượng mẫu thử và chuẩn (mg); P là hàm lượng % của chất chuẩn; MTB là khối lượng trung bình viên

Yêu cầu: Hàm lượng trimetazidin hydroclorid trong mỗi viên phải đạt từ

• Pha dung dịch chuẩn:

P ha dung dịch chuẩn gốc C o: Cân chính xác khoảng 50,0 mg trimetazidin dihydroclorid chuẩn vào bình định mức 50 ml Thêm khoảng 40 ml môi trường hòa tan, siêu âm đến tan, cho môi trường hòa tan đến vạch, lắc đều (Co≈1000 μg/ml )

Pha dung dịch chuẩn C: Hút chính xác 5,0 ml dung dịch chuẩn gốc Co và pha loãng thành 100 ml bằng dd đệm phosphat pH 6,8, lắc đều.(C≈ 50 μg/ml)

Đo độ hấp thụ của dãy dung dịch chuẩn và dung dịch thử ở bước sóng 270 nm

và 300 nm với mẫu trắng là dung dịch đệm phosphat pH 6,8

Tính toán: % trimetazidin giải phóng tại các thời điểm được tính theo công thức sau

10035

50010050

21001

500

10 (%) 1 100 35

500 100 50

5 100 2

500

10 (%) 2 100 35

500 100 50

5 100 4

500

10 (%) 4 100 35

500 100 50

5 100 6

500

10 (%) 6 100 35

500 100 50

5 100 8

Trong đó:

Mchuan , ∆Dchuan : lần lượt là khối lượng TRI chuẩn (mg) và hiệu độ hấp thụ UV tại 2 bước sóng 270 nm và 300 nm của dung dịch chuẩn

P: là hàm lượng trimetazidin hydroclorid của TRI chuẩn, (%)

∆Dthu1; ∆Dthu2; ∆Dthu4; ∆Dthu6; ∆Dthu8: lần lượt là hiệu độ hấp thụ UV tại 2 bước sóng 270 nm và 300 nm của các dung dịch thử ở thời điểm 1; 2; 4; 6; 8 giờ

%G1; %G2; %G4; %G6; %G8: lần lượt là % trimetazidin 2HCl giải phóng từ viên tại các thời điểm 1; 2; 4; 6; 8 giờ

Yêu cầu: Dựa vào kết quả thử hòa tan viên đối chiếu và một số tài liệu tham

khảo chúng tôi đặt ra yêu cầu % giải phóng TRI tại các thời điểm như sau:

 Phương pháp đánh giá động học giải phóng dược chất từ viên nén

a) Đánh giá động học giải phóng theo mô hình giải phóng Higuchi:

Phương trình giải phóng dược chất của động học Higuchi có dạng:

=

Wo t

b) Đánh giá động học giải phóng theo mô hình giải phóng động học bậc O

Phương trình giải phóng dược chất của động học bậc 0 có dạng:

×

=

Wo t

C( ) 100 K o t (%) Trong đó: C(t) là % dược chất giải phóng ở thời điểm t; W o là tổng lượng dược

chất có trong mẫu; K o là hằng số giải phóng bậc 0 Đây là mô hình lý tưởng cho quá trình giải phóng thuốc từ dạng thuốc giải phóng kéo dài

Để đánh giá động học giải phóng theo động học bậc O, dùng phần mềm Excel xây dựng đồ thị biểu diễn sự tương quan giữa % TRI giải phóng với thời gian, xác định hệ số tương quan R2

Ý nghĩa: Xác định được mô hình giải phóng cho phép hiểu rõ hơn cơ chế giải

phóng dược chất từ viên, so sánh được đồ thị giải phóng dược chất từ các công thức

c) Đánh giá sự giống nhau giữa hai đồ thị giải phóng dựa vào hệ số tương đồng f 2

Trong nghiên cứu, để đánh giá mức độ tương đồng đồ thị giải phóng của chế phẩm thử so với chế phẩm đối chiếu thường dựa vào hệ số tương đồng f2 Công

5 0 2

1 2

n t

t

t T R n f

Trong đó: n là số điểm lấy mẫu thử Rt, Tt lần lượt là % dược chất giải phóng tại

thời điểm t của mẫu đối chiếu, mẫu thử

Ý nghĩa: f2 nhận giá trị từ 0- 100 Hai đồ thị hòa tan được coi là giống nhau khi

f2 ≥ 50 (f2 càng lớn, hai đồ thị hòa tan càng giống nhau)

2.2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT

2.2.1 Xây dựng đường chuẩn biểu thị tương quan giữa hiệu số mật độ quang và nồng độ dung dịch TRI trong phương pháp đo quang vi sai

 Quét phổ tìm bước sóng hấp thụ cực đại

Tiến hành quét phổ UV-VIS dung dịch TRI có nồng độ C = 70 μg/ml trong môi trường đệm phosphat pH 6,8 từ bước sóng 200 nm đến 400 nm xác định được bước sóng hấp thụ cực đại là: λmax=270 nm Hình ảnh quét phổ ghi lại như phụ lục 1 Từ kết quả trên, ta lựa chọn 2 bước sóng là 270 nmvà 300 nm để tiến hành đo quang vi sai

 Xây dựng đường chuẩn biểu thị tương quan giữa hiệu số mật độ quang và nồng độ dung dịch trimetazidin

Để khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ dung dịch TRI và hiệu số mật

độ quang làm cơ sở cho phép định lượng TRI trong chế phẩm và định lượng TRI có trong dịch thử hòa tan, chúng tôi tiến hành như sau:

Pha dãy dung dịch chuẩn TRI có nồng độ lần lượt là 10, 50, 70, 100, 150, 200 µg/ml trong môi trường đệm pH 6,8 Tiến hành đo quang ở 2 bước sóng 270 nm và

300 nm, thu được kết quả như sau:

Bảng 3 Mật độ quang dung dịch TRI trong môi trường đệm pH 6,8

Hình 3: Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính của ∆A vào nồng độ dung dịch TRI

Nhận xét: Hệ số tương quan R2= 0,9999 (> 0,99) tất cả các giá trị đo đều nằm gần sát đường hồi quy cho thấy hiệu số mật độ quang của dung dịch phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ dung dịch TRI trong khoảng nồng độ từ 10- 200 µg/ml Vì vậy, có thể sử dụng phương pháp đo quang vi sai theo bước sóng tại 270 và 300 nm

để định lượng TRI trong viên nén và thử độ hòa tan

Ngoài ra, khảo sát ảnh hưởng của tá dược tới kết quả định lượng trong phương pháp đo quang vi sai cũng được thực hiện, được trình bày trong phụ lục 1

2.2.2 Xây dựng đường chuẩn biểu thị tương quan giữa diện tích pic và nồng độ dung dịch TRI trong phương pháp định lượng bằng HPLC

Trong việc thẩm định một số tiêu chí của phương pháp định lượng dung dịch TRI bằng HPLC, để khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính giữa diện tích pic và nồng độ dung dịch TRI, chúng tôi tiến hành như sau:

Pha dãy dung dịch chuẩn TRI có nồng độ lần lượt là 10, 20, 30, 50, 80, 100 µg/ml trong pha động Lọc qua màng lọc 0,45 μm trước khi tiêm mẫu Tiến hành chạy sắc kí và ghi lại diện tích pic như sau:

Bảng 4 Diện tích pic của dung dịch TRI trong pha động