Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm tobramycin

Bộ GIáO DụC Và ĐàO TạO Bộ Y Tế TRƯờNG ĐạI HọC DƯợC Hà NộI Phạm Thị ánh Tuyết Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm tobramycin luận văN THạC Sĩ DƯợC HọC Hà nội -2007 Bộ GIáO DụC Và ĐàO TạO Bộ Y Tế TRƯờNG ĐạI HọC DƯợC Hà NộI Phạm Thị ánh Tuyết Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm tobramycin luận văN THạC Sĩ DƯợC HọC Chuyên ngành Mã số : công nghệ dược phẩm-BàO CHế : 60.73.01 Người hướng dẫn khoa học : PGS TS Nguyễn Văn Long Nơi thực hiện: Bộ môn Bào chế Trường Đại học Dược Hà nội Xí nghiệp Dược phẩm Trung ương I Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương Hà nội -2007 Mục lục Trang Đặt vấn đề chương 1: Tổng quan 1.1 Đại cương tobramycin 1.1.1 Công thức 1.1.2 Các phương pháp định lượng ghi dược điển 1.1.3 Các đặc tính dược lực học 1.1.4 Các đặc tính dược động học 1.1.5 Dạng thuốc, định, chống định liều dùng 1.1.6 Một số kết nghiên cứu tobramycin 1.1.7 Một số chế phẩm thuốc tobramycin thị trường 11 1.2 Thành phần thuốc tiêm 11 1.2.1 Dược chất 11 1.2.2 Dung môi hay chất dẫn 12 1.2.3 Các thành phần khác 12 chương Nguyên liệu, trang thiết bị Và phương pháp nghiên cứu 16 2.1 Nguyên liệu 16 2.2 Phương tiện, thiết bị sử dụng cho nghiªn cøu 16 2.3 Néi dung nghiªn cøu 17 2.3.1 Xây dựng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin 17 2.3.2 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho thuốc tiêm tobramycin 17 2.3.3 Bước đầu theo dõi, đánh giá độ ổn định thuốc 17 2.4 Phương pháp nghiên cứu 18 2.4.1 Xây dựng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin 18 2.4.2 Xây dựng tiêu chuẩn sở thuốc tiêm tobramycin 21 2.4.3 Đánh giá độ ổn định 22 phần kết bàn luận 24 3.1 Kết 24 3.1.1 Xây dựng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin 24 3.1.2 Xây dựng tiêu chuẩn sở cho dung dịch tiêm tobramycin 40 3.1.3 Nghiên cứu sơ độ ổn định 42 3.2 Bàn luận 44 3.2.1 Xây dựng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin 44 3.2.2 Xây dựng tiêu chuẩn sở thuốc tiêm tobramycin 46 3.2.3 Độ ổn định thuốc 47 phần kết luận đề xuất 48 4.1 Kết luận 48 4.2 Đề xuất 49 Tài liệu tham khảo Phụ lục danh mục bảng STT Trang Bảng 1.1: Nång ®é th­êng dïng cđa mét sè chÊt chèng oxy hoá 13 thuốc tiêm Bảng 1.2: Nồng ®é th­êng dïng cđa mét sè chÊt s¸t khn 15 thuốc tiêm Bảng 2.1: Nguyên liệu sử dụng trình thực nghiệm 16 Bảng 3.1: Công thức thuốc tiêm tobramycin nghiên cứu 24 Bảng 3.2: ảnh hưởng chất sát khuẩn đến tiêu cảm quan 25 dung dịch tobramycin Bảng 3.3: ảnh hưởng chất sát khuẩn đến pH dung dịch 26 tobramycin Bảng 3.4: ảnh hưởng chất sát khuẩn đến hàm lượng 27 tobramycin dung dịch Bảng 3.5: Kết kiểm tra độ vô khuẩn thuốc tiêm tobramycin 28 Bảng 3.6: Sự thay đổi pH dung dịch tobramycin 29 10 Bảng 3.7: Giá trị pH số biệt dược tiêm tobramycin 30 11 Bảng 3.8: ảnh hưởng pH đến hàm lượng tobramycin 30 dung dịch 12 Bảng 3.9: ảnh hưởng chất chống oxy hoá đến tiêu cảm 31 quan dung dịch tobramycin 13 Bảng 3.10: Sự thay đổi pH dung dịch tobramycin ảnh 32 hưởng chất chống oxy hoá 14 Bảng 3.11: ảnh hưởng chất chống oxy hoá đến hàm lượng 33 tobramycin 15 Bảng 3.12:ảnh hưởng khí nitơ đến pH dung dịch tobramycin 35 16 Bảng 3.13: Sự thay đổi pH dung dịch tobramycin đun sôi liên 36 tục 10 17 Bảng 3.14: ảnh hưởng điều kiện đóng ống đến hàm lượng 36 tobramycin dung dịch 18 Bảng 3.15: Hàm lượng tobramycin dung dịch sau 38 đun sôi liên tục 10 19 Bảng 3.16 : So sánh kết định lượng tobramycin phương 41 pháp SKLHNC VSV 20 Bảng 3.17: Kết khảo sát số tiêu chất lượng mẻ 42 thuốc tiêm tobramycin pha theo CT7 21 Bảng 3.18 : Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 42 80 mg/2 ml, mẻ 1, điều kiện bảo quản (302)0C 22 Bảng 3.19: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 43 80 mg/2 ml, mẻ 2, điều kiện bảo quản (302)0C 23 Bảng 3.20: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 43 80 mg/2 ml, mẻ 3, điều kiƯn b¶o qu¶n (30±2)0C 24 B¶ng 3.21: KÕt qu¶ theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 43 80 mg/2 ml, mẻ 1, điều kiện bảo quản (402)0C 25 Bảng 3.22: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 44 80 mg/2 ml, mẻ 2, điều kiện bảo quản (402)0C 26 Bảng 3.23: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml, mẻ 3, điều kiện bảo quản (402)0C 44 danh mục hình STT Trang Hình 2.1: Sơ đồ tóm tắt giai đoạn bào chế thuốc tiêm 20 tobramycin Hình 3.1: Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng chất sát khuẩn đến pH 26 dung dịch tobramycin điều kiện LHCT Hình 3.2:Đồ thị biểu diễn thay đổi pH dung dịch tobramycin 29 Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn thay đổi pH dung dịch 32 tobramycin ảnh hưởng chất chống oxy hoá điều kiện LHCT Hình 3.4: Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng khí nitơ đến pH dung 35 dịch tobramycin điều kiện LHCT Hình 3.5: Sắc đồ dung dịch tobramycin chuẩn 37 Hình 3.6: Sắc đồ dung dịch tiêm tobramycin sau đun sôi 10 38 liên tục Hình 3.7: Biểu đồ so sánh hàm lượng tobramycin dung dịch 39 trước sau đun sôi liên tục 10 Hình 3.8: Đồ biểu diễn mức độ giảm hàm lượng tobramycin 39 dung dịch sau đun sôi liên tục 10 đặt vấn đề Kháng sinh loại dược phẩm thiếu phục vụ cho công tác chăm sóc sức khoẻ, Việt nam, tû träng cđa c¸c thc kh¸ng sinh chiÕm 30,99% tổng số thuốc lưu hành [3] Tobramycin kháng sinh thuộc họ aminoglycosid có phổ tác dụng rộng vi khuẩn Gram (+) Gram (-), có tác dụng chủng vi khuẩn kháng thuốc khác, đặc biệt tobramycin có tác dụng Pseudomonas aeruginosa cho hiệu đáp ứng lâm sàng nhanh [25] Chính vậy, tobramycin sử dụng phổ biến điều trị nhiễm khuẩn, nước phát triển nước ta Tobramycin kháng sinh aminoglycosid khác tồn dung dịch dạng cation phân cực cao khó hấp thu theo đường uống Do dạng bào chế thường gặp thuốc tiêm thuốc nhỏ mắt Tại thời điểm nay, thị trường Việt nam thuốc tiêm tobramycin chđ u nhËp khÈu ch­a thÊy cã c¬ së nước sản xuất Xuất phát từ yêu cầu trên, lựa chọn đề tài Nghiên cứu bào chế thc tiªm tobramycin” víi mơc tiªu chÝnh: - Nghiªn cứu xây dựng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2ml - Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở bước đầu theo dõi độ ổn định chế phẩm CHƯƠNG I TổNG QUAN 1.1 Đại cương tobramycin 1.1.1 Công thức NH2 NH2 OH H2N OH O O H2N OO OH OH OH NH2 - Công thức phân tử : C 18 H 37 N O [15], [31],[39], [44], [45] - Khối lượng phân tử: 467,52 [15], [31],[39], [44], [45] - Tªn khoa häc: 4-O-(3-amino-3-deoxy-α-D-glucopyranosyl)-2-deoxy-6-O (2,6-diamino-2,3,6-trideoxy-α-D-ribo-hexopyranosyl)-L-Streptamine [15] - TÝnh chÊt : tobramycin bột màu trắng trắng ngà, không mùi 20 có mùi khó chịu, D : + 129 , tan n­íc (1/1,5), Ýt tan methanol, tan ethanol (1/2000), đặc biệt không tan ether, cloroform, tổng hợp phương pháp vi sinh vi khuẩn Streptomyces tenebrarius hay phương pháp khác [44] Công thức phân tö cã nhãm –NH , nhãm –OH liên kết osid nên dễ bị oxy hoá, thuỷ phân môi trường kiềm - pH: dung dịch tobramycin 10% n­íc cã pH: 9-11 [15] 39 Hình 3.7: Biểu đồ so sánh hàm lượng tobramycin dung dch trước sau đun sôi liên tục 10 giê 4,5 3,81 3,5 2,5 2,6 2,26 2,18 2,41 2,38 2,45 1,5 0,5 M ứ CT 7.2 CT 7.3 CT 7.4 CT7, có N, CT7, khơng CT7, có Bluramycin ống khơng N, ống N,ống mu mu khụng mu Hình 3.8: Đồ thị biểu diễn mức độ giảm hàm lượng tobramycin dung dch sau đun sôi liên tục 10 Từ kết thực nghiệm cho thấy khác biệt nhiều loại ống thuỷ tinh sử dụng (ống không mu ống màu nâu) điều kiện nghiên cứu Điều chứng tỏ có ảnh hưởng ánh sáng đến chất lượng dung dch tobramycin, lựa chọn dùng ống thuỷ tinh không màu để đóng thuốc tiêm tobramycin 40 NhËn xÐt: dung dÞch tobramycin pha theo CT7 đóng ống thuỷ tinh không màu, đóng ống có sục khí ni tơ có chất lượng ổn định, đạt yêu cầu sau tháng bảo quản điều kiện: bình thường lão hoá cấp tốc Chúng lựa chọn bào chế thuốc tiêm tobramycin theo CT7, đóng ống thuỷ tinh không màu, đóng ống có sục khí nitơ để pha chế mẻ theo dõi độ ổn định xây dựng quy trình bào chế (phụ lục 3) 3.1.2 Kết xây dựng tiêu chuẩn sở cho dung dịch tiêm tobramycin 3.1.2.1 Sơ so sánh kết định lượng tobramycin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (SKLHNC) phương pháp vi sinh vật (VSV) Để đánh giá phương pháp định lượng tobramycin dung dịch thuốc tiêm, tiến hành song song phương pháp mẫu thuốc, thực nghiệm tiến hành 11 mẫu, có mẫu biệt dược Kết thực nghiệm ghi bảng 3.16; hình 3.9 105 Hàm lư ng tobramycin (%) ợ 102,55 100 101,31 99,6999,38 102,24 100,58 99,18 98,13 95,87 101,61 101,7 99,2199,25 96,97 95,37 98,73 102,58 100,75 99,91 99,55 96,18 HPLC VSV 95 92,54 90 nj tI in yc ulp s m n lu yci Ỵ B m am i br lạ ẻ To im ,p lạ T7 ê C gi m Ỵ i ,p 10 T7 a lạ ôi u C ,s h ầ ,p gN nđ a n T7 C , b iờ hô N ,k g g T7 «n C i1 h sô u ,k , N T7 đầ C có n ba 7, N T iê C cã g 7, i1 T sô u C ầ 2, n đ ba T C T C H×nh 3.9: BiĨu đồ so sánh kết định lượng tobramycin dung dch phương pháp SKLHNC VSV 41 Bảng 3.16: So sánh kết định lượng tobramycin phương pháp SKLHNC VSV Hàm lượng tobramycin (%) CT Phương pháp Phương pháp Chênh lệch SKLHNC VSV C CT 7.2, ban đầu 98,13 101,31 3,18 CT 7.2 đun sôi 10h 95,87 99,69 3,82 CT 7, có nitơ, ban đầu 99,38 102,55 3,17 CT 7, có nitơ, đun sôi 10h 96,97 100,58 3,61 CT7, không nitơ, ban đầu 99,18 102,24 3,06 CT7, không nitơ, đun sôi 10h 95,37 99,21 3,84 CT7, pha lại mẻ 99,25 101,61 2,36 CT7, pha lại mẻ 98,73 101,70 2,97 CT7, pha lại mẻ 99,55 100,75 2,25 BiƯt d­ỵc Tobramycin sulphat Inj 92,54 96,18 3,64 Biệt dược Brulamycin 99,91 102,58 2,67 Như vậy, chênh lệch kết định lượng phương pháp không lớn (C #3%); kết định lượng phương pháp VSV lớn kết định lượng phương pháp SKLHNC tất mẫu Vì vậy, sơ sử dụng phương pháp định lượng tobramycin nêu 3.1.2.2 Xây dựng tiêu chuẩn quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin Tiến hành pha mẻ thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml theo CT7, mẻ 500 ống Sau kiểm tra số tiêu chất lượng như: cảm quan, độ trong, thể tích, pH, định lượng, độ vô khuẩn Kết trình bày bảng 3.17 Trên sở đó, xây dựng tiêu chuẩn sở cho chế phẩm (phụ lục 4) 42 Bảng 3.17: Kết khảo sát số tiêu chất lượng thuốc tiêm TB Chỉ tiêu MỴ sè MỴ sè MỴ sè TÝnh chất Đạt Đạt Đạt Độ trong, màu sắc Đạt Đạt §¹t pH: 3,5-6 5,0 5,02 5,01 ThĨ tÝch: 2-2,3 ml Đạt Đạt Đạt Định lượng: 90,0 120,0% 99,88 99,38 99,55 Độ vô khuẩn Đạt Đạt Đạt Ba mẻ thuốc tiêm tobramycin tương đối đồng chất lượng Từ ®ã rót kÕt ln: cã thĨ sư dơng c«ng thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml nghiên cứu; tiêu chuẩn chất lượng dự thảo phù hợp với chế phẩm nghiên cứu số dược điển giới 3.1.3 Kết nghiên cứu sơ độ ổn định dung dịch tiêm tobramycin Trong điều kiện thời gian có hạn, để đánh giá độ ổn định thuốc tiêm tobramycin, sử dụng phương pháp lão hoá cấp tốc bảo quản thuốc tủ vi khí hậu điều kiện bình thường phòng thí nghiệm ghi mục 2.4.3 Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin ghi bảng từ 3.18 đến 3.23 Bảng 3.18: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml, mẻ 1, điều kiện bảo quản (302)0C Chỉ tiêu Ban đầu tháng tháng tháng Tính chất Đạt Đạt Đạt Đạt Độ trong, màu sắc Đạt Đạt Đạt Đạt pH: 3,5 - 5,0 5,0 4,99 4,97 ThÓ tÝch: 2-2,3 ml Đạt Đạt Đạt Đạt 99,75 99,53 99,32 Đạt Đạt Đạt Định lượng: 90,0 120,0% 99,88 Độ vô khuẩn Đạt 43 Bảng 3.19: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml, mẻ 2, điều kiện bảo quản (302)0C Chỉ tiêu Ban đầu tháng tháng tháng Tính chất Đạt Đạt Đạt Đạt Độ trong, màu sắc Đạt Đạt Đạt Đạt pH: 3,5 - 5,02 5,0 4,99 4,99 ThÓ tÝch: 2-2,3 ml Đạt Đạt Đạt Đạt Định tính Đúng Đúng Đúng Đúng Định lượng: 90,0 99,38 99,25 99, 98,88 Đạt Đạt Đạt Đạt 120,0% Độ vô khuẩn Bảng 3.20: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml, mẻ 3, điều kiện bảo quản (302)0C Chỉ tiêu Ban đầu tháng tháng tháng Cảm quan Đạt Đạt Đạt Đạt Độ trong, màu sắc §¹t §¹t §¹t §¹t pH: 3,5 - 5,01 4,99 4,99 4,99 Thể tích: 2-2,3 ml Đạt Đạt Đạt Đạt Định lượng: 90,0 120,0% 99,55 99,35 99,35 99,05 Độ vô khuẩn Đạt Đạt Đạt Đạt Bảng 3.21: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml, mẻ 1, điều kiện bảo quản (402)0C Chỉ tiêu Ban đầu tháng tháng tháng Cảm quan Đạt Đạt Đạt Đạt Độ trong, màu sắc Đạt Đạt §¹t §¹t pH: 3,5 - 5,0 4,99 4,94 4,94 Thể tích: 2-2,3 ml Đạt Đạt Đạt Đạt Định lượng:90,0 99,88 99,43 99,21 98,89 120,0% 44 Độ vô khuẩn Đạt Đạt Đạt Đạt Bảng 3.22: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml, mẻ 2, điều kiện bảo quản (402)0C Chỉ tiêu Ban đầu tháng tháng tháng Cảm quan Đạt Đạt Đạt Đạt Độ trong, màu sắc Đạt Đạt Đạt Đạt pH: 3,5 - 5,02 5,01 5,0 4,99 ThÓ tÝch: 2-2,3 ml Đạt Đạt Đạt Đạt Định lượng: 90,0 99,38 99,15 98,65 98,37 Đạt Đạt Đạt Đạt 120,0% Độ vô khuẩn Bảng 3.23: Kết theo dõi độ ổn định thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml, mẻ 3, điều kiện bảo quản (402)0C Chỉ tiêu Ban đầu tháng tháng tháng Cảm quan Đạt Đạt Đạt Đạt Độ trong, màu sắc Đạt Đạt Đạt Đạt pH: 3,5 - 5,01 5,0 5,0 4,98 ThÓ tÝch: 2-2,3 ml §¹t §¹t §¹t §¹t 99,34 99,94 98,56 §¹t §¹t §¹t Định lượng: 90,0 120,0% 99,55 Độ vô khuẩn Đạt Nhận xét: mẻ pha chế theo CT7, thời hạn bảo quản tháng điều kiện bình thường lão hóa cấp tốc, kết kiểm tra cho thấy chất lượng thuốc tiêm tobramycin đạt tiêu chuẩn sở Tuy nhiên, cần tiếp tục theo dõi độ ổn định chế phẩm đủ thời gian quy định để xác định hạn dùng 3.2 Bàn luận 45 3.2.1 Xây dựng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin Hầu hết công thức thuốc tiêm tobramycin tham khảo có chất chống oxy hoá dùng phenol chất sát khuẩn Trong thời gian ngắn, tiến hành khảo sát ¶nh h­ëng cđa c¸c u tè : chÊt chèng oxy hoá, sục khí nitơ đóng ống, pH, chất bảo quản, loại ống tiêm điều kiện tiệt khuẩn để kiểm chứng Kết bước đầu cho thấy: - Chất chống oxy hoá sục khí nitơ đóng ống có có vai trò quan trọng thuốc tiêm tobramycin Khi thành phần chống oxy hoá dung dịch có màu ánh vàng sau tiệt khuẩn; tiêu pH, hàm lượng tobramycin dung dịch giảm rõ rệt so với dung dịch thành phần có chất chống oxy hoá Mặt khác, phối hợp chÊt chèng oxy ho¸: natri metabisulfit, natri dithionit rongalit với dinatri EDTA tác dụng chống oxy hoá tốt sử dụng đơn lẻ chất Điều phù hợp với lý thuyết, phối hợp hai chế chống oxy hoá thực tế, biệt dược thường sử dụng phối hợp chất chống oxy hoá Khi đóng ống nitơ, tiêu cảm quan dung dịch tiêm tobramycin không thay đổi pH, hàm lượng tobramycin dung dịch giảm rõ rệt cho thấy cần thiết phải sục khí nitơ đuổi oxy đầu ống Sự sai khác tiêu chất lượng thuốc tiêm tobramycin đóng ống thuỷ tinh không màu màu nâu không ®¸ng kĨ cho thÊy ¸nh s¸ng Ýt t¸c ®éng ®Õn độ ổn định dược chất Có thể sử dụng ống màu nâu hay không màu để đóng thuốc Trong thùc tÕ còng thÊy cã h·ng ®ãng èng thủ tinh màu, có hãng đóng ống không màu - pH dung dịch khoảng khảo sát ảnh hưởng đến độ ổn định thuốc tiêm tobramycin Tuy nhiên pH thấp thay đổi tiêu chất lượng dung dịch Để đảm bảo tiêm đỡ đau, pH dung dịch tiêm phải gần với pH sinh lý (pH = 7,4) Kết hợp với yêu cầu số dược điển, lựa chọn pH dung dịch 5- 5,5 Trong đó, biệt dược so sánh có pH dung dịch nằm khoảng 4,5 - 5,2 46 - ChÊt s¸t khn còng có ảnh hưởng định đến chất lượng dung dịch tobramycin Mặc dù, chấtấnát khuẩn (CT4), hay dùng chất sát khuẩn hỗn hợp nipagin nipasol (CT3), dung dịch tobramycin đạt yêu cầu độ vô khuẩn thay đổi tiêu pH, hàm lượng tobramycin lớn so với dung dịch pha chÕ theo c«ng thøc cã phenol Cã thĨ phenol có tính acid góp phần ổn định chất lượng dung dÞch tobramycin - Khi tiƯt khn 1000C/30 hay lọc qua màng 0,2 àm thuốc tiêm tobramycin đạt yêu cầu độ vô khuẩn Để đảm bảo an toàn tuyệt đối sử dụng thuốc, sản xuất thuốc sở chưa đạt GMP dùng phương pháp tiƯt khn b»ng nhiƯt 1000C/30 phót, víi c¬ së GMP dùng phương pháp tiệt khuẩn màng lọc Do thời gian có hạn, đánh giá chất lượng thuốc dựa tiêu cảm quan, pH dung dịch, hàm lượng tobramycin Vì vậy, cần tiếp tục đánh giá độ ổn định hoá học, vật lý sinh häc cđa dung dÞch thc thêi gian quy định 3.2.2 Xây dựng tiêu chuẩn sở thuốc tiêm tobramycin 80 mg/ 2ml - Do đặc tính dược chất tobramycin phổ hấp thụ đặc hiệu, khó khăn cho việc định lượng Một số dược điển đưa phương pháp định lượng chủ yếu : xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp vi sinh vật sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng phương pháp tạo dẫn xuất trước cột, hai phương pháp tiến hành phức tạp Theo tài liệu tham khảo, có số công trình nghiên cứu định lượng tobramycin chế phẩm hai phương pháp nêu (xem mục 1.1.6) Tuy nhiên, điều kiện Việt nam chưa cho phép áp dụng phương pháp đòi hỏi thiết bị đắt tiền hoá chất đặc biệt Chính tôn trọng sử dụng phương pháp xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp khả thi thực xí nghiệp Bên cạnh tiến hành định lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, tạo dÉn xt sau cét, thùc hiƯn t¹i ViƯn KiĨm nghiƯm 47 Đồng thời tiến hành sơ so sánh kết phương pháp định lượng mẫu bao gồm mẫu nghiên cứu biệt dược lưu hành thị trường Kết cho thấy chênh lệch hàm lượng phương pháp không lớn mÉu (#3%) Nh­ vËy, cã thÓ dïng mét hai phương pháp nói để định lượng tobramycin thuốc tiêm dung dịch - Trên sở phương pháp định lượng nêu tài liệu tham khảo quy trình bào chế, dự thảo xây dựng tiêu chuẩn sở, kiểm nghiệm mẻ thuốc tiêm tobramycin pha theo CT7 Kết mẻ thuốc tiêm tobramycin tương đối đồng chất lượng 3.2.3 Độ ổn định thuốc Chúng tiến hành theo dõi độ ổn định mẻ thuốc bào chế lại theo CT7 Do thời gian có hạn mẫu theo dõi thời gian tháng Đa số biệt dược tobramycin có hạn dùng năm Vì vậy, kết luận CT đề xuất đạt yêu cầu thời gian nghiên cứu Cần tiếp tục theo dõi độ ổn định theo thời gian quy định để xác định tuổi thọ chế phẩm nghiên cứu 48 Phần kết LUậN Và Đề XT 4.1 KÕt ln Sau thêi gian nghiªn cøu, chóng sơ rút số kết luận sau: * Về xây dựng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm dung dịch tobramycin 80 mg/2 ml - ¶nh h­ëng cđa chÊt chèng oxy ho¸: sư dơng c¸c chÊt chèng oxy ho¸: natri metabisulfit, natri EDTA, natri dithionit, rongalit để khảo sát Kết cho thấy: mức độ ổn định dung dịch xếp theo thứ tự CT7.3 (natri dithionit+ natri EDTA) > CT7 (natri metabisulfit +natri EDTA) > CT7.4 (rongalit+natri EDTA) > CT7.2 (natri metabisulfit) > CT7.1 (không có chất chống oxy hoá) Đã lựa chọn hỗn hợp natri metabisulfit 0,32% natri EDTA 0,01% - ảnh hưởng pH: khảo sát dung dịch có pH khoảng 3,0 đến 7,0 Trong khoảng pH khảo sát, dung dịch tobramycin ổn định vật lý hoá học - ảnh hưởng chất sát khuẩn: nghiên cứu dùng chất sát khuẩn khác nhau: phenol, hỗn hợp nipagin nipasol Kết cho thấy: mức độ ổn định dung dịch xếp theo thứ tự CT1 CT2 (phenol) > CT3 (nipagin+nipasol) > CT4 (không có chất sát khn) §· lùa chän phenol víi tû lƯ 0,5% - ảnh hưởng sục khí nitơ đóng ống: dung dịch tiêm tobramycin sục khí nitơ đóng ống có chất lượng ổn định so với không sục khí nitơ - ảnh hưởng bao bì: thay đổi loại ống thuỷ tinh không màu hay màu nâu ảnh hưởng đến chất lượng dung dịch tiêm tobramycin Vì vậy, sử dụng ống thuỷ tinh không màu hay ống màu để đựng thuốc - ảnh hưởng phương pháp tiệt khuẩn: dùng hai phương pháp tiệt khuẩn: 1000C/30 phút hay lọc qua màng 0,2 àm 49 - Từ kết nghiên cứu, xây dựng công thức thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml: Tobramycin 80 mg Natri metabisulfit 6,4 mg Dinatri EDTA 0,2 mg Phenol 10 mg Dung dÞch NaOH M H SO M vđ để pH 5,0 Nước cất pha tiêm vđ 2ml - Dự thảo quy trình bào chế (phụ lục 3) * Về xây dựng tiêu chuẩn sở thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2 ml đánh giá độ ổn định thuốc + Đã xây dựng tiêu chuẩn sở cho thuốc tiêm tobramycin (phụ lục 4) + Bước đầu theo dõi độ ổn định chế phẩm Sau tháng theo dõi điều kiện thường lão hóa cấp tốc, mẫu thuốc tiêm nghiên cứu đạt tiêu chuẩn chất lượng 4.2 Đề xuất: Để sớm áp dụng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm dung dịch tobramycin 80 mg/2 ml vào sản xuất, cần tiếp tục nghiên cứu độ ổn định chế phẩm thử nghiệm quy mô pilot Tài liệu tham khảo Tiếng Việt Bộ y tế (2002), Dược điển Việt nam III, Nhà xuất y học, tr PL 16-18, PL84-85, PL95, PL194-201 Bé Y tÕ (2002), D­ỵc th­ quèc gia ViÖt nam, tr 929-931 Cao Minh Quang, (2006), Cơ hội thách thức ngành dược Việt nam trước thềm hội nhập WTO Trần Thị Minh Thu (2004), Nghiên cứu xây dựng công thức thuốc nhỏ mắt tobramycin 0,3%, Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà nội Trường Đại học Dược Hà nội, Bộ môn Bào chế (2002), Kỹ thuật bào chế sinh dược học dạng thuốc, tr.102-178 Trường Đại học Dược Hà nội, Bộ môn Bào chế (2004), Một số chuyên đề bào chế đại, tr 210-239 Trường Đại học Dược Hà nội, Bộ môn Bào chế (2003), Sinh dược học bào chế, tr 5-54 Trường Đại học Dược Hà nội, Bộ môn Hoá Hữu Cơ (1999), Hoá học Hữu dược, tr.129-143 Trường Đại học Dược Hà nội, Tỉ m«n tin häc (2005), øng dơng tin häc số công tác dược, tr 139-162 10.Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương, (2005), Tạp chí kiểm nghiệm thuốc, tr.14-18 TiÕng Anh 11.Abdulsalam et all, (2002), Determination of gentamicin, tobramycin in urine samples after inhalation by reversed-phase high-performance liquid chromatography using pre-column derivatisation with o-phthalaldehyde, J Chromatograph B, 769, p 89-95 12.G Banker et all, (2002), Modern Pharmaceutics, 3, Marcel Dekker, Inc 13.D.Barends et all, (1987), Fast pre-column derivatization of aminoglycosides with 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene and its application to pharmaceutical analysis, J Pharm Biomed Anal., 5, p 613-617 14.Bilton et al, (2006), Addition of inhaled tobramycin to ciprofloxacin for acute exacerbations of Pseudomonas aeruginosa infection in adult bronchiectasis, Chest, 130, p.1503-1510 15.British Pharmacopoeia, (2005) 16.O Burkhardt et all, (2006), Once-daily tobramycin in cystic fibrosis: better for clinical outcome than thrice-daily tobramycin but more resistance development, J Antimicrob Chemother 58,4, p 822-829 17.C Cannella et al, (2003), Acute renal failure associated with inhaled tobramycin, Ame J Health Syst Pharm., 63, 19, p 1858-1861 18.A Clavel et all, (2006), Neubulisers comparison with inhaled tobramycin in young children with cystic fibrosis, J Pharm Biomed Anal., 42, p 389-390 19.A Dask et all, (1991), A liquid chromatographic method for the determination of tobramycin, J Pharm Biomed Anal., 9, 3, p 237-245 20.H Fabre et all, (1989), Determination of aminoglycosides in pharmaceutical formulations, J Pharm Biomed Anal., 7, p 1711-1718 21.C Feng et all, (2002), Trace analysis of tobramycin in human plasma by derivatization and high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection, J Chromatography B, 780, p 349-354 22.O Felt et all,(1999), Topical use of chitosan in opthalmology: tolerance assessment and evaluation of precorneal retention, Int J Pharm., 180, p.185- 193 23.S Glass et all, (2005), The effects of intravenous tobramycin on renal tubular function in children with cystic fibrosis, J Cys Fib., 4, p 221-225 24.M Guo et all, (2006), Measurement of tobramycin by reversed-phase highperformance liquid chromatography with mass spectrometry detection, Anal Chimica Acta, 571, p 12-16 25.V Hanko et all, (2005), Determination of tobramycin and impurities using high-performance anion exchange chromatography with integrated pulsed amperometric detection, J Pharm Biomed Anal., 40, p.1006-1012 26.E Karpova et all (2004), Sublimation drying of tobramycin sulfates 0,08g Injections in flasks, Pharm Chem J., 38, p 37-39 27.K Kov¸cs et all, (1998), The determination of benzalkonium chlorids in eye-drops by difference spectrophotometry, J Pharm Biomed Anal., 16, p.733-740 28.W Law et all, (2006), Determination of tobramycin in human serum by capillary electrophoresis with contactless conductivity detection, Electrophoresis; 27, p 1932-1938 29.P Le et all (1999), Inhalation of tobramycin in cystic fibrosis, Int J Pharm., 189, p 215-225 30.Z Liu et all, (2005), HPLC determination of vertilmicin, tobramycin in rat plasma using sensitive fluorometric derivatization, J Chromatography B, 828, p 2-8 31.Martindale: The complete drug reference, 34th Ed (2005), p.264, 212-215 32.C Mugabe et all (2006), Preparation and characterization of dehydrationrehydration vesicles loaded with aminoglycoside and macrolide antibiotics, Int J Pharm., 307, p 244-250 33.R Nageswara (2003), An overview of the recent trends in development of HPLC methods for determination of impurities in drugs, J Pharm Biomed Anal., 33, p 335-377 34.S Nan et all, (2006), Adosortive stripping voltammetric technique for the rapid determination of tobramycin on the hanging mecury eletrode, Anal Chimica Acta, 571, p 112-116 35.P Newswire, (2006), ISTA pharmaceutical files new drug application with US FDA for T-Pred, available at www.tobramycin.com 36.B Pai et all (2006), Efficacy and Safety of Aerosolized Tobramycin in Cystic Fibrosis, Ped Pul., 32, p.314-327 37.B Patrick et all, (2006), Acute renal failure associated with vancomycin and tobramycin, Ann Pharmacother., 40, p.2037-2042 38.G Pilcer et all(2005), Formulation and characterization of Lipid-coated tobramycin particles for dry powder inhalation, Pharm Res., 23, p.931-940 39.Remingtons:The Science and Practice of Pharmacy,(2000), 20thEd., p.1183 40.W Sakchai et all (2002), Freeze-drying of tert-Butanol/Water cosolvent systems: a case report on formation of a friable freeze-dried powder of tobramycin sulfate, J Pharm Sci., 91, 4, p 1147-1155 41.J Shalini, (2002), HPLC separation of antibiotics present in formulated and unformulated samples, J Pharm Biomed Anal., 28, p.795-809 42.J Straikovic et all , (2000), Application of spectrophotometric method with palladium (II) chloride for determination of tobramycin in pharmaceutical dosage forms, J Pharm Biomed Anal., 23, p 991-994 43.J.Szónyog et all (2000), Analysis of tobramycin by liquid chromatography with pulsed electrochemical detection, J.Pharm.Biomed.Anal., 23,p 891-896 44.The Merck index, 33th Ed., (2002), Merck & Co Inc, p.1692 45.The United States Pharmacopoeia, 28, 2005 46.C Waterman et all (2002), Stabilization of Pharmaceuticals to Oxidative Degration, Pharm Dev Tech., 7, p 1-32 ... trên, lựa chọn đề tài Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm tobramycin với mục tiêu chính: - Nghiên cứu xây dựng công thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin 80 mg/2ml - Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn... thức quy trình bào chế thuốc tiêm tobramycin 2.3.2 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho thuốc tiêm tobramycin Nghiên cứu lựa chọn phương pháp định lượng tobramycin dung dịch thuốc tiêm Kiểm định,... kết nghiên cứu tobramycin Tobramycin sử dụng phổ biến nước ta giới Một số công trình nghiên cứu bào chế, kiểm nghiệm sử dụng thuốc tác giả giới công bố Tuy nhiên, nước tài liệu nghiên cứu dạng bào