NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC MỘT SỐ THỰC VẬT CÓ KHẢ NĂNG LÀM TRẮNG DA

quả được coi là nguồn nguyên liệu tự nhiên quý trong việc làm đẹp da, loại bỏ vết thâm nám, tàn nhang trên da. Chính vì vậy, việc ứng dụng các hoạt chất từ thiên nhiên vào sản phẩm mỹ phẩm đang là xu hướng được ưa chuộng và ngày càng phát triển. Tuy đó chỉ là kinh nghiệm của y học dân gian nhưng cũng cần có những nghiên cứu cụ thể để làm sáng tỏ, kiểm chứng các tác dụng, góp phần tạo sự tiến bộ trong y học. Để góp phần cung cấp những cơ sở tiền đề cho việc ứng dụng nguyên liệu tự nhiên vào các mỹ phẩm chăm sóc sắc đẹp, đề tài lựa chọn 8 loại thảo mộc phổ biến trong dân gian để khảo sát hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase bao gồm: quả dâu tằm, củ đậu, rễ cam thảo, hoa kim ngân, hoa hòe, hoa cúc, khổ qua rừng và đu đủ. Các loại thảo mộc này thường được dân gian sử dụng để chăm sóc da như: xay nhuyễn làm mặt nạ, nấu nước tắm hoặc xông hơi, uống trà. Một vài thảo mộc trong số những loại này đã được nghiên cứu và công nhận về hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase ở ngoài nước cũng như trong nước, tuy nhiên vẫn còn một sốquả được coi là nguồn nguyên liệu tự nhiên quý trong việc làm đẹp da, loại bỏ vết thâm nám, tàn nhang trên da. Chính vì vậy, việc ứng dụng các hoạt chất từ thiên nhiên vào sản phẩm mỹ phẩm đang là xu hướng được ưa chuộng và ngày càng phát triển. Tuy đó chỉ là kinh nghiệm của y học dân gian nhưng cũng cần có những nghiên cứu cụ thể để làm sáng tỏ, kiểm chứng các tác dụng, góp phần tạo sự tiến bộ trong y học. Để góp phần cung cấp những cơ sở tiền đề cho việc ứng dụng nguyên liệu tự nhiên vào các mỹ phẩm chăm sóc sắc đẹp, đề tài lựa chọn 8 loại thảo mộc phổ biến trong dân gian để khảo sát hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase bao gồm: quả dâu tằm, củ đậu, rễ cam thảo, hoa kim ngân, hoa hòe, hoa cúc, khổ qua rừng và đu đủ. Các loại thảo mộc này thường được dân gian sử dụng để chăm sóc da như: xay nhuyễn làm mặt nạ, nấu nước tắm hoặc xông hơi, uống trà. Một vài thảo mộc trong số những loại này đã được nghiên cứu và công nhận về hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase ở ngoài nước cũng như trong nước, tuy nhiên vẫn còn một sốquả được coi là nguồn nguyên liệu tự nhiên quý trong việc làm đẹp da, loại bỏ vết thâm nám, tàn nhang trên da. Chính vì vậy, việc ứng dụng các hoạt chất từ thiên nhiên vào sản phẩm mỹ phẩm đang là xu hướng được ưa chuộng và ngày càng phát triển. Tuy đó chỉ là kinh nghiệm của y học dân gian nhưng cũng cần có những nghiên cứu cụ thể để làm sáng tỏ, kiểm chứng các tác dụng, góp phần tạo sự tiến bộ trong y học. Để góp phần cung cấp những cơ sở tiền đề cho việc ứng dụng nguyên liệu tự nhiên vào các mỹ phẩm chăm sóc sắc đẹp, đề tài lựa chọn 8 loại thảo mộc phổ biến trong dân gian để khảo sát hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase bao gồm: quả dâu tằm, củ đậu, rễ cam thảo, hoa kim ngân, hoa hòe, hoa cúc, khổ qua rừng và đu đủ. Các loại thảo mộc này thường được dân gian sử dụng để chăm sóc da như: xay nhuyễn làm mặt nạ, nấu nước tắm hoặc xông hơi, uống trà. Một vài thảo mộc trong số những loại này đã được nghiên cứu và công nhận về hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase ở ngoài nước cũng như trong nước, tuy nhiên vẫn còn một sốquả được coi là nguồn nguyên liệu tự nhiên quý trong việc làm đẹp da, loại bỏ vết thâm nám, tàn nhang trên da. Chính vì vậy, việc ứng dụng các hoạt chất từ thiên nhiên vào sản phẩm mỹ phẩm đang là xu hướng được ưa chuộng và ngày càng phát triển. Tuy đó chỉ là kinh nghiệm của y học dân gian nhưng cũng cần có những nghiên cứu cụ thể để làm sáng tỏ, kiểm chứng các tác dụng, góp phần tạo sự tiến bộ trong y học. Để góp phần cung cấp những cơ sở tiền đề cho việc ứng dụng nguyên liệu tự nhiên vào các mỹ phẩm chăm sóc sắc đẹp, đề tài lựa chọn 8 loại thảo mộc phổ biến trong dân gian để khảo sát hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase bao gồm: quả dâu tằm, củ đậu, rễ cam thảo, hoa kim ngân, hoa hòe, hoa cúc, khổ qua rừng và đu đủ. Các loại thảo mộc này thường được dân gian sử dụng để chăm sóc da như: xay nhuyễn làm mặt nạ, nấu nước tắm hoặc xông hơi, uống trà. Một vài thảo mộc trong số những loại này đã được nghiên cứu và công nhận về hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase ở ngoài nước cũng như trong nước, tuy nhiên vẫn còn một số

MỤC LỤC

DANH MỤC HÌNH

DANH MỤC BẢNG

MỞ ĐẦU 1

Chương 1: TỔNG QUAN 2

1.1. Hoạt chất trắng da 2

1.1.1. Sắc tố melanin 2

1.1.2. Các cơ chế làm trắng da 4

1.1.3. Một số chất có khả năng ức chế enzyme tyrosinase phổ biến 5

1.1.3.1. Các chất có nguồn gốc tự nhiên 5

1.1.3.2. Các chất có nguồn gốc tổng hợp 7

1.2. Khảo sát một số loài thực vật có khả năng ức chế enzyme tyrosinase 10

1.2.1. Tổng quan về khả năng ức chế enzyme tyrosinase của thực vật 10

1.2.2. Khảo sát 8 mẫu thực vật 12

1.2.2.1. Quả dâu tằm 12

1.2.2.2. Củ đậu 15

1.2.2.3. Rễ cam thảo 16

1.2.2.4. Hoa kim ngân 18

1.2.2.5. Hoa hòe 19

1.2.2.6. Hoa cúc 21

1.2.2.7. Khổ qua rừng 24

1.2.2.8. Đu đủ 25

Chương 2: ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN 26

2.1. Mục tiêu nghiên cứu và đối tượng nghiên cứu 26

2.2. Nội dung nghiên cứu 26

2.3. Phương pháp nghiên cứu 27

2.3.1. Xử lí nguyên liệu 27

2.3.2. Phương pháp đo độ ẩm 27

2.3.3. Khảo sát sơ bộ thực vật 28

2.3.4. Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học 29

Phương pháp định lượng hàm lượng polyphenol tổng Chương 3: KẾT QUẢ SƠ BỘ 35

3.1. Kết quả sàng lọc 35

TÀI LIỆU THAM KHẢO 37

DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Quy trình sinh tổng hợp melanin [6] 3

Hình 1.2: Cơ chế phản ứng của chất ức chế thuận nghịch [12] 5

Hình 1.3: Một số chất có khả năng làm trắng da 9

Hình 1.4: Quả dâu tằm 12

Hình 1.5: Củ đậu 14

Hình 1.6: Rễ cam thảo 16

Hình 1.7: Hoa kim ngân 18

Hình 1.8: Nụ hoa hòe 19

Hình 1.9: Một số hợp chất được phân lập từ hoa hòe 21

Hình 1.10: Hoa cúc 21

Hình 1.11: Khổ qua rừng 24

Hình 1.12: Quả đu đủ 25

Hình 2.1: Tóm tắt nội dung nghiên cứu 27

Hình 2.2: Quy trình đo enzyme tyrosinase 30

Hình 2.3: Phản ứng của gốc tự do DPPH và chất chống oxy hóa 32

Hình 2.4: Quy trình đánh giá khả năng kháng oxy hóa DPPH 32

Hình 2.5: Xác định đường kính kháng khuẩn khuếch tán trong thạch 33

Hình 2.6: Quy trình đo hàm lượng phenol tổng 34

DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Khả năng ức chế enzyme tyrosinase của một số thực vật [30] 10

Bảng 1.2: Khả năng ức chế enzyme tyrosinase và kháng oxi hóa của một số thực vật [31] 11

Bảng 1.3: Một số thành phần trong quả dâu tằm [37] 14 Bảng 1.4: Hàm lượng phenolic của hoa, lá và cành của cây kim ngân [47] 19 Bảng 1.5: Một số thành phần trong hoa cúc [53] 22 Bảng 1.6: Hàm lượng phenolic, flavonoid và khả năng kháng oxi hóa của các bộ phận

cây đu đủ [59] 25

Bảng 2.1: Các thông số đo enzyme tyrosinase 31 Bảng 3.1: Kết quả khảo sát khả năng ức chế enzyme tyrosinase của cao chiết EtOH

tuyệt đối của một số loại thảo mộc tại nồng độ 1000 µg/ml 35

Bảng 3.2: Khảo sát khả năng ức chế enzyme tyrosinase của cao chiết EtOH tuyệt đối

của các độ chín khác nhau của quả dâu tằm 1000 µg/ml 36

MỞ ĐẦU

Từ xa xưa, con người đã biết sử dụng các bộ phận của các loại thảo mộc để làm ranhững bài thuốc chữa bệnh hay thay thế cho các mỹ phẩm làm đẹp Ngày nay, xã hộingày càng phát triển và hiện đại, vì vậy nhu cầu làm đẹp của con người tăng lên, đồngthời con người ngày càng có xu hướng tìm về với tự nhiên để tìm kiếm giải pháp làmđẹp an toàn, hiệu quả và tiện lợi Bởi vì họ tin rằng trong bản thân từng cây, từng hoạt

tính sinh học đã được dân gian truyền lại từ xa xưa, hơn nữa các chất trong đó cũng hỗtrợ nhau trong việc chữa bệnh cũng như làm giảm tối đa các tác dụng phụ nếu có Các

bộ phận như lá, hoa, quả được coi là nguồn nguyên liệu tự nhiên quý trong việc làmđẹp da, loại bỏ vết thâm nám, tàn nhang trên da Chính vì vậy, việc ứng dụng các hoạtchất từ thiên nhiên vào sản phẩm mỹ phẩm đang là xu hướng được ưa chuộng và ngàycàng phát triển Tuy đó chỉ là kinh nghiệm của y học dân gian nhưng cũng cần cónhững nghiên cứu cụ thể để làm sáng tỏ, kiểm chứng các tác dụng, góp phần tạo sựtiến bộ trong y học

Để góp phần cung cấp những cơ sở tiền đề cho việc ứng dụng nguyên liệu tự nhiên vàocác mỹ phẩm chăm sóc sắc đẹp, đề tài lựa chọn 8 loại thảo mộc phổ biến trong dângian để khảo sát hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase bao gồm: quả dâu tằm, củ đậu, rễcam thảo, hoa kim ngân, hoa hòe, hoa cúc, khổ qua rừng và đu đủ Các loại thảo mộcnày thường được dân gian sử dụng để chăm sóc da như: xay nhuyễn làm mặt nạ, nấunước tắm hoặc xông hơi, uống trà Một vài thảo mộc trong số những loại này đã đượcnghiên cứu và công nhận về hoạt tính ức chế enzyme tyrosinase ở ngoài nước cũngnhư trong nước, tuy nhiên vẫn còn một số loài chưa được nghiên cứu

Chương 1 TỔNG QUAN

1.1. Hoạt chất trắng da

1.1.1. Sắc tố melanin

Sắc tố melanin (hắc tố) được tạo ra bởi nhóm các tế bào chuyên biệt gọi là tế bào biểu

bì tạo hắc tố, chủ yếu nằm trong da, lông và mắt [1] Ước tính trên 1 mm2 bề mặt da cókhoảng 1100 - 1500 tế bào biểu bì tạo hắc tố Các tế bào này có chứa melanosome là

nơi sinh tổng hợp melanin Có ba loại melanin cơ bản là: eumelanin, pheomelanin vàneuromelanin, trong đó eumelanin là sắc tố chính tạo nên màu da Các sắc tố này đóngvai trò quan trọng trong việc hấp thu gốc tự do và ngăn cản ảnh hưởng của các bức xạ

UV [2]

Trong da, sự hình thành hắc tố xảy ra sau khi tiếp xúc với bức xạ tia cực tím khiến làn

da chuyển màu rám nắng mặt trời rõ ràng Melanin là một chất hấp thụ ánh sáng hiệuquả, có thể làm tiêu tan hơn 99,9% tia UV hấp thụ [3] Bởi vì đặc tính này, melaninđược cho là bảo vệ tế bào da khỏi tác hại bức xạ UV, giảm nguy cơ ung thư da Tuynhiên, việc tích tụ một lượng melanin bất thường trong da có thể gây ra các vấn đề về

da như nám, tàn nhang, đồi mồi, lão hóa da… Ở các nước phương Tây, chất làm sáng

da được ứng dụng để phòng ngừa và điều trị việc tăng sắc tố không đều [4] Quá trìnhhình thành melanin trong các dạng cơ thể sống khác nhau đã được nghiên cứu lần đầutiên bởi Raper năm 1928, sau đó là nghiên cứu của Mason vào năm 1948 và Lernercùng các cộng sự năm 1949 (hình 1.1) [5]

Hình 1.1: Quy trình sinh tổng hợp melanin [6].

Enzyme quan trọng liên quan đến sự tổng hợp của tất cả các loại melanin từ tiền chấtban đầu nhất (tyrosine) chính là enzyme tyrosinase (EC 1.14.18.1), do đó ức chếenzym này làm giảm hình thành sắc tố da [7] Enzyme tyrosinase được tìm thấy trongnhiều chủng loài bao gồm động vật hữu nhũ, các động vật bậc thấp, thực vật và kể cảnấm Thực ra các quan sát sớm nhất về chức năng xúc tác của enzyme tyrosinase chính

là từ chiết xuất của nấm [8], và nấm vẫn còn được sử dụng rộng rãi cho đến ngày naynhư là nguồn cung cấp dồi dào loại enzyme này

Theo quy trình trong hình 1.1, để tổng hợp nên melanin, đầu tiên, các sắc tố eumelanin

và pheomelanin có bản chất là các amino acid tyrosine sẽ được oxy hóa bởi enzymetyrosinase tạo thành 3,4-dihydroxyphenyl alanine (Dopa) Dopa bị oxy hóa thànhdopaquinone và quá trình xảy ra nhanh hơn khi có mặt enzyme tyrosinase [9].Dopaquinone là một chất có khả năng phản ứng cao và có thể tự oxy hóa thànhdopachrome, sau đó chuyển thành dihydroxyindole (DHI) hoặc dihydroxyindole-2-carboxylic acid (DHICA) để cuối cùng tạo thành eumelanin, sắc tố nâu - đen Nếu cómặt cysteine hoặc glutathione, dopaquinone sẽ chuyển thành cysteinyl dopa hoặcglutathione dopa và tạo thành pheomelanin, sắc tố vàng - đỏ [10]

1.1.2. Các cơ chế làm trắng da

Mục đích của các chất làm trắng da là giảm sự có mặt của melanin trong da [11].Các hoạt chất ức chế enzyme tyrosinase được chia thành 4 nhóm chính:

Chất ức chế kiểu cạnh tranh: Các hợp chất ức chế cạnh tranh sẽ liên kết với một loại

enzyme tự do có vai trò cản trở việc liên kết với cơ chất Ở đây, các chất ức chế và cơchất loại trừ lẫn nhau, thường là bởi chúng cạnh tranh cho cùng một vị trí Các chất ứcchế cạnh tranh dùng làm đẹp da thường sẽ là một hợp chất hữu cơ có liên kết Cu hoặcmột dẫn xuất từ chính cơ chất đó [12]

Chất ức chế không cạnh tranh: Chất ức chế chỉ bám vào phức hợp enzyme – cơ chất,

sản phẩm P không được tạo thành (hình 1.2) [12]

Chất ức chế hỗn hợp: Chất ức chế này vừa liên kết với một enzyme tự do vừa liên kết

với phức hợp enzyme - cơ chất Phần lớn ở các loại hỗn hợp này, thế liên kết cân bằngcủa chúng cho mỗi loại enzyme khác nhau và hoạt động độc lập [12]

Chất ức chế cân bằng: Là một trường hợp đặc biệt của chất ức chế hỗn hợp khi liên

kết của chúng với enzyme tự do và enzyme chất nền có thể liên kết cân bằng giốngnhư nhau [12]

Hình 1.2: Cơ chế phản ứng của chất ức chế thuận nghịch [12].

Trong đó: E, S, I, và P lần lượt là enzyme, cơ chất, chất ức chế, và sản phẩm tương ứng; ES là phức hợp enzyme - cơ chất, EI và ESI lần lượt là phức hợp enzyme - chất

Sự giống nhau về cấu trúc giữa HQ và các tiền chất của quá trình tổng hợp melanincho phép HQ tương tác với tyrosinase Sự tương tác này xảy ra do HQ kết hợp vớihistidine hoặc đồng ở vị trí hoạt động của enzyme Thêm vào đó, HQ gây ra sự hìnhthành các loại oxy hoạt tính và quinones dẫn tới sự oxy hoá lipid màng và protein nhưtyrosinase Hydroquinone cũng có thể ức chế sắc tố bằng cách làm suy giảmglutathione, làm thay đổi sự hình thành melanosome hoặc làm giảm sự tổng hợp DNA

và RNA với sự thoái biến melanosome và phá huỷ tế bào melanocyte [14, 15]

Do những rủi ro mà tác dụng phụ gây ra như ochronosis ngoại sinh và mất sắc tố vĩnhviễn khi sử dụng trong thời gian dài, hydroquinone đã bị cấm tại Liên minh Châu Âu(24th Dir 2000/6/EC) Những sản phẩm có chứa thành phần hydroquinone theo quyđịnh cũng chỉ được cấp theo toa [14, 15].

b Arbutin (2)

Arbutin (hydroquinone-β-D-glucopyranoside) và các dẫn xuất của arbutin là hoạt chấttrắng da chứa gốc đường được tìm thấy trong nhiều loài thực vật bậc cao như

Arctostaphylos uvaursi (L) Spreng (quả bearberry), Vaccinium vitisidea L (quả

lingonberry), Pyrus communis L (cây lê), …Ngoài ra arbutin còn được tìm thấy trong

một số loài thảo mộc [16]

Arbutin có tác dụng ức chế hoạt động của enzyme tyrosinase trong quy trình sinh tổnghợp tế bào sắc tố melanin Hai dạng của arbutin là α-arbutin và β-arbutin Một nghiêncứu của Funayama và các cộng sự (năm 1995) đã chỉ ra cơ chế của hai dạng arbutinnày, trong khi β-arbutin có khả năng ức chế hoạt tính của cả tyrosinase từ nấm và từ tếbào melanin của chuột theo cơ chế không cạnh tranh, α-arbutin chỉ có khả năng khángtyrosinase từ tế bào melanin của chuột theo cơ chế hỗn hợp [17] Arbutin nồng độ 10-3

M không gây độc tế bào và có khả năng làm sáng da rõ rệt, hiệu quả hơn cả kojic acid

có cùng nồng độ [18]

c Kojic acid (3)

Kojic acid (5-hydoxy-4-pyran-4-one-2-methyl) là một chất ức chế tyrosinase có nguồn

gốc từ các loại nấm đặc biệt như Aspergillus và Penicillium [19] Kojic acid thuộc loại

chất ức chế tyrosinase hỗn hợp với giá trị IC50 = 0,054 mM [20], là chất ức chếtyrosinase tốt nhất nên thường được sử dụng như chất đối chiếu trong các quy trình thửhoạt tính kháng tyrosinase Tuy nhiên, khi sử dụng làm hoạt chất trắng da trong sảnphẩm mỹ phẩm thường kết hợp kojic acid với các thành phần khác để làm giảm nhữngkích ứng không mong muốn

d Vitamin C (4)

Vitamin C ngăn chặn sắc tố bằng cách liên kết với ion đồng ở vị trí hoạt động củatyrosinase và làm giảm sự hình thành dopaquinone Vitamin C từ trái cây và rau củ có

thể không bền, do đó ít được sử dụng trong mỹ phẩm Magnesium L-ascorbic

acid-2-phosphate (MAP), một dẫn xuất bền của vitamin C, được xem là tác nhân làm trắnghiệu quả [13]

e Polyphenol

Một số polyphenol được xem như là cơ chất của enzyme tyrosinase, sự hiện diện và vịtrí của nhóm thế đóng vai trò quyết định đến khả năng ức chế enzyme tyrosinase.Polyphenol thực vật là nhóm các hợp chất có nhiều nhóm chức phenol, tiêu biểu làflavonoid Hơn 4000 flavonoid phân bố trong lá, hạt, vỏ cây và hoa đã được xác định

Ở thực vật các hợp chất này bảo vệ thực vật bằng cách chống lại tia cực tím và tácnhân gây bệnh [21]

Các isoflavone, bao gồm glycitein (5), daidzein (6), và genistein (7) thể hiện khả năng kháng tyrosinase khá thấp, trong khi 6,7,4′-trihydroxyisoflavone (8) có khả năng ức chế tyrosinase mạnh hơn cả kojic acid Các flavanone như naringenin (9), eriodictyol (10) và hesperidin (11) có tác dụng tương tự như hydroquinone [22] Một số flavonoid như kaempferol (12), quercetin (13) và morin (14) (hình 1.3) cũng thể hiện tác dụng ức

chế tyrosinase, trong khi những chất khác, ví dụ catechin và rhamnetin, đóng vai trò làcác cơ chất của tyrosinase Một số nghiên cứu cho thấy rằng flavonoid có chứa nhómα-keto có tác dụng ức chế tyrosinase mạnh [23]

Ngoài dịch chiết Citrus, chiết xuất của loài thuộc chi Morus , cũng được biết đến là

loài cây giàu polyphenol, ngoài việc được sử dụng như một tác nhân điều trị tự nhiênkhông gây hại còn đóng vai trò là tác nhân làm trắng da hiệu quả Mulberroside F

(moracin M-6,3′-di-O-β-glucopyranoside) (15) được tách từ lá cây dâu tằm có tác dụng

ức chế enzyme tyrosinase cao nấm gấp 4,5 lần kojic acid và thể hiện khả năng ức chếảnh hưởng của việc hình thành melanin trong tế bào melanoma [24]

1.1.3.2. Các chất có nguồn gốc tổng hợp

Một lượng đáng kể các hợp chất có nguồn gốc tổng hợp như hydroxylamin, các hợp

chất chứa thiol, acid cacboxylic thơm, dẫn xuất của acid cinnamic (16), chalcone (17), peptid, acid alkylbenzoic [25], N-hydroxy-N’-phenyl ure (18) và N-hydroxyN’-phenyl thioure (19) (hình 1.3) [26] có tác dụng ức chế enzym tyrosinase

Tropolon (2-hydroxy-2,4,6-cycloheptatrien-1-on) (20) là một trong những chất ức chế

tyrosinase mạnh nhất Nó có cấu trúc tương tự như các cơ chất O-diphenolic của tyrosinase [27]

3

1 2 5 4 7

6

11 10

13 12

15 14

16

20

Hình 1.3: Một số chất có khả năng làm trắng da.

1.2. Khảo sát một số loài thực vật có khả năng ức chế enzyme tyrosinase

1.2.1. Tổng quan về khả năng ức chế enzyme tyrosinase của thực vật

Sạm da là một trong những vấn đề thẩm mỹ được con người quan tâm đặc biệt Vì vậyngày càng có nhiều mỹ phẩm làm trắng da, sáng da, giảm vết thâm nám xuất hiện trênthị trường Gần đây, việc sử dụng tiềm năng của các loại thảo mộc thiên nhiên cho mỹphẩm chăm sóc da ngày càng được nhấn mạnh [28] Nhiều nhà nghiên cứu đã nghiêncứu trên nhiều loài thảo mộc khác nhau để tìm ra những hợp chất mới có tác dụngtrong việc ức chế enzyme tyrosinase, làm giảm sắc tố melanin trên làn da con người.Nhiều thành phần có hoạt tính đã được tìm thấy trên nhiều loại thảo mộc như một tácnhân làm trắng da và được ứng dụng vào các mỹ phẩm chăm sóc da [29]

Năm 2007, Jung-Hee Hwang và Byung Mu Lee đã nghiên cứu khảo sát khả năng ứcchế enzyme tyrosinase trên dịch chiết methanol và nước của nhiều loài thảo mộc khácnhau Kết quả cho thấy có nhiều loài có tác dụng ức chế cao tại nồng độ 666,67 µg/ml[30]:

Bảng 1.1: Khả năng ức chế enzyme tyrosinase của một số thực vật [30].

dùng Dịch chiết

Phần trăm ức chếtyrosinase (I%) tại666,67 µg/ml

Ligularia fischeri Asteraceae (họ

Cúc)

Tất cả Methanol 58,76 0,36

Perilla frutescens Lamiaceae (họ

Sophora flavescens Fabaceae (họ

uralensis Fischer

Fabaceae (họĐậu)

Năm 2015, Wang Ya và các cộng sự đã làm thí nghiệm với dịch chiết enthanol 80 của⁰

44 loài thực vật khác nhau, tỉ lệ nguyên liệu khô : dung môi là 1:12 để khảo sát khảnăng kháng enzyme tyrosinase và kháng oxi hóa của chúng Kết quả cho thấy nhiềuloại thực vật có phần trăm ức chế enzyme tyrosinase cao hơn 50% tại nồng độ 2 mg/ml

và khả năng kháng oxi hóa cao khi đối chứng với vitamin C có IC50 = 0.004 mg/ml[31]:

Bảng 1.2: Khả năng ức chế enzyme tyrosinase và kháng oxi hóa của một số thực vật

[31]

Phần trăm ức chếenzyme tyrosinase (I%)

ở nồng độ 2 mg/ml

Khả năng kháng oxihóa IC50 (mg/ml)

Rễ cây cam thảo (Glycyrrhiza

Cây dâu tằm (Morus alba L.) trong sách cổ của Trung Quốc được coi là loài cây quý,

bởi nó có rất nhiều công dụng quý đối với con người, vừa có thể làm thuốc trị bệnh,vừa có thể làm thực phẩm bồi bổ cơ thể Quả dâu tằm được sử dụng như một loại dượcliệu giúp tuần hoàn máu, điều trị suy nhược, mệt mỏi, thiếu máu, tóc bạc sớm, ù tai,chóng mặt ở người cao tuổi [33] Ngoài ra, ăn dâu tằm còn giúp con người có làn dađẹp và khỏe

Năm 2007, Sezai Ercisli , Emine Orhan đã tiến hành nghiên cứu khảo sát hàm lượng

phenolic, flavonoid và fatty acid trên 3 loại quả dâu là Morus alba, Morus rubra

Morus nigra Kết quả cho thấy hàm lượng phenolic trong loài Morus alba là 181 mg

GAE/100g nguyên liệu tươi, hàm lượng flavonoid là 29 mg QE/100g nguyên liệu tươi,hàm lượng linoleic acid (54,2%), palmitic acid (19,8%) and oleic acid (8,41%) [34].Năm 2010, Pornanong Aramwit và các cộng sự đã nghiên cứu hàm lượng

anthhocyanin có trong các độ chín của quả dâu tằm Morus alba bằng phương pháp

biến đổi giá trị pH Kết quả cho thấy quả dâu tằm màu tím có độ chín cao nhất chứahàm lượng anthocyanin là 0,17 mmol CGE/g DW (mmol cyaniding-3-glucoside/1g nguyên liệu khô), cao hơn so với 2 độ chín còn lại Nghiên cứu cũng đã khảo sáthàm lượng anthocyanin trong quả dâu tằm màu tím ảnh hưởng đến khả năng kháng oxihóa của nó với giá trị IC50 = 5 µg/ml [35]

Năm 2018, Halil Koyu, Aslihan Kazan và các cộng sự đã tiến hành khảo sát khả năng

ức chế enzyme tyrosinase dựa trên những hợp chất được phân lập từ quả dâu tằm.Theo nghiên cứu, 5g nguyên liệu khô được chiết với 50ml hỗn hợp dung môi ethanol:nước: TFA (70:29:1), các anthocyanin được đánh giá bằng phương pháp UPLC-DAD-ESI-MS/MS, kết quả phổ cho thấy có 4 anthocyanin chính là cyanidin-3-glucoside,cyanidin-3-rutinoside, pelargonidin-3-glucoside và pelargonidin-3-rutinoside và giá trị

IC50 của thí nghiệm khảo sát khả năng ức chế enzyme tyrosinase là 0,116 mg/ml khi sovới kojic acid là 0,004 mg/ml [36]

Ngoài ra, quả dâu tằm còn chứa các phenolic acid như benzoic và cinnamic acid, cácflavonoid như quercetin glycoside, flavone là những hợp chất có hoạt tính kháng oxihóa, trắng da, kháng viêm, kháng khuẩn, chống nghẽn mạch máu [37]

Quercetin: R1= H, R2 =HQuercetin-3-O-ꞵ-D-glucopyranoside: R1= H,

R2= ꞵ-D-GlcQuercetin 3-O-ꞵ-D-rutinoside: R1= H, R2=α-L-Rha-(16)-ꞵ-D-Glc

Kaempferol 3-O-ꞵ-D-glucopyranoside:R= ꞵ-D-Glc

Kaempferol 3-O-ꞵ-D-rutinoside: R= Rha-(16)-ꞵ-D-Glc

α-L-Isobavachalcone: R= H2,4,29,49,-tetrahydroxy-39-(3-methyl-2-butenyl)-chalcone (morachalcone): R= OH

trihydroxyphenylacetic acid: R= H2-O-(3,4-dihydroxybenzoyl)-2,4,6-trihydroxyphenylmethylacetate (jaboticabin):R= CH3

liệu chính trong các sản phẩm mỹ phẩm chăm sóc da, làm trắng và kem chống nắng[38, 39]

Bengkoang chứa khoảng 86-90% nước và chứa nhiều các hợp chất phenolic, flavonoid[40] Theo như nghiên cứu của Wang và cộng sự (năm 2006) thì hợp chất phenolic cótác dụng ức chế quá trình tổng hợp melanin vì chúng có cấu trúc hóa học tương tự vớityrosine (tiền chất của tyrosinase) [41] Nghiên cứu của Lukitaningsih năm 2009 đãcho thấy dịch chiết ethyl acetate của Bengkoang chứa hàm lượng phenolic là 140,76 ±14,87 mg GAE/g dịch chiết và hàm lượng flavonoid là 16,22 ± 0,1 mg CE/g dịch chiết[38]

Sandler và các cộng sự (năm 2005) đã nghiên cứu rằng trong Bengkoang có chứasaponin, hợp chất này như là một chất chống nắng tự nhiên bảo vệ da khỏi sự tổnthương do ánh sáng mặt trời bằng việc hấp thu tia cực tím [42]

Lukitaningsih và Holzgrabe năm 2014 đã báo cáo rằng các hợp chất cấu thành trong

Bengkoang như daidzein (21), daidzein-7-O-β-glucopyranose (22), daidzein7-O-β-glucopyranose (23) và 8,9-furanyl-pterocarpan-3-ol (24) được xác định

5-hydroxy-trên cao chiết bằng kỹ thuật chiết Soxhlet với ether dầu hỏa kết hợp phương pháp sắc

kí lỏng hiệu năng cao HPLC, khối phổ GC/MS, NMR có tác dụng ngăn chặn hoạtđộng của enzyme tyrosinase theo thứ tự IC50 là 5,35 mM, 22,2 mM, 4,38 mM và 7,49

mM so với IC50 của kojic acid là 0,07 mM [39]

21

1.2.2.3. Cam thảo

Hình 1.6: Rễ cam thảo

Cam thảo (Glycyrrhiza uralensis) là một loài thực vật có hoa bản địa châu Á, một

trong khoảng 18 loài của chi Glycyrrhiza Cam thảo là một trong những loại thảo dược

được sử dụng rộng rãi nhất và được ghi nhận trong dược điển của Trung Quốc và cácnước khác Trong y học cổ truyền và thí nghiệm lâm sàng phương Đông, cam thảođược sử dụng chủ yếu để điều trị ho, cảm cúm, tổn thương gan và giải độc

Cho đến nay, có ít nhất 400 hợp chất đã được phân lập từ các chi Glycyrrhiza, bao gồm

triterpenoid saponin, các hợp chất phenolic như flavanone, chalcone, coumarin, vàglycoside của chúng [43]

Theo nghiên cứu của Liangliang Liu và cộng sự vào năm 2013, các hợp chất được phân lập từ dịch chiết ethanol của rễ cây cam thảo: Liquiritin apioside (25),

24 23

neolicuroside (26), liquiritigenin (27), licorice saponin G2 (28), chrysoeriol (29), dihydrodaidzein (30), formononetin (31), glycyrrhisoflavanone (32), glycyrrhizic acid (33), licoarylcoumarin (34) và pratensein (35) có hoạt tính kháng enzyme tyrosinase.

Kết quả khảo sát khả năng ức chế enzyme tyrosinase của rễ cam thảo với phân đoạnethyl acetate là IC50 = 397,35 µg/ml [44]

Nghiên cứu của Wang Ya và các cộng sự năm 2015 đã khảo sát 44 loại thực vật có khảnăng ức chế enzyme tyrosinase và kết quả cho thấy dịch chiết ethanol của rễ cam thảo

có tác dụng ức chế cao với I% = 76,65 % ở nồng độ 2000 µg/ml và khả năng khángoxi hóa với IC50= 0,0335 mg/ml khi so với vitamin C là 0,0040 mg/ml [31]

Ngoài tác dụng làm trắng da, có nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng chiết xuất rễ cây camthảo có khả năng kháng oxy hóa, kháng khuẩn, kháng viêm, chống bệnh tiểu đường[45]

Hình 1.6 Một số thành phần trong rễ cam thảo.

1.2.2.4. Hoa kim ngân

(28): R=OH (33): R=H

Hình 1.7: Hoa kim ngân

Hoa kim ngân (Lonicera japonica) được trồng và được sử dụng làm dược liệu ở nhiều

nơi, đặc biệt là ở các nước Đông Á Từ năm 1995, hoa kim ngân được ghi nhận trongdược điển của Trung Quốc và được ứng dụng để làm các sản phẩm điều trị viêm ruộtmãn tính, viêm phổi, viêm amidan cấp tính, viêm thận, Người ta cũng dùng hoa kimngân để pha nước uống giúp cải thiện sức khỏe, ngăn ngừa bệnh tật, giúp làm ẩm vàtrẻ hóa làn da [46]

Năm 2009, T Dung, V.K Bajpai và các cộng sự đã nghiên cứu khảo sát hàm lượngphenolic, khả năng kháng oxi hóa và trắng da của hoa, lá và cành của kim ngân Theobáo cáo, 2 g nguyên liệu được thu hái ở Hà Nội sấy khô rồi chiết với dung môi ethanolvới tỉ lệ 1:10 Kết quả cho thấy:

Bảng 1.4: Hàm lượng phenolic của hoa, lá và cành của cây kim ngân [47].

Hàm lượng phenolic (mg GAE/g