Khảo sát và đánh giá phương pháp chiết cặp ion đo quang và phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lượng chế chlorpheniramin maleate trong chế phẩm thuốc đa thành phần

BỘ Y TẾ Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI ===== m ===== Nguyễn Việt H oà KHẢO SÁT, ĐÁNH GIÁ PHƯƠNG PHÁP CHIế T CẶP ION - ĐO QUANG VÀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO ĐỊNH LƯỢNG CHLORPHENIRAMIN MALEATE TRONG CH ế PH ẩ M t h u ố c đ a t h n h p h ầ n Luận văn Thạc sĩ dược học Chuyên ngành: Kiểm nghiệm Dược phâm r- Độc chất học Mã sô: 030205 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Trần Tử An TS Thái phan Quỳnh Như HÀ NỘI - 2003 MỤC LỤC Trang ĐẬT VẤN Đề Chương 1: T ổ NG QUAN 01 04 1.1 1.1.1 1.1.2 1.2 1.3 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 04 04 04' 04 05 05 05 06 09 Cơng thức, tính chất Chlorpheniramin maleate Cơng thức Tính chất Tác dụng dược lý Các phương pháp định lưọng Chlorpheniramin maleate Phương pháp môi trườnơ khan Phương pháp quang phổ tử ngoại Phương pháp chiết cặp ion- đo quang Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Chương 2: Đ ố i TƯỢNG, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Các mẫu sử dụng khảo sá t phương pháp 2.1.2 Các mẫu sử dụng thử áp dụng phương pháp 2.1.3 Các chất đối chiếu 2.2 Thiết bị hoá chất 2.2.1.Thiết bị 2.2.2 Hoá chất 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 3.1.Phương pháp chiết cặp ion - đo quang định lượng Chlorpheniramin maleate thuốc đa thành phần 2.3.2 Xây dựng phương pháp HPLC để định lượng thời Chlorpheniramin maleate Phenylpropanolamin hydroclorid, định lượng Paracetamol thuốc đa thành phần 2.3.3 So sánh phương pháp chiết cặp ion - đo quang phương pháp HPLC định lượng Chlorpheniramin maỉeate 2.3.4 Phương pháp xử lý đánh giá kết 21 21 22 22 23 23 23 24 Chương 3: THỤC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 31 3.1 24 26 29 29 Định lượng Chlorpheniramin maleate thuốc đa thành phần phương pháp chiết cạp ion- đo quang 31 3.1.1 Đánh giá phương pháp chiết cặp ion- đo quang số tiêu chuẩn sở 3.1.2 Nồng độ thể tích dung dịch thử 3.1.3 Khảo sát bước sóng hấp thụ cực đại dịch chiết 3.1.4 Khảo sát độ ổn định dịch chiết 3.1.5 Khảo sát số lần chiết lượng dung môi chiết 3.1.6 Khảo sát khoảng tuyến tính độ hấp thụ nồng độ Chlorpheniramin maleate 3.1.7 Khảo sát độ lặp lại phương pháp chiết cặp ion - đo quang 3.1.8 Khảo sát độ phương pháp chiết cặp ion - đo quang 3.2 Xây dựng phương pháp HPLC định lượng đồng thời Chlorpheniramin maleate Phenylpropanolamin hydroclorid, định lượng Paracetamol thuốc đa thành phần 3.2.1 Tóm tắt, đánh giá số quy trình định lượng Chlorpheniramin maleate thuốc đa thành phần phương pháp HPLC 3.2.2 Khảo sát chọn điều kiện sắc ký để định lượng đồng thời Chlorpheniramin maleate Phenylpropanolamin hydroclorid, định lượng Paracetamol thuốc đa thành phần 3.2.3 Khảo sát khoảng tuyến tính diện tích píc nồng độ chất: Chlorpheniramin maleate, Phenylpropanolamin hydroclorid, Paracetamol 3.2.4 Khảo sát độ lặp lại phương pháp HPLC định lượng Chlorpheniramin maleate 3.2.5 Khảo sát độ phương pháp HPLC định lượng Chlorpheniramin maleate 3.3 So sánh hiệu hai phương pháp việc định lượng Chlorpheniramin maleate 3.3.1 So sánh kết hai phương pháp 3.3.2 Đánh giá ưu, nhược điểm hai phương pháp 3.4 Kết khảo sát thử áp dụng phương pháp 31 33 33 34 35 35 37 38 39 39 40 45 49 51 54 54 55 56 Chương 4: BÀN LUẬN VE KẾT QUẢ 57 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 60 62 BẢNG CHỮ VIẾT TẮT HPLC: High performance Liquid chromatography u v - VIS: Tử ngoại - Khả kiến TCCS: Tiêu chuẩn sở kl/tt: Khối lượng thể tích, vđ: Vừa đủ dd: Dung dịch ĐẬT VÂN ĐỂ Với phát triển nhanh chóng khoa học kỹ thuật, đặc biệt thành tựu khoa học ngành dược, dạng bào chế đa thành phần nhằm phối hợp tác dụng dược lý hoạt chất ngày sản xuất, lưu hành, sử dụng rộng rãi có mặt rộng khắp thị trường thuốc Nhiều biệt dược trở nên quen thuộc với người tiêu dùng Trong số nhóm thuốc hạ nhiệt, giảm đau phổ biến Các biệt dược thường phối hợp thành phần số chất: Paracetamol, Chlorpheniramin maleate, Phenylpropanolamin hydroclorid Chlorpheniramin maleate dược chất có tác dụng kháng Histamin có mặt hầu hết chế phẩm nói Ngồi Chlorpheniramin maleate phối hợp thuốc chống dị ứng, thuốc h o Vì có tác dụng mạnh nên hàm lượng Chlorpheniramin maleate chế phẩm nhỏ ( - mg ), chênh lệch so với hoạt chất khác Chính phương pháp phân tích gặp nhiều khó khăn, phức tạp Theo qui định Dược điển hành:Dược điển Anh-98 [5], Dược điển Châu âu -97 [17], Dược điển Việt nam i n [20] Chlorpheniramin maleate khơng phải định lượng mà phải thử độ đồng hàm lượng Có nghĩa đòi hỏi phải có phương pháp định lượng có độ nhạy độ xác cao Trong hầu hết Dược điển có phương pháp định lượng chế phẩm đơn thành phần, với chế phẩm đa thành phần tiêu chuẩn nhà sản xuất đưa khác nhau: Phương pháp quang phổ tử ngoại, phương pháp chuẩn độ môi trường khan, phương pháp so m àu C ác phương pháp thường phải chiết tách phức tạp, tốn nhiều thời gian Đặc biệt phương pháp chiết cặp ion- đo quang đa số tiêu chuẩn sở (TCCS) áp dụng kỹ thuật tiến hành lại khác nhau, khơng đảm bảo độ xác Hơn chế phẩm có chứa hoạt chất trở lên phương pháp thường tỏ không hữu hiệu.Trong trường hợp phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) thường áp dụng để định lượng chế phẩm Dược điển Mỹ 24 đưa hệ dung môi để định lượng dược chất thuốc đa thành phần ( có Chlorpheniramin maleate ) khơng qua q trình chiết tách [33] Ở nước có nhiều cơng trình nghiên cứu số tiêu chuẩn sở đưa phương pháp HPLC định lượng đồng thời Chlorpheniramin maleate thành phần khác thuốc đa thành phần Tuy nhiên nghiên cứu thực chế phẩm thuốc định với điều kiện phân tích khác nhau, mà chưa đưa qui trình chung việc phân tích thuốc đa thành phần nói Thực tế phân tích Viện kiểm nghiệm cho thấy phương pháp sắc ký pha thuận phương pháp sắc ký pha đảo sử dụng, kết cho thấy phương pháp sắc ký pha thuận có độ lặp lại khơng ổn định, nhiều trường hợp đạt 60 - 80% so với hàm lượng thực [15] Như thực tế kiểm nghiệm, việc định lượng Chlorpheniramin maleate chế phẩm thuốc đa thành phần vấn đề cần nghiên cứu tiếp để lựa chọn phương pháp kỹ thuật tiến hành cho độ độ xác cao Hiện nhu cầu sử dụng sản xuất thuốc đa thành phần nước nhập ngày tăng, đòi hỏi phải tăng cường công tác quản lý, kiểm tra, giám sát chất lượng thuốc Để đáp ứng điều cần phải có biện pháp quản lý chặt chẽ, đồng có phương pháp kiểm nghiệm thuốc phù hợp cho phép định lượng hàng loạt chế phẩm loại để tăng lượng mẫu phân tích mẫu nhiều lần Mặt khác với phát triển mạnh mẽ khoa học kỹ thuật, nhiều máy móc thiết bị với kỹ thuật phân tích đại đời áp dụng vào thực tế kiểm nghiệm Chính luận văn tiến hành nghiên cứu nhằm đạt mục tiêu sau: - So sánh, đánh giá số phương pháp định lượng Chlorpheniramin maleate thuốc đa thành phần - Đưa hai qui trình kỹ thuật thông dụng để áp dụng định lượng Chlorpheniramin maleate số chế phẩm thuốc đa thành phần CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Công thức, tính chất Chlorpheniramin maleate 1.1.1 Cơng thức[4] ị ^ ^ N ( C H 3)2 ^ /C O O H COOH - Công thức phân tử: C 16H 19C1N2, C4H 4O - Khối lượng phân tử: 390,3 - Tên khoa học: - ( - Chlorophenyl) - - (2 - Pyrydyl) - Propyl dimethylamine, hydrogen maleate 7.7.2 Tính chất [4], [18] Bột kết tinh màu trắng, không mùi, tan phần nước, 10 phần Ethanol (96%), tan 10 phần Cloroform 1.2 Tác dụng dược lý [14] Chlorpheniramin maleate có tác dụng kháng Histamin đối kháng tranh chấp với Histamin thụ thể Hj, làm giảm tiết dịch niêm mạc mũi đường hô hấp 1.3 Các phương pháp định lượng Chlorpheniram in maleate 1.3.1 Phương pháp môi trường khan[17],[26] Chuẩn độ môi trường khan phương pháp chuẩn độ acid base yếu muối chúng môi trường nước, Chlorpheniramin maleate muối base hữu nên áp dụng phương pháp Trong hỗn hydrobromid, hợp có Chlorpheniramin Paracetamol, maleate với Phenylpropanolamin Dextromethorphan hydroclorid Chiết Dextromethorphan hydrobromid Chlorpheniramin maleate với Cloroform, bốc hết Cloroform, hoà tan cắn acid acetic băng Định lượng dung dịch acid Pecloric 0,1N với thị tím tinh thể đo (Dextromethorphan hydrobromid có nhóm HBr nên khơng tham gia phản ứng) 1.3.2 Phương pháp quang p h ổ tử ngoại[2], [5], [8], [13] Phương pháp quang phổ tử ngoại dựa hấp thụ lượng xạ tử ngoại làm thay đổi mức lượng điện tử, gọi phổ điện tử - Khi chiếu chùm tia sáng đơn sắc có bước sóng X cường độ I0 qua dung dịch đồng có nồng độ c , bề dày lớp dung dịch Khi qua dung dịch, phần ánh sáng bị hấp thụ, phần bị phản xạ, phần lại (I) qua dung dịch Sự liên quan đại lượng biểu thị theo phương trình: D = l* Ậ = l g ^ Trong đó: D độ hấp thụ ánh sáng T độ truyền quang (1 ) - Định luật Lambert - Beer: Nếu khơng kể đến yếu tố hố lý độ hấp thụ dung dịch chất bước sóng xác định tỷ lệ thuận với nồng độ dung dịch bề dày lớp dung dịch đem đo D = k l.c (2) Trong đó: k hệ số hấp thụ c nồng độ dung dịch bề dày lớp dung dịch đem đo Trong trường hợp c = 1% (kl/tt), = lcm , t°: 19 - 21°c hộ số hấp thụ k gọi hệ số hấp thụ riêng, ký hiệu EỊ hay E (1%, lcm ), ta có: D = EỊ.l.C (3) Nếu nồng độ c biểu thị mol/lit có hệ số hấp thụ phân tử Theo Dược điển Anh-98, Dược điển Ấn độ -96, Dược điển Nhật 13: Chlorpheniramin maleate chiết khỏi chế phẩm ether, sau chiết lớp ether dung dịch acid sulfuric 0,25M Đem đo độ hấp thụ bước sóng 265 nm/7 7], [23], [32] Theo số Tiêu chuẩn sở nước, Chlorpheniramin maleate chiết khỏi hỗn hợp thuốc Clorform, kiềm hoá gạn lấy lớp cloroform Sau chiết dung dịch acid acid sulfuric 0,5M , đo độ hấp thụ dung dịch thu bước sóng 265 nm, từ xác định hàm lượng Chlorpheniramin 1.3.3 Phương pháp chiết cặp ion - đo quang • Các đại lượng đặc trưng cho chiết[1], [2], [3],[13] + Hằng số phân bố: Nếu dung dịch nước có chất A hồ tan lắc với dung mơi khơng hồ tan nước, q trình phân bố A vào hai pha cân ta có: Da = ^ L a A( N) (4) 55 Bảng 14: Kết so sánh hai phương pháp định lượng Chlorpheniramin maleate mẫu Mị STT Phương pháp chiết Phương pháp HPLC Tính tốn thống kê tạo cặp ion - đo quang X 2,12 2,10 So sánh phương sai s 0,024 0,022 (test F): Sx 0,010 0,009 FTN= 1,09 n 6 Fxn < F0=5,05 a 0,05 0,05 So sánh hai giá trị ta 2,571 2,571 trung bình (test t) tTN= 1,474 tfN ^ to = 2,228 (a=0,05; n=10) 3.3.2- Đánh giá ưu, nhược điểm hai phương pháp •S Phương pháp chiết cặp ion - đo quang: Ưu điểm: - Kỹ thuật đơn giản, thao tác dễ dàng - Hoá chất dung mơi sẵn có - Kết định lượng tin cậy Nhược điểm: - Không định lượng đồng thời thành phần hỗn hợp, phải trải qua trình chiết tách phức tạp, tốn thời gian dung mơi hố chất - Kết phụ thuộc vào thao tác kiểm nghiệm viên, cần có tay nghề ổn định s Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao: Ưu điểm: - Tiến hành nhanh, kết định lượng xác 56 - Định lượng đồng thời thành phần hỗn hợp không qua trình chiết tách Nhược điểm: - Hiện trang thiết bị HPLC giá thành cao - Các hố chất, dung mơi thường đắt tiền 3.4 K ết khảo sát thử áp dụng phương pháp Phương pháp HPLC xây dựng áp dụng kiểm nghiệm số thuốc hạ nhiệt, giảm đau lưu hành thị trường mà thành phần có chứa thành phần Kết ghi bảng 15 Bảng 15: Kết kiểm nghiệm số mẫu khảo sát TT Tên thuốc SKS Nơi sản xuất % so với hàm lượng ghi nhãn Chlorpheni Phenylpropa Paraceta ramin nolamin mo! maleate hydroclorid Tiffy 0010401 Thái lan 99,10 101,25 97,61 Trianacin 030402 Đồng tháp 96,97 103,54 101,70 Mexcold 070702 Imex pharm 96,54 100,38 99,21 Dehanogel Pharma hà nội 101,62 97,61 96,84 Dotux 070302 Đồng tháp 95,09 98,42 97,56 Neo cold 060502 Tiền giang 97,58 77291201 102,13 57 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN VỂ KẾT QUẢ ■ Đối tượng nghiên cứu trình số chế phẩm thuốc hạ nhiệt, giảm đau đa thành phần mà có chứa Chlorpheniramin maleate thành phần Paracetamol Phenylpropanolamin hydroclorid ■ Phương pháp chiết cặp ion - đo quang để định lượng Chlorpheniramin maleate áp dụng nhiều tiêu chuẩn sở Tuy nhiên tiêu chuẩn chưa có thống kỹ thuật tiến hành, dẫn đến nhiều tiêu chuẩn cho kết ổn định, độ xác thấp Nguyên nhân chủ yếu liên quan đến qui trình kỹ thuật định lượng: Từ khâu xử lý mẫu, chiết , đến đo độ hấp thụ Trên sở khảo sát thực nghiệm phân tích kết thu được, đưa qui trình chung nhằm định lượng Chlorpheniramin maleate chế phẩm đa thành phần phương pháp chiết cặp ion -đ o quang Phương pháp có độ có độ xác cao Tóm tắt phương pháp sau: - Chlorpheniramin maleate tạo cặp ion với Methyl da cam Thể tích dung dịch thử ml, nồng độ 50 p,g/ml Thể tích dung dịch thuốc thử (Methyl da cam) ml, nồng độ 0,1% - pH môi trường 4,5 - Dung môi chiết cặp ion Cloroform, chiết lần (10 + ml), thêm cloroform vừa đủ 25 ml - Đo độ hấp thụ bước sóng 422 nm Tiến hành song song mẫu chuẩn điều kiện, từ xác định hàm lượng Chlorpheniramin maleate chế phẩm 58 ■ Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) để định lượng Chlorpheniramin maleate số thành phần khác chế phẩm thuốc đa thành phần chưa đề cập tới Dược điển Việt nam Một số tài liệu áp dụng phương pháp cho chế phẩm định Trên sở điều kiện thực nghiệm sẵn có sở nghiên cứu, sau tham khảo tài liệu, tiến hành khảo sát thực nghiệm, phân tích kết thu được, chúng tơi đề xuất phương pháp HPLC pha đảo đẳng dòng định lượng Chlorpheniramin maleate thành phần khác số thuốc đa thành phần Phương pháp đặc biệt thích hợp để định lượng hỗn hợp chứa hai ba thành phần: Chlorpheniramin maleate, Phenylpropanolamin hydroclorid, Paracetamol với nhiều biệt dược khác mà tiêu chuẩn sở, tài liệu nghiên cứu định lượng riêng thành phần phải sử dụng phương pháp HPLC đại với gradient dung mơi Chương trình sắc ký đưa cho phép định lượng đồng thời Chlorpheniramin maleate Phenylpropanolamin hydroclorid, định lượng Paracetamol hỗn hợp Kết cho thấy píc Chlorpheniramin maleate sắc ký đồ có thời gian lưu nhỏ so với thành phần khác (tR = 4,36), thích hợp cho trường hợp định lượng Chlorpheniramin maleate mà chưa quan tâm tới thành phần khác Như chương trình sắc ký chúng tơi đưa cho phép tiến hành nhanh, tiết kiệm mặt thời gian, thời kết nghiên cứu cho thấy phương pháp có độ ổn định độ xác cao (sai số tương đối £%: 1,16 1,10) Phương pháp áp dụng định lượng số chế phẩm thuốc đa thành phần lưu hành thị trường Qui trình sắc ký sau: - Cột Lichrospher RP 18 (250 X mm; 10 |im) - DetectorUV: 216 nm đo Chlorpheniramin maleate Phenylpropanolamin hydroclorid, 244 nm đo Paracetam ol 59 - Pha động: Đệm pH 2,7 : Acetonitril (97 : 3) -Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút đo Chlorpheniramin maleate Phenylpropanolamin hydroclorid, ml/phút đo Paracetamol - Thể tích tiêm: 20 |il - Thời gian lưu: tR = 4,36 phút Chúng tiến hành so sánh hai phương pháp định lượng mẫu nghiên cứu, kết cho thấy hai phương pháp khác ý nghĩa thống kê, điều đảm bảo độ tin cậy phương pháp Phương pháp HPLC xây dựng áp dụng để định lượng số chế phẩm thuốc lưu hành thị trường Kết cho thấy phù hợp với công thức nhà sản xuất ■ Hiện số sở kiểm nghiệm, đặc biệt tỉnh miền núi, vùng xa chưa thể trang bị máy sắc ký lỏng hiệu cao Chính việc ứng dụng phương pháp chiết cặp ion - đo quang cần thiết Đối với sở có trang bị máy HPLC ứng dụng phương pháp đề xuất công tác kiểm tra chất lượng thuốc ■ Kết nghiên cứu sở khoa học để hội đồng Dược điển Việt nam xem xét, tiếp tục nghiên cứu áp dụng cho việc xây dựng số chuyên luận nhằm định lượng Chlorpheniramin maleate số thành phần khác thuốc đa thành phần 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: Trong trình làm luận văn tốt nghiệp, rút kết luận sau: Chúng tơi phân tích, so sánh, đánh giá số phương pháp định lượng Chlorpheniramin maleate thuốc đa thành phần Các phương pháp phần đáp ứng yêu cầu công tác kiểm tra chất lượng thuốc Tuy nhiên hầu hết qui trình đưa áp dụng cho biệt dược định mà chưa có phương pháp chung định lượng Chlorpheniramin maleate thuốc đa thành phần Chúng khảo sát, đánh giá kỹ thuật tiến hành số tiêu chuẩn sở, khảo sát thực nghiệm, phân tích kết thu xây dựng kỹ thuật tối ưu định lượng Chlorpheniramin maleate phương pháp chiết cặp ion- đo quang với độ xác cao Phương pháp áp dụng thuốc đa thành phần có chứa thành phần: Chlorpheniramin maleate, Phenylpropanolamin hydroclorid, Paracetamol Các sở kiểm nghiệm chưa có điều kiện trang bị máy sắc ký lỏng hiệu cao ứng dụng phương pháp cơng tác kiểm tra chất lượng thuốc Chúng tiến hành nghiên cứu, khảo sát điều kiện sắc ký khác nhau, từ xây dựng chương trình sắc ký khơng định lượng Chlorpheniramin maleate mà định lượng thành phần khác thuốc đa thành phần (Phenylpropanolamin hydroclorid, Paracetamol), Phenylpropanolamin hydroclorid định lượng đồng thời với Chlorpheniramin maleate Phương pháp có độ nhạy cao, tốn mẫu, có độ độ lặp lại cao, thực nhanh, thuận tiện sở trang bị máy sắc ký lỏng hiệu cao 61 Trên sở kết khảo sát thực nghiệm, xây dựng hai qui trình kỹ thuật chung định lượng Chlorpheniramin maleate thuốc có chứa hai ba thành phần (Chlorpheniramin maleate, Phenylpropanolamin hydroclorid, Paracetamol): Phương pháp chiết cặp ion - đo quang phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Các phương pháp có độ lặp lại tốt, độ cao Chúng tiến hành so sánh hai phương pháp định lượng mẫu nghiên cứu Kết cho thấy hai phương pháp khác ý nghĩa thống kê Áp dụng hai qui trình định lượng trên, tiến hành định lượng Chlorpheniramin maleate số thành phần khác nhiều thuốc đa thành phần lưu hành thị trường Điều góp phần định lượng mẫu thuốc lấy thị trường mà khơng có tiêu chuẩn tiêu chuẩn không phù hợp Như với kết thu luận văn đạt mục tiêu đề Kiến nghị: Với sở sản xuất, sở kiểm nghiệm, thấy hai phương pháp áp dụng Tuy nhiên điều kiện cho phép nên áp dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao vào tiêu chuẩn sở công tác kiểm nghiệm Tiếp tục nghiên cứu, khảo sát phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao định lượng Chlorpheniramin maleate thành phần khác hỗn hợp thuốc có chứa nhiều thành phẩn so với mẫu nghiên cứu phạm vi luận văn Đề nghị Hội đồng Dược điển sớm xây dựng chuyên luận thuốc đa thành phần có chứa Chlorpheniramin maleate Đặc biệt việc xây dựng qui trình chuẩn định lượng Chlorpheniramin maleate thành phần khác thuốc đa thành phần phương pháp HPLC Điều giúp sở kiểm nghiệm chủ động, thuận tiện việc kiểm tra, giám sát chất lượng thuốc, góp phần tích cực vào cơng tác quản lý chất lượng thuốc nước ta 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Trần Tử An (2002), ứng dụng phương pháp chiết kiểm nghiệm thuốc độc chất, Trường ĐH Dược Hà nội, tr 41, 45 - 53 Trần Tử An, Trịnh Văn Quì, Bùi Xuân Đồng, Chu Thị Lộc (1997), Cấc phương pháp kiểm nghiệm thuốc độc chất học- Tài liệu học tập sau đại học, Trường ĐH Dược Hà nội Bùi Long Biên (2001), Hố học phân tích định lượng, NXB khoa học kỹ thuật Hà nội, tr 174 - 186 Bộ y tế (1994), Dược điển Việt nam II tập 3, tr 96-98 Bộ y tế (2002), Dược điển Việt nam /// Bùi Thị Hoà, Thái Phan Quỳnh Như, Trịnh Văn Q (1997), “Nghiên cứu định tính, định lượng đồng thời hoạt chất: Dextromethorphan HBr, Chlorpheniramin maleate, Guaiphenesin Phenylpropanolamin HC1 thuốc hỗn hợp hạ nhiệt giảm đau”, Thông báo kiểm nghiệm (4), tr 11- 16 Phạm Luận (1989), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng cao áp - HPLC - Giáo trình đào tạo sau đại học, Trường ĐH Tổng hợp Hà nội Từ Văn Mặc (1995), Phân tích hố lý, NXB khoa học kỹ thuật Hà nội, tr 293- 311 Đoàn Thanh Thanh, Vũ Thị Ngay (1999), “Định tính định lượng Paracetamol, Cafein, Chlorpheniramin maleate viên Corypadol phương pháp HPLC”, Thông báo kiểm nghiệm (4), tr 13- 15 10 Nguyễn Anh Thơ (1996), “Định lượng viên nén Coderin phương pháp sắc ký lỏng cao áp”, Thông báo kiểm nghiệm (4), tr - 63 11 Nguyễn Thị Thuận (2000), “Định lượng đồng thời Chlorpheniramin maleate Phenylpropanolamin HC1 với có mặt Paracetamol hỗn hợp phương pháp HPLC”, Thông báo kiểm nghiêm (1), tr - 12 12 Dương Văn Trung (2000), “Định lượng viên Parafort- B phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao”, Thông báo kiểm nghiệm (4), tr - 11 13 Trường ĐH Dược Hà nội (1998), Hố phân tích 2, tr 53, 55 - 98 14 Trường ĐH Y Hà nội (1998), Dược lý học, NXB Y học, tr 468 - 512 15 Viện kiểm nghiệm (2000), ứng dụng phương pháp chiết tách kiểm nghiệm thuốc, Viện kiểm nghiệm, tr 25 - 41 16 Trần Phúc Vịnh (2000), “Định lượng thuốc ho Optux phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo”, Thông báo kiểm nghiệm (3), tr -1 Tiếng nước 17 Bristish Pharmacopoiea Vol.Ị & Vol.2 (1998), p 460- 475 18 C larke’s Isolation and Identification ofDrugs{ 1996), second edition, p 216 19 J.N.Done, J.H.Knox, J.Loheac (1974), Application o f High Speed Liquid Chromatography, A Wiley -Intersciense Publication, p 32 20 Douglas A Skoog, Donald M West (1996), Analytical Chemistry, Harcoust Brace College Publishers, p 660-685 21 European Pharmacopoeia Vol & Vol (1997), p 469- 475, 609 22 L Huber(1989), Applications o f Diode Array Detection in High Performance Liquid Chromatography 23 Indian Pharmacopoeia Vol (1996), p 176- 177 24 J.J.Kirkland, “Porous silica microphere column parking for high performance size excluction chromatography” (1976), J Chromatogr (125), p 231 64 25 J.H Knox, J Jurand, “Mechanism of zitterion - pair chromatography” (1981), J Chromatgr ( 218), p 314 26 Pharmacopoeia o f the P eople’s Republic o f China Vol (1997), p 122123, 213-214 27 Quanyun A Xu and Lawrence A Trissel (1999), Stability - Indicating HPLC Methods fo r Drug Analysis, American Pharmaceutical Association, p 94- 98 28 Sandie lindsay, High performance Liquid Chromatography, second edition 29 A.S Sidhu, J.M Kenedy and s Deeble (1987), “General method for the analysis of pharmaceutical dosage forms by high - performance liquid chromatography”, J Chromatogr ( 391), p 233- 242 30 Thai Pharmacopoeia Vol (1993), p 804 31 The Merck Index thirteenth edition (2001), p 456- 457 32 The Japannese Pharmacopoeia thirteenth edition Vol (1996), p 283- 284 33 The United Stated Pharmacopeia 24 V ol.l & Vol.2 (2000), p 22- 32, 217229, 392- 394 34 John Wiley (1982), A Text Book o f Pharmaceutical Analysis Third Edition, A Wiley -Intersciense Publication, p 412- 414 PHỤ LỤC Kết khảo sát độ lập lại, độ phương pháp chiết cặp ion - đo quang phương pháp HPLC ỉ Khảo độ lặp lại phương pháp chiết cặp ion - đo quang Kết khảo độ lạp lại phương pháp chiết cặp ion - đo quang mẫu Mị, M 2, M trình bày bảng la, lb, lc Bảng la : Kết khảo sát độ lặp lại mẫu Mị STT Lưọĩig cân Độ hấp thụ Hàm Iư = 2,776 tTN= 1,107 B ảng 2c: Kết khảo sát độ phương pháp mẫu Mị STT Lượng cân (g) Lượng thèm vào (mg) Độ hấp thụ Lượng thu hồi mg % Thống kê 1,1914 1,026 0,510 1,031 100,94 x = 99,28 1,1878 1,026 0,508 1,023 99,71 s = 0,8356 1,2012 1,026 0,511 1,009 98,34 Sx = 0,3736 1,1900 1,026 0,508 1,016 99,04 8% = 1,045 1,2054 1,026 0,513 1,014 98,83 n= Chuẩn 0,0999 0,511 Vs.WI = 2’776 tTN = 1,927 Khảo sát độ lặp lại phương pháp HPLC Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp trình bày bảng 3a, 3b Bảng 3a: Kết khảo sát độ lặp lại mẫu M ị STT Lưcmg càn Diện tích píc Hàm lượng (g) 0,6452 58,852 ( ing/v ) 2,09 0,6465 59,817 2,12 X = 2,10 0,6459 59,198 2,10 0,6471 58,461 2,07 0,6467 58,989 2,09 0,6473 60,174 2,13 Sx= 0,009 £% = 1,16 n=6 a = 0,05 ta = 2,571 Chuẩn 0,0798 55,762 Thông kê s = 0,022 Bảng 3b: Kết khảo sát độ lặp lại mâu M STT Lưcmg cân Diện tích píc Hàm Iưọng te) 0,6758 103,020 ( m g /v ) 3,85 0,6792 104,881 3,90 0,6805 104,274 3,87 0,6786 102,909 3,83 0,6801 105,289 3,91 0,6798 105,849 3,94 Chuẩn 0,0802 106,942 , , , Cơng thức tính: \ Thống kê S x m c x M x C c xn x(g/v) = —5———— - Sc X m t X nc Trong đó: - St Sc diện tích chiều cao píc mẫu thử mẫu chuẩn - mt, mc khối lượng mẫu thử mẫu chuẩn ( g ) - Cc hàm lượng chất chuẩn(%) - M khối lượng trung bình viên ( g ) - nt, nc hệ số pha loãng mẫu thử mẫu chuẩn X = 3,88 s = 0,040 Sx= 0,020 s% = 1,10 n=6 a = 0,05 ta = 2,571 Khảo sát độ phương pháp HPLC Kết khảo sát độ phương pháp trình bày bảng 4a,4b Bảng 4a: Kết khảo sát độ phương phấp mẫu Mj STT Lượng cân (g) Lưọng thêm vào (mg) Diện tích píc Lượng thu hồi mg % Thòng kẻ 0,4860 0,500 58,190 0,490 98,00 X = 99,28 0,4752 0,500 57,324 0,495 99,00 s = 1,2215 0,4785 0,500 57,780 0,500 100,00 Sx = 0,5463 0,4872 0,500 58,337 0,492 98,40 8% = 1,53 0,4854 0,500 58,536 0,505 101,00 n=5 Chuẩn 0,0796 55,435 = 2,776 tTN= 1,318 Bảng 4b: Kết khảo sát độ đủng phương pháp mẫu M4 STT Lượng cân (g) Lượng thèm vào (mg) Diện tích pic Lượng thu hồi mg % Thống kê 0,5010 1,000 103,175 0,981 98,10 X = 99,42 0,4956 1,000 102,870 1,000 100,00 s = 1,6483 0,4985 1,000 102,472 0,978 97,80 Sx = 0,7371 0,4968 1,000 103,577 1,019 101,90 £% = 2,05 0,5012 1,000 103,525 0,993 99,30 n= Chuấn 0,0795 105,867 t(