Nghiên cứu mô hình tối ưu hóa thống kế đánh giá độ ổn định của nguyên liệu artesunat

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TlỊíèrỉ® ®ẠI HỌC DƯỢC HÀ MỘI DƯỢC SỸ NGUYỄN THỊ THANH PHƯƠNG NGHIÊN CỨU MƠ HÌNH TỐI ƯU HỐ THỐNG KÊ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH ■ ■ CỦ A NGUYÊN LIỆU ARTESUINIAT ■ Chuyên ngành Kiểm nghiệm dược độc chất học Mã sô : 3.02.05 ẬM VẰN THẠC SỸ DƯỢC HỌC * * * ,* Người hướng dẫn khoa học P G S - T S TRẨN TỬ AN TS TRỊNH VĂN LAU Hà nội, 2000 Ỉ.UÃI I A i I Z( MỤC LỤC Mục lục, Lòi cảm n Phần : Đặt vấn đề Phần : Tổng quan 2.1 Tổng quan ARTESUNAT 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.1.5 2.1.6 Công thức: Tính chất: Phương pháp điều c h ế : Cơ chế tác dụng : Các phương pháp định lượng: Tạp chất cách xác định: 13 2.2 Tổng quan phương pháp nghiên cứu độ ổnđịnh thuốc 16 2.2.1 Khái niệm độ ổn định thuốc : 16 2.2.2 Các yếu tố ảnh hương đến độ ổn định thuốc : 16 2.2.3 Vài nét đặc điểm khí hậu Việt nam ảnh hưởng khí hậu đến độ ổn định thuốc : 17 2.2.4 Động học phản ứng phân huỷ thuốc việc đánh giá độ ổn định 18 thuốc: 2.2.5 Đánh giá độ ổn định thuốc: 19 2.3 Đánh giá độ ổn định thuốc mơ hình tối ưu hố thơng kê: 28 2.3.1 Ngun tắc chung: 28 2.3.2 Mơ hình hố thực nghiệm đa nhân tố: 29 2.3.3 Mơ hình hố thực nghiệm bậc hai đánh giá độ ổn định nguvén liệu Artesunat 39 Phần : Đối tượng - Phương tiện phương pháp nghiên cứu 41 3.1 Đối tượng 41 3.2 Phương tiện, dụng cụ, thuốc thử, điều kiện 41 3.2.1 Phương tiện, dụng cụ 41 3.2.2 Thuốc thử, chất chuẩn dung mơi hố chất: 41 3.2.3 Điều kiện tiến hành 42 3.3 Phương pháp nghiên cứu: 43 3.3.1 Đánh giả độ ổn định ngun liệu Artesunat mơ hình tối ưu hố thống kê: 43 3.3.2 Các tiêu đánh giá: 45 3.3.3 Tính tốn xử lý thống kê kết thực nghiệm 48 Phần : Kết thực nghiệm & bàn luận 50 4.1 Xảy dựng phương pháp định lượng nguyên liệu Artesunat mẫu có phân huỷ 50 4.1.1 Khảo sát độ lặp lại phương pháp: 50 4.1.2 So sánh với phương pháp HPLC 51 4.1.3 Xác đinh độ phương pháp: 52 , 4.2 Kết đánh giá mẫu ban đầu 52 4.2.1 Thử tạp chất liên quan 52 4.2.2 Xác định hàm lượng: 54 4.3 Đánh giá độ ổn định bàng mô hình tối ưu hố thống kê 56 4.3.1 Đánh giá mẫu A | 56 Trang I LLr»\i I AM J| *A c J Í 4.3.2 Đánh giá mẫu A2 60 4.4 Đánh giá nguyên liệu Artesunat điều kiện bảo quản bình thường 65 4.4.1 Tạp chất liên quan 65 4.4.2 Xác định hàm lượng 66 4.5 So sánh kết điều kiện bảo quản thường & kết tính tốn từ phương trình hồi qui 66 4.6 Dự đoán suy giảm hàm lượng nguyên liệu Artesunat điều kiện bảo quản 68 Phần : Bàn luận Kết luận 73 Tài liệu tham khảo 76 Trang LUẦII All i.;-y: LÒI CẢM ƠN Tơỉ xỉn bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS - TS Trần tử An - người hướng dẫn tận tình, chu đáo, đạo sâu sát mặt khoa học việc thực đề tài Để hồn thành luận án, tơi nhận giúp đỡ nhiều mặt tập thể Trung tâm KNDP - Sở Y tế Hà nội Tôi nhận giúp đỡ tận tình TS Trịnh văn Lẩu, Thạc sỹ Nguyễn kim Thanh cán phòng thuốc chuẩn Viện Kiểm nghiệm Trung ương Nhận dịp tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành với tất giúp đỡ quý báu nói Xin chân thành cảm ơn thư viện Viện Kiểm nghiệm, thư viện trường Đại học Dược Hà nội cung cấp thông tin cần thiết giúp đỡ hoàn thành đề tài Trang PHẦN : ĐẶT VẤN ĐỂ : Trong năm gần đây, ngành Dược nước ta ý đến vấn đề nâng cao chất lượng thuốc nhằm phục vụ ngày tốt cơng tác phòng chữa bệnh , chăm sóc sức khoẻ cộng đồng Chính sách quốc gia thuốc Việt nam đến năm 2000 đề việc nghiên cứu , sản xuất cung ứng đầy đủ thuốc đảm bảo chất lượng để phục vụ cho công tác phòng chữa bệnh , tiến tới đưa nhiều sản phẩm ngành dược Việt nam lưu hành thị trường quốc tế Đó nhiệm vụ cấp bách nặng nề Nguyên liệu làm thuốc có vai trò đặc biệt quan trọng việc hình thành chất lượng dược phẩm Hiện chế thị trường có cạnh tranh liệt giá Do nhiều sở sản xuất nhập số nguyên liệu làm thuốc với giá rẻ có chất lượng đạt tiêu chuẩn nằm gần giới hạn tối thiểu cho phép Mặt khác hãng sản xuất ngun liệu khác có cơng nghệ sản xuất kỹ thuật tinh chế khác dẫn đến chất lượng giá khác có tượng “Một số ngun liệu sản xuất Trung quốc nhãn bao bì làm người ta hiểu nhầm sản xuất nước Châu Âu Việc kiểm tra chất lượng nguyên liệu sản xuất thuốc vấn đề cần quan tâm không nước ta mà chung cho tất nước giới Việc nghiên cứu đảm bảo tiêu chuẩn chất lượng thuốc từ nguyên liệu đến thành phẩm bào chế đạt yêu cầu chung dược điển nước tiên tiến góp phần thúc đẩy trình độ sản xuất thuốc nước, tiếp cận với khoa học kỹ thuật đại, hoà nhập vào cộng đồng y tế giới Trang L'J-Ul A»I l»!AC jf Hiện , số lượng thuốc Công ty nước nhập vào Việt nam thuốc sở sản xuất nước không ngừng gia tăng Một tiêu chuẩn để Cục Quản lý dược Việt nam xét duyệt cấp số đăng ký phải có hồ sơ theo dõi đánh giá độ ổn định thuốc (nguyên liệu hay thành phẩm bào chế) [1] Trong hồ sơ xin đăng ký lưu hành thuốc , nhãn bao bì hợp đồng kinh tế thuốc người dược sỹ quan tâm, đến hạn dùng (expiration date) tuổi thọ (shelf life) thuốc Số liệu tin cậy hạn dùng tuổi thọ thuốc phải xem xét tính tốn từ tư liệu nghiên cứu , theo dõi lập thành hồ sơ thuốc Việt nam thuộc vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa - nóng - ẩm có mưa nhiều việc nghiên cứu đánh giá tuổi thọ thuốc gắn với điều kiện khí hậu nước ta việc làm cần thiết Để góp phần làm phong phú thêm phương pháp đánh giá độ ổn định thuốc chúng tơi xây dựng “mơ hình tối ưu hố thống kê đánh giá độ ổn định nguyên liệu Artesunat “ nhằm hai mục tiêu sau : - Đánh giá khả sử dụng mơ hình 2k tâm trực giao việc đánh giá độ ổn định nguyên liệu thông qua ví dụ ngun liệu Artesunat - Thơng qua mơ hình tối ưu hố thống kê đánh giá ảnh hưởng yếu tố : nhiệt độ độ ẩm đến suy giảm hàm lượng hoạt chất để xem xét cách đánh giá tuổi thọ thuốc Trang r-ỈẬII All MẠC jf PHẦN : TỔNG QUAN 2.1 TỔNG QUAN VỂ ARTESUNAT 2.1.1 Công thức: o - c o - c h 2— c h 2— c o o h Công thức phân tử : c 19 H28 Og Trọng lượng phân tử: 384,4 Tên khoa học : Decahydro -3,6,9 - trimetyl - 3,12 epoxy -12 H - pyranol [ 1,33-6] benzodioxepin - 10 -ol, hydrogen succinate.(*} 2.1.2 Tính chất: Bột kết tinh trắng, tan nước, dễ tan dung môi Dicloromethan, Aceton, Cloroform dung dịch kiềm Artesunat không bền tác dụng nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng qui định bảo quản bao gói kín tránh ánh sáng để nơi mát [23] Nhiệt độ nóng chảy : 132-135°c Năng suất quay cực: [a]20D= 10-14° 2.1.3 Phương vháv điều c h ế : Artesunat bán tổng hợp từ artemisinin qua hai giai đoạn [11] Trang Ỉ.I/AI I /«l ỉ J* t»\C t» ( Giai đoạn : Artemisinin khử hố nhóm Lacton thành Dihydro artemisinin (DHA ) bed Natriborohydrid (NaBH4 ) môi trường Methanol khan nhiệt độ CM-5° c Sơ đồ phản ứng: o Artemisinin Dihydro artemisinin (DHA) DHA thu hai dạng đồng phân (X&p Giai đoạn 2: DHA este hoá thành Artesunat cho phản ứng với anhydrid succinic dùng dimethylaminopiridin (DMAP) làm xúc tác cho phản ứng vơí acid succinic dùng dicyclo-hexyl carbodimid (DCC) làm xúc tác : Sơ đồ phản ứng : o V- DMAP COOH CH, I ch2 COOH DMAP DDC O—CO- ch2- ch2- cooh Trang L'J.'MI Ai I J ; y ~A Ngày từ DHA người ta bán tổng hợp nhiều chất khác có hoạt lực tương tự Artesunat Arteether (AE) Artemether (AM), chất bền vững Artesunat 2.1.4 Cơ chế tác duns i Qua nhiều nghiên cứu người ta thấy tác dụng điều trị sốt rét Artesunat mạnh gấp lần artemisinin có tác dụng ký sinh trùng kháng Cloroquin, Mefloquin, Fansidar [7] Cơ chế tác dụng bắt nguồn từ cấu tạo phân tử Artesunat có mang cầu nối peroxyd từ phân tử Artesunat sinh dạng Oxy hoạt động, gốc tự Oxy tác động vào tế bào ký sinh trùng sốt rét tiêu diêt Vì cầu nối peroxyd bị phá huỷ thuốc khơng tác dụng Artesunat ức chế hoạt tính cytochrom- oxydaza hệ vận chuyển glutamin hồng cầu Ở pH cao Artesunat tạo tức dạng oxy hoạt động 2.1.5 Các vhươns vháv đinh Ỉươri2: 2.1.5.1 Phươns pháp quang p h ổ : thán Artesunat hấp thụ vùng u v có bước sóng ngắn Sau đun nóng mơi trường kiềm Artesunat chuyển thành Q289 sản phẩm có độ hấp thụ cực đại bước sóng 289 nm± l nm - Nếu acid hoá Q289 trở thành dẫn chất Q260 Các chất người ta phân lập dạng kết tinh [17][12] 60°C; NaOH H+ 30' OH ► OH h3C^ Q 289 'COOH Q260 Trang tvẬti All I.uy: ‘ù Nhìn chung nước ta Artesunat chế phẩm thường qui định định lượng phương pháp đo quang X =289 nm sau thuỷ phân Artesunat môi trường NaOH 0,1 N nhiệt độ : 60 c thời gian 30 phút so sánh với hàm lượng chất chuẩn Phương pháp cho kết xác chuẩn thử tiến hành điều kiện , nhiệt độ ổn định suốt thời gian thuỷ phân dùng nguyên liêu đạt qui định độ ẩm đạt yêu cầu tạp chất phân huỷ 2.1.5.2 Phươns pháp sắc ký lỏns hiêu n ă m cao : nhìn chuns đươc tiến hành theo hướns i • Hướng trực tiếp: Artesunat làm giàu cột Sau tách khỏi cột tách phát detector thích hợp Tử ngoại, điện hố, khúc xạ kế [33] [23] [15] • Hướng gián tiếp : - Phản ứng trước cột tách : Artesunat sau thuỷ phân kiềm phản ứng với thuốc thử đặc hiệu tạo sản phẩm có hấp thụ tử ngoại khả kiến, sản phẩm tách cột phát detector tử ngoại khả kiến - Phản ứng sau cột tách : Dịch chiết Artesunat tạp chất sau chiết tách qua cột phản ứng với thuốc thử đặc trưng tạo thành dẫn chất phát detector thích hợp Phương pháp dựa nguyên tắc Artesunat thuỷ phân môi trường kiềm đặc diểm khác trình thuỷ phân xảy sau khi,hoạt chất tách khỏi cột với pha động Acetonitril hệ đệm acetat bơm thứ qua ống hình chữ T chứa thuốc thử (KOH IM Methanol) dẫn chất bơm vào bơm thứ hai - Toàn đặt bể ổn nhiệt 70 c Sau Trang Như : Từ điều kiện bảo quản thực nghiệm theo mơ hình tối ưu hố 2k bậc hai tâm trực giao ta thu hai phương trình mơ tả giảm hàm lượng nguyên liệu Artesunat sau : Mẫu AI : y = 1,688 + 0,464 Xj + 0,834 x2 + 0,251 x3 + 0,244 X|X2 Mẫu A2 : y = 1,792 + 0,474 X] + 0,860 x2 + 0,253 x3 + 0,177 x ,x Từ hai phương trình hồi quy cho thấy khoảng khơng gian ba yếu tố khảo sát suy giảm hàm lượng Artesunat tn theo mơ hình bậc : • Yếu tố độ ẩm có hệ số hồi quy bậc lớn ảnh hưởng đến giảm hàm lượng , tiếp yếu tố nhiệt độ Tuy nhiên ma trận thí nghiệm AX, = đơn vị nhiệt độ, ẢX2 = 10 đơn vị RH% thấy tác động thay đổi nhiệt độ độ ẩm lên suy giảm hàm lượng Artesunat khơng khác nhiều • Ảnh hưởng tổng hợp hai yếu tố nhiệt độ độ ẩm có ý nghĩa đáng biến phụ thuộc y • Trong khoảng nhiệt độ độ ẩm khảo sát mẫu nghiên cứu AI A2 bền vững theo thời gian bảo quản thể hệ số hồi quy x3 • Sự suy giảm hàm lượng hoạt chất Artesunat hai mẫu không khác rõ rệt Trang 64 4.4 ĐÁNH GIÁ NGUYÊN LIỆU ARTESUNAT Ở ĐIỂU KIỆN BẢO QUẢN BÌNH THƯỜNG Điều kiện bình thường mẫu đuợc đóng hai lần túi PE.hàn kín, đựng hộp cáctơng có túi silicagel chống ẩm, đặt tủ lưu mẫu phòng thí n ghiệm • Ngày bắt đầu bảo quản : 1/8/1999 • Ngày kiểm tra l i : 15/1/00 4.4.1 Tay chất liên quan Tiến hành theo mục 3.3.2.1 thu kết hinh 8,9: 0 • • • •• 0 0 • • • •• Dd(l) Dd(2) Dd(3) Hình 8: sắc ký đồ mẫu AI 0 Dd(l) Dd(2) Dd(3) Hình 9: sắc ký đồ mẫu A2 Nhận x é t : sắc ký đồ dung dịch (1) hai mẫu A] & A2 thu xuất vết thứ xong vết nhạt vết thứ dung dịch chuẩn Artesunat (dung dịch2) Kết luận : Sau khoảng 5,5 tháng bảo quản điều kiện bình thường, hai mẫu A| Aọ đạt yêu cầu tạp chất liên quan theo 52 TCN 370 - 92 Trang 65 4.4.2 Xác đinh hàm lươns Tiến hành định lượng theo mục 3.3.2.2 thu kết bảng 12,13 Bảng 12 : Kết định lượng mẫu Aj Tt Lượng cân (g) Dtr Dt % 0,0505 0,003 0,502 99,40 0,0512 0,003 0,507 99,02 0,0520 0,003 0,517 99,63 c 0,0505 0,002 0,497 98,6 Trung bình 99,35% Bảng 13 : Kết định lượng mẫu A2 Tt Lượng cân (g) Dtr Dt % 0,0515 0,004 0,513 98,63 0,0510 0,003 0,508 98,82 0,0500 0,003 0,498 98,79 c 0,0500 0,002 0,496 98,6 Trung bình 98,75% 4.5 SO SÁNH KẾT QUẢ ĐIỂU KIỆN BẢO QUẢN THƯỜNG & KẾT QUẢ TÍNH TỐN TỪ PHƯƠNG TRÌNH HỔI QUI Theo số liêu Tổng cục thuỷ văn nhiệt độ độ ẩm trung bình Hà nội năm 1995 bảng số liệu trang 18, để dự đoán suy giảm hàm lượng nguyên liệu Artesunat theo phương trình hồi quy thực nghiệm tìm ta lấy điều kiện bảo quản thường khoảng thời gian từ 01/08/1999 đến 15/01/2000 mức c = 22,87°c độ ẩm 75,17% Trang 66 Phương trình hồi qui mơ tả giảm hàm lượng theo thời gian phụ thuộc vào nhiệt độ, độ ẩm bảo quản có dạng - Từ mẫu Aị : Hàm lượng ban đầu 100,165% y= 1,688+0,464 X +0,834x2 +0,251 x3 +0,244 - Từ mẫu A2: Hàm lượng bsn đầu 99,69 % y= 1,792+ 0,474 Xj +0,860x2 +0,253 x3 +0,177 XjX2 t° = 22,87° C - > X, = -1 ,4 Độ ẩm =75,17 % -> x2 =-0,983 Thời gian : 5,5 tháng -> x3 =1,964 Sau 5,5 tháng bảo quản t° trung bình 23° c , độ ẩm tương đối 75,17% giảm hàm lượng nguyên liệu Artesunat (A,,A2 ) bảng 14 Bảng 14: So sánh giảm hàm lượng thực tế tính tốn Kết thực nghiêm Số liệu tính tốn Bảo quản ĐK thường Mẫu AI 0,815% 1,042 % Mẫu A2 0,940% 1,016 % TB: 0,8775 TB : 1,029 % s : 0,0883 s: 0,02 Từ cơng thức (27),(28) ta tính Sc = 0,095 tính dược tm= 1,674 Tra bảng t005.2 = 4,303 ttn < t0 : Giảm hàm lượng nguyên liệu Artesunat bảo quản điều kiện thường tính tốn gần từ phương trình hồi qui khác khơng có ý nghĩa thống kê mức a =0,05 Nói cách khác kết tính từ phương trình hồi qui thu phù hợp với thực tế, ta sử dụng để tính Trang 67 tốn tuổi thọ nguyên liệu Artesunat điều kiện bảo quản điều kiện thích hợp để giữ ổn định chất lượng nguyên liệu Artesunat 4.6 Dự ĐOÁN S ự SUY GIẢM HÀM LƯỢNG CỦA NGUYÊN LIỆU ARTESUNAT Ở CÁC ĐIỂU KIỆN BẢO QUẢN Phương trình tính tốn suy giảm hàm lượng nguyên liệu Artesunat sau : Mẫu AI : y=l,688 + 0,464 X! + 0,834x2 + 0,251x3 +0,244xjx2 (*1) Mẫu A2 : y=l,792 + 0,474 X! + 0,860x2 + 0,253x3 +0,177x1x2 (*2) Với giá trị Ai — '» -3 x2 = % R H - 85 10 Thời gian năm tương đương với x3=4,286 Các giá trị X ] , x2 tính từ điều kiện bảo quản dự đốn Thay vào phương trình (*1) (*2) thu số liệu bảng 15 hình 10,11,12 Trang 68 vjr.ii,.i! I.;-.' : Bảng 15: Dự đoán suy giảm hàm lượng nguyên liệu Artesunat sau năm điều kiện bảo quản Điều kiện bảo quản Mẫu AI Mẫu A2 t° °c %RH yi 20 75 1,576 y2 1,500 25 75 1,796 1,805 25 80 2,091 2,139 25 85 2,386 2,480 25 90 2,681 2,821 30 75 2,016 2,094 30 80 2.433 2,524 30 85 2.850 2,954 30 90 3.267 3,280 35 75 2.236 2,391 , Trang 69 20 25 30 35 HìnhlOa : Biểu đồ giảm hàm lượng theo nhiệt độ độ ẩm 75% Trang 70 75 80 85 90 Hình lla : Biểu đồ giảm hàm lượng theo độ ẩm nhiệt độ 25°c Trang 71 75 80 85 90 Hình 12a: Biểu đồ giảm hàm lượng theo đô ẩm nhiêt đô 30oC Trang 72 PHẦN : BÀN LUẬN VÀ KẾT LUẬN 5.1 Bàn luận 5.1.1 Mơ hình tối ưu hố thống kê 2k bậc tâm trực giao Khảo sát giảm hàm lượng Artesunat theo thời gian phụ thuộc vào nhiệt độ độ ẩm, tiến hành thực nghiệm theo mơ hình 2k bậc tâm trực giao điều kiện chuẩn hoá, thí nghiệm làm lặp lặp lại nhiều lần để có kết xác Qua xử lý thống kê thu phương trình hồi quy mơ tả phù hợp với thực nghiệm sơ cho thấy dùng phương pháp để dự đoán tuổi thọ ngun liệu Artesunat , tìm điều kiện thích hợp để giữ ổn định chất lượng nguyên liệu A rtesunat 5.1.2 Phương trình hồi quy mơ tả giảm hàm lượng nguyên liệu Artesunat theo thòi gian phụ thuộc vào nhiệt độ độ ẩm bảo quản cho thấy : • Sự giảm hàm lượng phụ thuộc vào hai yếu tố nhiệt độ độ ẩm, giảm hàm lượng tăng lên nhiệt độ độ ẩm tăng lên Sự thay đổi hai yếu tố ảnh hưởng gần lên giảm hàm lượng Artesunat • Tuổi thọ nguyên liệu Artesunat giảm nhanh bảo quản nhiệt độ 30°c độ ẩm 80% Vì để giữ ổn định hàm lượng Artesunat phải bảo quản nơi mát đồ bao gói kín, tránh ẩm 5.1.3 Khi nghiên cứu độ ổn định thuốc mơ hình tối ưu hố thống kê : Để thu phương trình mơ tả thực nghiệm điều kiện nghiên cứu phải chuẩn hoá, phương pháp phân tích phải có độ lặp cao, kế hoạch thực nghiệm phải chuẩn bị cẩn thận chặt chẽ Các sở sản xuất phấn đấu đạt GMP, phòng thí nghiệm phấn đấu đạt Trang 73 GLP việc chuẩn hố điều kiện thí nghiệm , xây dựng quy trình thao tác chuẩn yêu cầu thực So với phương pháp nghiên cứu độ ổn định phép thử dài hạn, phép thử cấp tốc nghiên cứu độ ổn định thuốc mơ hình 2k tâm trực giao có ưu điểm : - Khơng đánh giá ảnh hưởng nhiệt độ mà đánh giá ảnh hưởng độ ẩm tương đối điều quan trọng ước lượng ảnh hưởng tương tác hai yếu tố - Trên sở phương trình hồi quy thu được, khảo sát khơng gian yếu tố đủ lớn ngoại suy đáng tin cậy tuổi thọ thuốc, ngoại suy phương pháp lão hoá cấp tốc dựa vào ước lượng ảnh hưởng nhiột độ theo nguyên lý Van’t-hoff Tuy nhiên để có phương trình hồi quy tin cậy cần có thực nghiệm chuẩn hố người nghiên cứu phải có hiểu biết tối thiểu tối ưu hố thống kê Trong trường hợp hồn tồn có khả năngdùng mơ hình tối ưu hố thống kê để đánh giá độ ổn định tuổi thọ nguyên liệu làm thuốc 5.1.4 Về phương pháp định lượng xác định tạp chất liên quan: Trong đề tài dùng phương pháp định lượng băng cách thuỷ phân môi trường kiềm , nhiệt độ 50°c, song có điểm khác với 52 TCN 370 - 92 trừ phần độ hấp thụ nguyên liệu bước sóng 289 nm chưa thuỷ phân Phương pháp kiểm tra độ đúng, độ lặp lại so sánh với phương pháp HPLC(3.3.2.1) kết luận phương pháp đủ độ tin cậy cho phép Trong điều kiện giữ nhiệt độ ổn định , quy trình thao tác chuẩn làm song song với chuẩn điều kiện phương pháp dễ thực phòng kiểm nghiệm , cho kết nhanh xác phương diện kinh tế tiết kiệm phương pháp HPLC Trang 74 Tạp chất liên quan phát bằnc sắc kv lớp mỏnc (3.3.2.1) cho sắc ký đồ dề đọc kếl quả, vếl tách lốt cho phép phát tạp châl ò nồng độ 0,01% 5.2 K ết luận 5.2.1 Mơ hình tối ưu hố thống kê bậc tâm trực giao áp dụng để nghiên cứu độ ổn định thuốc 5.2.1 Độ ổn định nguyên liệu Artesunat phụ thuộc vào điều kiện bảo quản: Nhiệt độ, độ ẩm thời gian Sự giảm hàm lượng tăng lên bảo quản ỏ' nhiệt độ 30°c độ ẩm 80% Vì nguyên liệu Artesunat phải bảo quản nhiệt độ mát đồ bao gói kín, tránh ẩm M ôt sô kiến nghi - Khi hồ sơ nghiên cứu thử độ ổn định thuốc yêu cầu việc đăng ký sản phẩm Bộ Y tế cần ban hành văn hướng dẫn thử độ ổn định thuốc làm sở cho nhà sản xuất thực cách thống n h ấ t - Thử độ ổn định thuốc mơ hình tối ưu hố phương pháp , thời gian điều kiện tiến hành thử nghiệm có hạn nên chúng tơi tiến hành so sánh điều kiện bảo quản thường khoảng thời gian tháng Do để có kết đầy đủ cần tiếp tục theo dõi thời gian dài - Để dùng phương trình hồi quy cho việc ngoại suy tuổi thọ thuốc cần bố trí thí nghiệm khoảng thời gian đủ lớn, lúc ta có phương trình hồi quy bậc đầy đủ Nên tiếp tục nghiên cứu sâu thêm phương pháp để ứng dụng vào thực tế đánh giá độ ổn định nguyên liệu chế phẩm sản xuất bảo quản thuốc T I'd Ilf; 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1/ Bộ Y tế, Quy ch ế đăng ký thuốc số 1203/BYT-QĐ 11/7/1996 2/ B ộ Y tế T C N 370-92 3/ Bộ Y tế, Tiêu chuẩn sở 52TCP2 ỉ 1-93 4/ Phạm N ỌC Bùng, Độ ổn định thuốc cách xác định, Tài liệu sau Đại học , trường Đại học Dược 1997, 5-13 5/ Harvald Cramen, Phương pháp toán học thống kê, NXB Khoa học kỹ th u ậ t, Hà nội 1970 6/ Trần tuấn Điệp, Lý hoàng Tú, Giáo trình lý thuyết xác suất thống kê tốn học, NXB Đại học THCN, Hà nội 1979 7/ Đào đình Đức & cộng , Kết điều trị lâm sàng Artesunat Mediplantex, 1994 8/ Đặng Văn Giáp, Phân tích liệu khoa học chương trình MS -EXCEL, Nhà xuất Giáo dục, 1997, 35 -r 89 9/ Trịnh Văn Lẩu, D ự đoán tuổi thọ thuốc sở lão hoá cấp tốc ; Viện kiểm nghiệm,Bộ Ytế 10/ Trịnh Văn Lẩu, Phương pháp nghiên cứu độ ổn định cuả thuốc, Viện kiểm nghiệm, Bộ ytế (5-17) 11/ ĐỗHữu Nghị, Một s ố phương pháp cải tiến bán tổng hợp Artemether 'và Arteether từ Artemisinin Tạp chí dược học số 5,1996 12/ Cao Mai Phương, Định lượng artemisinin sắc ký lỏng hiệu cao, Luận văn tốt nghiệp Dược sỹ CK1, 1995 13/ Trịnh Văn Quỳ, Vấn đề quản lý kiểm tra chất lượng nguyên liệu làm thuốc, Tạp chí Dược học, Bộ Y tế số 270,1998, 10- 12 Trang 76 14/ Nguyễn Kim Thanh , Nghiên cííii độ ổn đinh cức nguyên ìiệit kìiáng sinh Ampicilin , Rifampicin , Ciprofloxacin ảnh hưởng độ ẩm nhiệt độ phươìig pháp HPLC, Luận văn thạc sỹ dược học, Hà nội 1998 15/ Hoàng Văn Thuỷ, Nghiên cứu khảo sát độ ổn đinh chất lượng dạng bào chế thuốc sốt rét Artesunaĩ artemisinin điều kiện bảo quản khác nhau, Luận vãn tốt nghiệp thạc sỹ dược học, 1998 16/ Bùi Minh Trí, Bùi Thế Tâm, Giáo trình tối ưit ho á, sở lý thuyết, thuật toán, chương trình mẫu Pascal, Nhà xuất Giao thơng vận tải, 1996 17/ Chu Vĩnh Trung, Góp phần định lượng Artesunat phương pháp HPLC, Luận văn tốt nghiệp Dược sỹ Đại học, Hà nội, 1993 18/ Trường Đại học Dược Hà Nội Bài giảng tối ưu hoá thống kê, giảng sau đại học, 1998 19/ Trường Đại học Tổng hợp, Giáo trình xử lý số liệu thống kê, 1996, 40 - 88 20/ Ưỷ ban dân số & Kế hoạch hố gia đình Việt nam, Dân số, tài nguyên, môi trường & phát triển, Hà n ộ i, 1996 21/ Viện kiểm nghiệm, Bộ Y tế, Thông báo K N 4-1999 , 25-26 22/ Cochran w c , Cox GM, Exprỉmental Designs, Ind cd, Wiley, NY, 1957 23/ D.L Klayman, Scienses 2 ,1985, 1049 24/ JH Richards, Physiccochemical principles o f pharmaceutics, chapter 7, “ Kinetics and stability testing London 1986, 124-127 T r a i l Ị; 7 Statistical aspects o f drug stability analyses (Bài giản íỉ sau dại học), Sunderland Bruce 1998 26/ Stability o f pharmaceuticals (Bài íỊÍàng sau đại học) Sunderland Bruce , March 1998 27/ RLevin, Statistics fo r management, 4rd ed, Pentice Hall, 25/ Englewood C liff, 1990 28/ Common physical techniques in pure fication , page 45, table 19 29/ International Chemical, reference substances ICPS 1979, 11,23/SO, LA, MH 30/ Pharmacertics Weekblad, Volume 3, April 24, 1981 31/ The United State pharmacopoeia 23,1995 pag 1941 32/ WHO: Guidelines o f stability testing o f pharmaceutical products containing Well, established drug substances in conventional dosuge forms 33/ WHO, The international pharmacopoeia third edition, 1998, pages 204-22 Tranỵ 78 ... thống kê đánh giá độ ổn định nguyên liệu Artesunat “ nhằm hai mục tiêu sau : - Đánh giá khả sử dụng mơ hình 2k tâm trực giao việc đánh giá độ ổn định ngun liệu thơng qua ví dụ ngun liệu Artesunat. .. pháp nghiên cứu: 43 3.3.1 Đánh giả độ ổn định nguyên liệu Artesunat mô hình tối ưu hố thống kê: 43 3.3.2 Các tiêu đánh giá: 45 3.3.3 Tính tốn xử lý thống kê kết... 18 thuốc: 2.2.5 Đánh giá độ ổn định thuốc: 19 2.3 Đánh giá độ ổn định thuốc mơ hình tối ưu hố thơng kê: 28 2.3.1 Nguyên tắc chung: 28 2.3.2 Mơ hình hố thực nghiệm đa