supplemented with different concentrations of BA and NAA or 2,4D , in which one PGR is kept constant whereas the other varies. The requirement for each experiment on those plants are also unique. The effects of the plant growth regulator on particular types of specimen of each species are recorded. To S.Speciosa, the probable best PGR concentration is BA 2.5mgl : NAA 0.1 mgl for the stem sample and BA 1mgl: NAA 0.1mgl for the leaf sample. To Chrysanthenum sp, the best result is obtained at BA 2mgl and 2,4D 1.5mgl in darkness. To Lilium sp, 0.5mgl of BA and 0.5mgl of NAA gives the best PLBs formation ratio. To Tarragon, The highest shoot and root is formed at the explant with no BA whereas the highest shoot induction ratio is obtained at 0.1 mgl BA. KEYWORK: in vitro, Tử La Lan, Cúc, Ngải Giấm, Ly Ly, Lilium SP, Sinningia speciosa, Chrysanthemum, Artemisia Dracunculus Abbreviation: MS: MurashigeSkoog medium, PLB protocorm supplemented with different concentrations of BA and NAA or 2,4D , in which one PGR is kept constant whereas the other varies. The requirement for each experiment on those plants are also unique. The effects of the plant growth regulator on particular types of specimen of each species are recorded. To S.Speciosa, the probable best PGR concentration is BA 2.5mgl : NAA 0.1 mgl for the stem sample and BA 1mgl: NAA 0.1mgl for the leaf sample. To Chrysanthenum sp, the best result is obtained at BA 2mgl and 2,4D 1.5mgl in darkness. To Lilium sp, 0.5mgl of BA and 0.5mgl of NAA gives the best PLBs formation ratio. To Tarragon, The highest shoot and root is formed at the explant with no BA whereas the highest shoot induction ratio is obtained at 0.1 mgl BA. KEYWORK: in vitro, Tử La Lan, Cúc, Ngải Giấm, Ly Ly, Lilium SP, Sinningia speciosa, Chrysanthemum, Artemisia Dracunculus Abbreviation: MS: MurashigeSkoog medium, PLB protocorm
BÁO CÁO THÍ NGHIỆM CƠNG NGHỆ TẾ BÀO Nguyễn Minh Tuệ, Nguyễn Thị Thu Trinh, Đỗ Thị Xuân Uyên, Phùng Thị Cẩm Thu, Nguyễn Thị Thơm Võ Thanh Phúc Trường Đại học Bách Khoa TP Hồ Chí Minh ABSTRACT: In the study, we conducted the technique of tissue culture on subjects Lilium, Sinningia speciosa, Artemisia Althought, we investigated the effect of plant growth regulators on plants The environment of each species is supplemented with different concentrations of BA and NAA or 2,4D , in which one PGR is kept constant whereas the other varies The requirement for each experiment on those plants are also unique The effects of the plant growth regulator on particular types of specimen of each species are recorded To S.Speciosa, the probable best PGR concentration is BA 2.5mg/l : NAA 0.1 mg/l for the stem sample and BA 1mg/l: NAA 0.1mg/l for the leaf sample To Chrysanthenum sp, the best result is obtained at BA 2mg/l and 2,4-D 1.5mg/l in darkness To Lilium sp, 0.5mg/l of BA and 0.5mg/l of NAA gives the best PLBs formation ratio To Tarragon, The highest shoot and root is formed at the explant with no BA whereas the highest shoot induction ratio is obtained at 0.1 mg/l BA KEYWORK: in vitro, Tử La Lan, Cúc, Ngải Giấm, Ly Ly, Lilium SP, Sinningia speciosa, Chrysanthemum, Artemisia Dracunculus Abbreviation: MS: Murashige-Skoog medium, PLB protocorm-like body, PGR: plant growth hormone Mở đầu Nuôi cấy mô tế bào thực vật phương pháp nhân giống trồng cách nhanh chóng hiệu Ni cấy mơ tế bào thực vật có vai trò lơn nhân giống trồng, bảo vệ loài thựcTr vật quý hiếm, lai tạo giống mới, thu nhận hợp chất thứ cấp Trong mơn thí nghiệm công nghệ tế bào môn Công nghệ Sinh học – Khoa Kỹ thuật Hóa học- Trường Đại học Bách khoa Chúng tơi làm thí nghiệm lồi thực vật Tử La Lan (Sinningia speciosa) , Cúc (Chrysanthemum sp), Ly Ly( Lilium Sp.), Ngải Giấm( Artemisia Dracunculus) Tử La Lan(Sinningia speciosa) có tên khoa học Gloxinia speciosa, hay có tên khác hoa Thánh, Mõm Chó Biển, Đại Nhâm Đồng, Hồng Xiêm, Phú Quý Cây có nguồn gốc từ Brazin Tử La Lan loài bật để nhà, cánh hoa mềm mượt nhung, có nhiều màu sắc tím, trắng, đỏ, hồng, Cây có dạng thân củ, thấp(12-15 cm) có hình oval, hoa hình chng to Tử La Lan tình u ý nghĩa biểu tượng tình cảm đôi lứa nồng nàn bền lâu Tử La Lan xem lồi trồng năm sau nở hoa khoảng 6-8 tuần hoa toàn rơi vào trạng thái ngủ, sau khoảng thời gian nảy mầm lại tiếp tục hoa Cúc(Chrysanthemum sp.) nằm số 10000 loài hoa cúc khác giới, loại nhỏ, tồn thân có lơng trắng, mềm Mép có cưa lượn sóng, mặt có nhiều lơng màu trắng mốc Hoa đầu cành kẽ có đường kính từ 2.5 đến cm, hoa có màu trắng đẹp Do đặc tính khả thích nghi nên trồng quanh năm Ly Ly (Lilium Sp) có nguồn gốc từ nước Trung Quốc, Bắc Mĩ, Nhật Bản Châu Âu Ly Ly mang ý nghĩa Sắc đẹp, đức hanh, cao, quý phái, kiêu hãnh, tượng trương cho trắng, lòng chung thủy cao thượng, có tính dược liệu hương liệu Thơng thường hoa Ly có thân hình trụ, khơng lơng, xoắn mọc thành dãy, mọc thành vòng tròn, phiến hình mác hình sợi Lá khơng cuống có cuống ngắn , vành nguyên vẹn Hoa Ly to, mọc đơn lẻ, có lồi mọc thành cụm, hoa có nhiều màu trắng, vàng, hồng, đỏ Cây có đặc tính ưa mát, chịu rét, sinh trưởng tốt mơi trường đất có tính acid, giàu mùn khơ Ngải Giấm( Artemisia Dracunculus) hay gọi Ngải Thơm, Thanh Thảo Lá Hẹp, Thanh Cao Rồng Ngải Giấm loại thân thảo, cao khoảng 90 cm, thân mọc thẳng đứng, mảnh, phân nhánh Lá Ngải Giấm cuống, nhẵn, ngun có răng, hình giáo dài 3-8 cm, rộng 2-4 cm Hoa Ngải Giấm theo cụm nách lá, cuống hoa dài khoảng 1.5 cm, mảnh, bao chung cao khoảng cm Hoa hình ống có màu lục trắng, có lơng Cây Ngải Giấm ưa đất tốt, chịu sáng tốt Cây phân bố chủ yếu Nam Âu, Ấn Độ, Trung Quốc, Mông Cổ, Siberia Cây chủ yếu dùng để làm gia vị Vật liệu phương pháp Vật liệu Mẫu Các mẫu thực vật cung cấp phòng thí nghiệm Cơng nghệ Sinh học – Khoa Kĩ thuật Hóa học – Trường Đại học Bách khoa – Đại học QG TP.HCM Thân, lá, cuống Thân, lá, cuống sử dụng để tạo trực tiếp chồi sử dụng để nhân chồi bên Ngải Giấm Các mẫu thực vật phòng thí nghiệm cung cấp 30 ngày tuổi để làm nguyên liệu cho thí nghiệm Phương pháp Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật Thao tác cấy thực tủ vô trùng, trước cấy đèn UV bật 30 phút để chờ 15 phút trước cấy Đối với người thực thao tác cấy cần rửa tay đến khủy tay xà phòng lau tay cồn 70o trước tiến hành thao tác cấy Các dụng cụ mang vào tủ cấy phải lau cồn để đảm bảo môi trường vô trùng tủ cấy cấy thao tác phải thực tủ cấy Tạo chồi bất định Tử La Lan Môi trường tạo chồi mơi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật gồm BA 2.5 mg/ml , NAA 0.1 mg/ml Môi trường pha vừa đủ cho vào ống nghiệm, sau bịt miệng ống nghiệm lại đem hấp khử trùng 1210C thời gian 15 phút Thao tác tiến hành tạo chồi bất định Tử La Lan thực tủ cấy vô trùng, hơ qua lửa đĩa Petri để diệt trùng tế bào vi sinh bào tử, dùng đĩa Petri để gác kẹp dao, đĩa lại để đựng mẫu xử lý mẫu Kẹp dao trước sử dụng phải đưuọc đốt cồn ba lần, trình cấy kẹp dao cần đốt cồn lần trước tiếp tục cấy Hoặc sử dụng giếng khử trùng cách cắm dụng cụ vào giếng thời gian hai phút để khử trùng Đầu tiên, lấy ống giống, nắp hơ lửa miệng ống nghiệm, sau dùng kẹp lấy Tử La Lan khỏi ống nghiệm đặt vào đĩa Petri, dùng dao cắt thành mẫu có cạnh khoảng 0.5x0.5 cm chuẩn bị bốn mẫu lá, tương tự với bốn mẫu cuống cắt đoạn khoảng 0.5cm không chứa chồi nách không lấy phần tiếp giáp cuống cuối lấy mẫu thân không chứa chồi nách Dùng kẹp gắp mẫu vào ống nghiệm chứa môi trường chuẩn bị sẵn Với ống chứa hai mẫu, năm ống gồm hai ống chứa mẫu lá, hai ống chứa mẫu cuống ống chứa thân Sau cấy mẫu, hơ qua lửa bịt đầu ống lại để tránh bị nhiễm nấm mốc Cột năm ống mẫu lại thành bó, sau để kệ theo dõi phát triển mẫu cấy Lưu ý nên thường xuyên đổi kẹp để giảm khả nhiễm q trình ni cấy, nên sau lấy mẫu cắt mẫu nên đổi lần, cho mẫu vào ống nghiệm nên đổi kẹp sau hai ống Điều kiện cho cho phát triển mẫu cấy Điều kiện phòng thí nghiệm bao gồm nhiệt độ 25 +2oC, độ ẩm 70%, cường độ chiếu sáng 4000 lux với thời gian chiếu sáng 12h/ngày Mẫu cấy theo dõi bốn tuần Tạo sẹo Cúc Môi trường tạo sẹo mơi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật bao gồm BA mg/l, 2-4D 2.5 mg/l Môi trường pha vừa đủ cho vào ống nghiệm, sau bịt miệng ống lại mang hấp 121oC thời gian 15 phút Thao tác tiến hành tạo sẹo Cúc tiến hành tử cấy vô trùng, hơ qua lửa đĩa Petri để diệt tế bào vi sinh bào tử, dùng đĩa để gác kẹp kéo, đĩa lại dùng để chứa mẫu xử lý mẫu Kẹp kéo trước sử dụng phải đốt cồn ba lần, sau cần đốt lần trước sử dụng Hoặc sử dụng giếng khử trùng cách cắm dụng cụ vào hai phút để khử trùng Đầu tiên, lấy ống giống, mở nắp hơ qua lửa miệng ống nghiệm, sau dùng kẹp lấy Cúc khỏi ống nghiệm đặt vào đĩa Petri, dùng kéo cắt thành phần lá, cuống thân riêng biệt Bao gồm gồm bốn mẫu kích thước 0.5x0.5 cm, bốn mẫu cuống kích thước 0.5 cm hai mẫu thân khơng chứa chồi kích thước 0.5 cm Dùng kẹp gắp mẫu vào ống chứa môi trường chuẩn bị sẵn Với ống chứa hai mẫu, năm ống gồm hai ống chứa mẫu lá, hai ống chứa mẫu cuống ống chứa mẫu thân Sau cấy hơ qua lửa bịt đầu ống lại để tránh bị nhiễm nấm mốc Cột năm ống lại thành bó bỏ hộp tối để tạo môi trường tối cho mẫu theo dõi phát triển mẫu cấy Lưu ý nên thường xuyên đổi kẹp để giảm khả nhiễm q trình ni cấy, nên sau lấy mẫu cắt mẫu nên đổi lần, cho mẫu vào ống nghiệm nên đổi kẹp sau hai ống Điều kiện cho phát triển mẫu cấy phòng thí nghiệm là, độ ẩm 70%, nhiệt độ 25+2oC, để điều kiện khơng có ánh sáng Mẫu cấy theo dõi thời gian tuần Tạo PLB Ly Ly Môi trường tạo PLB mơi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật bao gồm BA 0.6 mg/l NAA 0.5 mg/ml Môi trường pha vừa đủ cho vào ống nghiệm, sau bịt miệng ống lại mang hấp 121oC thời gian 15 phút Thao tác tiến hành tạo PLB Ly Ly tiến hành tủ cấy vô trùng, hơ qua lửa đĩa Petri để diệt toàn tế bào vi sinh bảo tử, đĩa để gác kẹp dao, đĩa lại dùng để chứa mẫu xử lý mẫu Kẹp dao trước sử dụng phải đốt cồn ba lần, sau cần đốt lần trước dùng cho lần Hoặc sử dụng giếng khử trùng để khử trùng dụng cụ cách cắm dụng cụ vào giếng hai phút để khử trùng dụng cụ Đầu tiên, lấy ống giống Ly Ly mở nắp, hơ qua lửa miệng ống dùng kẹp lấy Ly Ly bỏ vào đĩa Petri Dùng dao cắt vảy thành mẫu có kích thước 0.5x0.5 cm Cắt tổng cộng mẫu Ly Ly bốn mẫu vảy Ly Ly Dùng kẹp gắp mẫu cho vào ống chứa môi trường chuẩn bị sẵn Với ống chứa hai mẫu, tổng cộng có năm ống gồm ống chứa mẫu hai ống chứa mẫu vảy Sau cấy hơ qua lửa bịt đầu ống lại để tránh mẫu cấy bị nhiễm nấm mốc Cột năm ống lại để giá để theo dõi phát triển mẫu cấy Lưu ý nên thường xuyên đổi kẹp để giảm khả nhiễm q trình ni cấy, nên sau lấy mẫu cắt mẫu nên đổi lần, cho mẫu vào ống nghiệm nên đổi kẹp sau hai ống Điều kiện nuôi cấy tạo PLB Ly Ly môi trường phòng thí nghiệm với điều kiện độ ẩm 70%, nhiệt độ 25+2oC, điều kiện chiếu sáng 4000 lux với thời gian 12h/ngày Mẫu cấy theo dõi thời gian tuần Tạo chồi từ chồi bên Ngải Giấm Môi trường tạo chồi mơi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng thực vật bao gồm BA 0.15 mg/l Môi trường pha vừa đủ cho vào ống nghiệm, sau bịt miệng ống lại mang hấp 121oC thời gian 15 phút Thao tác tiến hành tạo chồi chồi bên Ngải Giấm tiến hành tủ cấy vô trùng, hơ qua lửa đĩa Petri để diệt toàn tế bào vi sinh bảo tử, đĩa để gác kẹp kéo, đĩa lại dùng để chứa mẫu xử lý mẫu Kẹp keo trước sử dụng phải đốt cồn ba lần, sau cần đốt lần trước dùng cho lần Hoặc sử dụng giếng khử trùng để khử trùng dụng cụ cách cắm dụng cụ vào giếng hai phút để khử trùng dụng cụ Đầu tiên, lấy ống giống chứa Ngải Giấm, mở nắp hơ qua lửa Dùng kẹp kéo Ngải Giấm lên khỏi miệng ống nghiệm từ hai đến ba đốt dùng kéo cắt hứng mẫu vào đĩa Petri Tiếp tục dùng kẹp kéo đoạn thân khỏi miệng ống từ ba đến bốn đốt, dùng kéo cắt thân thành mẫu hứng vào đĩa Petri, mẫu có chứa từ hai đến ba đốt thân Tiếp tục làm đủ năm mẫu Ngải Giấm Dùng kẹp gắp mẫu cắm vào môi trường, lưu ý không cắm phần xuống mà cắm phần gốc xuống Mỗi ống cắm mẫu Sau cấy hơ qua lửa bịt ống lại để tránh bị nhiễm nấm mốc Sau cấy xong, cột năm ống lại để giá để theo dõi phát triển mẫu cấy Lưu ý nên thường xuyên đổi kẹp để giảm khả nhiễm q trình ni cấy, nên sau lấy mẫu cắt mẫu nên đổi lần, cho mẫu vào ống nghiệm nên đổi kẹp sau hai ống Điều kiện nuôi cấy tạo chồi chồi bên Ngải Giấm mơi trường phòng thí nghiệm với điều kiện độ ẩm 70%, ánh sáng 4000 lux với thời gian chiếu sáng 12h/ngày, nhiệt độ phòng thí nghiệm 25+2oC Kết bàn luận Thu mẫu Tử La Lan Kết Sau hai tuần ni cấy, mẫu có tượng trương lên, kích thước to so với lúc cấy hai mẫu bị đen vết thương mẫu cấy Còn mẫu cuống khơng thay đổi kích thước bị đen hai đầu mẫu Hai mẫu thân có trái ngược nhau, mẫu khơng thay đổi kích thước, hình dạng màu sắc mẫu thân lại có trượng trương lên, kích thước lớn so với lúc cấy Sau ba tuần nuôi cấy, mẫu trương lên phát triển kích thước, mẫu tạo mô sẹo vết thương có mẫu tạo chồi bất định mơ sẹo mẫu Bốn mẫu cuống không thay đổi kích thước hình dạng so với sau hai tuần nuôi cấy, mẫu cuống bị đen hai đầu mẫu Hai mẫu thân có trái ngược nhau, mẫu khơng phát triển, mẫu có phát triển tạo mơ sẹo hai đầu vết thương mẫu Sau bốn tuần nuôi cấy, tiến hành thu mẫu Lấy mẫu khỏi ống mơi trường, sau tiến hành đếm số lượng chồi, đo kích thước, màu sắc số lượng mẫu Số liệu thể bảng Mẫu Lá Mẫu số Số chồi/mẫu Kích thước (mm) Số Màu sắc Xanh nhạt 2.5 Xanh nhạt 2 Xanh nhạt 1 Xanh nhạt Xanh nhạt Xanh nhạt Xanh nhạt Xanh nhạt 0 Cuống 0 0 0 0 Thân Xanh nhạt 3 Xanh nhạt 0 Bảng 1: Sự tái sinh chồi trực tiếp Tử La Lan sau tuần nuôi cấy môi trường MS bổ sung BA NAA Thu mẫu Tử La Lan ta có, bốn mẫu tạo mơ sẹo có ba mẫu tạo chồi bất định, bốn mẫu cuống không tạo sẹo chồi bất định, hai mẫu thân có mẫu tạo sẹo chồi bất định mẫu lại khơng tạo sẹo chồi bất định Biểu đồ 1: Tỉ lệ tạo chồi thay đổi nồng độ(BA: 1, 1.5, 2, 2.5 NAA 0.1 (mg/l)) Biểu đồ 2: Tỉ lệ số chồi/ số mẫu Tử La Lan Bàn luận Từ bảng 1, ta thấy tỉ lệ chồi mẫu cao so với mẫu khác Chứng tỏ môi trường nuôi cấy sử dụng để tạo chồi bất định phù hợp với mẫu cấy Ngồi mẫu có kích thước lớn, diện tích tiếp diện tích vết thương hở lớn so với mẫu lại nên tăng khả trao đổi chất, kchs thích tế bào phân chia phản phân hóa tạo thành mơ sẹo Từ kích thích tạo chồi bất định mẫu cấy Đối với mẫu cuống lá, tơi thấy khơng có thay đổi kích thước hình dạng mẫu cấy, hai đầu mẫu cấy bị đen nên khẳng định mẫu không phát triển Nguyên nhân mẫu cuống không phát triển môi trường MS có chứa chất điều hòa sinh trưởng với nồng độ không phù hợp cho mẫu cuống phát triển, ngồi có ngun nhân khác mẫu cấy nhỏ nên khả sống sót mẫu giảm Dẫn tới mẫu trao đổi chất với môi trường chết Với mẫu thân, mẫu có diện tích tiếp xúc lớn nên khả trao đổ chất với mơi trường tăng, từ mẫu thân phát triển tạo chồi, với mẫu thân nhỏ nên khả trao đổi chất hơn, mẫu khơng phát triển Từ kết luận mơi trường thích hợp cho mẫu mẫu Từ biểu đồ tơi có nhận xét sau Ở biểu đồ 1, nhìn chung tỉ lệ tạo chồi thân giảm dần tăng nồng độ BA trừ nhóm khơng tạo chồi, tỉ lệ tạo chồi giảm dần nhóm lại có tỉ lệ tạo chồi cao nhóm 3, tỉ lệ tạo chồi mẫu cuống tăng dần nhóm lại khơng có mẫu tạo chồi Ở biểu đồ 2, tơi có nhận xét sau, tỉ lệ số chồi mẫu cấy giảm dần nhóm lại có tỉ lệ số chồi cao nhóm lại Khi cấy, thao tác người cấy làm vết thương lớn khiến mẫu tự phục hồi lại mẫu cấy nhỏ nên mẫu phát triển ngun nhân khiến mẫu khơng tạo phát triển tạo chồi bất định Ngồi cấy, kích thước mẫu không giống nguyên nhân dẫn đến sai số Khi cấy mẫu thân, đoạn thân nhỏ nên người cấy cắt ln đoạn thân có chứa chồi bên nên phát triển có chồi bên nằm số chồi bất định làm ảnh hưởng đến kết Các nguyên nhân kể yếu tố làm ảnh hưởng tới kết bảng số liệu Nguyên nhân tạo chồi bất định Do đáp ứng kích thích PGRs ngoại mơ khác loại mẫu cấy mà khác loại tế bào, cấu trúc mô, nồng độ dinh dưỡng chất điều hòa Với mẫu lá, cấu trúc phiến mỏng khiến khả hấp thu dinh dưỡng PGRs tốt Với mẫu cuống, tăng sinh hoàn toàn phụ thuộc vào điều kiện dinh dưỡng ngoại mô Mẫu thân với loại tế bào cấu trúc cho mạch dẫn nên cần tỷ lệ cytokinin/auxin cao cho kích thích tạo chồi Hình 1: Tử La Lan sau tuần nuôi cấy Tạo sẹo Cúc Sau tuần ni cấy, mẫu Cúc khơng có thay đổi màu sắc, hình dạng kích thước Sau hai tuần ni cấy, có mẫu tăng lên kích thước, khơng có thay đổi khác màu sắc hình dạng mẫu lại Sau ba tuần, chúng tơi tiến hành thu mẫu Lấy mẫu khỏi ống nghiệm, sau tiến hành cân mẫu để xác định trọng lượng mô sẹo Mẫu Số mẫu tạo sẹo Khối lượng trung bình mẫu(g) Lá 0.020975 Thân 0.01435 Cuống 0.0035 Bảng 2: Sự tạo sẹo Cúc sau ba tuần nuôi cấy môi trường MS có bổ sung BA 2,4-D Thu mẫu Cúc ta có, bốn mẫu đề tạo sẹo, hai mẫu thân tạo sẹo có ba mẫu cuống tạo sẹo Thảo luận Biểu đồ 3: Tỉ lệ tạo sẹo Cúc thay đổi nồng độ 2,4-D 1,5 2,5 (mg/l) BA (mg/l) Hình 2: Mẫu Cúc sau tuần ni cấy So sánh để tối để sáng mẫu để tối có khả tạo sẹo tốt Nhìn chung tỉ lệ tạo sẹo nhóm mức cao Khối lượng sẹo khơng xác cân khối lượng mẫu, tỉ lệ mơ sẹo mẫu so với mẫu nên khối lượng mơ sẹo khơng xác Thông thường tạo mô sẹo diễn tốt tối[1] Các mẫu cấy sáng có khối lượng tươi lớn tối có khả quang hợp phần Đồng thời tối, diệp lục tố bị phá hủy mẫu bị cháy phần Biểu đồ 4: Khối lượng mô sẹo Cúc Tạo PLB Ly Ly Sau ba tuần nuôi cấy, lấy mẫu xác định tỉ lệ tạo PLB tạo chồi có Mẫu Lá Vảy Số mẫu Số mẫu tạo PLB 4 Bảng 3: Sự tạo PLB Ly Ly sau ba tuần nuôi cấy mơi trường MS có bỏ sung BA NAA Thu mẫu Ly Ly ta có, mẫu không tạo PLB, bốn mẫu vảy tạo PLB Thảo luận Mẫu không tạo PLB mà có mẫu vảy tơi tạo PLB Dựa vào biểu đồ cho thấy tỉ lệ tạo PLB giảm dần tỉ lệ tạo PLB vảy tăng dần Nguyên nhân theo nghiên cứu Nhut et al[2], nồng độ TDZ=0.5 NAA=0.2 mg/l (tỳ lệ C/A=2.5) cho 23 PLB mẫu cấy Người ta chứng minh dùng TDZ:NAA với ty lệ 1:1 SỐ MOL với nồng độ mol khoảng mM thu lượng PLB cao [3] Tuy nhóm tỷ lệ số mol BA:NAA khoảng nồng độ mol nên khơng phải tối ưu cho tạo PLB Hình 3: Mẫu Ly Ly sau ba tuần nuôi cấy Biểu đồ 5: Tỉ lệ tạo PLB Ly Ly thay đổi nồng độ BA 0,3 0,4 0,5 0,6 (mg/l) NAA 0,5 Tạo chồi chồi bên cây(mg/l) Ngải Giấm Sau hai tuần nuôi cấy, tiến hành thu mẫu xác định só lượng chồi mẫu hình thái cảu chồi Mẫu Ngọ n Thân Thân Thân Thân Chồi số Màu sắc Chiều cao(cm) Số Số đốt Kích thước lá(đo từ lên) (cm) Xanh 0.8 0.6, 0.9, 0.4, 0.3 Xanh 0.4 0 Xanh 0.3 0 Xanh 0.3 0 Xanh 0.8 0.5, 0.8, 1, 0.6, 0.3, 0.4, 1.2, 1, 0.8 Xanh 0.6 0 Xanh 0.8 0.9, 0.7, 1.1, 1.1, 0.8 Xanh 0.6 0.7, 1, 1.2, 1.2, 1 Xanh 0.8 0.7, 0.5, 1.2, 1.2, 0.7 Xanh 0.7 0.7, 0.8, 1.3, 1.4, 0.9, 0.7 Xanh 0.7 0.2, 0.2, 0.8, 1.1, 1.2, 1.0 Xanh 0.6 0.4, 0.4, 1.2, 1.2, 1.3, 1.1 Bảng 4: Sự hình thành chồi chồi bên Ngải Giấm mơi trường MS có chứa BA Sau thu mẫu Ngải Giấm ta có tất mẫu tạo chồi, khơng có mẫu tạo rễ Thảo luận Dựa vào biểu đồ cho thấy tỉ lệ tạo chồi cao BA nằm khoảng 0,05 0,1 mg/l Bảng cho thấy tất mẫu chồi Theo kết trên, nồng độ cytokinin ngoại sinh có tác động đối kháng tác dụng với auxin: Ngăn ưu đỉnh, tăng chồi bên, cản rễ Nhiều tài liệu hợp thức khẳng định tác dụng đó[4] Nồng độ cytokinin cần cho tăng sinh chồi phụ thuộc vào loại mẫu cấy độ tuổi mẹ Mẫu cấy già, nồng độ cytokinin cần cho phát sinh hình thái nhiều.Với nồng độ cytokinin q cao kích thích nhiều chồi nhỏ khơng thể kéo dài, làm cho bị biến dạng làm cho chồi chứa nước.[1] Biểu đồ 6: Tỉ lệ tạo chồi Ngải Giấm thay đổi Kếtnồng luậnđộ BA 0,05 0,1 0,15 (mg/l) Hình 4: Mẫu Ngải Giấm sau tuần nuôi cấy BA=2.5 mg/l với nồng độ NAA 0.1 mg/l thích hợp việc tăng sinh chồi bất định tử la lan để thúc đẩy sẹo Cúc tốt cần nuôi cấy tối với nồng độ chất điều hòa tốt cho việc tạo mẫu BA 2mg/l 2,4-D 1,5 mg/l PLB tạo từ vảy Ly Ly phát triển tối ưu BA =0.5 mg/l với NAA 0.5 mg/l Đối với ngải giấm, muốn mẫu cấy phát triển cao khơng cần bổ sung PGR đễ kích ứng chồi bên nhiều, BA 0.1 mg/l tốt Kết chưa phải tối ưu thao tác lượng giới hạn mẫu, thời gian giới hạn, khơng có tính thống kê điều kiện ni cấy coi chuẩn Lời cám ơn Chúng xin chân thành cảm ơn cô Võ Thanh Phúc thầy Nguyễn Minh Thiện tận tình hướng dẫn tạo điều kiện cho sử dụng phòng thí nghiệm thiết bị phòng 108 B2 Khoa Kỹ thuật Hóa học Trường Đại học Bách khoa ĐHQGTPHCM Mơn thí nghiệm cơng nghệ tế bào môn học mang ý nghĩa thực tiễn giúp sinh viên nắm kiến thức kỹ thuật thao tác nuôi cấy mô điều kiện in vitro Trong mơn học, mơn học thí nghiệm cơng nghệ tế bào môn học giúp sinh viên nắm sát thực tế kỹ thuật môn học giúp sinh viên nắm rõ kiến thức kỹ thuật Ý kiến môn học, sinh viên chưa nắm đầy đủ thao tác từ lúc đưa mẫu vào phòng thí nghiệm lúc mang mẫu ngồi nên hy vọng mơn giảng dạy thêm phần xử lý mẫu bước mang mẫu ngồi mơi trường Tài liệu tham khảo [1] Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên Công nghệ tế bào (pp.166, 109) Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [2] an Nhut, Duong & Nguyen, Trinh-Don & Nguyen, Vu & Nguyen, Thien & Thi Thu Thuy, Dang & Duy, Nguyen & Teixeira da Silva, Jaime (2006) Advanced technology in micropropagation of some important plants (pp.325335) [3] Madhumita Majumder • Sudhanshu S Maiti• Nirmalya Banerjee “Direct and Callus-mediated Protocorm-like Body Induction and High Frequency Adventitious Shoot Regeneration in an Endangered Orchid – Dendrobium farmeri Paxt (Orchidaceae)” Floriculture and Ornamental Biotechnology ©2010 Global Science Books [4] Edwin F George et al Plant Propagation by Tissue Culture 3rd Edition Volume The Background (Chapter 6) Springer ... điều kiện cho chúng tơi sử dụng phòng thí nghiệm thiết bị phòng 108 B2 Khoa Kỹ thuật Hóa học Trường Đại học Bách khoa ĐHQGTPHCM Mơn thí nghiệm cơng nghệ tế bào môn học mang ý nghĩa thực tiễn giúp... nhân chồi bên Ngải Giấm Các mẫu thực vật phòng thí nghiệm cung cấp 30 ngày tuổi để làm nguyên liệu cho thí nghiệm Phương pháp Kỹ thuật ni cấy mô tế bào thực vật Thao tác cấy thực tủ vô trùng, trước... thao tác nuôi cấy mô điều kiện in vitro Trong môn học, môn học thí nghiệm cơng nghệ tế bào mơn học giúp sinh viên nắm sát thực tế kỹ thuật môn học giúp sinh viên nắm rõ kiến thức kỹ thuật Ý kiến