Nghiên cứu tái sinh invitro rong sụn kappaphycus alvarezii từ mô sẹo

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM PHẠM THỊ MÁT NGHIÊN CỨU TÁI SINH INVITRO RONG SỤN KAPPAPHYCUS ALVAREZII TỪ MÔ SẸO Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Văn Nguyên PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn, thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Phạm Thị Mát i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh, TS Nguyễn Văn Nguyên, ThS Đào Duy Thu tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Công nghệ Sinh học thực vật, Khoa Công nghệ Sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức phòng Nghiên cứu Cơng nghệ Sinh học Biển, Viện Nghiên cứu Hải sản giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Phạm Thị Mát ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Trích yếu luận văn ix Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu yêu cầu nghiên cứu 1.3 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học, thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tổng quan rong sụn Kappaphycus alvarezii 2.2 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy mô rong biển Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 20 3.1 Địa điểm nghiên cứu 20 3.2 Thời gian nghiên cứu 20 3.3 Vật liệu nghiên cứu 20 3.4 Nội dung nghiên cứu 20 3.5 Phương pháp nghiên cứu 20 Phần Kết thảo luận 28 4.1 Kết nghiên cứu 28 4.1.3 Kết nghiên cứu phương pháp tái sinh chồi thích hợp 39 4.1.3 Kết nghiên cứu so sánh hiệu tái sinh dạng mô sẹo khác 42 4.1.4 Kết nghiên cứu mơi trường dinh dưỡng thích hợp cho sinh trưởng rong tái sinh 44 4.1.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng cường độ ánh sáng đến sinh trưởng rong in vitro 48 4.2 Thảo luận 52 4.2.1 Khử trùng tạo vật liệu 52 4.2.2 Cảm ứng tạo mô sẹo 54 4.2.3 Phương pháp tái sinh chồi từ mô sẹo 58 iii Phần Kết luận kiến nghị 62 5.1 Kết luận 62 5.2 Kiến nghị 62 Danh mục cơng trình cơng bố 63 Tài liệu tham khảo 64 Phụ lục 70 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BA - benzylaminopurine IAA indole-3-acetic acid NAA 1-naphtalene acetic axit v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Kết nghiên cứu nuôi cấy mô từ mô sẹo rong biển 11 Bảng 2.2 Môi trường, chất điều hòa sinh trưởng thử nghiệm ni cấy từ mơ sẹo số đối tượng rong biển 15 Bảng 4.1 Hiệu tái sinh phương pháp phát sinh phôi 39 Bảng 4.2 Các dạng mô sẹo hình thành giai đoạn cảm ứng tạo phôi 42 Bảng 4.3 Hiệu tái sinh chồi dạng mô sẹo 43 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Những khu vực trồng nhiều rong sụn Hình 2.2 Các lồi rong sụn thương mại Kappaphycus alvarezii Hình 2.3 Vòng đời rong sụn Kappaphycus alvarezii Hình 2.4 Quá trình tái sinh mô sẹo thành 13 Hình 4.1 Hiệu chế độ khử trùng khác 29 Hình 4.2 Mẫu cấy số cơng thức thí nghiệm 30 Hình 4.3 Mơ sẹo phát sinh ni cấy mô rong sụn 31 Hình 4.4 Các loại mơ sẹo hình thành (sau 60 ngày ni cấy) 32 Hình 4.5 Tỷ lệ sống tỷ lệ cảm ứng mô sẹo cường độ ánh sáng khác 32 Hình 4.6 Tỷ lệ loại mơ sẹo cường độ ánh sáng khác 33 Hình 4.7 Mẫu cấy cường độ ánh sáng khác 33 Hình 4.8 Tỷ lệ sống tỷ lệ cảm ứng mô sẹo mẫu cấy nồng độ agar 34 Hình 4.9 Tỷ lệ loại mơ sẹo mẫu cấy nồng độ agar khác 35 Hình 4.10 Mẫu cấy nồng độ agar khác 36 Hình 4.11 Tỷ lệ cảm ứng mơ sẹo mẫu cấy môi trường bổ sung chất điều tiết sinh trưởng khác 53 Hình 4.12 Tỷ lệ cảm ứng mô sẹo mẫu cấy môi trường bổ sung chất điều tiết sinh trưởng khác 37 Hình 4.13 Khả cảm ứng mô sẹo mẫu rong nuôi cấy môi trường PES bổ sung chất điều tiết sinh trưởng khác 38 Hình 4.14 Mơ sẹo tái sinh phương pháp nuôi lỏng trực tiếp phương pháp phát sinh phôi 39 Hình 4.15 Mơ sẹo sau ni cấy tăng trưởng 40 Hình 4.16 Sự tái sinh chồi mơ sẹo 41 Hình 4.17 Các dạng mơ sẹo hình thành giai đoạn cảm ứng tạo phơi thạch 42 Hình 4.18 Kết tái sinh dạng mô sẹo 44 Hình 4.19 Tốc độ sinh trưởng mẫu rong môi trường khác 45 Hình 4.20 Số lượng chồi tăng lên mẫu rong môi trường khác 62 Hình 4.21 Sự tăng chiều dài mẫu rong môi trường khác 46 Hình 4.22 Động thái sinh trưởng rong môi trường khác 30 ngày 47 vii Hình 4.23 Rong ni môi trường khác 48 Hình 4.24 Tốc độ sinh trưởng mẫu rong cường độ ánh sáng khác 49 Hình 4.25 Số lượng chồi tăng lên mẫu rong cường độ ánh sáng khác 49 Hình 4.26 Sự tăng chiều dài mẫu rong cường độ ánh sáng khác 50 Hình 4.27 Động thái sinh trưởng rong điều kiện ánh sáng khác 51 Hình 4.28 Rong ni cường độ ánh sáng khác 51 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Phạm Thị Mát Tên Luận văn: Nghiên cứu tái sinh in vitro rong sụn Kappaphycusalvarezii từ mô sẹo Ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60.42.02.01 Tên sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Kappaphycus alvarezii lồi rong biển nhiệt đới có giá trị kinh tế quan trọng, đặc biệt ngành công nghiệp carrageenan Tuy nhiên, từ trước đến nay, giống rong biển nói chung, giống rong sụn nói riêng chủ yếu sản xuất phương pháp sinh sản sinh dưỡng truyền thống Đây ngun nhân dẫn đến suy thối nguồn gen, giảm biến dị di truyền, đồng thời làm giảm tốc độ sinh trưởng, hàm lượng carrageenan làm tăng mức độ cảm nhiễm bệnh rong kéo theo suy giảm suất thu hoạch Những nhược điểm khắc phục công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật Mặc dù giới có thành cơng định, nhiên, ni cấy mơ rong sụn Việt Nam lĩnh vực mẻ Chính vậy, chúng tơi tiến hành thực đề tài nhằm cảm ứng tái sinh thành công mô sẹo rong sụn K.alvarezii tạo phòng thí nghiệm làm sở xây dựng quy trình nhân giống rong sụn in vitro để phục vụ nhu cầu rong giống thiết yếu Phương pháp nghiên cứu Mẫu rong sụn K alvarezii thu thập từ vịnh Cam Ranh, Khánh Hòa chuyển phòng Nghiên cứu Cơng nghệ Sinh học Biển - Viện Nghiên cứu Hải sản Sau đó, rong ni thích nghi điều kiện nhà kính tuần phòng thí nghiệm tuần Phương pháp ni cấy mơ rong sụn có bước gồm (1) khử trùng tạo vật liệu sạch, (2) cảm ứng tạo mô sẹo, (3) tái sinh mô sẹo thành chồi (4) nuôi tạo tản rong Việc nghiên cứu lựa chọn phương pháp tạo vật liệu sở bố trí thí nghiệm so sánh hiệu ba phương pháp khử trùng kháng sinh nguyên chất hãng Sigma, kháng sinh có nguồn gốc dược phẩm dung dịch Javen nồng độ, thời gian khác Để tối ưu cho việc cảm ứng mô sẹo, ảnh hưởng số yếu tố môi trường tiến hành nghiên cứu nồng độ agar (0,4; 0,8; 1,5 2%), cường độ ánh sáng (5, 35, 70 µmol photon.m-2.s-1) chất điều tiết sinh trưởng (IAA, NAA, BA) Sau đó, mơ sẹo nghiên cứu tái sinh hai phương pháp phương pháp nuôi trực tiếp môi trường lỏng phương pháp cảm ứng phát sinh phôi môi ix Total 9 27 2.57778 3.80000 3.15556 3.17778 253859 173205 260342 555624 084620 057735 086781 106930 2.38264 3.66686 2.95544 2.95798 2.77291 3.93314 3.35567 3.39758 2.200 3.600 2.800 2.200 2.800 4.000 3.600 4.000 Test of Homogeneity of Variances Sochoitang Levene Statistic df1 1.396 df2 Sig 24 267 ANOVA Sochoitang Sum of Squares df Mean Square Between Groups 6.729 3.364 Within Groups Total 1.298 8.027 24 26 054 F Sig 62.219 000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Sochoitang Tukey HSD (I) (J) Congthucanhsang Congthucanhsang Mean Difference (I-J) Std Error -1.222222* 109620 000 -1.49597 -.94847 3 * -.577778 1.222222* 644444* 577778* 109620 109620 109620 109620 000 000 000 000 -.85153 -.30403 94847 1.49597 37069 91820 30403 85153 -.644444* 109620 000 -.91820 -.37069 * The mean difference is significant at the 0.05 level 90 Sig 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound Homogeneous Subsets Sochoitang Tukey HSD Congthucanhsang N Subset for alpha = 0.05 1 Sig 9 2.57778 3.15556 1.000 3.80000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 9.000 14 Kết phân tích ảnh hưởng ánh sáng đến tốc độ sinh trưởng rong ONEWAY Tocdosinhtruong BY Congthucanhsang /STATISTICS DESCRIPTIVES HOMOGENEITY /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=TUKEY ALPHA(0.05) Oneway [DataSet0] D:\New folder (2)\Anhsang-Tocdosinhtruong.sav Descriptives Tocdosinhtruong N Total Mean 9 27 Std Std Error Deviation 4.28692 4.90134 4.19354 4.46060 043673 052673 046471 323228 014558 017558 015490 062205 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound 4.25335 4.86085 4.15782 4.33274 4.32049 4.94183 4.22926 4.58847 Test of Homogeneity of Variances Tocdosinhtruong Levene Statistic 298 df1 df2 Sig 24 745 91 Minimum Maximum 4.207 4.839 4.118 4.118 4.343 4.983 4.265 4.983 ANOVA Tocdosinhtruong Sum of Squares df Mean Square Between Groups 2.662 1.331 Within Groups Total 055 2.716 24 26 002 F 583.580 Sig .000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Tocdosinhtruong Tukey HSD (I) (J) Congthucanhsang Congthucanhsang Mean Difference (I-J) Std Error 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.614419* 022511 000 -.67064 -.55820 3 * 093385 614419* 707804* -.093385* 022511 022511 022511 022511 001 000 000 001 03717 55820 65159 -.14960 14960 67064 76402 -.03717 -.707804* 022511 000 -.76402 -.65159 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Tocdosinhtruong Tukey HSD Congthucanhsan g Sig Sig N Subset for alpha = 0.05 4.19354 4.28692 4.90134 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 9.000 92 15 Kết phân tích ảnh hưởng môi trường đến chiều cao rong ONEWAY Chieucaotang BY Congthucmoitruong /STATISTICS DESCRIPTIVES HOMOGENEITY /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=TUKEY ALPHA(0.05) Oneway [DataSet0] D:\New folder (2)\Moitruong-Chieucaotangtrungbinhmau.sav Descriptives Chieucaotang N Mean Std Deviation Std Error 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Total 14.40000 9.32222 11.77778 27 11.83333 234521 139443 178730 2.120595 Minimum Maximum Upper Bound 078174 14.21973 046481 9.21504 059577 11.64039 408109 10.99445 14.58027 9.42941 11.91516 12.67221 14.100 9.100 11.500 9.100 14.800 9.500 12.000 14.800 F Sig Test of Homogeneity of Variances Chieucaotang Levene Statistic 2.685 df1 df2 Sig 24 089 ANOVA Chieucaotang Sum of Squares df Mean Square Between Groups 116.069 58.034 Within Groups Total 851 116.920 24 26 035 1636.480 000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Chieucaotang Tukey HSD (I) (J) Congthucmoitruong Congthucmoitruong Mean Difference (I-J) 93 Std Error Sig 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 5.077778* 088773 000 * 3 2.622222 -5.077778* -2.455556* -2.622222* 088773 088773 088773 088773 5.29947 000 2.40053 2.84391 000 -5.29947 -4.85609 000 -2.67725 -2.23386 000 -2.84391 -2.40053 2.455556* 088773 000 4.85609 2.23386 2.67725 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Chieucaotang Tukey HSD Congthucmoitruo ng Sig N Subset for alpha = 0.05 9.32222 11.77778 14.40000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 9.000 16 Kết phân tích ảnh hưởng môi trường đến số lượng chồi rong ONEWAY Sochoitang BY Congthucmoitruong /STATISTICS DESCRIPTIVES HOMOGENEITY /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=TUKEY ALPHA(0.05) Oneway [DataSet0] Descriptives Sochoitang N Total 9 27 Mean 6.42222 2.51111 4.28889 4.40741 Std Deviation 233333 176383 226078 1.642214 Std Error 95% Confidence Interval for Mean 077778 058794 075359 316044 94 Lower Bound Upper Bound 6.24287 2.37553 4.11511 3.75777 6.60158 2.64669 4.46267 5.05705 Minimum Maximum 6.000 2.200 4.000 2.200 6.800 2.800 4.600 6.800 Test of Homogeneity of Variances Sochoitang Levene Statistic df1 304 df2 Sig 24 741 ANOVA Sochoitang Sum of Squares Between Groups Within Groups Total Post Hoc Tests df Mean Square 69.025 34.513 1.093 70.119 24 26 046 F Sig 757.593 000 Multiple Comparisons Dependent Variable: Sochoitang Tukey HSD (I) (J) Congthucmoitruong Congthucmoitruong Mean Difference (I-J) Std Error 3.911111* 3 * 2.133333 -3.911111* -1.777778* -2.133333* 1.777778* 100615 000 100615 100615 100615 100615 Sig N Subset for alpha = 0.05 2.51111 4.28889 6.42222 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 95 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 3.65985 4.16238 000 1.88207 2.38460 000 -4.16238 -3.65985 000 -2.02904 -1.52651 000 -2.38460 -1.88207 100615 000 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Sochoitang Tukey HSD Congthucmoitruo ng Sig 1.52651 2.02904 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 9.000 17 Kết phân tích ảnh hưởng môi trường đến tốc độ sinh trưởng rong ONEWAY Tocdosinhtruong BY Congthucmoitruong /STATISTICS DESCRIPTIVES HOMOGENEITY /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=TUKEY ALPHA(0.05) Oneway [DataSet0] D:\New folder (2)\Moitruong-Tocdosinhtruong.sav Descriptives Tocdosinhtruong N Total Mean 9 27 5.00405 4.48958 4.96771 4.82044 Std Deviatio n Std Error 95% Confidence Interval for Mean 042721 060511 035294 243192 014240 020170 011765 046802 Minimum Lower Bound Upper Bound 4.97121 4.44306 4.94058 4.72424 5.03689 4.53609 4.99483 4.91665 Maximum 4.939 4.424 4.908 4.424 5.063 4.587 5.014 5.063 Test of Homogeneity of Variances Tocdosinhtruong Levene Statistic 2.247 df1 df2 Sig 24 128 ANOVA Tocdosinhtruong Sum of Squares df Mean Square Between Groups 1.484 742 Within Groups Total 054 1.538 24 26 002 96 F 330.610 Sig .000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Tocdosinhtruong Tukey HSD (I) (J) Congthucmoitruong Congthucmoitruong Mean Difference (I-J) 3 N Lower Bound 254 000 000 254 -.01942 -.57024 -.53390 -.09211 09211 -.45871 -.42236 01942 478129* 022331 000 42236 53390 4.48958 1.000 4.96771 5.00405 254 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 9.000 97 Upper Bound 57024 Subset for alpha = 0.05 9 95% Confidence Interval 45871 036347 -.514476* -.478129* -.036347 Sig Sig .514476* 022331 000 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Tocdosinhtruong Tukey HSD Congthucmoitruo ng Std Error 022331 022331 022331 022331 Phụ lục Kết nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo vật liệu Nồng độ khử trùng (%) Thời gian khử trùng Tỷ lệ sống (%) Tỷ lệ mẫu (%) Tỷ lệ tạo mô sẹo (%) 100 66,67±11,55 12 100 66,67±5,77 46,67±5,77 24 100 73,33±5,77 43,33±5,77 48 100 83,33±5,77 43,33±5,77 12 100 76,67±5,77 43,33±5,77 24 100 93,33±5,77 40,00±10,00 48 100 100 33,33±5,77 12 96,67±5,77 96,67±5,77 23,33±5,77 24 90,00±10,00 100 16,67±5,77 10 48 86,67±5,77 100 6,67±5,77 11 12 63,33±5,77 60,00±10,00 Công thức Chất khử trùng Đối chứng 1,5 Hỗn hợp kháng sinh Sigma 3,0 4,5 12 1,5 100 24 100 66,67±5,77 63,33±5,77 48 100 73,33±5,77 53,33±5,77 12 100 66,67±5,77 50,00±10,00 24 86,67±5,77 80,00±10,00 46,67±5,77 48 66,67±5,77 93,33±5,77 30,00±10,00 12 93,33±5,77 86,67±5,77 43,33±5,77 24 70,00±10,00 96,67±5,77 40,00 19 48 53,33±5,77 96,67±5,77 30,00±10,00 20 giây 100 86,67±5,77 96,67±5,77 10 giây 100 86,67±5,77 83,33±5,77 22 15 giây 100 90,00 70,00±10,00 23 giây 100 10 giây 100 90,00 33,33±5,77 25 15 giây 96,67±5,77 93,33±5,77 33,33±11,54 26 giây 100 10 giây 96,67±5,77 93,33±5,77 36,67±5,77 15 giây 96,67±5,77 93,33±5,77 33,33±5,77 0,000 0,000 0,000 13 14 15 16 Hỗn hợp kháng sinh dược phẩm 3,0 17 18 4,5 21 24 0,25 Javen 0,5 27 0,75 28 P 98 90,00±10,00 46,67±11,54 90,00±10,00 40,00±10,00 Phụ lục Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ agar đến khả cảm ứng mô sẹo Công thức Nồng độ agar (%) Tỷ lệ sống (%) Tỷ lệ mô sẹo (%) 0,4 80,00 0,8 Chất lượng mô sẹo Loại Loại Loại 66,67 63,33 3,33 100 93,33 33,33 30,00 30,00 1,5 100 96,67 13,33 26,67 56,67 2,0 100 90,00 33,33 16,67 40,00 0,002 0,003 0,000 0,022 0,000 P Phụ lục Kết nghiên cứu ảnh hưởng cường độ ánh sáng đến khả cảm ứng mô sẹo Công thức Cường độ ánh sáng (µmol photon m-2.s-1) Tỷ lệ sống (%) Tỷ lệ mô sẹo (%) 100 35 70 P Chất lượng mô sẹo Loại Loại Loại 96,67 13,33 30,00 53,33 76,67 43,33 23,33 20,00 0 0 0 0,000 0,000 0,024 0,002 0,000 99 Phụ lục Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả cảm ứng tạo mô sẹo Công thức Nồng độ BA (mg/l) Nồng độ IAA (mg/l) Nồng độ Tỷ lệ NAA mẫu (mg/l) sống (%) 0 100 2,5 5,0 0,5 Tỷ lệ mô sẹo (%) Chất lượng mô sẹo Loại Loại Loại 96,67 16,67 26,67 53,33 100 96,67 20,00 33,33 43,33 100 93,33 13,33 36,67 43,33 0 100 100 16,67 20,00 63,33 0,5 2,5 100 96,67 26,67 23,33 46,67 0,5 5,0 100 66,67 53,33 13,33 0 100 100 10,00 90,00 2,5 100 96,67 36,67 30,00 30,00 5,0 100 86,67 23,33 40,00 23,33 10 0 0,5 100 93,33 46,67 23,33 23,33 11 0 1,0 100 86,67 3,33 30,00 53,33 12 0,5 0,5 100 90,00 43,33 23,33 23,33 13 0,5 1,0 100 90,00 13,33 46,67 30,00 14 0,5 100 86,67 30,00 43,33 13,33 15 1,0 96,67 73,33 26,67 40,00 6,67 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 P 100 Phụ lục Sự sinh trưởng rong môi trường dinh dưỡng khác Công thức Môi trường Số lượng (n) Tốc độ sinh trưởng (%/ngày) Chiều cao tăng (mm) Số chồi tăng CT1 PES 45 5,004 ±0,014 14,400±0,078* 6,422±0,078* CT2 f/2 45 4,490±0,020* 9,322±0,046* 2,511±0,059* CT3 NH4ClKH2PO4 45 4,968±0,012 11,778±0,060* 4,289±0,075* (Số liệu thể giá trị trung bình ± SD * Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê độ tin cậy 95%) Phụ lục Biến động khối lượng rong nuôi môi trường dinh dưỡng khác 30 ngày Khối lượng rong (mg) Môi trường PES Môi trường f/2 Môi trường NH4ClKH2PO4 Ngày 14,867±0,033 14,844±0,029 14,844±0,029 Ngày 21,467±0,219 19,622±0,085 20,756±0,208 Ngày 10 29,644±0,199 24,667±0,216 28,800±0,238 Ngày 15 39,911±0,200 32,956±0,247 37,333±0,221 Ngày 20 48,978±0,239 40,933±0,247 46,889±0,273 Ngày 25 58,333±0,156 48,667±0,313 56,133±0,464 Ngày 30 66,711±0,245 57,089±0,322 65,889±0,229 (Số liệu thể giá trị trung bình ± SD) 101 Phụ lục 10 Sự sinh trưởng rong cường độ ánh sáng khác Công thức Cường độ ánh sáng (µmol photon.m2 -1 s ) Số lượng (n) Tốc độ sinh trưởng (%/ngày) Chiều cao tăng (mm) Số chồi tăng 10 45 4,287 ±0,015* 7,956±0,084* 2,578±0,085* 35 45 4,901±0,018* 11,956±0,078* 3,800±0,058* 70 45 4,194±0,015* 6,878±0,113* 3,156±0,087* (Số liệu thể giá trị trung bình ± SD * Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê độ tin cậy 95%) Phụ lục 11 Biến động khối lượng rong nuôi cường độ ánh sáng khác 30 ngày Khối lượng rong (mg) 10 µmol photon.m-2.s-1 35 µmol photon.m-2.s-1 70 µmol photon.m-2.s-1 Ngày 14,867±0,033 14,867±0,033 14,867±0,033 Ngày 19,689±0,111 20,044±0,132 19,533±0,115 Ngày 10 27,089±0,219 28,156±0,210 26,289±0,164 Ngày 15 35,444±0,210 36,556±0,264 35,622±0,187 Ngày 20 43,133±0,365 44,756±0,240 43,867±0,167 Ngày 25 49,378±0,207 54,956±0,282 49,437±0,204 64,689±0,298 52,311±0,177 Ngày 30 53,800±0,262 (Số liệu thể giá trị trung bình ± SD) 102 Phụ lục 12 Hình ảnh số hóa chất, thiết bị trình nghiên cứu Chất tẩy rửa, betadine Javen Hỗn hợp kháng sinh nguyên chất Sigma Hỗn hợp kháng sinh dược phẩm Hình Hóa chất khử trùng Kính hiển vi soi Kính hiển vi soi Máy đo pH Khúc xạ kế Màng lọc 0,2 µm Máy đo độ ẩm Hình Một số thiết bị sử dụng 103 Cân phân tích Máy đo ánh sáng Soi mẫu đoạn rong R Rửa rong với chất tẩy rửa Xử lý với dung dịch betadine Xử lý với dung dịch Javen Cắt đoạn rong 3-5 mm Cấy mẫu rong Nuôi cảm ứng tạo mô sẹo Soi mơ sẹo Hình Một số hoạt động nghiên cứu Hình Rong ni điều kiện sụcc khí bình tam giác bình cầu c 104 ... tài: Nghiên cứu tái sinh in vitro rong sụn Kappaphycusalvarezii từ mô sẹo nhằm tạo rong giống nuôi cấy mô phục vụ nhu cầu thiết yếu 1.2 MỤC TIÊU VÀ YÊU CẦU NGHIÊN CỨU 1.2.1 Mục tiêu nghiên cứu. .. văn: Nghiên cứu tái sinh in vitro rong sụn Kappaphycusalvarezii từ mô sẹo Ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60.42.02.01 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Kappaphycus. .. 39 4.1.3 Kết nghiên cứu so sánh hiệu tái sinh dạng mô sẹo khác 42 4.1.4 Kết nghiên cứu mơi trường dinh dưỡng thích hợp cho sinh trưởng rong tái sinh 44 4.1.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng