Nghiên cứu ảnh hưởng của prostaglandin đến các chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu và khả năng sinh trưởng của tế bào hạt ở tầng trước tế bào trứng gà

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÁI NGUYÊN - 2014 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố, sử dụng để bảo vệ học vị Các thơng tin, tài liệu trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc i năm 2014 Tác giả i LỜI CẢM ƠN Hoàn thành luận văn này, nỗ lực thân, nhận giúp đỡ quý báu, bảo tận tình thầy hướng dẫn TS ực luận văn Nhân dịp hoàn thành luận văn tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc thầy hướng dẫn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành quan tâm giúp đỡ thầy PGS.TS Lê Ngọc Công tồn thể thầy giáo, cán bộ, nhân viên khoa Sinh - KTNN, khoa sau đại học - Đại học sư phạm Thái Nguyên giúp đỡ q trình thực đề tài nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo cán viên chức đơn vị: Phòng phân tích sinh hóa - Phòng khám Đa khoa Trung tâm Thái Ngun, Phòng thí nghiệm Sinh lý người động vật, Khoa SinhKTNN - Trường Đại học Sư phạm - Đai học Thái Ngun, Phòng thí nghiệm công nghệ gen động vật - Đại học Chiết Giang Trung Quốc tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ nhiệt tình cho tơi q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp, người thân tạo điều kiện, động viên q trình thực đề tài hồn thành luận văn Trong trình thực luận văn hạn chế thời gian, kinh phí trình độ chun mơn nên khơng tránh khỏi sai sót Rất mong nhận ý kiến đóng góp quý báu thầy cô giáo, nhà khoa học bạn bè Tôi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, 15 tháng năm 2014 Tác giả ii LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ vi MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tính chất lý hố học chức máu 1.1.1 Tính chất lý học, chức thành phần máu 1.1.1.1 Hồng cầu 1.1.1.2 Hemoglobin (Hb) 1.1.1.3 Bạch cầu 1.1.2 Tính chất sinh hóa học máu 1.1.2.1 Protein huyết tiểu phần protein huyết 1.1.2.2 Hệ số A/G 10 1.2 10 10 11 13 16 1.2.5 17 (EGF) 17 kemia inhibitory factor (LIF) 18 iii (SCF) 18 1.3 (PG) 19 1.3.1 Lịch sử nghiên cứu 19 1.3.2 Sinh tổng hợp PG 20 1.3.3 Phân loại 21 1.3.4 Cách gọi tên PG 22 1.3.5 Tác dụng sinh lý 22 1.4 23 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu nghiên cứu 25 2.2 Địa điểm nghiên cứu 25 2.3 Thiết bị hóa chất 25 2.3.1 Thiết bị 25 2.3.2 Hóa chất 25 2.4 Phương pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phương pháp tách chiết lấy máu 27 2.4.2 Phương pháp phân tich tiêu sinh lý, sinh hóa máu 27 2.4.3 Phương pháp xử lý nuôi cấy nguyên tế bào trứng 27 2.4.4 Phương pháp xử lý nuôi cấy tế bào hạt 27 2.4.5 Phương pháp hóa miễn dịch PCNA 28 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu 28 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Ảnh hưởng PG đến tiêu sinh lý, sinh hóa máu sinh sản tế 29 3.1.1 Ảnh hưởng PG đến tiêu sinh lý máu 29 3.1.2 Ảnh hưởng PG đến tiêu sinh hóa máu 30 3.1.3 Ảnh hưởng PG đến khả sinh sản tế bào hạt 31 33 iv 3.2.1 Ảnh hưởng PG đến phát triển độ dày màng tế bào hạt 34 3.2.2 Ảnh hưởng PG độ dày tầng màng tế bào 36 3.2.3 Ảnh hưởng PG tới khả sinh trưởng số lượng tế bào hạt 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 38 Kết luận 38 Đề nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CS : EGF : Epidermal growth factor Hb : Hemoglobin LIF : Leukemia inhibitory factor LWF : LYF : PG : Protaglandin SCF : Stem cell factor SWF : SYF : DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng PG đến số lượng hồng cầu, bạch cầu hàm lượng huyết sắc tố máu phôi gà 29 Bảng 3.2 Ảnh hưởng PG đến hàm lượng protein tiểu phần protein huyết 30 Bảng 3.3 Ảnh hưởng PG đến khả sinh sản tế bào hạt 31 DANH MỤC CÁC HÌNH 1.1 Tế bào hạt (Granulosa Cell) 17 (PG) 19 Hình 1.3 Sơ đồ sinh tổng hợp prostaglandin 20 Hình 1.4 Acid prostanoic 21 Hình 1.5 PGE2 21 Hình 1.6 PGF2 22 3.1 Ảnh hưởng PG đến sinh sản tế bào hạt 32 Hình 3.2 Đặc điểm hình thái tế bào hạt tách từ tế bào hạt màu vàng nhỏ (SYF) sau 24h nuôi cấy 33 3.3 Ảnh hưởng PG đến độ dày màng tế hạt sau 24 ni cấy…………………………………………………………….…34 Hình 3.4 Hình thái tầng tế bào hạt, tầng màng tế bào tầng trước tế bào trứng sau 24 35 3.5 Ảnh hưởng PG đến độ dày màng tế trứng sau 24 nuôi cấy 36 3.6 PG nuôi cấy sau 24 số lượng tế bào hạt tầng trước tế bào trứng thay đổi 37 Chỉ tiêu X mx Cv % X mx 10 Cv% X mx 100 Cv% X mx Cv % Protein toàn phần 50,44±1,48 8,75 51,50±3,25 7,45 52,40±1,60 7,10 51,20±1,32 7,70 Albumin 20,20±1,30 11,31 21,33±1,50 11,20 21,35±1,30 11,17 21,27±2,34 12,26 α5,850±2,20 14,00 globulin βglobulin γglobulin A/G 5,92±0,37 13,05 5,96±0,32 14,28 5,80±0,35 12,90 6,60±0,32 13,25 7,08±0,25 13,50 7,28±0,31 14,30 7,20±0,20 13,65 8,15±0,50 12,20 8,45±0,35 12,70 8,40±0,50 14,25 8,25±0,45 13,25 0,980 0,992 0,993 1,000 Từ bảng kết cho thấy: hàm lượng protein toàn phần, hàm lượng albumin tiểu phần globulin nhóm đối chứng nhóm thí nghiệm khơng có sai khác rõ rệt (P>0,05) Theo Kalior Lê Khắc Thận (trích dẫn Trần Thanh Vân cs, 1997) protein huyết phụ thuộc vào hướng sản xuất giống, cường độ đẻ Giống vịt hướng trứng có hàm lượng protein huyết cao vịt kiêm dụng vịt chuyên thịt [13] Nguyễn Thị Minh cs, 2001 γ-globulin giữ vai trò quan trọng, có chứa kháng thể huyết thanh, protein miễn kháng khả kháng bệnh c - ng tiêu chí để đánh giá khả kháng bệnh, thích nghi với điều kiện mơi trường [9] Hệ số A/G khơng có chênh lệch : 1-100,992; 0,993; 1,00 (P > 0,05), kết luận rằng: PG khơng có ảnh hưởng đến tiêu sinh hóa máu nói chung 3.1.3 Ảnh hưởng PG đến khả sinh sản tế bào hạt Tiến hành nuôi cấy tế bào hạt, sau nuôi cấy 16 giờ, quan sát thấy tế bào bám chặt vào đáy ni cấy, hình thành đường gân nhỏ, hình thái tròn nhỏ Sau , quan sát thấy tế bào hạt bám chặt dàn khắp đáy ni cấy, xuất hình thái lập phương rõ, hình thành tầng đơn duỗi thẳng đan xen lẫn nhau, hình thái tế bào hạt rõ ràng, cảm quan hình khối tăng, số lượng tế bào hạt tăng mạnh (Hình 3.2) Bảng 3.3 Ảnh hưởng PG đến khả sinh sản tế bào hạt Nồng độ PG (ng/ml) Chỉ tiêu đánh giá 10 100 Số lượng tế bào/mm 935,25 1214,54 1431,50 1285,45 Hệ số PCNA (%) 61,45 69,04 74,15 70,41 Ảnh hưởng PG đến khả sinh sản tế bào hạt chúng tơi thể Hình 3.2 Tra PG nồng độ từ 1-100ng /ml thấy số lượng tế bào hạt lơ thí nghiệm tăng so với lô đối chứng (p