Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 37 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
37
Dung lượng
857,1 KB
Nội dung
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI MAM CHANDARA KHẢOSÁTẢNHHƯỞNGCỦAĐIỀUKIỆNCẤPKHÍVÀNHIỆTĐỘĐỂTHUSINHKHỐIDƯỚIDẠNGBÀOTỬCỦABacillusclausii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI MAM CHANDARA KHẢOSÁTẢNHHƯỞNGCỦAĐIỀUKIỆNCẤPKHÍVÀNHIỆTĐỘĐỂTHUSINHKHỐIDƯỚIDẠNGBÀOTỬCỦABacillusclausii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: DS Lê Ngọc Khánh Nơi thực hiện: Bộ môn Công nghiệp Dược HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Với tất kính trọng, tơi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo DS Lê Ngọc Khánh, người động viên, hướng dẫn thời gian làm khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn Tiến sĩ Đàm Thanh Xuân toàn thể thầy cô giáo anh chị kỹ thuật viên mơn Cơng Nghiệp Dược nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt thời gian nghiên cứu để hồn thành khóa luận Tơi xin cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng đào tạo, thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội tạo điềukiện thuận lợi, dìu dắt tơi suốt q trình học tập trường Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè ln động viên giúp đỡ sống học tập Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 21 tháng 05 năm 2013 Sinh viên MAM CHANDARA Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.Vi khuẩn Bacillus…………………………………………………………… 1.1.1 Giới thiệu chi Bacillus ……………………………………………7 1.1.2 Vị trí phân loại………………………………………………………….7 1.1.3 Đặc điểm vi khuản Bacillus…………………………………………………7 1.1.4 Bàotử khả hình thành bào tử……………………………… 1.1.5 Ứng dụng vi khuẩn Bacillus…………………………………… 10 1.2 Giới thiệu Bacillus clausii………………………………………….11 1.2.1 Đặc điểm sinh thái sinh lý Bacillus clausii………………………11 1.2.2 Ứng dụng Bacillus clausii………………………………………14 1.3 Các phương pháp ni cấy……………………………………………16 CHƯƠNG 2: : NGUN LIỆU, HĨA CHẤT, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị………………………….…… ………17 2.1.1 Nguyên liệu, hóa chất……………………………………………… 17 2.1.2 Máy móc, thiết bị………….………….………………….… ……… 17 2.1.3 Môi trường sử dụng………………………………………………… 17 2.2 Nội dung nghiên cứu…………………………………………… …….18 2.2.1 Xây dựng đường cong sinh trưởng Bacillus clausii……………18 2.2.2 Khảosátảnhhưởngđiềukiệncấpkhíđểthusinh khối………….18 2.3 Phương pháp nghiên cứu…………………………………………… 18 2.3.1 Hoạt hóa giống từ chế phẩm Enterogermina……………………18 2.3.2 Giữ giống thạch nghiêng…………………………………… 18 2.3.3 Chuẩn bị dịch nhân giống………………………………………….19 2.3.4 Phương pháp xây dựng đường cong sinh trưởng xác định lượng sinhkhối ướt dịch lên men Bacillusclausii thời điểm khác ………………………………………………………………………19 2.3.5 Phương pháp khảosátảnhhưởngđiềukiệncấpkhí lên khả tăng sinhkhối ………………………………………………………19 2.3.6 Phương pháp khảosátảnhhưởngđiềukiệnnhiệtđộ lên khả tăng sinhkhối ……………………………………………………….20 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN………… 21 3.1 Xây dựng đường cong sinh trưởng Bacillus clausii……………21 3.2 KhảosátảnhhưởngđiềukiệncấpkhínhiệtđộđểthusinhkhốidạngbàotửBacillusclausii so sánh với Bacillus subtilis…………………………………………………………………….23 3.2.1 Khảosátảnhhưởng chế độcấpkhí lên khả tăng sinhkhốiBacillusclausii so sánh với Bacillus subtilis……………… 23 3.2.2 Khảosátảnhhưởngnhiệtđộ lên khả tăng sinhkhốiBacillusclausii …………………………………………………………….28 KẾT LUẬN VÀKIẾN NGHỊ…………………… ……………………….32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Các hóa chất sử dụng nghiên cứu 17 Bảng 2.2 Các máy móc thiết bị sử dụng nghiên cứu 17 Bảng 3.1 Lượng sinhkhốithuBacillusclausii thời 21 điểm khác Bảng 3.2 Ảnhhưởng tốc độ lắc lên khả tăng sinhkhối 24 Bacillusclausiinhiệtđộ 370C Bảng 3.3 Ảnhhưởng tốc độ lắc lên khả tăng sinhkhối 25 Bacillus subtilis nhiệtđộ 370C Bảng 3.4 So sánh sinhkhốiBacillusclausiiBacillus subtilis 27 tốc độ lắc khác 370C Bảng 3.5 Lượng sinhkhốithunhiệtđộ 300C 370C 29 Bacillusclausii Bảng 3.6 Lượng sinhkhốithunhiệtđộ 300C 370C 30 Bacillus subtilis Bảng 3.7 So sánh khả tăng sinhkhốinhiệtđộ 300C 370C BacillusclausiiBacillus subtilis 31 DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 BàotửBacillus subtilis Hình 1.2 BàotửBacillus anthracis Hình 1.3 Quá trình hình thành bàotửBacillusclausii Hình 1.4 Cấu tạo bàotử Hình 1.5 Bacillusclausii mơi trường đặc 13 Hình 1.6 BàotửBacillusclausii kính hiển vi điện tử 13 Hình 1.7 Chế phẩm Enterogermina 15 Hình 1.8 Chế phẩm Erceflora 15 Hình 1.9 Chế phẩm Bazivic 15 Hình 3.1 Sơ đồ biểu diễn đường cong sinh trưởng Bacillus 22 clausii Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn biến thiên lượng sinhkhốiBacillus 24 clausii theo tốc độ lắc nhiệtđộ 370C Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn biến thiên lượng sinhkhốiBacillus 26 subtilis theo tốc độ lắc nhiệtđộ 370C Hình 3.4 Đồ thị so sánh sinhkhốiBacillusclausiiBacillus 27 subtilis tốc độ lắc khác 370C Hình 3.5 Đồ thị biến thiên lượng sinhkhốiBacillusclausii 29 nhiệtđộ 300C 370C Hình 3.6 Đồ thị biến thiên lượng sinhkhốiBacillus subtilis nhiệtđộ 300C 370C 30 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi ĐẶT VẤN ĐỀ Trong đường ruột người có diện lớn hệ vi sinh vật với khoảng 100 tỷ vi khuẩn, bao gồm vi sinh vật có lợi vi sinh vật có hại Các vi sinh vật có lợi có tác động tốt cho sức khỏe tổng hợp vitamin, giảm hình thành chất gây hại ruột, hỗ trợ tiêu hóa, giúp hấp thu tốt cải thiện rối loạn đường ruột, tăng cường sức khỏe, giúp phòng bệnh Ngược lại, vi sinh vật gây hại gây tác động xấu cho thể hình thành chất gây hoại tử ruột, chất gây ung thư, tiêu chảy… Trong sống hàng ngày, hệ vi sinh vật đường ruột dễ bị tác động yếu tố bên ngồi lão hóa, dùng kháng sinh, thức ăn không vệ sinh… làm cân số lượng vi khuẩn có lợi vi khuẩn có hại, gây nên bệnh đường ruột tiêu chảy điển hình Vì việc trì lượng vi sinh vật có lợi chiếm ưu nhằm hỗ trợ chức tiêu hóa miễn dịch đường ruột quan trọng Sử dụng chế phẩm chứa vi sinh vật có lợi (Probiotic) nhằm mục đích bổ sung, cân lại vi sinh vật đường ruột phương pháp phòng chữa bệnh tiêu chảy Trong Probiotic chế phẩm Enterogermina thực bật, chế phẩm chứa bàotửBacillusclausii kháng đa kháng sinh, sử dụng dạngbàotử nên vi khuẩn qua dược dày với tỷ lệ sống sót cao điều trị rối loạn tiêu hóa hiệu Tuy nhiên việc nghiên cứu điềukiện nuôi cấy Bacillusclausii quan tâm Vì vậy, đề tài “Khảo sátảnhhưởngđiềukiệncấpkhíđểthusinhkhốidạngbàotử vi khuẩn Bacillus clausii” thực nhằm giải mục tiêu: - Xây dựng đường cong sinh trưởng Bacillusclausii - KhảosátảnhhưởngđiềukiệncấpkhínhiệtđộđểthusinhkhốidạngbàotửBacillusclausii so sánh với Bacillus subtilis CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vi khuẩn Bacillus 1.1.1 Giới thiệu chi Bacillus TừBacillus theo tiếng Latinh có nghĩa hình que, Bacillus gọi trực khuẩn Chi Bacillus gồm nhiều loài biết đến như: Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bacillus globigii, Bacillus natto, Bacillusclausii [15] Do đa dạng loài chi Bacillus, trực khuẩn sống phân lập môi trường khác nhau, từ đất, nước, không khí, trùng người 1.1.2 Vị trí phân loại Theo Bergey’s manual of Systematic of Bacteriology 2nd edition, 2004 chi Bacillus thuộc họ Bacillaceae họ thuộc Bacillales, lớp Bacilli, ngành Firmicutes giới vi khuẩn Việc phân loại vi khuẩn theo hình thái sinh lý hồn thiện việc giải trình tự gen 16S r.ARN Theo phương pháp người ta thấy Bacillus có mối quan hệ họ hàng với số loại vi khuẩn khơng hình thành nội tử Enterococcus, Lactobacillus Streptococcus cấp phân loại có mối quan hệ với Literia Staphylococcus cấp phân loại họ Chi Bacillusbao gồm 400 loài (476 loài) 1.1.3 Đặc điểm vi khuẩn Bacillus Vi khuẩn Bacillus có hình que, thường Gram dương, có khả di động, hơ hấp hiếu khí kỵ khí tùy tiện, hầu hết có phản ứng catalase dương tính, sử dụng khí oxy làm chất nhận electron trình trao đổi chất Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi Về dinh dưỡng sinh trưởng, Bacillus sử dụng hợp chất hữu đơn giản loại đường, acid amin acid hữu Trong số trường hợp chúng lên men cacbohydrat qua loạt chuỗi phản ứng phức tạp tạo glycerol glutadiol Phần lớn Bacillussinh trưởng tối ưu nhiệtđộ 30- 45ºC, pH khác nhau, dao động từ 2-11 Khả hình thành bàotử đặc điểm quan trọng chi Bacillus 1.1.4 Bàotử khả hình thành bàotử Bàotử (nội bào tử) chi Bacillus miêu tả lần đầu năm 1872 Ferdinand Cohn nghiên cứu Bacillus subtilis sau Koch nghiên cứu mầm bệnh than vi khuẩn Bacillus anthracis năm 1976 [12] Hình 1.1 BàotửBacillus subtilis Hình 1.2 BàotửBacillus anthracis Bàotử thường có dạng hình cầu elip, kích thước 0,8 - 1,4 µm chiều dài, thể nghỉ vi khuẩn cuối giai đoạn sinh trưởng điềukiện sống không thuận lợi Khi gặp điềukiện thuận lợi bàotử lại nảy mầm phát triển thành tế bàosinh dưỡng Sự hình thành nội bàotử qua bước: - Trong tế bàosinh dưỡng ADN phân chia thành nhiễm sắc thể (chromosom) riêng biệt màng tế bào chất lấn sâu vào phân chia tế bào 21 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Xây dựng đường cong sinh trưởng Bacillusclausii - Mục đích Xây dựng đường cong sinh trưởng, xác định thời điểm thusinhkhốiBacillusclausii cho thí nghiệm - Tiến hành Trong bình nón chứa 50ml mơi trường canh thang, hoạt hóa giống từ chế phẩm Enterogermina theo phương pháp nêu mục 2.3.1 Nuôi máy lắc 150 vòng/phút 370C 24h thu dịch nhân giống Cấy 5ml dịch nhân giống vào 50ml môi trường canh thang hấp tiệt trùng để nguội đến nhiệtđộ phòng, ni cấy máy lắc 370C, 150 vòng/phút Tại thời điểm khác (16h, 24h, 40h, 48h, 64h, 72h, 88h, 96h), ly tâm dịch lên men thusinh khối, cân sinhkhốiđể xây dựng đường cong sinh trưởng - Kết trình bày bảng 3.1 hình 3.1 Bảng 3.1 Lượng sinhkhốithuBacillusclausii thời điểm khác Thời điểm (h) Lượng sinhkhối (g) 16 24 40 48 64 72 88 96 0,84 0,98 1,10 1,09 1,02 0,97 0,92 0,92 Chênh lệnh sinhkhối (%) so với thời điểm 16,0 24h 12,0 11,2 4,0 1,0 6,5 6,5 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 22 Lượng sinhkhối (g) 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 16 24 40 48 64 72 80 88 96 Thời điểm (h) Hình 3.1 Sơ đồ biểu diễn đường cong sinh trưởng Bacillusclausii - Nhận xét Dựa vào đường cong sinh trưởng, ta nhận thấy thời điểm từ 16 – 40h lượng sinhkhối B clausii tăng dần theo thời gian Lượng sinhkhốithu lớn 1,10g thời điểm 40h (lớn 12% so với 24h) Kể từthứ 40, lượng sinhkhối giảm dần, đạt thấp 0,92g thời điểm 88 – 96h (ít 6,5% so với 24h) Kết tương tự với kết Nguyễn Thị Bích Ngọc [3] cho thấy sinhkhối tăng nhanh theo thời gian thời điểm 24 – 36h đầu Theo công bố khác Nguyễn Thị Hiền [4], bàotử bắt đầu xuất sau 40 – 48h nuôi cấy môi trường lỏng điềukiệntự nhiên (môi trường không bổ sung Mn2+, không xử lý nhiệtđểthubào tử) Trong nghiên cứu này, tượng lượng sinhkhốiBacillusclausii thời điểm 40h bắt đầu giảm dần so với giá trị lớn giải thích dựa vào đặc điểm hình thành bàotử chúng Hơn nữa, theo Nguyễn Thị Hiền [4], có phương pháp xử lý phù hợp hồn tồn chuyển dạng tế bàosinh dưỡng thành bàotử với hiệu suất cao Do đó, nghiên cứu này, việc khảosátđiềukiệnđểthu lượng bàotử lớn đưa khảosátđiềukiệnđểthu lượng sinh 23 khối lớn Đối chiếu với kết bảng 3.1 cho thấy, lượng sinhkhốithu thời điểm 40h nhiều nhất, sau 40h lượng sinhkhối chuyển thành dạngbàotửKhi so sánh với lượng sinhkhốithu thời điểm 24h, chênh lệch khơng q lớn (12%) Chính vậy, để tiết kiệm thời gian, môi trường dinh dưỡng thuận tiện cho việc lấy mẫu nghiên cứu, thời điểm 24h lựa chọn đểthusinhkhối cho thí nghiệm 3.2 KhảosátảnhhưởngđiềukiệncấpkhínhiệtđộđểthusinhkhốidạngbàotửBacillusclausii so sánh với Bacillus subtilis 3.2.1 Khảosátảnhhưởng chế độcấpkhí lên khả tăng sinhkhốiBacillusclausii so sánh với Bacillus subtilis Theo nhiều nghiên cứu cơng bố, Bacillusclausii thuộc nhóm vi khuẩn hiếu khí Đối với vi sinh vật hiếu khí nói chung chi Bacillus nói riêng, lưu lượng khí cung cấp q trình ni cấy đóng vai trò quan trọng đến sinh trưởng phát triển chúng Với mục đích thu lượng bàotử nhiều đưa khảosátđiềukiện tạo sinhkhối lớn nên thí nghiệm nhằm mục tiêu khảosátảnhhưởng tốc độcấpkhí máy lắc đến lượng sinhkhốithu q trình lên men Bacillusclausii quy mơ phòng thí nghiệm, đồng thời so sánh với Bacillus subtilis (là chủng vi khuẩn Bacillus phổ biến) điềukiện - Tiến hành Trong bình nón chứa 50ml mơi trường canh thang, hoạt hóa giống từ chế phẩm Enterogermina theo phương pháp nêu mục 2.3.1 Nuôi máy lắc 150 vòng/phút 370C 24h thu dịch nhân giống Cấy 5ml dịch nhân giống vào 50ml môi trường canh thang hấp tiết trùng để nguội đến nhiệtđộ phòng Lựa chọn điềukiệnnhiệtđộ cho lô lên men 370C với tốc độ lắc khác 100, 150 200 vòng/phút thời gian 24h Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 24 Ly tâm dịch sau lên men 24h, thu cắn (4000 vòng/phút 15 - 20 phút) theo phương pháp mục 2.3.4 Xác định lượng sinhkhối ướt cách cân cắn thu Thí nghiệm tiến hành lần độc lập - Kết trình bày bảng 3.2 hình 3.2 Bảng 3.2 Ảnhhưởng tốc độ lắc lên khả tăng sinhkhốiBacillusclausiinhiệtđộ 370C Lượng sinhkhối (g) Tốc độ lắc (vòng/phút) Trung Lần Lần Lần 100 0,64 0,73 0,72 0,69 150 0,70 0,74 0,86 0,76 200 0,74 0,80 0,81 0,78 bình Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn biến thiên lượng sinhkhốiBacillusclausii theo tốc độ lắc nhiệtđộ 370C 25 - Nhận xét Kết bảng 3.2 cho thấy với tốc độ lắc tăng lượng sinhkhốiBacillusclausii tăng, lượng sinhkhối đạt cực đại 0,78g tốc độ lắc 200 Như vậy, độcấpkhí tăng, sinhkhốiBacillusclausii tăng Điều hoàn toàn phù hợp với đặc điểm sinh lý Bacillusclausii kết nghiên cứu trước [3], [4] Tuy nhiên, so sánh lượng sinhkhối 150 vòng/phút 200 vòng/phút cho thấy chệnh lệnh không nhiều (0,02g), nên lựa chọn tốc độ lắc 150 vòng/phút để làm thí nghiệm Song song tiến hành thí nghiệm trên, Bacillus subtilis kết được trình bày bảng 3.3 hình 3.3 Bảng 3.3 Ảnhhưởng tốc độ lắc lên khả tăng sinhkhốiBacillus subtilis nhiệtđộ 370 C Lượng sinhkhối (g) Tốc độ lắc (vòng/phút) Trung Lần Lần Lần 100 0,53 0,71 0,73 0,65 150 0,68 0,76 0,78 0,74 200 1,02 1,03 1,10 1,05 bình Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 26 Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn biến thiên lượng sinhkhốiBacillus subtilis theo tốc độ lắc nhiệtđộ 370C - Nhận xét Kết bảng 3.3 cho thấy Bacillus subtilis ảnhhưởngđiềukiệnkhí tương tự với BacillusclausiiKhi tốc độ lắc tăng, sinhkhối tăng đạt cao chế độ lắc 200 vòng/phút 1,05g Sự chênh lệnh khối lượng sinhkhối chế độcấpkhí 200 vòng/phút 100 vòng/phút cao (đạt giá trị 0,4g) Kết so sánh sinhkhốiBacillusclausiiBacillus subtilis điềukiên lắc khác 370C thể bảng Bảng 3.4 hình 3.4 27 Bảng 3.4 So sánh sinhkhốiBacillusclausiiBacillus subtilis tốc độ lắc khác 370C Lượng sinhkhối (g) Tốc độ 100 Tốc độ 150 Tốc độ 200 vòng/phút vòng/phút vòng/phút Bacillusclausii 0,69 0,76 0,78 Bacillus subtilis 0,65 0,74 1,05 Chênh lệnh lượng sinhkhối 6,00 2,70 34,60 Vi sinh vật chủng VSV (%) 1.2 Lượng sinhkhối (g) 1.05 0.8 0.6 0.76 0.78 0.69 0.74 0.65 0.4 BacillusclausiiBacillus subtilis 0.2 100 vòng/phút 150 vòng/phút 200 vòng/phút Tốc độ lắc Hình 3.4 Đồ thị so sánh sinhkhốiBacillusclausiiBacillus subtilis tốc độ lắc khác 370C Theo đồ thị hình 3.4 so sánh tốc độ lắc, thấy 100 vòng/phút 150 vòng/phút, lượng sinhkhốiBacillusclausii lớn Bacillus subtilis Tuy nhiên chênh lệnh không nhiều Trong Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 28 với tốc độ lắc 200 vòng/phút, lượng sinhkhốiBacillusclausii lại 34,60% so với Bacillus subtilis Như Bacillus clausii, độcấpkhí thay đổi từ 100 – 200 vòng/phút biến thiên lượng sinhkhối khơng cao Sai khác tốc độ lắc 150 200 vòng/phút khơng đáng kể Dođộ lắc 150 vòng/phút chọn cho thí nghiệm 3.2.2 Khảosátảnhhưởngnhiệtđộ lên khả tăng sinhkhốiBacillusclausii - Mục đích Khảosátảnhhưởngnhiệtđộ lên khả tăng sinhkhốiBacillusclausii so sánh với Bacillus subtilis - Tiến hành Trong bình nón chứa 50ml mơi trường canh thang, hoạt hóa giống từ chế phẩm Enterogermina theo phương pháp nêu mục 2.3.1 Ni máy lắc 150 vòng/phút 370C 24h thu dịch nhân giống Cấy 5ml dịch nhân giống vào 50ml môi trường canh thang hấp tiệt trùng để nguội đến nhiệtđộ phòng Ni cấy với tốc độ lắc 150 vòng/phút hai nhiệtđộ khác 300C 370C Ly tâm dịch lên men sau 24h, thu cắn (ly tâm 4000 vòng/phút thời gian 15 – 20 phút) Xác định lượng sinhkhối ướt cách cân cắn thu Thí nghiệm tiến hành lần độc lập 29 - Kết trình bày bảng 3.5 hình 3.5 Bảng 3.5 Lượng sinhkhốithunhiệtđộ 300C 370C BacillusclausiiNhiệtđộ Lượng sinhkhối (g) Lần Lần Lần Trung Bình 30OC 0,86 0,86 0,94 0,84 37 OC 0,70 0,74 0,86 0,76 Chênh lệnh lượng sinhkhốinhiệtđộ (%) 10,5 Lần thí nghiệm Hình 3.5 Đồ thị biến thiên lượng sinhkhốiBacillusclausiinhiệtđộ 300C 370C - Nhận xét Kết bảng 3.5 cho thấy khối lượng sinhkhốiBacillusclausiithu sau ni cấy 24h với tốc độ lắc 150 vòng/phút nhiệtđộ 300C nhiều 10,5% so với 370C Như thấy 300C Bacillus Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 30 clausii nghiên cứu phát triển thuận lợi Kết phù hợp với nhiệtđộ tối ưu công bố để nuôi cấy chủng Bacillusclausii DSM 8716 [17], [19] Như chọn nhiệtđộ 300C nhiệtđộđểthusinhkhối lớn Đối với Bacillus subtilis tiến hành thí nghiệm trên, kết trình bày bảng 3.6 hình 3.6 Bảng 3.6 Lượng sinhkhốithunhiệtđộ 300C 370C Bacillus subtilis Lượng sinhkhối (g) Nhiệtđộ Lần Lần Lần Trung Bình 30OC 0,93 0,95 0,97 0,95 37 OC 0,68 0,76 0,78 0,76 Chênh lệnh lượng sinhkhốinhiệtđộ (%) 28,3 Lần thí nghiệm Hình 3.6 Đồ thị biến thiên lượng sinhkhốiBacillus subtilis nhiệtđộ 300C 370C 31 Kết bảng 3.6 cho thấy lượng sinhkhốiBacillus subtilis thu sau nuôi cấy 24h với tốc độ lắc 150 vòng/phút nhiệtđộ 300C cao 28,3% so với 370C Kết tương tự với kết Bacillusclausii - So sánh khả tăng sinhkhối tốc độ lắc 150 vòng/phút nhiệtđộ 300C 370C BacillusclausiiBacillus subtilis Bảng 3.7 So sánh khả tăng sinhkhốinhiệtđộ 300C 370C BacillusclausiiBacillus subtilis Vi sinh vật Lượng sinhkhối (g) 300C 370C Bacillusclausii 0,84 0,76 Bacillus subtilis 0,95 0,74 Chênh lệnh lượng sinhkhối 13,10 2,70 chủng VSV (%) Theo hình bảng 3.7, ta thấy nhiệtđộ 370C lượng sinhkhốithuBacillusclausiiBacillus subtilis tương đương (chênh lệch 2,7%) lượng sinhkhối 300C Ở nhiệtđộ 300C lượng sinhkhốiBacillusclausii lượng sinhkhốiBacillus subtilis 13,1% Như vậy, thấy điềukiệnnhiệtđộ 370C khả phát triển chủng vi sinh vật gần giống nhau, nhiệtđộ 300C, Bacillusclausii phát triển với tốc độ chậm Bacillus subtilis Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 32 KẾT LUẬN VÀKIẾN NGHỊ Kết luận Sau thời gian làm thực nghiệm khoa học, rút số kết luận sau: Xây dựng đường cong sinh trưởng Bacillusclausiitừ 16h đến 96h Lượng sinhkhốithu lớn 1,10g thời điểm 40h, nhiên chênh lệch so với 24h không nhiều Để tiết kiệm thời gian dinh dưỡng, lựa chọn thời điểm đểthusinhkhối cho thí nghiệm 24h Khảosátảnhhưởngđiềukiệncấpkhínhiệtđộ đến sinhkhốiBacillus clausii: - Khảosátảnhhưởng tốc độ lắc 100, 150, 200 vòng/phút đến lượng sinhkhốiBacillusclausii Lựa chọn tốc độ lắc 150 vòng/phút tốc độđểthusinhkhối với lượng sinhkhối tương đương lượng sinhkhối 200 vòng/phút cao so với lắc 100 vòng/phút - Khảosátnhiệtđộảnhhưởng đến sinhkhối Lựa chọn nhiệtđộ 300C nhiệtđộđểthusinhkhối tốt BacillusclausiiKiên nghị: - Tiếp tục nghiên cứu ảnhhưởngđiều kiện, môi trường dinh dưỡng ảnhhưởng đến sinhkhối - Nghiên cứu ảnhhưởngnhiệt độ, môi trường dinh dưỡng đến việc tạo bàotử TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ môn Vi sinh – Sinh học, Trường Đại Học Dược Hà Nội (2007), Vi sinh vật học, Hà Nội, tr 22– 24 [1] Nguyễn Đức Lượng (2004), Công nghệ Enzym, Nhà xuất Đại học quốc gia Thành Phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Bích Ngọc (2011), Khảosátđiềukiện ni cấy vi khuẩn Bacillus clausii, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ khóa 06-11 Nguyễn Thị Hiền (2012), Khảosát khả nẳng hình thành bàotử vi khuẩn Bacillus clausii, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ khóa 07-12 Trần Thu Hoa (2002), Nghiên cứu khả dung bàotửBacillus subtilis tái tổ hợp làm nguyên liệu thuốc chủng ngừa qua niêm mạc, Luận án tiến sĩ Dược học, Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, tr.33- 35 Tiếng Anh A.A Denizci, D Kazan, E.C.A Abeln, and A Erarslan Newly isolated Bacillusclausii GMBAE 42: an alkaline protease producer capable to grow under higly alkaline conditions Journal of Applied Microbiology 2004 Volume 96 p 320–327 N K Asha Devil, K Balakrishan, R Gopal and S Padmavathyl (2008), “Bacillus clausii MB9 from the east coast regions of India: Isolation, biochemical characterization an antimicrobial potentials”, Current science, vol 95, pp 627-635 Dilek Kazan Aziz Akın Denizci and Mine N Kerimak Oner Altan Erarslan (2005), “Purification and characterization of a serine alkaline protease from Bacillusclausii GMBAE 42”, Microbiol Biotechnol, vol 32, pp 335–344 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi C Ganesh Kumar, Han-Seung Joo, Yoon-Mo Koo, Seung R Paik and Chung-Soon Chang (2004), “Thermostable alkaline protease from a novel marine haloalkalophilic Bacillusclausii isolate”, World Journal of Microbiology & Biotechnology, vol 20, pp 351–357 10 Hatsuo Aoki and Ralph A Slepecky (1973), “Inducement of a Heat Resistance in Bacillus fastidiosus Spores by Manganuos Ions”, Journal of bacteriology, pp 137-143 11 Kageyama Y, Takaki Y, Shimamura S, Nishi S, Nogi Y, Uchimura K, Kobayashi T, Hitomi J, Ozaki K, Kawai S, Ito S, and Horikoshi K Intragenomic diversity of the V1 regions of 16S rRNA genes in high-alkaline protease-producing Bacillusclausii spp Extremophiles 2007 12 Maria R Spinosa, Tiziana Braccini, Ezio Ricca, Maurilio De Feliceb, Lorenzo Morelli, Gianni Pozzi, Marco R Oggioni (2000), “On the fate of ingested Bacillus spores”, Res Microbiol, vol 151, pp 361-368 13 Marseglia GL, Tosca M, Cirillo I, et al (March 2007) "Efficacy of Bacillusclausii spores in the prevention of recurrent respiratory infections in children: a pilot study" Ther Clin Risk Manag (1): 13–7 14 Nicholson, W.L and P Setlow (1990), “Sporulation, germination, and outgrowth”, pp 391 – 450 15 Preben Nielsen, Dagmar Fritze and Fergus G Priest (1995), “Phenetic diversity of alkaliphilic Bacillus strains: proposal for nine new species”, Microbiology, vol 141, pp 1745-1761 16 Rosa Lippolis, Antonio Gnoni, Anna Abbrescia, Damiano Panelli, Stefania Maiorano, Maria Stefania Paternoster, Anna Maria Sardanelli, Sergio Papa, Antonio Gaballo (2011), “Comparative proteomic analysis of four Bacillusclausii strains: Proteomic expression signature distinguishes protein profile of the strains”, Journal of proteomics, pp - 10 17 S Yazdany and K B Lashkari (1975), “Effect of pH on sporulation of Bacillus stearothermophilus”, Appl Environ Microbiol, Vol 30(1), pp 1-3 18 Seyedeh Faranak Ghaemi Oskouie, Fatemeh Tabandeh, Bagher Yakhchali, Fereshteh Eftekhar (2008), “Response surface optimization of medium composition for alkaline protease production by Bacillus clausii”, Biochemical Engineering Journal, vol 39, pp 37–42 19 Shirai, T., A Suzuki, T Yamane, T Ashida, T Kobayashi, J Hitomi, and S Ito High-resolution crystal structure of M-protease: phylogeny aided analysis of the high-alkaline adaptation mechanism Protein Eng 1997 Volume 10 p 627-634 ... cong sinh trưởng Bacillus clausii 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện cấp khí nhiệt độ để thu sinh khối dạng bào tử Bacillus clausii so sánh với Bacillus subtilis 2.2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng chế độ. .. 3.2 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện cấp khí nhiệt độ để thu sinh khối dạng bào tử Bacillus clausii so sánh với Bacillus subtilis…………………………………………………………………….23 3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng chế độ cấp khí. .. Khảo sát ảnh hưởng điều kiện cấp khí để thu sinh khối dạng bào tử vi khuẩn Bacillus clausii thực nhằm giải mục tiêu: - Xây dựng đường cong sinh trưởng Bacillus clausii - Khảo sát ảnh hưởng điều