Đánh giá sự lưu tồn và phân lập vi khuẩn có khả năng phân hủy chlorpyrifos ethyl trên ba mô hình canh tác - chuyên lúa, lúa - màu và chuyên màu ở đồng bằng sông Cửu Long

GIỚI THIỆU 1.1. Đặt vấn đề Việt Nam là một nước nông nghiệp với tổng diện tích đất canh tác nông nghiệp khoảng 26,28 triệu ha, nông dân chiếm hơn 2/3 dân số cả nước. Vì vậy, nông nghiệp chiếm vị trí vô cùng quan trọng trong nền kinh tế quốc dân. Theo thống kê của ngành nông nghiệp, tổng kim ngạch xuất khẩu nông sản trong 10 tháng đầu năm 2014 của nước ta đạt 25,85 tỷ USD. Trong đó, Đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL) - khu vực sản xuất nông nghiệp lớn nhất cả nước đóng góp một phần không nhỏ. Sự gia tăng sản lượng nông nghiệp là kết quả của việc nâng cao kỹ thuật canh tác và hoạt động thâm canh tăng vụ, tăng cường công tác bảo vệ thực vật (BVTV). Do điều kiện khí hậu nóng ẩm của ĐBSCL dễ làm cho sâu bệnh phát triển, hậu quả là việc sử dụng thuốc BVTV ngày càng tăng và đa dạng hơn về mặt chủng loại. Việc sử dụng thuốc BVTV quá mức đã làm cho một lượng lớn thuốc còn lưu tồn trong đất, nước, nông sản gây độc hại cho các sinh vật khác và sức khỏe cộng đồng. Trong số các loại thuốc BVTV đang được sử dụng rộng rải, chlorpyrifos ethyl là hoạt chất của thuốc trừ sâu thuộc nhóm lân hữu cơ. Hoạt chất này thuộc loại có tính độc thần kinh ở mức cao, gây hại cho người và nhiều loại động vật có lợi. Chlorpyrifos ethyl có khả năng hấp phụ vào đất rất cao, hệ số Koc dao động từ 652 đến 30.381 L/kg tùy từng loại đất (Gebremariam et al., 2012). Vì vậy đất phù sa và đất phèn có thể ảnh hưởng khác nhau đến sự hấp phụ chlorpyrifos ethyl vào đất và qua đó ảnh hưởng đến dư lượng hoạt chất này trong đất. Đồng thời, qua kết quả điều tra ở ĐBSCL của dự án RIP (Chương trình VLIR) hợp tác giữa Trường Đại học Cần Thơ và Trường Đại học Leuven của Bỉ cho thấy chlorpyrifos ethyl được nông dân sử dụng trên cả 3 mô hình canh tác chuyên lúa, luân canh lúa - màu, chuyên màu và lượng sử dụng cao nhất trên mô hình chuyên màu, khi chuyển đổi sang mô hình luân canh lúa - màu thì lượng sử dụng thấp nhất và sử dụng với lượng cao hơn khuyến cao từ 2-15 lần. Do đó, việc sử dụng chlorpyrifos ethyl lâu dài có thể làm lưu tồn hoạt chất này ở trong đất, sự phóng thích chlorpyrifos ethyl từ trong đất kết hợp với sự rửa trôi sẽ gây nguy cơ ô nhiễm loại hoạt chất này trong tầng nước mặt cũng như các môi trường khác. Trong đất chlorpyrifos ethyl có thể bị phân hủy bằng các con đường hóa học, vật lý và sinh học. Sự phân hủy sinh học thuốc BVTV nói chung và chlorpyrifos ethyl nói riêng đang rất được quan tâm. Phân hủy sinh học là khi các vi sinh vật đất có tham gia vào quá trình phân hủy (Andreu and Picó, 2004). Trong quá trình phân hủy sinh học những loài vi sinh vật đất đóng vai trò hết sức quan trọng vì chúng có thể sử dụng hoặc phân hủy các loại thuốc BVTV, đặc biệt là những loại thuốc có độ bền cao. Vì vậy, sự phân hủy sinh học làm giảm dư lượng thuốc BVTV một cách hiệu quả, bền vững, thân thiện với môi trường mà ít tốn kém và cũng là yếu tố chính quyết định số phận của các loại thuốc BVTV. Nhiều nhà nghiên cứu trên thế giới đã phân lập được các dòng vi khuẩn có khả năng phân hủy tốt chlorpyrifos ethyl như: Dòng vi khuẩn Enterobacter chủng B14 (Singh et al., 2004), Alcaligenes faecalis DSP3 (Yang et al., 2006), Paracoccus-TRP (Gangming et al., 2008). Mặt khác, ở ĐBSCL, nông dân đang canh tác trên 2 nhóm đất (đất phèn và đất phù sa) điển hình, với 3 kiểu mô hình phổ biến: chuyên lúa (ngập nước thường xuyên, điều kiện yếm khí chiếm ưu thế, lúa - màu (ngập khô luân phiên, điều kiện yếm khí xen kẽ hiếu khí) và chuyên màu (môi trường cạn, điều kiện hiếu khí chiếm ưu thế). Mô hình canh tác quyết định loại cây trồng (lúa hoặc rau màu) và tạo nên đặc tính lí hóa, sinh học đặc trưng của đất ở mỗi mô hình canh tác. Loại cây trồng trên mỗi mô hình của từng nhóm đất sẽ quyết định đến loại và lượng thuốc BVTV sử dụng và qua đó ảnh hưởng đến sự lưu tồn của chúng trong đất. Loại và lượng thuốc BVTV sử dụng trên các đối tượng cây trồng khác nhau của mỗi nhóm đất sẽ dẫn đến sự hình thành các hệ vi sinh vật đất khác nhau. Đặc biệt, nhóm vi sinh vật phân hủy thuốc BVTV trong đất. Vì vậy, để làm rõ mối tương quan giữa mô hình canh tác (đối tượng cây trồng và nhóm đất), loại và liều lượng thuốc BVTV sử dụng - đặc biệt là chlorpyrifos ethyl, với sự lưu tồn và nhóm vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl trong đất, luận án: “Đánh giá sự lưu tồn và phân lập vi khuẩn có khả năng phân hủy chlorpyrifos ethyl trên 3 mô hình canh tác: chuyên lúa, lúa - màu và chuyên màu ở ĐBSCL” được thực hiện với mục tiêu đánh giá sự tương tác giữa loại đất (đất phèn và đất phù sa), loại cây trồng (lúa và màu) với dư lượng chlorpyrifos ethyl trong đất và vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl trong đất.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TRƯƠNG QUỐC TẤT ĐÁNH GIÁ SỰ LƯU TỒN VÀ PHÂN LẬP VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY CHLORPYRIFOS ETHYL TRÊN BA MƠ HÌNH CANH TÁC: CHUN LÚA, LÚA - MÀU VÀ CHUYÊN MÀU Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH: KHOA HỌC ĐẤT 2018 3.1.2 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 34 3.1.3 Hóa chất 35 3.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 36 3.2.1 Nội dung 1: Đánh giá dư lượng chlorpyrifos ethyl đất phèn chuyên lúa, chuyên mía đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu số địa điểm Đồng Sông Cửu Long 36 3.2.2 Nội dung 2: Đánh giá ảnh hưởng loại đất (đất phèn đất phù sa) lên lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn chuyên lúa, chuyên mía đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu điều kiện đồng ruộng điều kiện nhà lưới 36 3.2.3 Nội dung 3: Đánh giá khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl vi khuẩn đất phèn đất phù sa chuyên lúa Hậu Giang Tiền Giang 42 3.2.4 Nội dung 4: Tuyển chọn, phân lập vi khuẩn hiếu khí phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phèn đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu 50 3.2.5 Nội dung 5: Đánh giá hoạt động phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn ký hiệu PH_C4.3 mơi trường khống tối thiểu mơi trường đất 57 3.2.6 Phương pháp phân tích xử lí số liệu 59 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 70 4.1 Nội dung 1: Kết đánh giá dư lượng chlorpyrifos ethyl đất phèn chuyên lúa, chuyên mía đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu Đồng sông Cửu Long 60 4.1.1 Đặc tính đất thí nghiệm 60 4.1.2 Kết đánh giá dư lượng chlorpyrifos ethyl đất 62 4.2 Nội dung 2: Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn, đất phù sa ảnh hưởng mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu chuyên màu đến lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất điều kiện đồng ruộng điều kiện nhà lưới 64 4.2.1 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu chuyên màu điều kiện nhà lưới 64 viii 4.2.2 Đánh giá ảnh hưởng mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu, lúa - màu lên lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa Long Khánh, Cai Lậy, Tiền Giang 67 4.2.3 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn, đất phù sa mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu chuyên màu 70 4.3 Nội dung 3: Đánh giá khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn đất phèn, đất phù sa chuyên lúa Hậu Giang Tiền Giang 74 4.3.1 Kết đánh giá khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn dung dịch đất 74 4.3.2 Sự hình thành sản phẩm trung gian q trình chuyển hóa chlorpyrifos ethyl bị phân hủy quần xã vi khuẩn kỵ khí 78 4.3.3 Đa dạng vi khuẩn phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl đất 80 4.4 Nội dung 4: Phân lập vi khuẩn hiếu khí địa phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phèn đất phù sa điều kiện đồng ruộng đất phù sa điều kiện nhà lưới mơ hình canh tác: chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu Đồng sông Cửu Long 84 4.4.1 Kết phân lập vi khuẩn hiếu khí địa có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl đất phèn đất phù sa chuyên canh lúa 84 4.4.2 Kết phân lập vi khuẩn hiếu khí địa có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl đất phèn đất phù sa chuyên màu 88 4.4.3 Kết phân lập vi khuẩn hiếu khí địa phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phù sa luân canh lúa - màu 91 4.4.4 Kết làm giàu mật số tuyển chọn quần xã vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl môi trường khống tối thiểu từ đất phù sa mơ hình chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu điều kiện nhà lưới 93 4.4.5 Một số đặc tính sinh thái dòng vi khuẩn có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl 97 4.4.6 Kết điện di sản phẩm PCR dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl định danh chúng dựa vào trình tự gene 16S-rRNA 98 4.4.7 Kết khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến gia tăng mật số dòng vi khuẩn 101 ix 4.5 Nội dung 5: Đánh giá hoạt động phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 mơi trường khống tối thiểu mơi trường đất 104 4.5.1 Khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 dung dịch khoáng tối thiểu 104 4.5.2 Khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 tổ hợp dòng vi khuẩn mơi trường đất 106 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 108 5.1 Kết luận 108 5.2 Kiến nghị 108 TÀI LIỆU THAM KHẢO 110 PHỤ LỤC x DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 2.1: Các cấp độ phân loại độ độc chất theo WHO Bảng 2.2: Các cấp độ phân loại độ độc thuốc BVTV Việt Nam Bảng 2.3: Khả hấp phụ vào đất trầm tích hoạt chất BVTV dựa vào Koc Bảng 3.1: Nguồn gốc mẫu đất dùng thí nghiệm ni ủ vi khuẩn kị khí 43 Bảng 3.2: Một số đặc tính lý hóa loại đất sử dụng thí nghiệm ni ủ yếm khí 43 Bảng 3.3: Thành phần nghiệm thức thí nghiệm ni ủ yếm khí 46 Bảng 3.4: Thành phần nghiệm thức khảo sát hoạt động phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn ký hiệu PH_C4.3 57 Bảng 3.5: Thành phần nghiệm thức khảo sát phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn PH_C4.3 tổ hợp dòng vi khuẩn môi trường đất 59 Bảng 4.1: Tính chất đất phèn huyện Phụng Hiệp tỉnh Hậu Giang 60 Bảng 4.2: Tính chất đất phù sa huyện Bình Minh Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long 61 Bảng 4.3: Một số đặc tính hóa học đất thí nghiệm huyện Cai Lậy, tỉnh Tiền Giang 67 Bảng 4.4: Tính chất đất phù sa huyện Chợ Mới, tỉnh An Giang 85 Bảng 4.5: Đặc điểm hình thái đặc tính sinh hóa dòng vi khuẩn 98 Bảng 4.6: Định danh dòng vi khuẩn thể phân hủy chlorpyrifos ethyl theo độ tương đồng đoạn gene 16S rRNA 100 Bảng 4.7: Các yếu tố môi trường tối ưu cho tăng trưởng dòng vi khuẩn 104 xi DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 2.1: Con đường di chuyển thuốc BVTV mơi trường Hình 2.2: Chi phí nhóm thuốc BVTV tồn giới năm 2010 11 Hình 2.3: Thị trường tiêu thụ thuốc BVTV toàn giới năm 2010 11 Hình 2.4: Tình hình nhập thuốc BVTV Việt Nam 13 Hình 2.5: Cấu trúc chlorpyrifos ethyl 20 Hình 2.6: Con đường chuyển hóa chlorpyrifos ethyl 25 Hình 2.7: Bản đồ phân bố loại đất ĐBSCL 28 Hình 3.1: Sơ đồ nội dung tổng quát luận án 33 Hình 3.2: Sơ đồ bố trí thí nghiệm nhà lưới 38 Hình 3.3: Các túi lưới chứa đất trộn chlorpyrifos ethyl cho vào đất 39 Hình 3.4: Thí nghiệm Cai Lậy - Tiền Giang 40 Hình 3.5: Địa điểm số ruộng khảo sát lưu tồn chlorpyrifos ethyl 41 Hình 3.6: Sơ đồ bố trí thí nghiệm khảo sát khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn 45 Hình 3.7: Bố trí thí nghiệm yếm khí: (a) Các lọ ủ trữ để lấy tiêu theo thời gian, (b) Mẫu ủ lọ pi 50 mL, (c) Lấy tiêu hóa học sinh học, (d) Dung dịch yếm khí có màu xanh xanh tím 47 Hình 3.8: Sắc ký đồ đường (mẫu trắng) 48 Hình 3.9: Sắc ký đồ chất chuẩn 48 Hình 3.10: Sơ đồ số lượng mẫu đất phân lập vi khuẩn hiếu khí theo mơ hình 51 Hình 4.1: Dư lượng chlorpyryfos ethyl đất phèn đất phù sa địa điểm thu mẫu 62 Hình 4.2: Dư lượng chlorpyryfos ethyl đất phèn đất phù sa mơ hình canh tác 63 Hình 4.3: Lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình canh tác điều kiện nhà lưới (2014) 66 Hình 4.4: Lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình canh tác Long Khánh - Cai Lậy - Tiền Giang (vụ Đơng Xn 2013) 69 xii Hình 4.5: Lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình lúa - màu (đậu xanh) Long Khánh, Cai Lậy, Tiền Giang (vụ Hè Thu 2013) 70 Hình 4.6: Tốc độ suy giảm chlorpyrifos ethyl mơ hình canh tác Bình Tân, Vĩnh Long (vụ Đông Xuân 2013) 71 Hình 4.7: Tốc độ chlorpyrifos ethyl đất phèn mơ hình chun lúa chun mía (vụ Đơng Xn 2013) (n = 4, Sai số chuẩn) 73 Hình 4.8: Khả phân hủy chlopyrifos ethyl quần xã vi khuẩn CL01 (a) CL02 (b) 74 Hình 4.9: Tốc độ phân hủy chlorpyrifos ethyl nghiệm thức quần xã vi khuẩn ký hiệu CL01 CL02 75 Hình 4.10: Khả phân hủy chlopyrifos ethyl hệ VK PH01 (a) PH02 (b) 76 Hình 4.11: Tốc độ phân hủy chlorpyrifos ethyl nghiệm thức cộng động vi khuẩn ký hiệu PH01 PH02 77 Hình 4.12: Sơ đồ chuyển hóa chlorpyrifos ethyl nghiệm thức bổ sung acid hữu 78 Hình 4.13: Sắc ký đồ sản phẩm trung gian q trình phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl scan GCMS 78 Hình 4.14: Điện di đồ sản phẩm PCR nhóm vi khuẩn Chloroflexi nghiệm thức mẫu đất PH01 với cặp mồi 338F/1101R 81 Hình 4.15: Điện di đồ sản phẩm PCR nhóm vi khuẩn Chloroflexi nghiệm thức mẫu đất PH01 với cặp mồi 341F-GC/534R 81 Hình 4.16: Điện di đồ sản phẩm PCR (DGGE) nghiệm thức mẫu đất PH01 83 Hình 4.17: Độ tương đồng vi khuẩn nhóm Chloroflexi mẫu đất PH01 84 Hình 4.18: Sự phát triển số quần xã vi khuẩn làm giàu mật số với chlorpyrifos ethyl 86 Hình 4.19: Phần trăm phân hủy chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn mơi trường khống tối thiểu sau 30 ngày ni cấy (n=3) 86 Hình 4.20: Sự phát triển dòng vi khuẩn ký hiệu PH_C3.1 PH_C4.3 mơi trường khống tối thiểu chứa chlorpyrifos ethyl nồng độ 20 ppm 87 xiii Hình 4.21: Phần trăm phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn mơi trường khống tối thiểu sau 30 ngày nuôi cấy (n=4) 88 Hình 4.22: Phần trăm phân hủy chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn mơi trường khống tối thiểu sau 30 ngày nuôi cấy (n=4) 89 Hình 4.23: Phần trăm phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn ký hiệu BM_C9.2 mơi trường khống tối thiểu sau 30 ngày ni cấy (n=4) 90 Hình 4.24: Phần trăm phân hủy chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn mơi trường khống tối thiểu sau 30 ngày nuôi cấy (n=4) 91 Hình 4.25: Phần trăm phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn ký hiệu BT_C8.9 mơi trường khống tối thiểu sau 30 ngày ni cấy (n=4) 92 Hình 4.26: Phần trăm phân hủy chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn mơi trường khống tối thiểu sau 30 ngày nuôi cấy (n = 3, Sai số chuẩn) 94 Hình 4.27: Điện di đồ sản phẩm PCR-DGGE (a) độ tương đồng (b) quần xã vi khuẩn có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl 96 Hình 4.28: Hình thái khuẩn lạc dòng vi khuẩn 97 Hình 4.29: Hình nhuộm Gram dòng VK, chụp KHV (X1000) 97 Hình 4.30: Phổ điện di sản phẩm PCR dòng VK 98 Hình 4.31: Ảnh hưởng nguồn carbon đến gia tăng mật số vi khuẩn 101 Hình 4.32: Ảnh hưởng pH đến mật số dòng vi khuẩn 102 Hình 4.33: Ảnh hưởng nhiệt độ đến mật số dòng vi khuẩn 103 Hình 4.34: Mật số vi khuẩn mơi trường ni cấy có khơng có bổ sung TSB 105 Hình 4.35: Khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 theo thời gian 106 Hình 4.36: Khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 nhóm vi khuẩn (n=3, sai số chuẩn) 107 xiv DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ADI acceptable daily intake (lượng chất độc không gây hại thể người chấp nhận) ADN a.i active ingredient (hoạt chất thuốc) BVTV bảo vệ thực vật BM Bình Minh BT Bình Tân CL Cai Lậ y PH Phụ ng Hiệ p CEC cation exchange capacity (khả nă ng trao đổ i cation) CFU colony-forming unit (đơ n vị CTAB Cetyltrimethylammonium bromide ĐBSCL Đồng sông Cửu Long DCM Dichloromethane DGGE Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DNA Deoxyribonucleic acid FAO Food and Agriculture Organization (tổ chức lương thực nông nghiệp) GC/MS phổ) Gas Chromatography Mass Spectrometry (sắc kí khí khối HPLC High Perfomance Liquid Chromatography (sắc kí lỏng cao áp) Kd Distribution coefficient (hệ số phân phố i) KHV Kính hiển vi Koc organic carbon adsorption coefficient (chỉ số hấp phụ độc chất hữu đất) LD50 Lethal Dose 50 (liều chất độc gây chết nửa động vật) MRL maximum residue limit (mức dư lượng tối đa) xv hình thành khuẩ n lạ c) MSBĐ Mật số ban đầu NN-PTNT Nông nghiệp - Phát triển nông thôn NT Nghiệm thức PCB Polychlorinated biphenyls PCR Polymerase chain reaction PE Petroleum ether ppb parts per billion (một phần tỷ) ppm parts per million (một phần triệu) TCP 3,5,6-trichloro-2-pyridinol WHO World Health Organization (Tổ chức y tế giới) xvi Dòng PH_C9.2 Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F Giá trị P động phương bình phương Nghiệm thức 3,0067 1,5033 499,27 0,000 Sai số 0,0181 0,0030 Tổng cộng 3,0248 Bảng 3: Phân tích phương sai ảnh hưởng nồng độ Chlorpyrifos ethyl đến số lượng dòng vi khuẩn Dòng PH_C3.1 Nguồn biến Độ tự động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương 0,104689 0,046733 0,151422 Trung bình bình phương 0,052344 0,007789 Giá trị F 6,72 0,029 Dòng PH_C4.3 Nguồn biến Độ tự động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương 0,07482 0,38356 0,30873 Trung bình bình phương 0,03741 0,05146 Giá trị F Giá trị P Dòng PH_C8.9 Nguồn biến Độ tự động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương 0,05727 0,11513 0,17240 Trung bình bình phương 0,02863 0,01919 Giá trị F Dòng PH_C9.2 Nguồn biến Độ tự động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương 0,21309 0,21000 0,42309 Trung bình bình phương 0,10654 0,03500 Giá trị F 0,73 1,49 3,04 Giá trị P 0,522 Giá trị P 0,298 Giá trị P 0,122 Bảng 4: Phân tích phương sai ảnh hưởng nguồn carbon đến số lượng dòng vi khuẩn Dòng PH_C3.1 Nguồn biến Độ tự động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương 4,1168 0,4117 4,5285 Trung bình bình phương 4,1168 0,1029 144 Giá trị F 39,99 Giá trị P 0,003 Dòng PH_C4.3 Nguồn biến Độ tự động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương 3,7288 0,1285 3,8573 Trung bình bình phương 3,7288 0,0321 Giá trị F Dòng PH_C8.9 Nguồn biến Độ tự động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương 26,670 0,044 26,714 Trung bình bình phương 26,670 0,011 Giá trị F Dòng PH_C9.2 Nguồn biến Độ tự động Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Tổng bình phương 21,927 0,444 22,371 Trung bình bình phương 21,927 0,111 Giá trị F 116,10 2443,09 197,51 Giá trị P 0,000 Giá trị P 0,000 Giá trị P 0,000 Bảng 5: Bảng phân tích phương sai mật số dòng vi khuẩn PH-C4.3 dung dịch theo thời gian 0, 10, 20, 30 ngày * Nghiệm thức không bổ sung TSB Nguồn biến Độ tự Tổng bình động phương Thời gian 10,83 Sai số 0,3060 Tổng cộng 11 11,1371 Trung bình bình phương 3,6104 0,0383 Giá trị F *Nghiệm thức có bổ sung TSB Nguồn biến Độ tự Tổng bình động phương Nghiệm thức 24,5314 Sai số 0,2966 Tổng cộng 11 24,8280 Trung bình bình phương 8,1771 0,0371 Giá trị F 94,39 220,56 Giá trị P 0,000 Giá trị P 0,000 Bảng Bảng phân tích phương sai khả phân hủy Chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn PH_C4.3 dung dịch theo thời gian 0, 10, 20, 30 ngày *Nghiệm thức không bổ sung TSB Nguồn biến Độ tự Tổng bình động phương Thời gian 30211 Sai số 12 113 Tổng cộng 15 30324 Trung bình bình phương 10070 145 Giá trị F 1069,78 Giá trị P 0,000 *Nghiệm thức có bổ sung TSB Nguồn biến Độ tự Tổng bình động phương Thời gian 20028,4 Sai số 12 98,5 Tổng cộng 15 20126,9 Trung bình bình phương 6676,1 8,2 Giá trị F 813,34 Giá trị P 0,000 Bảng 7: Bảng phân tích phương sai mật số dòng vi khuẩn PH_C4.3 dung dịch theo thời gian 0, 10, 20, 30 ngày *Nghiệm thức không bổ sung TSB Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình động phương bình phương Thời gian 10,83 3,6104 Sai số 0,3060 0,0383 Tổng cộng 11 11,1371 *Nghiệm thức có bổ sung TSB Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình động phương bình phương Nghiệm thức 24,5314 8,1771 Sai số 0,2966 0,0371 Tổng cộng 11 24,8280 Giá trị F 94,39 Giá trị F 220,56 Giá trị P 0,000 Giá trị P 0,000 Bảng 8: Bảng phân tích phương sai khả phân hủy Chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn PH_C4.3 dung dịch theo thời gian 0, 10, 20, 30 ngày *Nghiệm thức không bổ sung TSB Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình động phương bình phương Thời gian 30211 10070 Sai số 12 113 Tổng cộng 15 30324 *Nghiệm thức có bổ sung TSB Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình động phương bình phương Thời gian 20028,4 6676,1 Sai số 12 98,5 8,2 Tổng cộng 15 20126,9 Giá trị F 1069,78 Giá trị F 813,34 Giá trị P 0,000 Giá trị P 0,000 Bảng 9: Bảng phân tích phương sai kết đánh giả khả phân hủy Chlorpyrifos ethyl dòng PH_C4.3 đất tiệt trùng tổ hợp dòng vi khuẩn đất khơng tiệt trùng sau 30 ngày nuôi ủ Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F Giá trị P động phương bình phương Thời gian 7,684 7,684 7,87 0.049 Sai số 3,904 0,976 Tổng cộng 11,588 146 Bảng 10: Bảng phân tích phương sai kết đánh giả khả phân hủy Chlorpyrifos ethyl dòng PH_C4.3 tổ hợp dòng vi khuẩn đất không tiệt trùng sau 30 ngày nuôi ủ Nguồn biến Độ tự Tổng bình Trung bình Giá trị F Giá trị P động phương bình phương Thời gian 16,5752 0,2862 88,10 0.000 Sai số 0,5643 0,0941 Tổng cộng 17,1368 Phụ lục 13: Trình tự nucleotide dòng vi khuẩn có khả phân hủy Chlorpyrifos ethyl Trình từ nucleotide dòng vi khuẩn ký hiệu PH_C3.1 CGGTCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATGTATCGGAACGTGCCCAGTAGCGGGG 60 61 GATAACTACGCGAAAGCGTAGCTAATACCGCATACGCCCTACGGGGGAAAGCAGGGGATC 120 121 GCAAGACCTTGCACTATTGGAGCGGCCGATATCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGC 180 181 TCACCAAGGCGACGATCCGTAGCTGGTTTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGA240 241 CACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGGGAAACCCT 300 301 GATCCAGCCATCCCGCGTGTGCGATGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTTGGCAGGA 360 361 AAGAAACGTCATGGGCTAATACCCCGTGAAACTGACGGTACCTGCAGAATAAGCACCGGC 420 421 TAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGG 480 481 GCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTCGGAAAGAAAGATGTGAAATCCCAGAGCTTAACTTTG 540 541 GAACTGCATTTTTAACTACCGGGCTAGAGTGTGTCAGAGGGAGGTGGAATTCCGCGTGTA 600 601 GCAGTGAAATGCGTAGATATGCGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGCCTCCTGGGATAA 660 661 CACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCA 720 721 CGCCCTAAACGATGTCAACTAGCTGTTGGGGCCTTCGGGCCTTGGTAGCGCAGCTAACGC 780 781 GTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGG 840 841 ACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTAC 900 901 CCTTGACATGTCTGGAATGCCGAAGAGATTTGGCAGTGCTCGCAAGAGAACCGGAACACA 960 961 GGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG 1020 1021CGCAACCCTTGTCATTAGTTGCTACGAAAGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAAC 1080 1081 CGGACGAAGGTGGGGATGACG 1101 Trình từ nucleotide dòng vi khuẩn ký hiệu BM_C9.2 AGTCGAGCG-ACAGATAAAGGAGCTTGCTCCTTTGACGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAA 61 62 CACGTGGWTAACCTACCTATAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGGASCTAATACCGGA 121 122 TAAGATTTTGAACCGCATGGTTCAATAGTGAAAGACGGCCTTGCTGTCACTTATAGATGG 181 182 ATCCGCGCCGTATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCAACGATACGTAGCC 241 242 GACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGAACTGASACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGG 301 302 CAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGGCGAAAGCCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGA 361 362 TGAAGGTCTTCGGATCGTAAAACTCTGTTATCAGGGAAGAACAAACGTGTAAGTAACTGT 421 422 GCACGTCTTGACGGTACCTGATCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCARCAGCCGCGGT 481 482 AATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGCGGTTT 541 542 TTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGYTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAACCTGGAAAAC 601 602 TTGAGTGCMAAAG 614 147 Trình từ nucleotide dòng vi khuẩn ký hiệu PH_C4.3 19 TAGGCCATTGGGCTTCGGGTGTTACCAACTTTCGTGACTTGACGGGCGGTGTGTA-AAGG 77 78 CCCGGGAACGTATTCACCGCAGCGTTGCTGATCTGCGATTACTAGCGACTCCAACTTCAT 137 138 AGGGTCGAGTTGCAAACCCCAATCCGAACTGAGACCAGCTTTAAGGGATTCGCTCCACCT 197 198 CACGGTCTCGCAACCCTCTGTACCGGCCATTGTAGCATGCGTGAAGCCCAAGACATAAGG 257 258 GGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCAGTCTCCCATG 317 318 AGTCCCCACCATCACGTGCTGGCAACATGGAACGAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAA 377 378 CCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTGCACCAGCCACAAA 437 438 GGGAAACCACATCTCTGCAGTCGTCCGGTGCATGTCAAGCCTTGGTAAGGTTCTTCGCGT 497 498 TGCATCGAATTAATCCGCATGCTCCGCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGT 557 558 TTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGCGCTTAATGCGTTAGCTGCGGCACGGAA 617 618 CCCGTGGAATGGATCCCACACCTAGCGCCCAACGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATC 677 678 TAATCCTGTTCGCTCCCCATGCTTTCGCTTCTCAGCGTCAGTAATGGCCCAGAGACCTGC 737 738 CTTCGCCATCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTTCACCGCTACACCAGGAATTCCAG 797 798 TCTCCCCTACCACACTCTAGTCTGCCCGTACCCACTGCAGACCCGGAGTTAAGCCCCGGG 857 858 CTTTCACAGCAGACGCGACAAACCGCCTACAAGCTCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAA 917 918 CGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTCAGCCGGTGCTTCTTCTCC 977 978 ACCTACCGTCACCCCGAAGGGCTTCGTCAATGGCGAAAGGAGTTTACAACCCGAAGGCCG 1037 1038 TCATCCCCCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTG 1097 1098 CTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGGTCGCCCTCTCAG 1157 1158 GCCGGCTACCCGTCACCGCCTTGGTAGGGCACTACCCCACCAACAAGCTGAAAAGGCCGC1217 1218 GAGCCCATCCTTCACCGAAAAA-TCTTTCGACACC-CACCAAGGGAGTGCGCGGTCGTAT 1275 1276 CCGGGATTAGACCCAGTTTCCCGGGCTTATCCCAAAG-GAA 1315 Trình từ nucleotide dòng vi khuẩn ký hiệu BT_C8.9 GGCGGTGTGTACAAGACCCGGGAACGTATTCACCGCAGCGTTGCTGATCTGCGATTACTA 61 62 GCGACTCCGACTTCATGAGGTCGAGTTGCAGACCTCAATCCGAACTGGGACCGGCTTTTT 121 122 GGGATTCGCTCCACCTCACGGTATTGCAGCCCTTTGTACCGGCCATTGTAGCATGCGTGA 181 182 AGCCCAAGACATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTT-CCTCCGAGTTGAC 240 241 CCCGGCAGTATCCCATGAGTTCCCACCATTACGTGCTGGCAACATAGAACGAGGGTTGCG 300 301 CTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACC 360 361 TGTATACGAGTGTCCAAAGAGTTCTACATTTCTGCAGCGTTCTCGTATATGTCAAGCCTT 420 421 GGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCGCATGCTCCGCCGCTTGTGCGGGTCCC 480 481 CGTCAATTCCTTTGAGTTTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGAACTTAATGCG 540 541 TTAGCTGCGTCACGGAAACCGTGGAATGGTCCCCACAACTAGTTCCCAACGTTTACGGGG 600 601 TGGACTACCAGGGTATCTAAGCCTGTTTGCTCCCCACCCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTT 660 661 ACGGCCCAGAGATCTGCCTTCGCCATCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTCCACCGC 720 721 TACACCAGGAATTCCAATCTCCCCTACCGCACTCTAGTCTGCCCGTACCCACTGCAGGCT 780 781 GGAGGTTGAGCCTCCCGTTTTCACAGCAGACGCGACAAACCGCCTACAAGCTCTTTACGC 840 841 CCAATAATTCCGGATAACGCTTGCGCCCTACGTATTACCACGACTGCAGGCACGTAGTTC 900 901 ACCCGGCGCTTTTTCTGCAAGTACCGTCACTTTCGCTTCTTCCTTGCTAAAA-GAGGTAT 959 960 ACAACCCAGA-GGGCCGTCATCCCTCACGCGGGCGTGGCTGCATCAAG-CATGTAGCCCA 1017 1018 TTGAGG-AGTAGTCACCCACTGCTAACCTCCCGTATGAAATCTAGGACCG 148 1066 Phụ lục 14 Thông tin phẫu diện đất trồng mía Phụng Hiệp – Hậu Giang Ký hiệu phẫu diện đất: HG-Mía Ngày mơ tả thu mẫu đất: ngày 02/11/2014 Vị trí phẫu diện đất: - Toạ độ GPS: Tọa độ X: 566935 Tọa độ Y: 1078394 - Vị trí hành chính: xã Hòa An, huyện Phụng Hiệp, tỉnh Hậu Giang Tình trạng phẫu diện đất phẫu diện đất mô tả vào cuối mùa mưa, ruộng canh tác mía thu hoạch Hiện trạng: canh tác chuyên canh mía Tên đất phân loại theo hệ thống phân loại FAO: Anthraqui Endo Thionic Gleysols Quang cảnh phẫu diện Hình: Quang cảnh phẫu diện đất canh tác mía huyện Phụng Hiệp Đặc điểm hình thái phẫu diện đất Ap: 0-40 cm Đất có màu nâu xám (5YR 4/1); thịt pha sét; ẩm; thục; nhiều rễ thực vật tươi; đất xốp nhiều tế khổng; đốm rỉ 3-5% màu nâu đỏ sẫm (10YR 4/6), dạng ổ nhỏ; dính; có cấu trúc yếu dạng hạt; chất hữu phân hủy; chuyển tầng từ từ Ag:40–70 cm 149 Màu xám nâu (7.5YR 3/1); sét pha thịt; ẩm; thục; khoảng 3% đốm rỉ màu nâu đỏ (10YR 4/5) dạng ổ dạng ống ngắn; tế khổng trung bình; dính, dẻo; chất hữu trung bình, phân hủy; chuyển tầng từ từ Bgj: 70-170 cm Màu xám sáng (Gley 6/N); sét; ẩm ướt; thục; 5-7% đốm plinthite dạng vệt màu đỏ (10R 5/6) xen lẫn sét, 10-12% đốm jarosite màu vàng rơm (2.5Y 8/8) dạng ổ lớn ống ngắn; khơng có cấu trúc; dính, dẻo; nghèo chất hữ cơ; chuyển tầng không rõ Crp: >170 cm Màu xám xanh (Gley 5/N); sét; ẩm; bán thục; nghèo chất hữu cơ, có lẫn xác bã thực vật chưa phân hủy; dính, dẻo; có chứa vật liệu sinh phèn pyrite, pH (H2O2)