Đánh giá sự lưu tồn và phân lập vi khuẩn có khả năng phân hủy chlorpyrifos ethyl trên ba mô hình canh tác chuyên lúa, lúa màu và chuyên màu ở đồng bằng sông cửu long (tt)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: KHOA HỌC ĐẤT Mã ngành: 9620103 TRƯƠNG QUỐC TẤT ĐÁNH GIÁ SỰ LƯU TỒN VÀ PHÂN LẬP VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY CHLORPYRIFOS ETHYL TRÊN BA MƠ HÌNH CANH TÁC: CHUYÊN LÚA, LÚA-MÀU VÀ CHUYÊN MÀU Ở ĐỒNG BẰNG SƠNG CỬU LONG Cần Thơ, 2018 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn chính: TS Dương Minh Viễn Luận án bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp Trường Họp tại: Vào lúc ……… ngày ……… tháng …… năm …………… Phản biện 1: ………………………… Phản biện 2: ………………………… Phản biện 3: ………………………… Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Trương Quốc Tất, Nguyễn Thị Anh Thư, Dương Minh Viễn (2016) Phân lập vi khuẩn phân hủy thuốc trừ sâu Chlorpyrifos ethyl từ đất canh tác lúa Đồng sông Cửu Long Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn, số năm 2016, 33-38 Trương Quốc Tất, Huỳnh Thị Cẩm My, Dương Minh Viễn (2016) Sự phân hủy Chlorpyrifos ethyl hệ vi khuẩn kỵ khí Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, số 10 năm 2016, 47-53 Truong Quoc Tat, Duong Minh Vien, (2016) Isolation and Identification of ChlorpyrifosDegrading Bacteria From Rice-upland Crop Soil in The Mekong Delta Scientific Journal of Thu Dau Mot University, ISSN 1859-4433 Trương Quốc Tất, Dương Minh Viễn, (2017) Khảo sát khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl hệ vi khuẩn đất canh tác chuyên canh lúa Phụng Hiệp- Hậu Giang Tạp chí khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội ISSN: 2588-1140, Vol.33, No.2S, 2017 CHƯƠNG TỔNG QUAN VỀ LUẬN ÁN 1.1 Giới thiệu Chlorpyrifos ethyl loại thuốc trừ sâu thuộc nhóm lân hữu cơ, có khả hấp phụ vào đất cao, tan nước thấp có độc tính cao Do đó, chlorpyrifos ethyl sử dụng lâu dài canh tác nông nghiệp gây ô nhiễm môi trường đất, nước, ảnh hưởng đến sức khỏe cộng đồng Sự tăng cường phân hủy sinh học chlorpyrifos ethyl lưu tồn đất góp phần giảm thiểu nhiễm hoạt chất canh tác nơng nghiệp Vì thế, luận án thực với mục tiêu đánh giá dư lượng chlorpyrifos ethyl đất ảnh hưởng mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu chuyên màu đến lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn đất phù sa Đồng thời đánh giá phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl, đa dạng vi khuẩn khử -Cl đất phèn, đất phù sa chuyên canh lúa tuyển chọn, phân lập vi khuẩn, đánh giá ảnh hưởng mô hình canh tác chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu đến đa dạng vi khuẩn hiếu khí phân hủy chlorpyrifos ethyl đất 1.2 Mục tiêu nghiên cứu luận án - Đánh giá ảnh hưởng kiểu canh tác (chuyên lúa, lúa-màu, chuyên màu) loại đất (đất phèn đất phù sa) lên dư lượng lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất - Đánh giá ảnh hưởng ba kiểu canh tác chuyên lúa (ngập nước thường xuyên, điều kiện yếm khí chiếm ưu thế, lúa - màu (ngập khô luân phiên, điều kiện yếm khí xen kẽ hiếu khí) chun màu (mơi trường cạn, điều kiện hiếu khí chiếm ưu thế) loại đất (đất phèn đất phù sa) lên diện nhóm dòng vi khuẩn hiếu khí kỵ khí có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl đất 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án Những kết nghiên cứu luận án nhằm bổ sung tư liệu khoa học dư lượng lưu tồn vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl đất chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu ĐBSCL; Kết nguồn tư liệu phục vụ cho việc giảng dạy nghiên cứu khoa học nhằm quản lý phục hồi đất ô nhiễm chlorpyrifos ethyl 1.4 Những điểm luận án Nghiên cứu chứng minh có dư lượng chlorpyrifos ethyl đất phèn đất phù sa sau mùa vụ mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu chuyên màu ĐBSCL Đồng thời loại đất (đất phù sa đất phèn) ảnh hưởng đến lưu tồn dư lượng chlorpyrifos ethyl đất Đây nghiên cứu chứng minh có diện vi khuẩn hiếu khí địa đất phèn chuyên lúa đất phù sa chuyên màu lúa - màu ĐBSCL có khả sử dụng chlorpyrifos ethyl nguồn carbon Song song đó, nghiên cứu chứng minh có hoạt động quần xã vi khuẩn kỵ khí có khả khử chlor chlorpyrifos ethyl đất phèn đất phù sa chuyên canh lúa ĐBSCL Đồng thời nghiên cứu cho thấy mơ hình canh tác loại đất ảnh hưởng đến diện vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl đất Cụ thể, đất phèn chuyên lúa có diện vi khuẩn hiếu khí kị khí có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl; đó, đất phù sa vi khuẩn kỵ khí diện mơ hình chun lúa, vi khuẩn hiếu khí diện đất chuyên màu lúa-màu CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu - Thời gian: Từ tháng 01 năm 2013 đến tháng 01 năm 2016 - Địa điểm: Khảo sát, điều tra, thu mẫu đất phân lập vi khuẩn thực thí nghiệm đánh giá dư lượng chlorpyrifos ethyl đất canh tác chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu Bình Minh Bình Tân - Vĩnh Long, Cai Lậy - Tiền Giang, Chợ Mới - An Giang Phụng Hiệp - Hậu Giang 3.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3.2.1 Nội dung 1: Đánh giá dư lượng chlorpyrifos ethyl đất phèn chuyên lúa, chuyên mía đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu số địa điểm Đồng Sông Cửu Long - Địa điểm thu mẫu gồm: Bình Tân Bình Minh,Vĩnh Long, Phụng Hiệp - Hậu Giang, Cai Lậy - Tiền Giang Ở địa điểm thu đất 3-4 ruộng mơ hình - Phương pháp thu mẫu đất: Sử dụng khoan thu mẫu đất độ sâu - 20 cm, ruộng lấy ngẫu nhiên 12 điểm, trộn thành mẫu chứa túi nylon Dư lượng chlorpyrifos ethyl mẫu đất phân tích theo quy trình Trương Quốc Tất Dương Minh Viễn (2017) Đồng thời quy trình sử dụng để xác định dư lượng chlorpyrifos ethyl lại đất tất nội dung khác luận án 3.2.2 Nội dung 2: Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu điều kiện đồng ruộng điều kiện nhà lưới 3.2.2.1 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu điều kiện nhà lưới - Địa điểm: Thí nghiệm thực nhà lưới Bộ môn Khoa học Đất, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ - Vật liệu cho thí nghiệm: Đất sử dụng thí nghiệm thu từ đất chuyên trồng lúa huyện Cai Lậy, tỉnh Tiền Giang Mẫu đất thu độ sâu từ - 20 cm, thời điểm chuẩn bị đất cho vụ (đất ngập nước 0,5 - cm) - Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm thực chậu, với đường kính chiều cao chậu 30 cm 15 cm Trọng lượng khô đất chậu kg Hàm lượng chlorpyrifos ethyl bổ sung đạt 1,5 ppm đất chậu Thí nghiệm bố trí cho lặp lại nghiệm thức nghiệm thức mơ hình đặt cạnh nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho việc kiểm soát lượng nước tưới khảo sát nhân tố mơ hình canh tác (chuyên lúa, lúa - đậu chuyên đậu) thực vật (trồng không trồng cây) - Mẫu đất thu xác định dư lượng chlorpyrifos ethyl đất vào thời điểm 1, 10, 20, 30 ngày sau bổ sung chlorpyrifos ethyl 3.2.2.2 Đánh giá ảnh hưởng mơ hình canh tác chuyên lúa, lúa - màu lúa - màu lên lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa - Địa điểm thí nghiệm: Thí nghiệm thực đất phù sa mô hình canh tác chuyên lúa, lúa - màu lúa - màu Long Khánh - Cai Lậy - Tiền Giang - Thời gian thí nghiệm: Thí nghiệm thực vào năm 2013 Hai vụ cho mơ hình, vụ Đơng Xn (trồng lúa mơ hình) vụ Hè Thu (trồng đậu mơ hình lúa - màu màu - lúa) - Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí khối hồn tồn ngẫu nhiên, khảo sát nhân tố mơ hình canh tác, mơ hình canh tác bố trí lặp lại lần Thời điểm thu mẫu: mẫu thu xác định dư lượng chlorpyrifos ethyl đất vào thời điểm trước phun, sau phun 1, 4, 14 46 ngày Mẫu đất thu độ sâu - 20 cm khoan có đường kính cm Tại lơ thí nghiệm lấy ngẫu nhiên mẫu bán kính 10 m, sau mẫu trộn thành mẫu đại diện cho lơ thí nghiệm 3.2.2.3 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn chuyên lúa, chuyên mía đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu - Địa điểm thực thí nghiệm: Phụng Hiệp - Hậu Giang Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn ruộng chuyên trồng mía (cây mía trồng 5,5 tháng) ruộng chuyên trồng lúa (lúa sạ 20 ngày); Bình Tân Bình Minh - Vĩnh Long: đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa chuyên lúa, chuyên màu (trồng xà lách xoang) lúa - màu (khảo sát vụ màu trồng khoai lang), ruộng/mơ hình - Phương pháp khảo sát: Các ruộng chọn cách ngẫu nhiên, căng dây khoanh vùng diện tích định ruộng (40 m2), riêng ruộng lúa đắp đê diện tích chọn nhằm giữ lượng nước biến động Thuốc Tungcydan 55EC (được sản xuất Công ty Cổ phần sản xuất, thương mại, dịch vụ Ngọc Tùng) chứa 50% chlorpyrifos ethyl (500 g a.i/L) 5% Cypermethrin sử dụng thí nghiệm này, lượng khuyến cáo sử dụng để trừ sâu lúa màu 0,5 L/ha, lượng nước phun 400 - 600 L/ha, phun vào thời điểm 21 ngày sau gieo trồng, thời gian cách ly: không phun thuốc trước thu hoạch 12 ngày Mẫu đất thu xác định dư lượng chlorpyrifos ethyl đất vào thời điểm trước phun thuốc, sau phun thuốc ngày, 21 ngày 42 ngày 3.2.3 Nội dung 3: Đánh giá khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl vi khuẩn đất phèn đất phù sa chuyên canh lúa Hậu Giang Tiền Giang 3.2.3.1 Thu mẫu đất Mẫu đất thu độ sâu 0-20 cm từ ruộng chuyên canh lúa điều kiện ngập nước sau thu hoạch Nguồn gốc đặc tính mẫu đất trình bày Bảng 3.1 Bảng 3.1: Nguồn gốc đặc tính mẫu đất sử dụng thí nghiệm Địa điểm Ký hiệu Số vụ/năm Cai Lậy, Tiền Giang CL01 CL02 Phụng Hiệp, Hậu Giang PH01 PH02 Độ sâu thu mẫu (cm) Đặc tính đất Cát (%) Thịt (%) Chất hữu (%) (%) 67 31 7,62 5,70 73 27 0.2 4,90 5,06 Sét pH - 20 3.2.3.1 Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm thực với mẫu đất ký hiệu PH01, PH02, CL01 CL02 Mỗi mẫu đất bố trí hồn tồn ngẫu nhiên bao gồm nghiệm thức, nghiệm thức có lần lặp lại, thành phần nghiệm thức (NT) trình bày Bảng 3.2 Mỗi mẫu đất ủ lọ thủy tinh loại 50 mL Trước cho 10 g đất vào lọ, chlorpyrifos ethyl bổ sung cách hòa tan vào acetone bơm lên g đất khô nghiền mịn, để bay tự nhiên hết acetone tủ hút Sau bổ sung 30 mL dung dịch yếm khí Dung dịch yếm khí pha theo Christoph et al., 2004 Thành phần dung dịch yếm khí bao gồm khống đa lượng, vi lượng, vitamin thiết yếu để thúc đẩy hoạt động vi khuẩn khử -Cl gồm: D-biotin, folic acid, riboflavin, pyrodoxin hydrochloride, vitamin B12, nicotiamide hỗn hợp acid hữu đóng vai trò chất cho điện tử (electron donor) gồm: pyruvic acid (pyruvate), acetic acid (acetate), butyric acid (butyrate), lactic acid (lactate) propionic acid (propionate) (250 µM chất) Các thành phần sau pha phải sục khí N2 hút chân khơng để loại bỏ hồn tồn O2 Dung dịch khống đa lượng (thể tích L) bổ sung khoáng vi lượng (1 mL), vitamin (0,1 mL) hỗn hợp acid hữu (4 mL) Bảng 3.2: Thành phần nghiệm thức thí nghiệm khảo sát khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn Nghiệm thức Thành phần Sử dụng 10 g đất tiệt trùng, chlorpyrifos ethyl với hàm lượng 35 ppm, 30 mL dung dịch yếm khí (Đối chứng âm) (Đối chứng dương cho q trình hơ hấp yếm khí) (Đối chứng dương cho q trình lên men) (hơ hấp yếm khí) (lên men) Sử dụng 10 g đất không tiệt trùng, không bổ sung chlorpyrifos ethyl, 30 mL dung dịch yếm khí, bổ sung vitamin hỗn hợp acid hữu Mẫu nghiệm thức dùng so sánh với mẫu nghiệm thức để xác định sản phẩm trung gian q trình phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl thơng qua hơ hấp kỵ khí quần xã vi khuẩn Sử dụng 10 g đất không tiệt trùng, không bổ sung chlorpyrifos ethyl, 30 mL dung dịch yếm khí, khơng bổ sung vitamin hỗn hợp acid hữu Mẫu nghiệm thức dùng so sánh với mẫu nghiệm thức để xác định sản phẩm trung gian q trình phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl thơng qua trình lên men quần xã vi khuẩn Sử dụng 10 g đất không tiệt trùng, bổ sung chlorpyrifos ethyl hàm lượng 35 ppm, 30 mL dung dịch yếm khí, bổ sung vitamin hỗn hợp acid hữu Nghiệm thức nhằm khảo sát khả sử dụng gốc -Cl chlorpyrifos ethyl làm chất nhận điện tử q trình hơ hấp kỵ khí quần xã vi khuẩn Sử dụng 10 g đất không tiệt trùng, bổ sung chlorpyrifos ethyl hàm lượng 35 ppm, 30 mL dung dịch yếm khí, khơng bổ sung vitamin hỗn hợp acid hữu Nghiệm thức nhằm khảo sát khả sử dụng carbon từ chlorpyrifos ethyl q trình lên men yếm khí quần xã vi khuẩn Bổ sung thêm chlorpyrifos ethyl: Sau 11 tháng, lọ ủ bổ sung thêm chlorpyrifos ethyl để làm giàu mật số vi khuẩn Hàm lượng chlorpyrifos ethyl bổ sung vào đạt 70 ppm, bổ sung cho NT1, NT4 NT5, không bổ sung chlorpyrifos ethyl cho NT2, NT3 Trước thêm chlorpyrifos ethyl cần thêm lượng dung dịch yếm khí để đưa lọ ủ thể tích ban đầu (40 mL) Chỉ tiêu theo dõi: Lấy mẫu thời điểm tháng, tháng, tháng, trước bổ sung thêm chlorpyrifos ethyl, bổ sung thêm chlorpyrifos ethyl, 20 ngày tháng sau thêm chlorpyrifos ethyl để xác định hàm lượng chlorpyrifos ethyl lại sản phẩm trung gian tạo trình phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl Cách lấy mẫu dung dịch ni yếm khí: Lắc thật lọ ủ, dùng bơm tiêm y tế tiệt trùng lấy từ lọ ủ mL cho vào lọ pi 12 mL Bơm tiêm phải thổi với khí N để đẩy hết O2 trước lấy mẫu Trong trình lấy mẫu, nên lắc nhẹ lọ ủ để mẫu xác Phương pháp phân tích hóa học chlorpyrifos ethyl: Quy trình trích mẫu thực qua lần trích với hỗn hợp toluene: acetone (2:1) Sau trích cho mẫu bay tự nhiên tủ hút đạt thể tích mL để tiếp tục quy trình lọc Chlorpyrifos ethyl dung dịch trích làm cách lọc qua cột Alumina Sản phẩm trung gian trình phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl cách scan máy sắc kí khí (GC/MS) Hàm lượng chlorpyrifos ethyl dịch trích sau làm xác định HPLC (High Performance Liquid Chromatography), sử dụng cột C18 (dài: 25 cm, đường kính trong: 4,6 mm), tỷ lệ pha động Methanol:Nước 80:20, bước sóng 230 nm, tốc độ dòng 1,00 mL 3.2.3.3 Kiểm tra tính đa dạng quần xã vi khuẩn khử chlor yếm khí dung dịch đất Các mẫu đất quần xã vi khuẩn đất ký hiệu PH01 vào thời điểm sau tháng ủ sử dụng để trích DNA, thực PCR-DGGE sử dụng phần mềm Gel-compare để phân tích đa dạng di truyền quần xã vi khuẩn có khả khử chlor yếm khí dung dịch đất DNA vi khuẩn đất trích cách ly tâm typ chứa 1,5 dung dịch mẫu, lấy phần đất trích DNA Dùng 0,25 g mẫu đất để trích DNA theo quy trình trích DNA từ đất hãng PowerSoil(R) Isolation Mẫu sau trích dùng để thực PCR - DGGE nhằm xác định đa dạng quần xã vi khuẩn có khả khử chlor yếm khí dung dịch đất Phản ứng PCR kép bao gồm PCR lần với cặp mồi đặc hiệu 338F/Chl1101R cho nhóm Chloroflexi nhắm vào gene 16S rRNA để xác định vi khuẩn khử chlor yếm khí (Park et al., 2011; Lane, 1991) Sản phẩm PCR cặp mồi 338F/Chl1101R tiếp tục thực PCR với cặp mồi 341F-GC/534R (Muyzer et al., 1993) Sau khuếch đại lần thứ hai, sản phẩm PCR dùng để kiểm tra gel agarose, phân tích đa dạng quần xã vi khuẩn kỹ thuật điện di biến tính DGGE (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis) phần mềm Gel-compare 3.2.4 Nội dung 4: Tuyển chọn, phân lập vi khuẩn hiếu khí địa phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phèn đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu 3.2.4.1 Thu mẫu đất Năm mươi ba mẫu đất thu từ đất mơ hình canh tác: chuyên lúa, lúa-màu chuyên màu Các mẫu đất sử dụng để phân lập vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl Trong đó, 38 mẫu đất thu điều kiện đồng ruộng Chợ Mới - An Giang, Bình Tân - Vĩnh Long, Cai Lậy - Tiền Giang, Phụng Hiệp - Hậu Giang 15 mẫu đất thu điều kiện nhà Bảng 3.4: Thành phần nghiệm thức khảo sát phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn PH_C4.3 tổ hợp dòng vi khuẩn đất Nghiệm thức (đối chứng) (Đối chứng ) Thành phần Chỉ tiêu theo dõi g đất tiệt trùng, bổ sung chlorpyrifos ethyl đạt hàm lượng 20 ppm g đất tiệt trùng, bổ sung chlorpyrifos ethyl đạt hàm lượng 20 ppm, 200 µL dung dịch vi khuẩn ký hiệu PH_C4.3 (OD = 0,7 tương đương mật số 106 tế bào/mL) g đất không tiệt trùng, bổ sung chlorpyrifos ethyl đạt hàm lượng 20 ppm g đất không tiệt trùng, bổ sung chlorpyrifos ethyl đạt hàm lượng 20 ppm, 200 µL dung dịch vi khuẩn ký hiệu PH_C4.3 (OD = 0,7 tương đương mật số 106 tế bào/mL) g đất không tiệt trùng, chlorpyrifos ethyl hàm lượng 20 ppm, 50 µL dung dịch dòng PH_C3.1, PH_C4.3, BT_C8.9, BM_C9.2 (OD = 0,7 tương đương 106 tế bào/mL) Hàm lượng chlorpyrifos ethyl lại đất sau 30 ngày ủ 3.2.7 Phương pháp phân tích xử lí số liệu Số liệu xử lí vẽ biểu đồ phần mềm Microsoft Excel, phần mềm thống kê Minitab 16 để kiểm định phân phối chuẩn, đồng phương sai, so sánh trung bình phân tích ANOVA Đồng thời sử dụng phần mềm Gel-compare để so sánh độ tương đồng quần xã vi khuẩn CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Nội dung 1: Đánh giá dư lượng chlorpyrifos ethyl đất phèn chuyên lúa, chuyên mía đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu Đồng sông Cửu Long Kết phân tích mẫu đất cho thấy dư lượng chlorpyrifos ethyl cao đất phù sa Bình Tân, mơ hình lúa - màu vụ trồng khoai lang với 291 µg/kg Dư lượng chlorpyrifos ethyl thấp đất phù sa Bình Tân mơ hình chun canh lúa với 3,51 µg/kg (Hình 4.1) Cai Lậy Bình Tân Bình Minh Phụng Hiệp Hình 4.1: Dư lượng chlorpyrifos ethyl đất phèn đất phù sa địa điểm thu mẫu 4.2 Nội dung 2: Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn, đất phù sa ảnh hưởng mô hình canh tác chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu đến lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất điều kiện đồng ruộng điều kiện nhà lưới 4.2.1 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu chuyên màu điều kiện nhà lưới Tốc độ chlorpyrifos ethyl đất mơ hình canh tác cho thấy chlorpyrifos ethyl bị cao (68%) đất mơ hình lúa - màu (trồng đậu xanh) thấp đất mơ hình lúa - màu (trồng lúa) (22%) (Hình 4.2) Hình 4.2: Lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mô hình canh tác điều kiện nhà lưới (2014) Ngồi kết nghiên cứu cho thấy mô hình canh tác lúa - màu, trồng khác lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất khác Tốc độ chlorpyrifos ethyl đất trồng đậu xanh cao đất trồng lúa Sau 30 ngày phun thuốc, hàm lượng chlorpyrifos ethyl đất trồng đậu xanh lại 27% đất trồng lúa lại 72% (Hình 4.15) Như vậy, mơ hình canh tác loại trồng ảnh hưởng đến tốc độ chlorpyrifos ethyl đất 4.2.2 Đánh giá ảnh hưởng mô hình canh tác chuyên lúa, lúa - màu, lúa - màu lên lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa Long Khánh, Cai Lậy, Tiền Giang Kết phân tích mẫu đất vào thời điểm sau phun thuốc cho thấy mơ hình canh tác khác lưu tồn tốc độ chlorpyrifos ethyl đất khác Trong khoảng thời gian - 14 ngày sau phun thuốc, hàm lượng chlorpyrifos ethyl đất mơ hình chun lúa, lúa - màu có tốc độ giảm gần (khoảng 7%/ngày) mơ hình lúa - màu tốc độ giảm thấp (5,83%/ ngày) (Hình 4.3) Hình 4.3: Lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình canh tác Long Khánh - Cai Lậy - Tiền Giang (vụ Đông Xuân 2013) Sau vụ Đơng Xn, thí nghiệm thực để đánh giá so sánh lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất trồng đậu xanh mơ hình lúa - màu vụ Hè Thu so với đất trồng lúa vụ trước Kết phân tích mẫu đất cho thấy hàm lượng chlorpyrifos ethyl cao ngày sau phun (532 µg/kg) thấp thời điểm 42 ngày sau phun (62 µg/kg) Hàm lượng chlorpyrifos ethyl giảm mạnh giai đoạn - 13 ngày sau phun (giảm 31%) với tốc độ 2,58%/ngày (Hình 4.4) Hình 4.4: Lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình lúa - màu (đậu xanh) Long Khánh, Cai Lậy, Tiền Giang (vụ Hè Thu 2013) Qua kết lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình lúa - màu vào vụ Đơng Xuân Hè Thu cho thấy hàm lượng chlorpyrifos ethyl đất cao vụ Hè Thu (trồng đậu xanh) 532 µg/kg cao vụ Đơng Xn (trồng lúa) 127 µg/kg Đồng thời, tốc độ chlorpyrifos ethyl đất trồng lúa (5,8%/ngày) mạnh đất trồng đậu (2,58%/ngày) 4.2.3 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn, đất phù sa mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu chuyên màu 4.2.3.1 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình canh tác chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu Bình Tân - Vĩnh Long Kết tốc độ chlorpyrifos ethyl đất mơ hình canh tác Bình Tân thể Hình 4.5 Hình 4.5: Tốc độ suy giảm chlorpyrifos ethyl mơ hình canh tác Bình Tân Vĩnh Long (vụ Đông Xuân 2013) (n = 4, Sai số chuẩn) Nhìn chung, tốc độ chlorpyrifos ethyl đất mơ hình lúa - màu mạnh (giảm 100% thời điểm 42 ngày sau phun thuốc) mơ hình lại tốc độ chlorpyrifos ethyl đáng kể (giảm khoảng 87%) 4.2.3.2 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phèn mơ hình canh tác chun lúa chuyên mía Phụng Hiệp - Hậu Giang Kết tốc độ chlorpyrifos ethyl đất phèn mơ hình chun lúa chun mía Phụng Hiệp thể Hình 4.6 Tốc độ chlorpyrifos ethyl đất mô hình mạnh 21 ngày đầu sau phun (giảm khoảng 70%) Trong thời gian 21 ngày tiếp theo, tốc độ chlorpyrifos ethyl đất trồng mía thấp (giảm 11%) tốc độ chlorpyrifos đất trồng lúa vào thời điểm mạnh (giảm 42,08%) tốc độ có chậm 21 ngày đầu (Hình 4.6) Hàm lượng Chlorpyrifos ethyl µg/kg) ( 25000 20000 Sau phun ngày 15000 Sau phun 21 ngày Sau phun 42 ngày 10000 5000 Mô hình chun mía Mơ hình chun lúa Hình 4.6: Tốc độ chlorpyrifos ethyl đất phèn mơ hình chun lúa chun mía (vụ Đơng Xn 2013) (n = 4, Sai số chuẩn) 4.3 Nội dung 3: Đánh giá khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn đất phèn đất phù sa chuyên lúa Hậu Giang Tiền Giang 4.4.1 Kết đánh giá khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl quần xã vi khuẩn dung dịch đất phèn đất phù sa Bốn mẫu đất thu từ đất chuyên canh lúa Hậu Giang Tiền Giang sử dụng để thực thí nghiệm đánh giá khả phân hủy yếm khí chlorpyrios ethyl quần xã vi khuẩn Kết quần xã vi khuẩn có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl Sau tháng nuôi ủ, hàm lượng chlorpyrifos ethyl lại từ 3% - 45% so với hàm lượng ban đầu Tốc độ phân hủy chlorpyrifos ethyl tăng lên sau bổ sung chlorpyrifos ethyl Điều chứng tỏ mật số vi khuẩn gia tăng Hai mươi ngày sau bổ sung chlorpyrifos ethyl, hàm lượng chlorpyrifos ethyl lại từ 4,9% - 48,3% so với hàm lượng bổ sung chlorpyriofs ethyl Sau tháng ủ, hàm lượng chlorpyrifos ethyl từ 0,8% - 16% (Hình 4.7 Hình 4.8) Mặt khác, thời điểm tháng sau bổ sung chlorpyrifos ethyl, tốc độ phân hủy chlorpyrifos ethyl trung bình quần xã vi khuẩn ký hiệu CL01, CL02 (còn lại - 1,5% chlorpyrifos ethyl so với đối chứng) cao quần xã vi khuẩn ký hiệu PH01, PH02 (còn lại - 16% chlorpyrifos ethyl so với đối chứng) Do đất Cai Lậy, Tiền Giang thuộc loại đất phù sa, hàm lượng chất hữu cao (7,62%) nên hoạt động phân hủy chlorpyrifos ethyl vi khuẩn tốt so với đất phèn Phụng Hiệp, Hậu Giang có hàm lượng chất hữu thấp (4,9%) Hình 4.7: Khả phân hủy yếm khí chlopyrifos ethyl quần xã vi khuẩn CL01 (a) CL02 (b) (n=3, sai số chuẩn) Hình 4.8: Khả phân hủy yếm khí chlopyrifos ethyl quần xã vi khuẩn PH01 (a) PH02 (b) (n=3, sai số chuẩn) 4.4.2 Sự hình thành sản phẩm trung gian q trình chuyển hóa chlorpyrifos ethyl bị phân hủy quần xã vi khuẩn kỵ khí Kết phân tích số mẫu đất có diện quần xã vi khuẩn ký hiệu PH01 PH02 cho thấy tất mẫu có hình thành sản phẩm trung gian q trình chuyển hóa chlorpyrifos ethyl Đối với nghiệm thức bổ sung acid hữu nhằm thúc đẩy hoạt động phân hủy chlorpyrifos ethyl theo hướng khử chlor, có nhiều sản phẩm chuyển hóa như: sản phẩm phân hủy gốc chlor vị trí số vòng pyridine: O,O-diethyl-3,6-dichlo-2 pyridil photphorothioat, sản phẩm phân hủy gốc este tạo thành 3,5,6 trichloro-2 pyridinol (TCP) Ngồi ra, qua phân tích dò tìm hình thành O,O-diethyl-O (3,5,6-trichloro-2pyridyl) phosphate (chlorpyrifos oxon) Tuy nhiên, TCP chlorpyrifos oxon phát với hàm lượng thấp, xu hướng phân hủy chủ đạo hình thành sản phẩm khử chlor 4.3.3 Đa dạng vi khuẩn phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl dung dịch đất Sự đa dạng quần xã vi khuẩn thực với mẫu đất ký hiệu PH01, vào thời điểm sau tháng ủ Kết thực điện di gel agarose kiểm tra sản phẩm PCR mồi 338F/Chl1101R nhắm vào gene 16S rRNA nhóm vi khuẩn Chloroflexi (nhóm vi khuẩn khử Chlor) cho thấy có diện nhóm vi khuẩn mẫu ủ Ở tất mẫu có band sản phẩm PCR thu tương ứng vị trí 800 bp Sản phẩm PCR mồi 338F/Chl1101R tiếp tục sử dụng để thực phản ứng PCR lần với mồi tổng quát 341F-GC/534R (Muyzer et al., 1993) Kết thu band vị trí 200 bp Kết chứng tỏ có diện nhóm vi khuẩn Chloroflexi nghiệm thức mẫu đất PH01 Sản phẩm PCR thực điện di biến tính (DGGE) để thấy đa dạng quần xã vi khuẩn tham gia phân hủy chlorpyrifos ethyl Mỗi band gel DGGE thể cho loài vi khuẩn khác Điện di đồ sản phẩm PCR-DGGE trình bày Hình 4.9 kết phân tích độ tương đồng quần xã vi khuẩn trình bày Hình 4.10 Sự khác biệt cấu trúc quần xã vi khuẩn tất nghiệm thức không vượt 10% Cụ thể, độ tương đồng cấu trúc quần xã vi khuẩn nghiệm thức có bổ sung acid hữu (giếng số 4), không bổ sung acid hữu (giếng số 3) so với nghiệm thức đối chứng (giếng số 2) đến 90% Ngoài ra, độ tương đồng nghiệm thức đối chứng có bổ sung khơng bổ sung acid hữu cao, đến 96% (Hình 4.10) Negative 341F-GC/ 534R Negative 338F/1101R Possitive NT4 NT5 NT3 NT4 NT2 NT5 NT3 NT2 NT2 Pearson correlation [0.0%-100.0%] Hình MY4.9: Điện di đồ sản phẩm PCR-DGGE nghiệm thức mẫu đất PH01 MY 94 92 92 94 96 96 98 98 100 100 Ghi chú: NT2: Đối chứng khơng có Chlorpyrifos ethyl, có bổ sung acid hữu cơ, NT3: Đối chứng khơng có Chlorpyrifos ethyl, khơng bổ sung acid hữu cơ; NT4: có Chlorpyrifos ethyl, có bổ sung acid hữu cơ; NT5: có Chlorpyrifos ethyl, khơng bổ sung acid hữu chứng-bổ 21.Đối sung acid hữu 32.Đối chứng- không bổ sung acid hữu 43 Không bổ sung acid hữu 14 Bổ sung acid hữu Hình 4.10: Độ tương đồng vi khuẩn nhóm Chloroflexi mẫu đất PH01 4.4 Nội dung 4: Phân lập vi khuẩn hiếu khí địa phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phèn đất phù sa điều kiện đồng ruộng đất phù sa điều kiện nhà lưới mơ hình canh tác: chun lúa, lúa - màu chuyên màu Đồng sông Cửu Long 4.4.1 Kết tuyển chọn quần xã vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phèn đất phù sa điều kiện đồng ruộng đất phù sa điều kiện nhà lưới mơ hình canh tác: chun lúa, lúa - màu chuyên màu Đồng sông Cửu Long Kết tuyển chọn quần xã vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phèn chuyên lúa, chuyên mía đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu điều kiện đồng ruộng nhà lưới thể Bảng 4.1 Bảng 4.1: Các quần xã vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl Điều kiện thu mẫu Loại đất Mơ hình Đồng ruộng Đất phèn Chuyên lúa Đất phù sa Nhà lưới Đất phù sa Ký hiệu quần xã vi khuẩn Khả phân hủy (%) PH C_3 17,64 PH C_4 16,66 Chuyên màu BM9_Màu 14,00 Lúa – màu BT8M-LM 18,85 lúa – màu 6-Trồng đậu 25,10 Chuyên màu 13-Không 34,80 14-Khơng 45,30 Kết trình bày Bảng 4.1 cho thấy tuyển chọn quần xã vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phèn đất phù sa điều kiện đồng ruộng Đồng thời, quần xã vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl tuyển chọn từ đất phù sa điều kiện nhà lưới Nhìn chung, quần xã vi khuẩn phân lập từ đất điều kiện nhà lưới có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl cao quần xã vi khuẩn tuyển chọn từ đất điều kiện đồng ruộng 4.4.2 Kết phân lập dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl từ quần xã vi khuẩn tuyển chọn Kết phân lập dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl từ quần xã vi khuẩn tuyển chọn mục 4.5.1 trình bày qua Bảng 4.2 Bảng 4.2: Các dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl Loại đất Đất phèn Đất phù sa Mơ hình Ký hiệu quần xã vi khuẩn Ký hiệu dòng vi khuẩn Khả phân hủy (%) Chuyên lúa PH C_3 PH-C3.1 13,96 Chuyên lúa PH C_4 PH_C4.3 49,72 Chuyên màu BM9_ Màu BM_C9.2 22,09 Lúa-màu BT8M-LM BT-C8.9 41,07 Kết phân lập dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl trình bày Bảng 4.2 cho thấy phân lập dòng vi khuẩn đất có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl Trong đó, dòng vi khuẩn ký hiệu PH_C4.3, PH_C3.1 phân lập từ đất phèn chuyên lúa, dòng vi khuẩn ký hiệu BM_C9.2 phân lập từ đất phù sa chuyên màu, dòng vi khuẩn ký hiệu BT_C8.9 phân lập từ đất phù sa luân canh lúa - màu, vụ trồng khoai lang Sau 30 ngày ni cấy mơi trường khống tối thiểu có bổ sung chlorpyrifos ethyl hàm lượng 20 ppm phần trăm phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn khác theo mức độ giảm dần sau: dòng PH_C4.3 (49,72%), dòng BT_C8.9 (41,07%), dòng BM_C9.2 (22,09%), dòng PH_C3.1 (13,96%) 4.4.6 Kết điện di sản phẩm PCR định danh dựa vào trình tự gene 16S-rRNA dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl DNA dòng vi khuẩn có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl trích thực phản ứng PCR với cặp mồi tổng quát 27F-1492R nhằm vào đoạn gene 16S-rRNA Kết chạy điện di sản phẩm PCR cho thấy, band sản phẩm PCR dòng vi khuẩn có kích thước tương ứng với band vị trí 1500 bp Sản phẩm PCR dòng vi khuẩn giải mã trình tự định danh cách so sánh trình tự nucleotide gene 16S-rRNA dòng vi khuẩn với gene tương ứng sở liệu NCBI BlastN Kết định danh dòng vi khuẩn tóm tắt Bảng 4.3 Bảng 4.3: Định danh dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl theo độ tương đồng đoạn gene 16S rRNA STT Dòng Độ Nguồn tương gốc đồng (%) Các dòng vi khuẩn sở liệu Vi khuẩn Số đăng kí Định Danh PH_C3.1 Phụng HiệpHậu Giang 99 Achromobacter xylosoxidans CP012046.1 Achromobacter xylosoxidans C3.1 PH_C4.3 Phụng HiệpHậu Giang 98 Barrientosiimonas humi KP345949.1 Barrientosiimonas humi C4.3 BT_C8.9 Bình TânVĩnh Long 99 Microbacterium sp SR 2-01 KM253157.1 Microbacterium sp C8.9 BM_C9.2 Bình MinhVĩnh Long 99 Staphylococcus pasteuri KC899358.1 Staphylococcus pasteuri C9.2 4.4.7 Kết khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến gia tăng mật số dòng vi khuẩn Kết tổng hợp giá trị thích hợp yếu tố ảnh hưởng đến gia tăng mật số dòng vi khuẩn thể Bảng 4.4 Bảng 4.4: Các yếu tố môi trường tối ưu cho tăng mật số dòng vi khuẩn Dòng Nhiệt độ (0C) pH vi khuẩn Nguồn Carbon Achromobacter xylosoxidans C3.1 30 TSB Barrientosiimonas humi C4.3 30 TSB Microbacterium sp C8.9 37 TSB Staphylococcus pasteuri C9.2 37 TSB Kết khảo sát số yếu tố môi trường sinh thái có ảnh hưởng đến sinh trưởng dòng vi khuẩn cho thấy đa số dòng vi khuẩn thích nghi pH - 7, nhiệt độ 300C 370C 4.5 Nội dung 5: Đánh giá hoạt động phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 mơi trường khống tối thiểu mơi trường đất 4.5.1 Khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 dung dịch khống tối thiểu Mật số trung bình dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 trình bày Hình 4.11 Mật số vi khuẩn theo Loragit (tế bào/mL) 15 NT2-Không bổ sung TSB NT4-Bổ sung TSB 12 10 20 Thời gian (ngày) 30 Hình 4.11: Mật số dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 mơi trường ni cấy có khơng có bổ sung TSB Kết khảo sát cho thấy nghiệm thức có bổ sung TSB, TSB nguồn thức ăn dễ tiêu so với chlorpyrifos ethyl (nguồn carbon khó tiêu) nên vi khuẩn ưu tiên sử dụng nguồn thức ăn TSB để thực trình trao đổi chất, làm gia tăng số lượng tế bào đáng kể Vì thế, nghiệm thức có bổ sung TSB, mật số tế bào vi khuẩn cao mật số tế bào vi khuẩn nuôi môi trường không bổ sung TSB thời điểm Về khả phân hủy chlorpyrifos ethyl, nghiệm thức không bổ sung TSB đến thời điểm 30 ngày hàm lượng chlorpyrifos ethyl lại 6,8 ppm, giảm 12,1 ppm (tương ứng 63,7%) khác biệt có ý nghĩa thống kê so với đối chứng Đối với nghiệm thức có bổ sung TSB, đến thời điểm 30 ngày hàm lượng chlorpyrifos ethyl lại khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với đối chứng (Hình 4.12) Hình 4.12: Khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 theo thời gian 4.5.2 Khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 tổ hợp dòng vi khuẩn môi trường đất Sau 30 ngày nuôi ủ dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl loại đất Mặt khác, bổ sung tổ hợp dòng vi khuẩn có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl vào đất không tiệt trùng khả phân hủy tăng lên (28,4%) so với nghiệm thức bổ sung dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 (phân hủy 19,3% chlorpyrifos ethyl (Hình 4.13) Hình 4.13: Khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 nhóm vi khuẩn (n=3, sai số chuẩn) Ghi chú: Tổ hợp dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl gồm Achromobacter xylosoxidans C3.1, Barrientosiimonas humi C4.3, Microbacterium sp C8.9, Staphylococcus pasteuri C9.2 Như vậy, thời gian nuôi ủ 30 ngày, khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 mơi trường khống tối thiểu có hiệu (phân hủy 63,07% chlorpyrifos ethyl) so với nuôi đất (phân hủy 21,4% chlorpyrifos ethyl) Đồng thời, khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn Barrientosimonas humi C4.3 ni đất tiệt trùng cao đất không tiệt trùng CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Dư lượng chlorpyrifos ethyl đất sau thu hoạch mơ hình canh tác chun lúa, ln canh lúa - màu chuyên màu Kiểu canh tác lúa - màu làm cho chlorpyrifos ethyl đất tốt mơ hình ln canh lúa - màu chuyên màu Trong đất phèn đất phù sa chuyên lúa ĐBSCL có quần xã vi khuẩn có khả phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl theo kiểu khử -Cl hơ hấp yếm khí Sản phẩm trung gian trình phân hủy yếm khí chlorpyrifos ethyl chủ yếu O,O-diethyl-3, 6dichlo-2 pyridil photphorothioat Sự đa dạng nhóm vi khuẩn Chloroflexi (vi khuẩn khử -Cl) đất phèn đất phù sa chuyên lúa thấp Trong điều kiện hiếu khí, tuyển chọn quần xã vi khuẩn phân lập dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl Bốn dòng vi khuẩn định danh Achromobacter xylosoxidans C3.1, Barrientosiimonas humi C4.3, Microbacterium sp C8.9, Staphylococcus pasteuri C9.2 Đồng thời, khả phân hủy chlorpyrifos ethyl dòng vi khuẩn B humi C4.3 nuôi đất tiệt trùng cao đất không tiệt trùng Như vậy, dư lượng, lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất diện vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl đất phụ thuộc vào loại đất kiểu mô hình canh tác 5.2 Kiến nghị Sự chlorpyrifos ethyl đất mơ hính ln canh lúa - màu cao Đồng thời vi khuẩn có khả phân hủy chlorpyrifos ethyl diện đất lúa (ở điều kiện yếm khí hiếu khí) đất trồng màu (ở điều kiện hiếu khí) Vì vậy, để giảm dư lượng chlorpyrifos ethyl đất nên chọn kiểu canh tác phù hợp luân canh lúa trồng cạn để vừa đảm bảo hiệu kinh tế vừa hạn chế tối đa dư lượng chlorpyrifos ethyl đất Trên sở quần xã dòng vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl đất điều kiện phòng thí nghiệm Thí nghiệm điều kiện nhà lưới điều kiện đồng ruộng cần thực nhằm khẳng định khả phân hủy chlorpyrifos ethyl đất quần xã dòng vi khuẩn phân lập Từ đó, quần xã dòng vi khuẩn sử dụng để xử lí dư lượng chlorpyrifos ethyl đất canh tác nông nghiệp ... mơ hình canh tác: chun lúa, lúa - màu chuyên màu Đồng sông Cửu Long Kết tuyển chọn quần xã vi khuẩn phân hủy chlorpyrifos ethyl từ đất phèn chuyên lúa, chuyên mía đất phù sa chuyên lúa, lúa - màu. .. - màu chuyên màu 4.2.3.1 Đánh giá lưu tồn chlorpyrifos ethyl đất phù sa mơ hình canh tác chuyên lúa, lúa - màu chuyên màu Bình Tân - Vĩnh Long Kết tốc độ chlorpyrifos ethyl đất mơ hình canh tác. .. dạng vi khuẩn khử -Cl đất phèn, đất phù sa chuyên canh lúa tuyển chọn, phân lập vi khuẩn, đánh giá ảnh hưởng mơ hình canh tác chun lúa, lúa - màu chuyên màu đến đa dạng vi khuẩn hiếu khí phân hủy