Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa pellet lansoprazol bao tan ở ruột (tt)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y LƯƠNG QUANG ANH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NANG CHỨA PELLET LANSOPRAZOL BAO TAN Ở RUỘT Chuyên ngành: Công nghệ Dược phẩm Bào chế thuốc Mã số: 9720202 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - NĂM 2019 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI HỌC VIỆN QN Y Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Ngọc Chiến PGS TS Nguyễn Đăng Hòa Phản biện 1: PGS.TS Trịnh Văn Lẩu Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Phản biện 2: PGS.TS Phương Thiện Thương Viện Dược liệu Phản biện 3: PGS.TS Trịnh Nam Trung Học viện Quân y Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án Tiến sĩ cấp trường họp Học viện Quân y Vào hồi: ngày tháng Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia - Thư viện Học viện Quân y năm 2019 ĐẶT VẤN ĐỀ Loét dày tá tràng bệnh lý phổ biến giới Việt Nam với tỷ lệ bệnh nhân mắc tương đối cao (từ - 10 % dân số) Nhóm thuốc ức chế bơm proton sử dụng phổ biến để điều trị loét dày tá tràng, có Lansoprazol (LPZ) Thuộc nhóm II hệ thống phân loại sinh dược học, LPZ tan nên dùng theo đường uống SKD bị ảnh hưởng tốc độ độ hồ tan DC từ dạng thuốc LPZ nhạy cảm với nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng, dễ bị phân hủy môi trường (MT) acid dịch vị chất bền nhóm nên gặp nhiều khó khăn q trình bào chế đảm bảo độ ổn định chế phẩm Các nghiên cứu giới tiến hành để tiếp tục nâng cao độ ổn định độ hòa tan LPZ dạng bào chế Để nâng cao SKD thuốc biệt dược LPZ chủ yếu bào chế dạng nang cứng chứa pellet bao tan ruột (BTOR) Hiện nay, doanh nghiệp nước chưa sản xuất phải nhập pellet LPZ BTOR để đóng nang cứng Điều cho thấy việc sản xuất chế phẩm phải phụ thuộc hoàn toàn vào nhà sản xuất pellet LPZ nước ngồi Ở Việt Nam, chưa có cơng trình nghiên cứu tồn diện bào chế đánh giá sinh khả dụng (SKD) viên nang chứa pellet LPZ BTOR cơng bố Vì đề tài tiến hành với mục tiêu sau: Bào chế viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR đáp ứng tiêu chuẩn Dược điển Mỹ độ hòa tan quy mơ phòng thí nghiệm Đề xuất tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR Đánh giá SKD viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR so với viên đối chiếu động vật thực nghiệm * Đóng góp luận án - Đã xây dựng cơng thức quy trình bào chế pellet LPZ BTOR quy mô 1,0 kg/lô phương pháp bồi dần thiết bị tầng sôi qua giai đoạn: Bồi lớp LPZ, bao cách ly BTOR Viên nang cứng chứa pellet LPZ 30 mg BTOR đạt tiêu chuẩn Dược điển Mỹ khả kháng acid độ hòa tan, ổn định điều kiện thực (18 tháng) điều kiện lão hóa cấp tốc (LHCT) (6 tháng) với độ ổn định dự kiến lên tới 30 tháng - Đã đánh giá SKD viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR bào chế được, so sánh với thuốc đối chiếu Gastevin chó thực nghiệm Các thông số Cmax, AUC0-t, AUC0-∞ thuốc bào chế cao so với thuốc đối chiếu, Tmax hai thuốc thử nghiệm tương đương Luận án có tính cấp thiết, ý nghĩa khoa học tính thực tiễn cao Kết luận án có đóng góp cho chun ngành cơng nghệ dược phẩm bào chế thuốc, tài liệu tham khảo hữu ích nghiên cứu bào chế thuốc có dạng bào chế đại * Nội dung cấu trúc luận án Luận án gồm 140 trang: Đặt vấn đề trang; tổng quan 30 trang; nguyên liệu, thiết bị, đối tượng phương pháp nghiên cứu 23 trang; kết nghiên cứu 57 trang; bàn luận 25 trang; kết luận trang; kiến nghị trang Danh mục báo trang, có 159 tài liệu tham khảo (11 tài liệu tiếng Việt, tài liệu tiếng Pháp, 146 tài liệu tiếng Anh) 17 phụ lục Chương TỔNG QUAN Tổng quan LPZ gồm cơng thức, tính chất, độ ổn định, dược động học, tác dụng dược lý số dạng bào chế Tổng quan phương pháp định lượng LPZ dạng bào chế dịch sinh học Tổng quan pellet phương pháp bào chế pellet, kiến thức liên quan đến pellet BTOR số nghiên cứu dạng bào chế chứa LPZ nước giới Tổng quan phương pháp đánh giá SKD tương đương sinh học (TĐSH), nghiên cứu SKD TĐSH LPZ Chương NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị, đối tượng nghiên cứu - LPZ đạt tiêu chuẩn USP 32 LPZ chuẩn, PPZ chuẩn đạt tiêu chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc TP HCM Các tá dược (TD) hóa chất phân tích đạt tiêu chuẩn thí nghiệm Các thiết bị sử dụng đạt yêu cầu cho nghiên cứu bào chế đánh giá SKD - Thuốc thử viên nang cứng chứa pellet LPZ 30 mg bào chế dạng BTOR Thuốc đối chiếu biệt dược dạng viên nang cứng chứa pellet LPZ 30 mg BTOR bao gồm: Viên Gastevin (Slovenia) sản xuất 02/2013, hạn dùng 02/2016; viên IntasLan (Ấn Độ) sản xuất 05/2011, hạn dùng 04/2013; viên Lansoprazol Mylan (Pháp) sản xuất 10/2011, hạn dùng 10/2014 - Chó đực ta khỏe mạnh, trưởng thành từ đến tuổi, con, cân nặng từ 10 đến 12 kg đạt tiêu chuẩn thí nghiệm 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thử tương hợp LPZ TD, dung môi - Trộn 150 mg LPZ loại TD đem khảo sát theo tỷ lệ xác định vào ống nghiệm thủy tinh, nút kín Các ống nghiệm bảo quản điều kiện thực điều kiện LHCT (40 oC, độ ẩm tương đối 75 %) tuần Quan sát, so sánh màu sắc khối bột số mẫu với mẫu đối chiếu chứa LPZ điều kiện - Cân xác khoảng 500 mg LPZ cho vào ống nghiệm thủy tinh suốt, thêm 20 ml dung môi, đậy nút kín, siêu âm 15 phút, bảo quản điều kiện nhiệt độ độ ẩm phòng 72 Trong khoảng thời gian trên, ống nghiệm có biểu biến màu sinh chứng tỏ LPZ không ổn định dung môi 2.2.2 Phương pháp bào chế - Bào chế pellet LPZ: Lựa chọn phương pháp bào chế pellet LPZ thông qua khảo sát phương pháp đùn - tạo cầu (máy QZJ-350) phương pháp bồi dần thiết bị tầng sôi (máy Diosna minilab) - Bao cách ly cho pellet LPZ BTOR cho pellet LPZ bao cách ly (máy mini Caleva): Sử dụng phương pháp bao màng mỏng Thiết kế thí nghiệm phần mềm Modde 5.0, tối ưu hoá phần mềm Inform 3.1 để lựa chọn CT BTOR tối ưu cho pellet - Nâng cấp quy trình bào chế pellet LPZ BTOR lên quy mô 1,0 kg pellet/lô máy Diosna minilab (tương đương với khoảng 3300 viên nang, viên chứa 30 mg LPZ) Đóng nang cứng số cho pellet LPZ BTOR thu với hàm lượng LPZ 30 mg/viên nang Ép vỉ nhôm - nhôm để tránh ánh sáng chống ẩm, 10 viên/vỉ 2.2.3 Phương pháp đánh giá chất lượng pellet viên nang - Đánh giá chất lượng pellet theo tiêu sau: Hình thức, phân bố kích thước, hiệu suất bồi, hiệu suất bao, tỷ lệ màng bao, tốc độ trơn chảy, độ mài mòn, độ ẩm, tỷ trọng biểu kiến, phổ nhiệt vi sai, phổ nhiễu xạ tia X, chụp kính hiển vi điện tử quét, định lượng (theo phương pháp UV cho mẫu bào chế HPLC cho mẫu theo dõi độ ổn định đánh giá SKD), giới hạn tạp chất, độ hòa tan LPZ - Các phương pháp thử độ hòa tan LPZ bao gồm: + Đánh giá khả hòa tan dược chất (DC) từ pellet LPZ pellet bao cách ly: Sử dụng thiết bị Erweka, loại cánh khuấy có tốc độ 75 vòng/phút, 900 ml MT đệm phosphat pH 6,8, nhiệt độ 37 ± 0,5ºC, lấy mẫu sau thời gian 60 phút + Đánh giá khả kháng acid pellet BTOR: Theo phương pháp với thiết bị Erweka, loại cánh khuấy có tốc độ 75 vòng/phút, 500 ml môi trường acid HCl 0,1 N, nhiệt độ 37 ± 0,5ºC Phương pháp A: Sau 60 phút, lọc bỏ dịch lọc, lấy pellet làm khô tự nhiên, định lượng LPZ pellet phương pháp HPLC, tính lượng LPZ giải phóng MT acid HCl 0,1 N Phương pháp Dược điển Mỹ: Sau 60 phút, hút khoảng 25 ml dịch hòa tan, lọc, định lượng LPZ phương pháp UV bước sóng 306 nm + Đánh giá khả giải phóng LPZ MT đệm pH 6,8 từ pellet BTOR: Theo phương pháp Dược điển Mỹ So sánh đồ thị hòa tan DC: Sử dụng số f2 - Đánh giá chất lượng viên nang chứa pellet LPZ BTOR theo tiêu sau: Hình thức, độ đồng khối lượng, định tính, định lượng, độ hòa tan 2.2.4 Phương pháp đánh giá độ ổn định viên nang Tiến hành viên nang chứa pellet BTOR bào chế quy mô 1,0 kg pellet/lô Bảo quản điều kiện thực 18 tháng điều kiện LHCT tháng Đánh giá độ ổn định viên nang theo tiêu sau: Hình thức, độ ẩm, hàm lượng, khả kháng acid, độ hòa tan LPZ từ viên nang Sử dụng phần mềm Minitab 17 để dự đoán độ ổn định viên nang bào chế 2.2.5 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng viên nang - Bố trí thí nghiệm theo phương pháp chéo đôi, ngẫu nhiên đơn liều mô theo mơ hình thử TĐSH FDA Xử lý mẫu định lượng LPZ phương pháp HPLC tác giả Vũ Ngọc Thắng Nguyễn Ngọc Chiến - Đánh giá SKD chó, lấy mẫu trước uống thuốc sau uống thuốc 0,5; 1; 1,5; 2; 2,25; 2,5; 2,75; 3; 3,5; 4; 6; 8; 10; 12 24 giờ, khoảng ml máu tĩnh mạch cổ Xử lý mẫu định lượng LPZ huyết tương chó Tính tốn thơng số DĐH so sánh phần mềm WinNonlin 5.2 Sử dụng phương pháp kiểm định phi tham số để so sánh Tmax hai chế phẩm 2.3 Phương pháp xử lý số liệu Tính tốn giá trị trung bình (TB), độ lệch chuẩn (SD), độ lệch chuẩn tương đối (RSD) Sử dụng phần mềm nêu mục 2.2 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Khả kháng acid độ hòa tan viên đối chiếu Tiến hành thử khả kháng acid MT pH 1,2 (60 phút) độ hòa tan MT pH 6,8 (60 phút tiếp theo) viên đối chiếu theo Dược điển Mỹ Kết lựa chọn viên Gastevin có khả kháng acid đạt yêu cầu độ hòa tan tốt Hình 3.1 Khả kháng acid độ hòa tan viên đối chiếu (n=12) 3.2 Bào chế pellet LPZ BTOR quy mô 250 g/mẻ 3.2.1 Sự tương hợp LPZ TD, dung môi Kết thử nghiệm cho thấy điều kiện thực sau tuần, TD tạo cầu (Avicel PH 101), TD độn (lactose monohydrat), TD siêu rã (SSG), TD dính (HPMC E15, PVP PVA), TD trợ tan (NaLS, Lutrol F127), TD kiềm, TD tạo màu TD chống dính tiếp xúc với LPZ khơng thấy có biến đổi màu sắc hỗn hợp, có Labrasol Cremophor RH40 có biến màu khơng đáng kể Tiến hành theo dõi biến đổi LPZ thông qua khác biệt diện tích pic HPLC LPZ mẫu thử tương hợp với Labrasol, Lutrol F127, NaLS Cremophor RH40 điều kiện thực điều kiện LHCT (4 tuần) với việc khơng có sử dụng TD kiềm dinatri hydrophosphat Khi cho thêm TD kiềm vào mẫu thử LHCT sơ nhận thấy LPZ ổn định rõ rệt bốn loại TD thử nghiệm Với kết thử tương hợp LPZ với dung môi, sau 72 có dung dịch đệm phosphat pH 6,8 khơng thấy có biến màu DC chọn dung môi cho bào chế pellet LPZ 3.2.2 Bào chế pellet LPZ 3.2.2.1 Bào chế pellet LPZ phương pháp đùn - tạo cầu Qua khảo sát, lựa chọn thành phần CT bào chế pellet (quy mô 50 g/mẻ) gồm LPZ (10 %), TD kiềm dinatri hydrophosphat (6 %), TD siêu rã SSG (5 %), Avicel PH 101 (30 %), talc (1 %), lactose monohydrat (vđ 100 %), TD dính lỏng dung dịch HPMC E15 (6 %) đệm phosphat pH 6,8 (71 ml cho 100 g pellet) - Ảnh hưởng TD trợ tan tới độ hòa tan LPZ: Cố định thành phần pellet trên, tiến hành bào chế pellet LPZ với TD trợ tan thay đổi gồm Labrasol, Cremophor RH40, Lutrol F127 NaLS, thay đổi tỷ lệ từ %, % 10 % Kết cho thấy với tỷ lệ TD trợ tan 10 % % LPZ hòa tan tăng lên theo thứ tự Lutrol F127 (78,93 %) Labrasol (78,44 %) > NaLS > Cremophor RH40 Căn vào kết thử tương hợp DC TD, lựa chọn Lutrol F127 để tiến hành nghiên cứu hỗn hợp Lutrol F127 LPZ có độ ổn định tốt so với hỗn hợp Labrasol LPZ - Ảnh hưởng lượng TD siêu rã tới độ hòa tan LPZ: Tiến hành bào chế pellet LPZ với tỷ lệ SSG thay đổi từ %, % đến % cố định thành phần khác pellet Kết thử hòa tan cho thấy tăng tỷ lệ SSG khơng làm tăng độ hòa tan DC Ở CT có % SSG LPZ hòa tan 76,68 % Với CT % % SSG, % LPZ hòa tan sau 60 phút gần tương đương (78,93 % 77,54 %) Sử dụng TD siêu rã SSG (5 %) cho nghiên cứu - Ảnh hưởng TD kiềm tới độ ổn định độ hòa tan LPZ: Thay đổi lượng TD kiềm (dinatri hydrophosphat) %, % 10 %, cố định thành phần khác CT pellet Kết thử độ hòa tan cho thấy % LPZ hòa tan khơng tỷ lệ thuận với lượng TD kiềm CT, đạt cao sau 60 phút (81,37 %) mẫu chứa TD kiềm với tỷ lệ %, với lượng TD kiềm % 10 % LPZ hòa tan thấp (78,93 % 79,26 %) % LPZ hòa tan điều kiện LHCT sau tuần không thay đổi so với ban đầu, CT chứa % TD kiềm có độ hòa tan LPZ cao Sau tuần bảo quản điều kiện thực, pellet LPZ chứa % dinatri hydrophosphat ổn định hình thức (cầu, đều), độ ẩm (dưới %), hàm lượng % LPZ hòa tan so với thời điểm đầu 14 Lựa chọn CT bào chế pellet LPZ phương pháp bồi dần có độ hòa tan cao so với phương pháp đùn - tạo cầu (độ hòa tan pellet nhân cao giúp cho thiết kế CT màng bao dễ dàng hơn), bề mặt pellet bồi dần nhẵn độ cầu tốt hơn, thuận lợi cho tiến hành bao cách ly BTOR Phân tích phổ nhiệt vi sai (mẫu LPZ nguyên liệu, hỗn hợp TD, hỗn hợp vật lý LPZ - TD, pellet bồi dần) phổ nhiễu xạ tia X (mẫu LPZ nguyên liệu, hỗn hợp vật lý LPZ - TD, pellet bồi dần) chứng minh tỷ lệ LPZ trạng thái kết tinh pellet bồi dần thấp so với mẫu hỗn hợp vật lý nguyên liệu, làm tăng độ hòa tan LPZ pellet bồi dần Bào chế pellet LPZ phương pháp bồi dần với mẻ (150 g/mẻ, pellet trơ Suglets công ty Colorcon - Mỹ) nhận thấy pellet ổn định sau tháng bảo quản điều kiện thực LHCT hàm lượng độ hòa tan LPZ Từ đó, đề xuất tiêu chuẩn pellet LPZ sau: Hình thức (cầu, đều, màu trắng, khơng sứt vỡ), kích thước (0,71 - 1,0 mm), độ ẩm (< %), hàm lượng LPZ (10,5 - 13,0 %), độ hòa tan LPZ (> 80 %) 3.2.3 Bao màng cách ly cho pellet LPZ Lựa chọn CT sử dụng 20 g pellet bồi dần sau: PVA (5 %), PEG 6000 (thay đổi), Lutrol F127 (thay đổi), titan dioxyd (2 %), talc (thay đổi), dung môi đệm phosphat pH 6,8 - Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ PEG 6000: Cố định tỷ lệ Lutrol F127 %, talc 1,5 %, thay đổi tỷ lệ PEG 6000 từ %, 1,25 % đến 1,5 % (CT B1, CT B2, CT B3) Kết nhận thấy, tăng tỷ lệ PEG 6000 hiệu suất bao tăng lên độ hòa tan LPZ không thay đổi, đạt cao tỷ lệ PEG 6000 1,5 % (CT B3) nên lựa chọn tỷ lệ để khảo sát tiếp - Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ Lutrol F127: Từ CT B3, thay đổi tỷ lệ Lutrol F127 CT từ 0,5 đến 2,0 % Kết nhận thấy tăng tỷ lệ Lutrol từ 0,5 đến 1,0 % (CT B4, CT B3) độ hòa tan 15 LPZ tăng lên, hiệu suất bao tăng Nhưng tỷ lệ Lutrol F127 tăng cao (> 1,0 %) làm dịch bao có độ nhớt cao, nhiều bọt gây khó khăn cho q trình bao, làm giảm hiệu suất bao (CT B5, CT B6) Vì vậy, tỷ lệ Lutrol 1,0 % (CT B3) tiếp tục lựa chọn - Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ TD chống dính: Thay đổi tỷ lệ talc CT B3 từ 0,5 % (CT B7), % (CT B8), 1,5 % (CT B3) % (CT B9) Ở CT B7, CT B8 có tượng pellet bị dính, hiệu suất bao thấp Q trình bao thuận lợi, hiệu suất cao quy mô 20 g máy Caleva (85,89 %) CT B3 Ở CT B9 hiệu suất bao giảm (còn 75,67 %), xuất bụi buồng bao Tuy nhiên, tiến hành bao quy mô 150 g máy Diosna, CT B3 CT B9 cho độ hòa tan LPZ đạt 90 % pellet bị dính CT B3, làm giảm hiệu suất bao Trong đó, CT B9 có q trình bao thuận lợi, hiệu suất đạt khoảng 90 % Do vậy, lựa chọn CT tỷ lệ talc 2,0 % để tiếp tục tiến hành khảo sát - Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ chất rắn dịch bao: Tỷ lệ chất rắn thay đổi từ 7,5 % (CT B10), 11,5 % (CT B9), 12,5 % (CT B11), 19 % (CT B12) Ở CT B12 trình bao khơng thực So sánh CT lại nhận thấy tiến hành bao tỷ lệ khoảng 12,5 % (CT B11) đảm bảo trình bao thuận lợi, tiết kiệm thời gian, đặc biệt giai đoạn nâng cấp quy mô sau - Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ màng bao: Bao CT B11 cho pellet bồi dần CT N19 với tỷ lệ màng bao thay đổi (5 %, 7,5 %, 10 %), sau BTOR CT tăng 25 % khối lượng so với pellet Các mẫu pellet BTOR thử MT acid HCl 0,1 N 60 phút để đánh giá khả kháng acid màng bao Kết lựa chọn màng bao cách ly tỷ lệ 7,5 % cho pellet bồi dần độ hòa tan > 90 %, hiệu suất bao 76 %, thời gian có pellet bắt đầu bị biến màu 56 phút, tỷ lệ pellet biến màu thấp (2 %) với CT màng 16 bao cách ly sau: PVA (5 g), PEG 6000 (1,5 g), Lutrol F127 (1 g), titan dioxyd (2 g), talc (2 g), đệm phosphat pH 6,8 (100 ml) 3.2.4 Bao màng tan ruột cho pellet bao cách ly Lựa chọn biến đầu vào thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa màng BTOR tỷ lệ TEC so với polyme, tỷ lệ talc so với polyme, tỷ lệ màng bao so với khối lượng pellet trước bao (kl/kl) Nồng độ polyme Eudragit L100 cố định 7,5 % Khối lượng titan dioxyd cố định 20 % so với polyme lượng dung môi EtOH : nước (3:1) cố định 100 ml Biến đầu % LPZ hòa tan MT pH 1,2 (0 % ≤ Y1 ≤ 10 %) MT đệm pH 6,8 (80 % ≤ Y2 ≤ 100 %) Bảng 3.20 Các biến độc lập khoảng biến thiên Biến độc lập Tỷ lệ TEC (% so với polyme) Ký hiệu X1 Mức thấp 20 Mức cao 30 Tỷ lệ talc (% so với polyme) X2 30 50 Tỷ lệ màng bao (%) X3 25 35 Thiết kế thí nghiệm phần mềm Modde 5.0 theo mơ hình D-optimal gồm 20 thí nghiệm Đánh giá Y1 phương pháp A Y2 phương pháp Dược điển Mỹ Tối ưu hóa phần mềm Inform 3.1 thu CT tối ưu biến đầu vào sau: X (20 %), X2 (46,14 %), X3 (35,09 %) Dự đoán Y1 4,07 %, Y2 90,87 % Bào chế theo CT tối ưu máy Diosna quy mô 150 g (n=3) nhận thấy pellet BTOR có tính chất sau: Hình thức (cầu, đều, bề mặt nhẵn), kích thước (0,85 - 1,2 mm), độ ẩm (3,58 %), tỷ trọng biểu kiến (0,81 g/ml), tốc độ trơn chảy (11,8 g/giây), độ mài mòn (0,05 %), giới hạn tạp chất (0,18 %), hàm lượng LPZ (8,26 %), % LPZ hòa tan MT acid pH 1,2 (3,18 - 3,65 %), % LPZ hòa tan MT đệm pH 6,8 (89,07 - 90,04 %) đạt yêu cầu Dược điển Mỹ Chụp ảnh kính hiển vi điện tử quét thấy lớp pellet LPZ BTOR rõ rệt bao gồm: Lớp pellet trơ, lớp chứa LPZ, lớp bao cách ly lớp BTOR Màng bao thu có bề dày liên tục 17 Đóng nang pellet BTOR theo CT tối ưu, so sánh độ hòa tan LPZ theo phương pháp Dược điển Mỹ với viên Gastevin (n=12) nhận thấy viên thử nghiệm đáp ứng tốt yêu cầu Dược điển Mỹ Tuy nhiên, với số f2 = 56,62 độ hòa tan viên nang theo CT tối ưu viên đối chiếu thử nghiệm in vivo khác biệt 3.3 Nâng cấp bào chế pellet LPZ BTOR quy mô 1,0 kg/lô Các thông số kĩ thuật thiết bị khảo sát phù hợp với pellet CT bồi dần màng bao trước nâng cấp Tiến hành nâng cấp quy mô 1,0 kg pellet (tương đương khoảng 3300 viên nang) máy bao tầng sôi Diosna gồm giai đoạn: Bào chế pellet LPZ (500 g pellet trơ), bao cách ly cho pellet LPZ, BTOR cho pellet bao cách ly Kết bào chế pellet LPZ BTOR lô trường Đại học Dược Hà Nội, đóng nang ép vỉ cơng ty Cổ phần Dược phẩm Sao Kim thu lặp lại, đáp ứng chất lượng pellet viên nang 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định viên nang chứa pellet LPZ BTOR Sau tiến hành bào chế pellet LPZ 30 mg BTOR quy mô 1,0 kg/lô, tiến hành đánh giá đề xuất số tiêu chất lượng cho pellet viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR Từ đó, tiến hành xây dựng tiêu chuẩn sở cho viên nang Tiêu chuẩn thẩm định đánh giá Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung Ương cho kết viên nang bào chế đạt tiêu chuẩn sở - Viên nang chứa pellet bào chế quy mô 1,0 kg pellet/lô lô đánh giá độ ổn định điều kiện thực 18 tháng điều kiện LHCT tháng Kết cho thấy tiêu hình thức, độ ẩm, hàm lượng, khả kháng acid, độ hòa tan LPZ từ viên nang thay đổi không đáng kể so với ban đầu Sử dụng phần mềm Minitab 17 cho kết dự kiến độ ổn định viên nang 30 tháng Bảng 3.25 Đề xuất số tiêu chất lượng cho viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR 18 Chỉ tiêu Hình thức (cảm quan) Đồng khối lượng (mg, theo DĐVN IV phụ lục 11.3) Định tính (phương pháp HPLC) Khả kháng acid MT pH 1,2 (theo phương pháp Dược điển Mỹ) % LPZ hòa tan MT đệm pH 6,8 (theo phương pháp Dược điển Mỹ) Hàm ẩm (%, theo DĐVN IV - phụ lục 9.6) Hàm lượng (%) (phương pháp HPLC) Đề xuất tiêu chuẩn Viên nang cứng đóng vỉ nhơm - nhơm kín, chứa pellet cầu, đều, màu trắng, khơng sứt vỡ mT B ± 7,5 % Trên sắc ký đồ, dung dịch thử phải cho pic có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu thu từ dung dịch LPZ chuẩn Khơng có nang hòa tan q 10 % LPZ so với hàm lượng ghi nhãn sau 60 phút Khơng 80 % lượng LPZ hòa tan so với hàm lượng ghi nhãn sau 60 phút Không 90,0 - 110,0 3.5 Đánh giá SKD viên nang chứa pellet LPZ BTOR động vật thực nghiệm 3.5.1 Phân tích mẫu huyết tương chó uống viên nang chứa pellet LPZ BTOR Tiến hành lấy mẫu, xử lý mẫu định lượng LPZ huyết tương chó thuốc thử (viên nang bào chế) thuốc đối chiếu (viên Gastevin) Từ liệu nồng độ LPZ trung bình huyết tương thời điểm lấy mẫu, vẽ đường cong nồng độ thuốc trung bình theo thời gian hình 3.23 Hình 3.23 Đường cong nồng độ thuốc trung bình theo thời gian thuốc thử thuốc đối chiếu (n=6) 3.5.2 Phân tích so sánh thơng số DĐH Sử dụng phần mềm WinNonlin 5.2 để tính thơng số DĐH LPZ thuốc thử (T) thuốc đối chiếu (R) theo mơ hình 19 khơng ngăn Kết trình bày bảng 3.30 Tiến hành phân tích phương sai để đánh giá ảnh hưởng cá thể, trình tự thử, chế phẩm thử, giai đoạn thử đến sai khác thông số DĐH phần mềm WinNonlin 5.2 Các thông số C max, AUC0- t AUC0- ∞ chuyển thành dạng logarit tự nhiên trước phân tích Mã động vật Cmax (µg/ml) Tmax (giờ) AUC0-t (ng.giờ/ml) AUC0- ∞ (ng.giờ/ml) R T R T R T R T 1,0515 1,4823 2,25 2,75 3194,9 3627,4 3330,4 3660,4 0,7851 1,0238 2,25 2,0 1866,0 1518,1 2021,4 1543,7 0,7111 0,4310 2,5 2,0 1998,0 784,2 2120,3 889,2 0,4320 0,8134 2,0 2,75 450,8 2040,1 474,6 2158,4 1,2963 1,1512 2,75 2,5 1651,5 2964,1 1939,5 3457,5 0,5251 0,6540 2,25 2,25 1031,9 2537,8 1069,6 3359,4 TB 0,8002 0,9260 2,33 2,37 1698,8 2245,2 1825,9 2511,4 SD 0,3252 0,3746 0,25 0,34 933,8 1021,5 979,7 1151,2 Bảng 3.30 Các thông số DĐH thuốc thử thuốc đối chiếu Kết cho thấy: Trình tự thử thuốc, cá thể, chế phẩm thử ảnh hưởng đến Cmax, AUC0- t, AUC0- ∞ khơng có ý nghĩa thống kê với P > 0,05 Các giai đoạn thử thuốc không ảnh hưởng đến C max với P > 0,05, ảnh hưởng đến AUC0-t, AUC0- ∞ có ý nghĩa thống kê với P < 0,05 Khoảng tin cậy 90 % (giữa thuốc) C max 79,56 % 166,40 %; AUC0-t 89,38 % - 216,46 %; AUC0-∞ 94,98 % - 218,71 % Các khoảng tin cậy 90 % nằm khoảng từ 80 % đến 125 % chứng tỏ giá trị C max, AUC0- t, AUC0- ∞ thuốc không tương đương theo quy định FDA Thông số T max thuốc phân tích kiểm định Wilcoxon dấu xếp hạng nhận thấy khác Tmax hai chế phẩm khơng có ý nghĩa thống kê với P > 0,05 Như vậy, kết nghiên cứu SKD cho thấy C max, AUC0-t, AUC0-∞ thuốc thử cao so với thuốc đối chiếu, 20 Tmax thuốc thử thuốc đối chiếu tương đương Chương BÀN LUẬN 4.1 Lựa chọn viên đối chiếu Các viên đối chiếu bào chế theo phương pháp bồi dần lên pellet trơ, tương đồng với phương pháp mà nghiên cứu sử dụng Vì vậy, đánh giá độ hòa tan in vitro viên đối chiếu phù hợp với viên nang bào chế Lựa chọn viên Gastevin làm viên đối chiếu đáp ứng yêu cầu Dược điển Mỹ, có độ hòa tan đạt cao Hơn nữa, viên Gastevin (Slovenia) lưu hành hợp pháp Việt Nam nên phù hợp với Thông tư 08/2010/BYT Bộ Y tế 4.2 Bào chế viên nang chứa pellet LPZ BTOR 4.2.1 Bào chế pellet LPZ 4.2.1.1 Phương pháp bào chế pellet LPZ Pellet LPZ giai đoạn quan trọng trình bào chế viên nang chứa pellet LPZ BTOR, đảm bảo khả giải phóng DC từ pellet, làm sở để xây dựng CT màng bao đáp ứng yêu cầu độ hòa tan Dược điển Mỹ Giai đoạn có vai trò định đến độ ổn định viên nang tác nhân nhạy cảm tương tác trực tiếp với DC Kết nghiên cứu lựa chọn phương pháp bồi dần để bào chế pellet LPZ (so sánh với phương pháp đùn tạo cầu) Phương pháp dùng Suglets (0,71 - 0,85 mm) làm pellet trơ, chấp thuận FDA chất lượng để ứng dụng bào chế dược phẩm Về chất, Suglets nhân đường trơ chứa succrose (tương đồng với Gastevin) nên phù hợp so sánh độ hòa tan DC viên nang bào chế với viên Gastevin 21 4.2.1.2 Độ ổn định độ hòa tan pellet LPZ bồi dần Để tăng độ ổn định độ hòa tan LPZ trình bào chế pellet LPZ phương pháp bồi dần bảo quản chế phẩm việc bổ sung thêm TD kiềm CT bào chế cần thiết Kết lựa chọn dinatri hydrophosphat phù hợp cho mục đích Ngồi ra, lựa chọn TD phù hợp, khơng tương kỵ với LPZ góp phần làm tăng độ ổn định pellet LPZ Nghiên cứu sử dụng Lutrol F127 để làm tăng độ tan LPZ (TD số nghiên cứu giới dùng làm tăng độ tan DC tan theo đường uống) Phân tích phổ nhiệt vi sai phổ nhiễu xạ tia X mẫu nghiên cứu giải thích chế làm tăng độ tan LPZ bào chế phương pháp bồi dần (LPZ giảm tỷ lệ kết tinh) Bên cạnh đó, kể đến vai trò PVA việc làm tăng độ hòa tan độ ổn định LPZ theo số nghiên cứu Pellet LPZ bào chế có độ hòa tan LPZ 85 % sau 60 phút, ổn định tối thiểu tháng điều kiện thực điều kiện LHCT 4.2.2 Bao màng cách ly cho pellet LPZ Do đặc tính bền môi trường acid nên pellet LPZ tiến hành bao cách ly với màng BTOR có tính acid (nhóm carboxy) Màng bao cách ly sử dụng PVA tạo dịch bao có độ nhớt cao, polyme có khả chống ẩm tốt với Lutrol F127 Nghiên cứu độ dày màng bao cách ly thông số giúp làm tăng khả kháng acid pellet BTOR, ngăn cản MT acid thấm qua phần lớp màng BTOR đến tiếp xúc với lớp chứa LPZ trước pellet chuyển qua MT kiềm để giải phóng DC 4.2.3 Bao màng tan ruột cho pellet LPZ bao cách ly 22 Để loại bớt giai đoạn ủ pellet sau bao, sử dụng TD BTOR Eudragit L100 hòa tan vào hỗn hợp EtOH - nước (3:1) Eudragit L100 tan tốt dung môi hữu dung dịch kiềm có pH từ 6,0 trở lên TD dạng bột nên thuận lợi cho việc pha thành dung dịch có nồng độ khác Đánh giá khả kháng acid pellet LPZ BTOR theo phương pháp khác nhau, đảm bảo độ tin cậy tính chặt chẽ Phương pháp A nhiều nghiên cứu sử dụng để khảo sát CT bào chế pellet LPZ BTOR Đối với CT tối ưu, sử dụng thêm phương pháp Dược điển Mỹ (theo mục tiêu nghiên cứu) Tương tự, đánh giá độ hòa tan LPZ MT đệm pH 6,8 tuân thủ theo Dược điển Mỹ Tiến hành lặp lại lần quy mô 150 g/mẻ kết CT tối ưu màng BTOR Kết cho thấy mẻ bào chế tương đối đồng khả kháng acid độ hòa tan LPZ MT đệm pH 6,8 So sánh đồ thị hòa tan viên bào chế viên Gastevin cho giá trị f2 > 50 mức giới hạn thấp SKD thuốc khác biệt thử nghiệm in vivo 4.3 Nâng cấp quy mô bào chế viên nang Với quy mô nâng cấp thành công, quy trình lơ thu ổn định, lặp lại giống với điều chỉnh thông số kĩ thuật không đáng kể so với giai đoạn khảo sát (do thiết bị điều kiện thí nghiệm tương đồng) Đồng thời, máy Diosna sử dụng để bồi dần lượng pellet tối đa khoảng 3,0 kg/lô nên thơng số thiết bị hồn tồn phù hợp tương đối ổn định sử dụng cho cỡ lô nhỏ 1,0 kg/lô Viên nang bào chế lô đáp ứng yêu cầu Dược điển Mỹ khả kháng acid độ hòa tan LPZ MT đệm pH 6,8 Khối lượng trung bình viên (xác định 20 viên) lơ đồng cho thấy thơng số đóng nang máy phù hợp (thiết bị thuộc xưởng GMP công ty Sao Kim cấp phép Bộ Y tế để sản xuất thuốc) 23 4.4 Tiêu chuẩn sở độ ổn định viên nang Các tiêu chuẩn sở thẩm định mẫu viên nang kiểm định đạt tiêu chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương Theo dõi độ ổn định viên nang điều kiện thực với thời gian 18 tháng nhiệt độ 15 - 30 oC, độ ẩm 40 - 90 % (là khoảng nhiệt độ, độ ẩm dao động thực tế phòng thí nghiệm lưu mẫu đánh giá độ ổn định) điều kiện LHCT với thời gian tháng nhiệt độ 40 oC  2, độ ẩm 75 %  Thời gian theo dõi điều kiện thực dài tháng so với quy định thời gian tối thiểu WHO Asean Khoảng thời gian đánh giá mẫu thử đáp ứng yêu cầu Asean Viên nang quy mơ 1,0 kg/lơ ổn định mặt lý, hóa thời gian theo dõi Kết dự đoán từ phần mềm Minitab 17 cho thấy độ ổn định dự kiến viên nang 30 tháng 4.5 Đánh giá SKD viên nang động vật thực nghiệm Thí nghiệm bố trí theo mơ hình thử chéo đơi, ngẫu nhiên đơn liều mơ theo mơ hình thử TĐSH FDA Cách bố trí thí nghiệm khoa học để hạn chế yếu tố ngoại lai ảnh hưởng đến kết đánh giá SKD Các mẫu huyết tương lấy thời điểm khác nhau, có 12 thời điểm xác định nồng độ LPZ huyết tương (lớn theo hướng dẫn tài liệu chuyên khảo 11 điểm) Trong có điểm lấy mẫu trước đạt tới đỉnh đường cong nồng độ thuốc - thời gian, điểm lấy mẫu sau đỉnh có điểm xung quanh C max, thời điểm lấy mẫu cuối định lượng khơng phát LPZ huyết tương Vì vậy, thời điểm lấy mẫu phù hợp đủ để phản ánh trình DĐH thuốc thể động vật Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ DC thuốc với thời gian thể q trình giải phóng dạng bào chế BTOR in vivo (đạt nồng độ đỉnh sau khoảng thời gian từ 2,0 đến 2,75 giờ) 24 Các kết so sánh Cmax, AUC0-t AUC0-∞ đưa kết luận thuốc thử không tương đương (cao hơn) với thuốc đối chiếu dùng liều đơn 30 mg chó Sự khơng tương đương nhược điểm cỡ mẫu nhỏ (6 chó) nên chưa phản ánh tồn diện hấp thu DC động vật thí nghiệm Hơn nữa, LPZ tan nước nên CT bào chế khác (giữa viên nang bào chế viên Gastevin) độ hòa tan LPZ dạng bào chế khác Do đó, đánh giá SKD in vivo độ hòa tan LPZ MT dịch ruột yếu tố quan trọng ảnh hưởng tới hấp thu DC (kể với DC có tính thấm tốt LPZ), làm cho LPZ hấp thu vào máu khác thuốc Bên cạnh đó, LPZ chất bị phân huỷ nhanh MT pH thấp (acid dịch vị) nên phần LPZ bị phân huỷ qua dày làm giảm nồng độ DC thuốc xuống tới ruột non, làm ảnh hưởng đến hấp thu LPZ Các giá trị trung bình Cmax, AUC0-t, AUC0-∞ thuốc chó nằm giới hạn phù hợp so với số nghiên cứu công bố DĐH LPZ dịch sinh học từ thử nghiệm viên BTOR Giới hạn nghiên cứu đối tượng nghiên cứu chó thí nghiệm, nghiên cứu tiến hành người tình nguyện Tuy nhiên, kết đánh giá SKD viên nang chó thí nghiệm có ý nghĩa định hướng nghiên cứu đánh giá SKD người tình nguyện với thuốc thử nâng cấp hồn thiện quy trình bào chế quy mô lớn KẾT LUẬN Đã bào chế viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR quy mơ phòng thí nghiệm 25 - Xây dựng CT bào chế pellet LPZ phương pháp bồi dần thiết bị tầng sơi (có so sánh với phương pháp đùn - tạo cầu) với thành phần sau (tính cho 150 g pellet trơ): Lansoprazol 5,7 %; HPMC E15 2,28 %; PVA 0,57 %; dinatri hydrophosphat 5,7 %; Lutrol F127 0,42 %; talc 2,28 % dung môi dung dịch đệm phosphat pH 6,8 - Đã xây dựng CT cho màng bao cách ly pellet LPZ CT cho màng BTOR cho pellet LPZ bao cách ly: + Màng bao cách ly: PVA 5,0 %; PEG 6000 1,5 %; Lutrol F127 1,0 %; titan dioxyd 2,0 %; talc 2,0 % dung môi dung dịch đệm phosphat pH 6,8 Tỷ lệ màng bao 7,5 % + Màng BTOR: Eudragit L100 7,5 %; titan dioxyd 20,0 %; TEC 20,0 %; talc 46,14 % so với polyme dung môi hỗn hợp EtOH - nước (3:1) Tỷ lệ màng bao 35,09 % - Bào chế viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR (đóng nang cứng gelatin số 1, ép vỉ nhơm - nhôm) đạt tiêu chuẩn Dược điển Mỹ khả kháng acid (dưới 10 % MT pH 1,2) độ hòa tan (trên 80 % MT pH 6,8) - Đã tiến hành xây dựng nâng cấp quy trình bào chế viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR quy mơ 1,0 kg/lơ Quy trình bào chế bao gồm giai đoạn sau: Bồi dần LPZ lên pellet trơ, bao màng bao cách ly cho pellet LPZ, bao màng tan ruột cho pellet bao cách ly đóng nang cho pellet thiết bị công nghiệp công ty Cổ phần Dược phẩm Sao Kim Các lô viên nang bào chế theo quy trình nâng cấp có khả kháng acid độ hòa tan đáp ứng yêu cầu Dược điển Mỹ Đã đề xuất tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR 26 - Đề xuất tiêu chuẩn sở cho viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR Viên nang chứa pellet LPZ BTOR đạt tiêu chuẩn sở thẩm định Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương - Đã theo dõi độ ổn định viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR với quy mô 1,0 kg/lô điều kiện thực (18 tháng) điều kiện LHCT (6 tháng) Viên nang ổn định điều kiện theo dõi đáp ứng yêu cầu tiêu chuẩn sở đề Đã dự kiến độ ổn định tối thiểu viên nang lên tới 30 tháng Đã đánh giá SKD viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR động vật thực nghiệm - Đánh giá SKD viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR bào chế được, có so sánh với thuốc đối chiếu Gastevin chó thực nghiệm Thuốc đối chiếu Gastevin đáp ứng tiêu chuẩn Dược điển Mỹ khả kháng acid độ hòa tan (cao thuốc đối chiếu đánh giá sẵn có thị trường Việt Nam) - Các thơng số Cmax, AUC0-t, AUC0-∞ thuốc bào chế cao so với thuốc đối chiếu (Cmax, AUC0-t, AUC0-∞ thuốc bào chế thuốc đối chiếu tương ứng 0,9260 0,8002 µg/ml; 2245,2 1698,8 ng.giờ/ml; 2511,4 1825,9 ng.giờ/ml), Tmax hai thuốc thử nghiệm tương đương KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nâng cấp thẩm định quy trình bào chế viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR quy mô lớn hơn, bước phát triển chế phẩm phù hợp với điều kiện cho phép sản xuất quy mô công nghiệp Tiếp tục đánh giá độ ổn định dài hạn chế phẩm theo điều kiện thử nghiệm quy định 27 - Tiến hành đánh giá SKD viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR người tình nguyện, làm sở cho ứng dụng chế phẩm lâm sàng, đóng góp vào cơng tác chăm sóc sức khỏe nhân dân từ dạng bào chế đại chủ động sản xuất từ công nghiệp dược nước DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA LUẬN ÁN Lương Quang Anh, Nguyễn Ngọc Chiến, Nguyễn Đăng Hòa (2013) Nghiên cứu bào chế lansoprazol dạng pellet phương pháp đùn tạo cầu Tạp chí Y Dược học quân sự, 38(6):15-19 Lương Quang Anh, Nguyễn Đăng Hòa, Nguyễn Ngọc Chiến (2014) Nghiên cứu bào chế pellet lansoprazol phương pháp bồi dần sử dụng thiết bị bao tầng sơi Tạp chí Y Dược học qn sự, 39(3):13-18 Anh Quang Luong, Thang Ngoc Vu, Dang Hoa Nguyen, Sultan M Alshahrani, John Mark Christensen, Chien Ngoc Nguyen (2017) Formulation optimization utilizing D-optimal experimental design of oral capsules containing enteric-coated pellets of lansoprazole and in vivo bioequivalence Pharmacology & Pharmacy, 8(5):153-171 Luong Quang Anh, Nguyen Ngoc Chien, Nguyen Dang Hoa (2018) Study on formulation of sub-coating of lansoprazole loading core pellets Journal of Military Pharmaco-medicine, 43(4):152-157 ... cầu cho nghiên cứu bào chế đánh giá SKD - Thuốc thử viên nang cứng chứa pellet LPZ 30 mg bào chế dạng BTOR Thuốc đối chiếu biệt dược dạng viên nang cứng chứa pellet LPZ 30 mg BTOR bao gồm: Viên. .. tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR 26 - Đề xuất tiêu chuẩn sở cho viên nang chứa pellet LPZ 30 mg BTOR Viên nang chứa pellet LPZ BTOR đạt tiêu chuẩn sở thẩm định... viên nang chứa pellet LPZ BTOR 4.2.1 Bào chế pellet LPZ 4.2.1.1 Phương pháp bào chế pellet LPZ Pellet LPZ giai đoạn quan trọng trình bào chế viên nang chứa pellet LPZ BTOR, đảm bảo khả giải phóng