Nghiên cứu kỹ thuật tách chiết silymarin từ hạt kế sữa và axit amin từ đậu tương làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng tăng cường chức năng gan

1 VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VA CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VA TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUYỄN THI QUY NGHIÊN CƯU KY THUẬT TÁCH CHIẾT SILYMARIN TƯ HAT KÊ SỮA VA AXIT AMIN TƯ ĐÂU TƯƠNG LAM NGUYÊN LIÊU CHO THỰC PHẨM CHỨC NĂNG TĂNG CƯỜNG CHỨC NĂNG GAN Ngành : Sinh hoc Chuyên nganh : Đông vật học Ma số : 60420103 LUẬN VĂN THẠC SI KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS PHẠM VIỆT CƯỜNG Ha nội 2014 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành ḷn văn thạc sĩ mợt cách hồn chỉnh, bên cạnh nỗ lực cớ gắng thân có hướng dẫn nhiệt tình quý Thầy Cô, động viên ủng hơ gia đình bạn bè śt thời gian học tập nghiên cứu thực luận văn thạc sĩ Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Phạm Việt Cường- Phòng Cơng nghệ sinh học - Viện Hóa sinh Biển, người đa hết lòng giúp đỡ tạo mọi điều kiện tớt cho tơi hồn thành ḷn văn Đồng thời, tơi xin gửi lời cảm ơn tới TS Lê Thi Hờng Minh anh chị em phòng Cơng nghệ sinh học - Viện Hóa sinh Biển đa tận tình giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu để hoàn thành đề tài luận văn Xin chân thành biết ơn đến tồn thể q Thầy Cơ bơ mơn Vi sinh vật học đa tận tình truyền đạt kiến thức quý báu tạo mọi điều kiện tḥn lợi cho tơi śt q trình học tập nghiên cứu thực đề tài luận văn Cuối xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình, bạn bè, người đa không ngừng động viên, hỗ trợ tạo mọi điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập thực luận văn Hà Nội, Ngày 21 tháng11năm 2014 Học viên Nguyễn Thị Quy MỤC LỤC DANH MUC CAC KY HIÊU, CHƯ VIÊT TĂT DANH MUC CAC BANG DANH MUC HINH ANH MƠ ĐÂU CHƯƠNG 1: TÔNG QUAN 10 1.1 Tông quan về silymarin 10 1.1.1 Cây kế sưa 10 1.1.2 Thanh phần hoa hoc cua qua kế sua 10 1.1.3 Đặc điểm tinh chất flavonoid 11 1.1.4 Tác dụng sinh học kế sưa 15 1.1.4.1 Sơ lược lịch sử sử dụng kế sưa làm thuốc 15 1.1.4.2 Tac dung dươc ly silymarin ứng dụng 16 1.1.5 Môt số nghiên cưu về tach chiết silymarin 18 1.1.6 Những thành tựu nghiên cứu chế phẩm silymarin 19 1.2 Tông quan về protein đâu tương 21 1.2.1 Cây đậu tương 21 1.2.2 Thanh phần hoa hoc qua đâu tương 21 1.2.3 Protein đâu tương 21 1.2.3.1 Thành phần Protein đậu tương 22 1.2.3.2 Tính chất Protein đậu tương 22 1.2.4 Tac dung dươc ly cua Protein hydrolysate đậu tương 24 CHƯƠNG 2: VÂT LIÊU VA PHƯƠN PHAP 26 2.1 Vật liệu 26 2.1.1 Nguyên liệu 26 2.1.2 Hoá chất va thiết bi 26 2.2 Phương pháp 27 2.2.1 Phương pháp chiết silymarinbằng dung môi hưu 27 2.2.2 Phương pháp Sắc ký HPLC 28 2.2.3 Phương phap xac đinh ham lương nhom amin tư 29 2.2.4 Phương pháp xác định hàm lượng axit amin tự 30 2.2.5 Xac đinh đô đôc va hoat tinh cua chế phâm 30 2.2.5.1 Nghiên cưu tac dung sinh hoc 30 2.2.5.2 Thư đôc tinh cấp 30 2.2.5.3 Thư tac dung bao vê gan 31 2.2.5.4 Thư tac dung lơi mât 31 2.2.6 Phương phap xư ly số liêu 32 CHƯƠNG : KẾT QUẢ 33 3.1 Xây dưng quy trinh chiết xuất silymarin 33 3.1.1 Nghiên cưu khao sat dung môi đê chiết xuất silymarin 33 3.1.2 Kết qua sắc kí HPLC 37 3.2 Nghiên cưu khả thuy phân protein bằng chế phâm enzyme 40 3.3 Nghiên cưu quy trình thuy phân thu nhận axit amin tự tư protein đâu tương 43 3.4 Mợt sớ đặc tính sinh học chế phẩm chứa sylimarin 48 3.4.1 Xac đinh đôc tinh cấp 49 3.4.2 Tac dung bao vê gan 50 3.4.3 Tac dung lơi mât 53 3.4.3.1 Tác dụng lưu lượng mật 53 3.4.3.2 Tác dụng hàm lượng cắn khô bilirubin dịch mật 54 CHƯƠNG 4: KÊT LUÂN VA KIÊN NGHI 56 4.1 Kết luận 56 4.2 Kiến nghi 57 TAI LIỆU THAM KHẢO 57 DANH MUC CAC KY HIÊU, CHƯ VIÊT TĂT ADN Acid Deoxyribo Nucleic ARN Acid Ribonucleic ALT Alanine Aminotransaminase AST Aspartate Aminotransaminase CCI4 Cacbon Tetrachlorid EtOH Ethanol MeOH Methanol NaCl Muối Natriclorua cAMP Cyclic Adenosine Monophosphat- Chất truyền tin TFN-α Tumor Necrosis Factor- Chất trung gian chinh cua phan ưng viêm cấp LD50 Lethal Dose- Liều lương gây cai chết 50% cua môt nhom đông vật dung thử nghiêm HPLC Sắc ki long hiêu cao SKLM Sắc ki lơp mong Cs Công sư CN Công nguyên TPCN Thưc phẩm chưc WHO World Health Organization- Tô chức y tế thế giới UV Ultravioler- Phô tư ngoại DANH MUC CAC BANG Bảng 3.1 Kết qua khảo sát dung môi để chiết xuất silymarin 34 Bảng 3.2 Kết qua chiết xuất silymarin phương pháp khác 35 Bang 3.3: Ham lương axit amin cac dich thuy phân 40 Bang 3.4: ảnh hưởng thời gian thủy phân bột đậu tương protease lên hàm lương amin tư 45 Bang 3.5: Kết qua kiêm tra lương amin tư bươc 45 Bang 3.6: Hàm lượng axit amin tự cua dich thủy phân đâu tương 46 Bang 3.7: Hàm lượng axit amin tự cua dich thủy phân đâu tương sau cô đăc 47 Bảng 3.8: Liều uống chế phẩm silymarin lô chuột thực nghiệm thử đợc tính cấp 49 Bảng 3.9: Tác dụng chế phẩm silymarin hoạt đô enzym ALT huyết chuột thực nghiệm 52 Bảng 3.10: Tác dụng chế phẩm silymarin bilirubin huyết chuột thực nghiệm 53 Bảng 3.11: Lưu lượng mật lơ cḥt thí nghiệm 54 Bảng 3.12: Hàm lượng cắn khô dịch mật chuột thực nghiệm 54 Bảng 3.13: Hàm lượng bilirubin dịch mật chuột thực nghiệm 55 DANH MUC HINH ANH Hinh 1.1: Môt số chất chinh silymarin 10 Hinh 3.1: Sơ đồ quy trinh chiết suất silymarin quy mơ phong thí nghiêm 37 Hinh 3.2: Sắc ký đồ mẫu silymarinthu sau tách chiết theo quy trình quy mơ phong thí nghiêm 38 Hinh 3.3: Sắc ký đồ mẫu silybin chuẩn 38 Hinh 3.4:Sơ đồ thuy phân protein đâu tương 40 Hinh 3.5: Sơ đồ quy trinh thuy phân protein đâu tương 44 MƠ ĐÂU Viêc dùng thuốc có nguồn gớc từ thảo dược phới hợp sử dụng thuốc đông dược tân dược đươc cộng đồng rất coi Do loại thuốc thảo dược kết hợp đông –tây y chữa bệnh mà có tác dụng phụ Vì vậy, th́c có nguồn gớc thao dươc, đặc biệt thuốc đa dùng rộng rai theo kinh nghiệm cô truyền để chữa bệnh nhà khoa học giới Việt Nam quan tâm nghiên cứu Gan la môt quan quan trọng về mặt chuyển hoa chất cua thể người Một chức quan cua gan la tham gia vào q trình giải đơc cac chất nội sinh va ngoai sinh Trong cac trương hơp bênh ly hay sư tai chất đôc gan, tế bao gan se bi huy hoại, dẫn đến tôn thương gan, dần dần làm cac tôn thương không hồi phuc làm cho gan bị xơ, mất chưc giải đôc Bệnh gan la môt bệnh phô biến công đồng Co nhiều loai bênh gan đo thương găp viêm gan siêu vi, đo một bệnh truyền nhiễm phô biến giới, ảnh hưởng đến sức khỏe cợng đồng thập niên Hiện có loại virus gây viêm gan : A, B, C, D, E G, phơ biến nguy hiểm siêu vi B C Khoảng tỷ người giới đa nhiễm virus viêm gan B, tâp trung chu yếu châu A va châu Phi Theo báo cáo tô chưc y tế thế giới, viêm gan B la môt mươi nguyên nhân gây tử vong nhiều nhất, khoang triêu ca tư vong môi năm bênh va 350 triêu mang virus man tinh Có khoảng 3% dân số giới nhiễm virus viêm gan C 170 triệu người mang virus man tính Viêt Nam la môt nươc co ty lê viêm gan B cao nhất thế giơi Ngươi bi viêm gan man tính có nguy ung thư gan cao gấp 20 lần so với binh thương va 40% sớ họ se tư vong ung thư gan [62], [63] Đa có chứng cho thấy silymarin kế sưa có tác dụng chữa bệnh xơ gan rượu Mợt hoạt tính triển vọng silymarin chớng ung thư, vậy sử dụng silymarin kết hợp với phương pháp hóa trị liệu Silymarin hoạt đợng chất chớng oxy hóa, bảo vệ mô loại bỏ chất gây độc cho gan [5], [10] Protein đậu tương sử dụng rộng rãi một thành phần chức nhiều loại thực phẩm chế biến khả tạo gel tính chất hóa lý, cảm quan dinh dưỡng cao Việc thủy phân protein hạt họ đậu cải thiện đặc tính dinh dưỡng chúng làm chậm trình hư hỏng, cải thiện cấu trúc, tăng giảm hòa tan, ngăn cản tương tác khơng mong ḿn, loại mùi khó chịu thành phần đợc [27], [57] Vi vây, để sản xuất một số loại sản phẩm tăng cường chức gan hỗ trợ điều trị bệnh liên quan đến gan Việt Nam, thay sản phẩm nhập ngoại, chinh sở để thực đề tài: “Nghiên cưu ky thuât tach chiết silymarin tư hat kế sưa va axit amin tư đâu tương làm nguyên liêu cho thưc phâm chức tăng cương chưc gan.” Muc tiêu cua đê tai Nghiên cứu quy trình tách chiết Sylimarin từ hạt kế sữa Nghiên cứu quy trình thuỷ phân thu nhận axit amin tư tư đâu tương Nôi dung nghiên cưu  Xây dưng quy trinh tach chiết silymarin tư hat kế sưa  Xây dựng quy trinh thuy phân thu nhân axit amin tư tư đâu tương  Thư đô độc tính cấp cua chế phâm thu đươc  Chưng minh môt số đăc tính sinh hoc cua chế phẩm 10 CHƯƠNG 1: TÔNG QUAN 1.1 Tông quan vê silymarin 1.1.1 Cây kê sưa Kế sưa (Sylibum marianum (L.) Gaernt) la môt loai thưc vật co hoa thuôc ho cúc, la loai thảo sống môt hoăc hai năm, cao 30-150cm Thân thẳng phân nhánh Lá xanh, khơng có kèm, bóng láng, thường có nhiều đớm trắng dọc theo gân, mép có dạng gai, gai màu vàng nhọn; phía ơm lấy thân; to, có phiến chia thuỳ có ćng Cụm hoa đầu đơn đợc, rợng 3-10cm Lá bắc ngồi có mợt phần phụ hình tam giác màu lục thu lại thành một gai to, gớc có 4-6 gai nhỏ, ngắn hơn, bên Hoa màu tím, gặp màu trắng, giớng nhau, có cánh hoa, nhị bầu với noan vòi nhuỵ phình gớc Qua bế hình bầu dục thn, dài 7-8mm, màu đen bóng có vân vàng nhiều ít, tùy thuộc vào nguồn giống S.marianum va điều kiên canh tac [15], [24], [26] Ra hoa vào tháng đến tháng năm thứ hai Cây có nguồn gớc Địa Trung Hải mọc hoang dại nhiều nơi giới miền Nam Trung Âu, Bắc Phi, Trung Đông, Ấn Độ, Trung Quốc, Bắc Nam Mỹ [26] 1.1.2 Thanh phân hoa hoc cua hat kê sưa Thành phần hoa hoc hat kế sưa la silymarin Silymarin flavonolignan la phenol tư nhiên gồm môt phần flavonoid va môt phần lignan Dịch chiết hạt chứa khoảng 70-80% silymarin flavonolignans khoảng 20-30% thành phần không xác định, chủ yếu hợp chất polyphenol oxy hóa trùng hợp Thành phần tơ hợp silymarin silybin, đồng nghĩa với silybinin Ngồi silybin hỗn hợp diastereomers A B với tỉ lệ khoảng 1:1, một lượng lớn flavonolygnants lam cho hoat đô ALT đo đươc môi trương tăng Ơ lô chuôt cho sư dung silymarin thi hoat đô enzym ALT giam, điều đo co nghia la silymarin đa co tac dung bao vê gan Nguyên Ngoc Hồng va cs (2012) nghiên cứu tác dung bao vê gan cua cao chiết ethyl acetate mô hinh gan chuôt bi gây đôc man tinh bằng CCl4 cung đanh gia tac dung bao vê gan dưa đô giam hoat cua enzyme ALT Tư tac giả cung đưa kết luận ethyl acetate co tac dung bao vê gan [6] Favari va cs (1997) đa nghiên cưu va chưng minh về tac dung bảo vê gan cua silymarin/silybin sư chuyên dang cua cac tế bao hinh cac nguyên bào sơi cho thấy, silybin nờng 100 µmol/l đa lam giam 75% tăng sinh tế bao hình tư gan cḥt, lam giam sư chuyên dang cua tế bao hình thành cac nguyên bào sơi va giam phần chất gian bao ngoại bao cần thiết đối với qua trinh sơ hoa [19] Trên mơ hình gây tởn thương gan mạn carbon tetraclorid, hàm lượng colagen gan chuột gây bệnh đa tăng lên gần lần so với chứng sinh lý Silymarin với liều uống 50mg/kg thể trọng/ngày ngày đa làm giảm hàm lượng colagen gan 55% so với đối chứng bệnh lý Trong mợt thí nghiệm tương tự, tăng hàm lượng colagen procolagen III tắc mật chuột cống trắng đa bị giảm 30% silymarin liều 50mg/kg/ngày khơng thấy có thay đởi liều 25mg/kg/ngày [16] Điều cho thấy silymarin có khả ức chế hình thành colagen điều kiện cụ thể [21] Tac dung chống đôc bao vê gan cua silymarin thông qua chế chống oxy hoa đa đươc Nguyên Thi Tố Nga va cs (2005) chưng minh, silymarin co anh hương lên thống enzym cytochrom P450 gan chuôt Sau 10 dung thuốc silymarin vơi liều 100mg/10g thê trong, đa lam tăng hoam lương P450 (tăng 25%), giam hoat đô enzym anilin hydroxylaza Trên đông vât bi nhiêm đôc CCl4 co bô sung silymarin co sư thay đôi tich cưc so vơi nhom bi nhiêm đôc CCl4 đơn thuần Silymarin co tac dung chống oxy hoa chuôt tinh trang bi nhiêm đôc CCl4 thông qua tac dung hoat hoa hai enzym SOD va GPx, đồng thơi cai thiên chống oxy hoa toan phần cua thê [8] Về kha chống oxy hoa cua silymarin, Lê Thi Lan Oanh va Cs.(2003) đa nghiên cưu tac dung cua silymarin lên hoat tinh cua cac enzym oxy hoa peroxydaza va catalaz cua mau Kết qua la silymarin đa kim ham manh hoat đông cua hai enzym đo huyết cua nhom mau [10] Môt nghiên cưu khac cua Altoray cs (1992) [15] cho thấy silymarin nồng đô 0,01 – 0,5 mmol/l silybin nồng đô cao đa ức chế có hiệu qua tác dụng gây peroxy hố lipid tiêu giảm glutathion allyl alcol Một điều đáng ý nồng đô tương đối cao khơng thấy có biểu rõ rệt tương tác silybin với cytochrom P450, cho thấy tác dụng chống độc chất nhờ vào hoạt tính chớng oxy hố qt gốc tự chúng Như vây tac dụng bảo vệ gan silymarin đa cac nha khoa hoc chưng minh mô hinh thực nghiêm la thông qua chế chớng oxy hóa, qut gớc tự do, chớng peroxy hoa lipit, làm ôn đinh điều hoa tinh thấm màng tế bào chống sư pha hoại cua cac tac nhân gây đôc, kich thich tông hơp protein gup tai sinh tế bào gan, chống chuyển dạng cac tế bao hinh cac nguyên bao sơi gây tich tu cac sơi colagen lam xơ hóa gan dân đến lam giảm hoat đô cua enzym ALT Bảng 3.9: Tác dụng chế phẩm silymarin hoạt độ enzym ALT huyết chuột thực nghiệm Stt Lô chuột Chứng sinh lý Chứng Đô tăng hoạt đô Đô giảm hoạt đô Số ALT enzym ALT so enzym ALT so chuột (U/ l) với chứng sinh với chứng bệnh lý (%) lý (%) 42,3  2,57 138,02  226,29 bệnh lý Silymarin 15,54 P < 0,01 87,33  106,45 12,33 36,73 P < 0,05 Bảng 3.10: Tác dụng chế phẩm silymarin bilirubin huyết chuột thực nghiệm Stt Lô chuột Chứng sinh lý Chứng bệnh lý Silymarin Đô tăng hàm Đô giảm hàm Số Bilirubin lượng bilirubin lượng bilirubin so chuột ( mol/ l) so với chứng với chứng bệnh lý sinh lý (%) (%) 2,35  0,19 3,56  0,35 2,58  0,31 51,49 P < 0,01 9,79 27,53 P < 0,05 Như vậy, chế phẩm silymarin có tác dụng bảo vệ gan có ý nghĩa 3.4.3 Tac dung lơi mât Thí nghiệm tiến hành chuột lang theo phương pháp ghi mục 2.2.6.4 Chỉ tiêu theo dõi lưu lượng mật tiết Tác dụng lợi mật chế phẩm silymarin biểu thị đô tăng lưu lượng mật sau bơm chế phẩm nghiên cứu so với trước bơm so với lô chuột đối chứng 3.4.3.1 Tác dụng lưu lượng mật Kết qua thí nghiệm ảnh hưởng chế phẩm silymarin chiết lưu lượng mật trình bày bảng 3.11 Các kết qua thu cho thấy chế phẩm silymarin với liều 0,4g silymarin/kg thể trọng chuột lang, sau 30 phút đa làm tăng lưu lượng mật lên 32,26% so với chưa xử lý 36,67% so với lô chuột đối chứng dùng nước muối sinh lý thời điểm Sự khác biệt có ý nghĩa thớng kê với P < 0,05 Theo dõi lượng mật chảy sau dùng chế phẩm nghiên cứu 60, 90 120 phút thấy khác biệt khơng có ý nghĩa thớng kê so với trước xử lý Bảng 3.11: Lưu lượng mật lơ chuột thí nghiệm Lưu lượng mật (ml/100 g chuột/30 phút) Trước Stt Lô chuột Số NaCl chuột 0,9% Sau NaCl 0,9% silymarin 30 phút 60 90 120 phút phút phút 0,25 0,26 0,24 0,02 0,02 0,03 silymarin Chứng 0,31  0,04 0,30  0,02  3,23%* (P > 0,05) 0,41  0,04 Silymarin P 0,31  0,02  32,25%* 36,67%** (P < 0,05) 0,31 0,28 0,25 0,03 0,03 0,02 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 *: So với trước dùng silymarin NaCl 0,9%, **: So vơi đối chưng *: Sau 30 phút, lô thử silymarin có khác biệt có ý nghĩa so với trước xử lý so với lô đối chứng thời điểm 3.4.3.2 Tác dụng hàm lượng cắn khô va bilirubin dịch mật Kết qua xác định hàm lượng cắn khô bilirubin dịch mật chuột trước sau dùng nước muối sinh lý dùng chế phẩm silymarin trình bày bảng 3.12 bảng 3.13 Bảng 3.12: Hàm lượng cắn khô dịch mật chuột thực nghiệm Lô chuột STT thí nghiệm Hàm lượng cắn khơ Sớ dịch mật (mg/ml) chuột Trước silymarin Sau silymarin oặc NaCl 0,9% NaCl 0,9% P sau so với trước Đối chứng 11,2  0,4 11,1  0,5 P > 0,05 Silymarin 14,4  0,3 12,4  0,4 P > 0,05 P > 0,05 P > 0,05 P Bảng 3.13: Hàm lượng bilirubin dịch mật chuột thực nghiệm Hàm lượng bilirubin Lơ cḥt STT thí nghiệm Số chuột dịch mật (mmol/l) Trước Sau silymarin silymarin hoặc NaCl NaCl 0,9% 0,9% P sau so với trước Đối chứng 11,40  1,03 10,81  1,40 P > 0,05 Silymarin 12,36  1,31 12,76  1,11 P > 0,05 P > 0,05 P > 0,05 P Kết qua cho thấy: Mặc dù sau dùng chế phẩm silymarin lưu lượng mật tăng có ý nghĩa hàm lượng cắn khô hàm lượng bilirubin dịch mật lô chuột chứng lô dùng chế phẩm nghiên cứu, trước sau xử lý tương tự nhau, sai khác khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) Chế phẩm silymarin chiết xuất từ kế sưa có tác dụng lợi mật rõ rệt mà chất lượng mật biểu hàm lượng cắn khô hàm lượng bilirubin không thay đổi Như vây chế phâm silymarin chiết suất tư kế sưa va axit amin không gây đôc, co tac dung bao vê gan va tac dung lơi mât Đo chinh la sơ đê chung co thê đinh rằng silymarin tư kế sưa va axit amin tư đâu tương la nguyên liêu tốt thich hơp đê lam thưc phâm chưc tăng cương chưc gan CHƯƠNG 4: KÊT LUÂN VA KIÊN NGHI 4.1 Kết luận Xây dựng công quy trình chiết xuất silymarin quy mơ phòng thí nghiệm, dùng ether dầu để loại dầu béo, sau chiết hồi lưu cồn 85%  ẫu silymarin thu chiết theo quy trình phòng thí M nghiệm có hàm lượng silymarin chiếm 56%, đáng ý hàm lượng silybin chiếm cao 28,9%  ây dựng cơng quy trình thủy phân thu nhận axit amin từ protein X đậu tương bằng enzyme peptidase Chưng minh đươc hỗn hợp silymarin va axit amin thu chiết theo quy trinh phong thi nghiêm co một số kha năng: - Tac dung bao vê gan co y nghĩa - Tác dụng lợi mật ro rêt ma chất lương mât biêu hiên bằng hàm lương cắn khô va ham lượng birubilin vân không thay đôi 4.2 Kiên nghi Tư kết chung đưa môt số kiến nghi: - Tiếp tuc nghiên cưu hoan thiên quy trình tach chiết silymarin - Tiếp tuc nghiên cưu anh hưởng cua cac liều lương hôn hơp chế phâm tach chiết đối vơi tác dung bảo vê gan, chống oxy hoa đông vât thi nghiêm - Tiếp tuc nghiên cưu sử dung silymarin axit amin san xuất thưc phâm chưc TAI LIỆU THAM KHẢO TAI LIỆU TIÊNG VIỆT Bô y tế (1996), quy chế đánh giá tính an toàn hiệu lực thuốc cô truyền, phụ lục 3: Hướng dẫn khảo sát đợc tính th́c truyền, (ban hành kèm theo định 371 BYT/QĐ ngày 12/3/1996 bô trưởng bô y tế), Hà Nội Đàm Trung Bảo (1985) Các chất chống oxy hóa sinh học, y dược học 1:23-25 Đỗ Trung Đàm (2003), Sử dụng Microsoft Excel,trong thống kê sinh học, Nxb Y học, Hà Nội Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985) Phương pháp nghiên cứu hoá học thuốc Nxb Y học, Hà Nội Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Quốc Khang, Lê Thị Lan Oanh, Nguyễn Thị Tố Nga, Nguyễn Thị Ngọc Dao (2003), “nghiên cứu quy trình cơng nghệ thu nhận silymarin tạo sinh khới từ kế sưa(Silybum Marianum) trồng Việt Nam”, Di truyền học ứng dụng 4:25:31 Nguyên Ngoc Hồng, Huynh Ngoc Thuy (2012), “Tac dung bao vê gan cua cao chiết ethyl acetate từ nghề lông dày va râu meo mô hinh gan chuột bị gây đôc man tính bằng carbon tetrachloride”, Tạp chi Sinh Hoc, , 34(3se): 313-318 Lê Văn Viêt Mân (chủ biên) (2010) Công nghê chế biến thưc phâm Nxb Đai hoc Quốc Gia TP Hồ Chi Minh Nguyễn Thị Tố Nga, Đô Thi Tuyên, Đoan Văn Viêt, Nguyên Thi Ngoc Dao (2006), “Tác dụng bao vê gan va chống oxy hoa cua hoat chất silymarin đươc tach chiết từ kế sưa Silybum marianum (L.) Gaertn”, Tap chí Sinh Hoc 28(3): 88-92 Hồng Thị Bích Ngọc (1991) Hố sinh gan Nxb Y học, Hà Nội, 303310 10 Lê Thị Lan Oanh, Lê Thị Việt Hồng, Hoa Thị Hằng (2003), Nguyễn Thị Ngọc Dao, Nguyễn Quốc Khang, Nguyễn Thi Hồng Gấm “ Thu nhận khảo sát một số dặc điểm sinh dược học flavonoid từ kế sưa Silybum marianum di thực vào Việt Nam” Hội nghị công nghệ sinh học tồn q́c, Hà Nợi, 1029-33 11 Vũ Thị Phương (2001) Hoá sinh hệ thống gan mật Nxb Y học, Hà Nội, 665-685 12 Nguyên Viêt Thai Ki thuât trồng đậu tương Nxb Đa Năng 13 Pham Văn Thiều (2002) Cây đậu tương, kĩ thuật trồng va chế biến san phâm Nxb Nông nghiêp Hà Nôi 14 Vũ Ngọc Thuý, Tào Duy Cần (1996) Sử dụng thuốc biệt dược Nhà xuất Y học, Hà Nội TAI LIỆU TIÊNG ANH 15 Altoray I., Dalmi L., Sari B., Imre S., Balla G (1992), “The effect of silibinin (Legalon) on the free radical scavenger mechanisms of human erythrocytes in vitro”, Acta physiol Hung., 80, pp 375-380 16 Boigk G., Stroedter L., Herbst H., Waldfdschmidt J., Riecken E.O (1997), “Silymarin retards collagene accumlation in early and advanced biliary fibrosis secondary to complete bile duct oblitteration in rats”, Hepatology, 26, pp 643-649 17 Lin Chen, Jianshe Chen, Jiaoyan Ren, and Mouming Zhao (2011) “Effects of Ultrasound Pretreatment on the Enzymatic hydrolysis of soy protein Isolates and on the Emulsifying properties of hydrolysates” J Agric Food Chem., 59(6), pp 2600-2609 18 A.Dehghan, AA Mahjoor, H Bazyar and K Zangili (2010) “Effects of silymarin and food restriction on hepatic and pancreatic function in Wistar rats” Asian J Ani Veteri Ad., 5(2):136-142 19 Favari 1., perez-Alvarez V (1997), “Comparative effects of colchicine and silymarin on CCL4 –chronic liver damage in rats”, Arch Med Res., 28,pp 11-17 20 Flora K., Hahn M., Rosen H., Benner K (1998), “Milk thistle ( Silybum marianum) for the therapy of liver disease”, The American Journal of Gastroenterology, 93(2), pp 139-143 21 Fuchs E.C., Weyhenmeyer R., Weiner O.H (1997), “Effects of silibinin and of a synthetic analogue on isolated rat hepatic atellate cells and myofibroblasts”, Azrneimittelforschung, 47, pp 1383-1387 22 Galvez AF (2003) Therapeutic peptides having a motif that binds specifically to nonacetylated H3 and H4 histones for cancer therapy Patent US 2003, 027765 A1 23 Hikino H., kiso Y., Wagner O., Fiebig M (1984), Antihepatoxic action of flavonolignans from Silybum marianum fruits, Planta Medica, 50, pp 248-250 24 Hobbs C (1992), Milk thistle: The liver herb Botanical Press, Capitola 25 Hooker J.D (1880), Flora of british india, Vol III., India 26 Joyeux M., Rolland A., Fleurentin J., Mortier F., Dorfman P (1990), Tert-Butyl hydroperoxide-induced injury in isolated rat hepatocytes: a model for studying anti-hepatotoxic crude drugs, Planta Med., 56(2), pp 171-174 27 Ashraf A Khalil, Samira S Mohamed, Fakhriya S Taha and Eva Nordberg Karlsson (2006),” Production of functional protein hydrolysates from Egyptian breeds of soybean and lupin seeds” African J Biotech (10): 907-916 28 Vladimirs Kren, Daniela Walterova (2005), “Silybin and silymarin- new aspects and applications” Biomed Papers 149(1): 29-41 29 Kaczmarek F (1977).,” Concentrate from Slybum marianum (L) Gaertn Seed with a high silymarin content”, Pol 89,368 (C1 A61K35/78), Theo CA 90: 69342p 30 A.Lavanya (2007), “C Selvamurugan and B Sivasankar Immobilized trypsin-mediated production of the protein hydrolysates from non- edible protein sources L Sci” Industrial Res., 66:651-654 31 Jing Liu (2009), “Research on Microwave Heating Three Enzymes Collaborative Hydrolysis Soy protein and preparation of small molecule peptides advanced studies in Biology”, 1(7): 345-354 32 Lovati MR, Manzoni C, Gianazza E, Arnoldi A, Kurowska E, Carroll KK, Sirtori CR (2000) “Soy protein peptides regulate cholesterol homeostasis in Hep G2 cells” J Nutr 130(10):2543-2549 33 Maria D Mesa, Jose M Silván, Josune Olza, Ángel Gil and Maria D.del Castillo (2008), “Antioxidant properties of soy protein- fructooligosaccharide glycation systems and its hydrolyzates” Food Res International 41(6): 606-615 34 M Marinova1, N Thi Kim Cuc2, B Tchorbanov (2008) “Enzymatic hydrolysis of soy protein isolate by food grade proteinases and aminopeptidases of plant origin” Biotechnol & Biotechnol EQ 22/2008/3, 835-838 35 Madaus R (1980) Silymarin from plant, Ger Offen 2,914,330 (C1 C07D311/20), Theo CA 94: 90326d 36 Nakamori T (2002) “Antiobesity effects of soy proteins and soy peptides” Food Style 21; 6(5):86-88 37 Flavia M Netto and Maria Antonia M (1998) “Galeazzi Production and Characterization of Enzymatic Hydrolysate from Soy protein Isolate” Lebensmittel- Wissenschaft und-Technologie 31(7-8), , 624-631 38 Nishi T, Hara H, Tomita F (2003b),”Soybean beta-conglycinin pepton suppresses food intake and gastric emptying by increasing plasma cholecystokinin levels in rats” J Nutr, 133(2):352-357 39 Yong- ping Pei, Jian Chen, Wei- Lin Li (2009), Progress in research and application of silymarin Medicinal & aromatic plant Sci Biotech.,3(1): 1-8, Global Sci Books 40 Radek Gazak, Vladimirs Kren, Daniela Walterova (2007), “Silybin and silymarin- new aspects and applications” Current Medicinal chemistry 14, 315-318 41 Riaz, Mian N (2006) Soy Application in Food Boca Raton, FL: CRC Press ISBN 0-8493-2981-7 42 Simanek Vilim, Nina Skottova, Josef Bartek, Jitka Psotova, Pavel Kosina, Libuse Balejova and Jitka Ulrichova (1999), “Extract from Silybum marianum as a nutraceutical”: a double-blind placebocontrolled study in healthy young men Czech J Food Sci.,19(3): 106110 43 Soto C, Perez J, Garecia V, Uria E, Vadillo M (2010), “Raya L Effect of silymarin on kidneys of rats suffering from alloxan-induced diabetes mellitus” Phytomedicine; 17(14): 1090-1094(Abstract) 44 S Subsiripaiboon and Y Puechkamut (2007) “Antioxidant capacities of papain modified soy protein isolate” International Conference on Integration of Science & Technology for Sustainable Development, Bankok, Thailand 26-27 April 2007, 349-352 45 L.N Ten, W-T Im, M-K Kim and S-T Lee A plate assay for simultaneous screening of polysaccharide and protein-degrading microorganisms Lett Appl Microbiol Med 70,397-400 46 Tuner R.A (1965), “Screening method in pharmacology”, Academic Press, Newyork and London 229-230 47 US2002/0168704 A1 Method for producing a protein hydrolysate with low bitterness 48 US4324805 Method of producing soy protein hydrolysate from fatcontaining soy protein hydrolysate 49 US2002/0132028 A1 Process for preparation of protein- hydrolysate from soy flour 50 US2010/0184132 A1 Enzymatic process for debittering of protein hydrolysate using immobilized peptidases 51 US4368195 Method for the extraction of silymarin from plant 52 US7318940 Method for isolation of silymarin from Silybum marianum seeds 53 Usman Ali Ashfaq, Tariq Javed, Sidra Rehman, Zafar Nawaz, and Sheikh Riazuddin (2011), “Inhibition of HCV 3a core gene thought silymarin and its factions” Virology J., 8:153 http://www.virologyj.com/content/8/1/153 54 Vessal G, Akmali M, Najafi P, Moein MR (2010), “Sagheb MM Silymarin and milk thistle extract may prevent the progresstion of diabetic nephropathy in streptozotocin-induced diabetic rats” Ren Fail.; 32(6):733-739(Abstract) 55 Wagner H (1980) “Plant Constituents with antihepatotoxic activity” Natural product as medicinal agents., Strasbourg 56 Wang Xin, Zheng Xianzhe, Liu Chenghai (2008) “Optimization of microwave-assisted extraction of silymarin from milk thistle seeds” Int J Agric & Biol Eng;1(1) : 75-81 57 Wenyi Wang, Saneewa G Rupasinghe, Mary A Schuler and Elvira Gonzalez de Mejia (2008) “Identification and characterization of metastases” Luân an TS tai Trương Tông hơp Albert-Ludwigs, LB Đưc 2003, 108 trang 58 Wo 2009/043671A1 Use of Silybum marianum extract 59 Wu J, Ding X.(2001), “Hypotensive and physiological effect of angiotensin converting enzyme inhibitory peptides derived from soy protein on spontaneously hypertensive rats” J Agric Food Chem 49(1):501-506 60 Hsin-Yi Yang, Jiun-Rong Chen and Le-Shin Chang (2008), “Effects of Soy protein hydrolysate on Blood Presure and Angiotensin-Converting Enzyme Activiti in Rats with Chronic Renal Failure” Hypertension Res 31: 957-963; doi: 10.1291/hypres.31.957 61 Hsiao Po- Yang Yao Hsueh Tung Pao, 16 (4), 22, 1981 62 http://suckhoe.24h.com.vn/viem-gan-b/dieu-tri-va-cham-soct1f2w43c569pc558ht5.html#gsc.tab=0&gsc.q=Viem-gan-B&gsc.page=1 63 http://benhnhietdoi.vn/tin-tuc/Viem-gan/tim-hieu-sau-hon-ve-viem-ganc_8354.html 65 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ... phẩm tăng cường chức gan hỗ trợ điều trị bệnh liên quan đến gan Việt Nam, thay sản phẩm nhập ngoại, chinh sở để thực đề tài: Nghiên cưu ky thuât tach chiết silymarin tư hat kế sưa va axit amin. .. đâu tương làm nguyên liêu cho thưc phâm chức tăng cương chưc gan. ” Muc tiêu cua đê tai Nghiên cứu quy trình tách chiết Sylimarin từ hạt kế sữa Nghiên cứu quy trình thuỷ phân thu nhận axit amin. .. protein đậu tương đa báo cáo [33] Những báo cáo cho thấy hàm lượng axit amin quan trọng protein đậu tương đáp ứng yêu cầu dinh dưỡng người trừ lysine methionine [27] Thủy phân protein đậu tương