Bước đầu thiết lập chất chuẩn tanshinon IIA từ đan sâm (salvia miltiorrhiza bunge)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN THỊ CHUYÊN BƯỚC ĐẦU THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN TANSHINON IIA TỪ ĐAN SÂM (Salvia miltiorrhiza Bunge) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN THỊ CHUYÊN BƯỚC ĐẦU THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN TANSHINON IIA TỪ ĐAN SÂM (Salvia miltiorrhiza Bunge) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2013.Y Người hướng dẫn: TS NGUYỄN HỮU TÙNG HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Hữu Tùng – giảng viên mơn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc - Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, thầy trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ cho em suốt thời gian thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa toàn thể thầy cô giáo Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội nói chung thầy cơ, cán thuộc Bộ mơn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc nói riêng dạy dỗ, bảo tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian học tập Khoa thực khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn anh Trần Đức Bình anh chị lớp Dược K57QH.2012.Y, đặc biệt chị Bích, chị Huệ, chị Ngần ln động viên, giúp đỡ cho em nhiều ý kiến giá trị q trình hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn anh chị, bạn Nhóm nghiên cứu đóng góp nhiều nhận xét bổ ích cho em q trình thực khóa luận Cuối em xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè động viên em suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Sinh viên Nguyễn Thị Chuyên DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT B uC C B uS ắP 3D A D Đ Et O Et O G C G L H P H e1 hĐ ầD E tE tS ắT hS ắH eP IH R I U L D M S M pM e N M P L Rf h P hT êL i P h N hM e P hP hH R S K T L U V U V v/ vΦ ệĐ ộS ắS ắP hT T hĐ MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN .3 1.1 Tổng quan thiết lập chất chuẩn đối chiếu 1.2 Tổng quan đan sâm .4 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Phân bố, sinh thái .5 1.2.3 Thành phần hóa học 1.2.4 Tác dụng sinh học 1.2.5 Tác dụng công dụng theo y học cổ truyền 1.3 Tổng quan tanshinon IIA 10 1.3.1 Cấu trúc hóa học .10 1.3.2 Đặc điểm tanshinon IIA 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị nghiên cứu 12 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 12 2.1.2 Dung mơi, hóa chất .12 2.1.3 Thiết bị dụng cụ dùng nghiên cứu 13 2.2 Phương pháp nghiên cứu .13 2.2.1 Nghiên cứu chiết xuất, phân lập tinh chế 13 2.2.2 Phương pháp thiết lập chất chuẩn đối chiếu 14 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu 15 2.3 Sơ đồ nội dung nghiên cứu .16 2.4 Địa điểm nghiên cứu 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 3.1 Chiết xuất tinh chế tanshinon IIA từ đan sâm 18 3.1.1 Phương pháp xử lý mẫu chiết xuất 18 3.1.2 Phương pháp phân lập tinh chế 18 3.2 Xác định cấu trúc tanshinon IIA 20 3.2.1 Tính chất vật lý .20 3.2.2 Các phương pháp phổ: phổ khối MS, phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR 20 3.2.3 Xác định cấu trúc 22 3.2.4 Đánh giá sơ độ tinh khiết 23 3.3 Thiết lập chất chuẩn đối chiếu 24 3.3.1 Xây dựng liệu nhận dạng tanshinon IIA 24 3.3.2 Đánh giá độ tinh khiết phân tích tạp chất 24 3.4 Bàn luận 28 3.4.1 Về phân lập xác định cấu trúc tanshinon IIA 28 3.4.2 Về phân tích HPLC 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG B T ả r K B ết ản q gB uả C ản h K B ết ản q gB uả K ản ết DANH MỤC HÌNH VẼ H T ì r HC ì ây HC ì ấu HC ì ấu HC ì ấu HC ì ấu HM ì ột HS ì H Ta ì ns P Hh ì ổ1 nH C H ì ấu HS ì ắc HS ì ắc ĐẶT VẤN ĐỀ Đan sâm nước ta biết đến thuốc quý có nguồn gốc từ Trung Quốc trồng nhiều sinh trưởng tốt vùng Tây Bắc nước ta Dược liệu đan sâm (Radix Salviae miltiorrhiza) rễ phơi khô sấy khô đan sâm, thường dùng để chữa bệnh tim, kinh nguyệt không đều, phong thấp, thần kinh suy nhược, ngủ… Trong y học cổ truyền Trung Quốc, Việt Nam, Hàn Quốc, đan sâm thuốc tăng cường tuần hoàn máu, chữa đau nhói ngực bụng, nhiễm khuẩn da, bồn chồn, chứng to gan lách, đau thắt ngực, đột quỵ [7,25] Ở nước ta, nghiên cứu đan sâm quan tâm để phát triển ứng dụng loại dược liệu quý y học đại Nghiên cứu Viện Dược liệu cho thấy đan sâm trồng Sapa có hàm lượng tanshinon IIA cao bên cạnh số thành phần tanshinon khác [15,21] Gần đây, tác giả Nguyễn Thanh Hải cộng công bố phân lập thêm số thành phần tanshinon [23] hai hợp chất triterpen acid ursoli acid 2β-hydroxypomolic [23] Các kết nghiên cứu hóa thực vật cho thấy đan sâm có thành phần tanshinon bao gồm dihydrotanshinon I, tanshinonate methyl ester, trijuganon B, cryptotanshinon, tanshinon IIA tanshinon I,….Trong đó, tanshinon IIA thành phần tanshinon chính, hoạt chất đan sâm dùng làm chất chuẩn đánh dấu đánh giá dược liệu đan sâm Cho đến thời điểm chưa có nhiều nghiên cứu chiết xuất, tinh chế tanshinon IIA làm chất chuẩn đối chiếu nước ta Nhìn chung với sản phẩm từ dược liệu nay, tiêu chuẩn sở phần lớn dựa việc định lượng hỗn hợp tồn phần cao dược liệu nhóm chất phương pháp không đặc hiệu mà không định lượng hợp chất đặc trưng, coi hợp chất có hoạt tính sinh học thiếu chất chuẩn đối chiếu Do đó, việc thiết lập chất chuẩn đối chiếu từ dược liệu ngày trở nên cần thiết công tác đảm bảo chất lượng thuốc sản phẩm từ dược liệu, từ giai đoạn lựa chọn nguyên liệu đầu vào, đến việc xây dựng tiêu chuẩn sở, giám sát chất lượng thuốc lưu hành quan quản lí Ở nước ta đan sâm trồng ngày nhiều tập trung Hà Giang, Lào Cai, Tam Đảo, Lâm Đồng, nhiên chưa thể đáp ứng nhu cầu ngày cao dược liệu có giá trị Đan sâm bán thị trường thiếu đảm bảo chất lượng bị nhầm lẫn chưa có tiêu chuẩn đánh giá thành phần hoạt chất Theo khảo sát thị trường công ty dược phẩm, phần lớn đan sâm phải nhập từ Trung Quốc nhiều dược liệu khác, vấn đề kiểm soát chất lượng cần quan tâm, kiểm soát dược liệu chất lượng tràn lan Trên sở thực tiễn kế thừa, tiếp nối nghiên cứu trước đan sâm, bước đầu tiến hành “Nghiên cứu thiết lập chất chuẩn tanshinon IIA từ đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) trồng Việt Nam” Kết đề tài góp phần cung cấp chất chuẩn tanshinon IIA dùng phân tích kiểm nghiệm dược liệu đan sâm sản phẩm chứa đan sâm Mục tiêu đề tài khóa luận: Xây dựng quy trình chiết xuất, phân lập tinh chế tanshinon IIA có độ tinh khiết 95% từ rễ đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) trồng Sapa để sử dụng làm chất chuẩn đối chiếu Xây dựng liệu nhận dạng chất xác định độ tinh khiết KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Sau q trình nghiên cứu chúng tơi hồn thành mục tiêu khóa luận tốt nghiệp với kết thu sau: - Đã chiết xuất phân lập tanshinon IIA từ đan sâm - Tinh chế để làm tăng độ tinh khiết tanshinon IIA phân lập để thiết lập chất chuẩn, chất đối chiếu - Xác định cấu trúc tanshinon IIA sử dụng phương pháp phổ Dữ liệu nhận dạng tanshinon IIA bao gồm đặc điểm vật lý, liệu phổ khối phổ cộng hưởng từ - Bước đầu thiết lập tanshinon IIA làm chất chuẩn đối chiếu kiểm nghiệm dược liệu với tiêu chuẩn chất lượng về: + Độ tinh khiết: 96,57% (>95%) + Tạp chất liên quan: 3,43% (