Nghiên cứu chế biến phụ phẩm thủy sản thành chế phẩm protein thủy phân dùng trong nuôi cấy nấm men yarrowia lipolytica

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & MÔI TRƯỜNG 0o0 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CHẾ BIẾN PHỤ PHẨM THỦY SẢN THÀNH CHẾ PHẨM PROTEIN THỦY PHÂN DÙNG TRONG NUÔI CẤY NẤM MEN YARROWIA LIPOLYTICA Giảng viên hướng dẫn : ThS TRẦN HẢI ĐĂNG Sinh viên thực : PHẠM THỊ NHƯ Ý Mã số sinh viên : 56130574 Khánh Hòa: tháng 8/2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & MÔI TRƯỜNG BỘ MÔN CÔNG NGHỆ MÔI TRƯỜNG 0o0 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CHẾ BIẾN PHỤ PHẨM THỦY SẢN THÀNH CHẾ PHẨM PROTEIN THỦY PHÂN DÙNG TRONG NUÔI CẤY NẤM MEN YARROWIA LIPOLYTICA GVHD : ThS TRẦN HẢI ĐĂNG SVTH : PHẠM THỊ NHƯ Ý MSSV : 56130574 Khánh Hòa, tháng 08/2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi tên : PHẠM THỊ NHƯ Ý MSSV : 56130574 Hiện sinh viên lớp Công Nghệ kỹ thuật mơi trường (khóa 2014-2018) Tơi xin cam đoan kết đề tài: “Nghiên cứu chế biến phụ phẩm thủy sản thành chế phẩm protein thủy phân dùng nuôi cấy nấm men Yarrowia lipolytica” cơng trình nghiên cứu cá nhân tơi chưa cơng bố cơng trình khoa học khác thời điểm Sinh viên thực PHẠM THỊ NHƯ Ý i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài, nhận nhiều giúp đỡ quý Thầy Cô Trường Đại Học Nha Trang, tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành đề tài Xin cám ơn Quý Thầy Cô giáo viện Công Nghệ Sinh Học & Môi Trường cán - Trung tâm thí nghiệm thực hành Trường Đại Học Nha Trang tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi thực đề tài suốt thời gian qua Sự biết ơn sâu sắc dành cho Thầy Trần Hải Đăng tận tình hướng dẫn động viên tơi suốt q trình thực đề tài Xin cảm ơn cô Tạ Thị Minh Ngọc, cô Phạm Thị Lan cô Nguyễn Hồng Ngân giúp đỡ tơi q trình thực nghiên cứu Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình tất bạn bè giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình học tập thực đồ án tốt nghiệp Sau cùng, em xin kính chúc Quý thầy cô viện Công nghệ sinh học & môi trường Thầy Trần Hải Đăng thật dồi sức khỏe, niềm tin để tiếp tục thực sứ mệnh cao đẹp truyền đạt kiến thức cho hệ mai sau Tôi xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực PHẠM THỊ NHƯ Ý ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ix MỞ ĐẦU x CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan cá ngừ phế liệu cá ngừ 1.1.1 Cá ngừ cá ngừ vây vàng 1.1.2 Tình hình khai thác, chế biến xuất cá ngừ Việt Nam giới 1.2 Phế liệu cá ngừ hướng tận dụng 1.3 Tổng quan enzyme Protease 1.3.1 Giới thiệu chung enzyme Protease 1.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình thủy phân protease 10 1.3.3 Các sản phẩm trình thủy phân phế liệu thủy sản sử dụng protease 11 1.4 Sản xuất sinh khối nấm men 12 1.4.1 Tổng quan nấm men Yarrowia lipolytica 12 1.4.2 Quy trình sản xuất sinh khối nấm men .20 CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Nguyên vật liệu .24 2.1.1 Đầu cá ngừ vây vàng 24 2.1.2 Enzyme Protamex .24 2.1.3 Nấm men Yarrowia lipolitica .24 iii 2.1.4 Dụng cụ, máy móc thiết bị .24 2.1.5 Hóa chất 25 2.2 Nội dung nghiên cứu .26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 27 2.3.1 Phương pháp xử lý nguyên liệu đầu cá 27 2.3.2 Phân tích hàm lượng protein theo phương pháp Kjeldahl 30 2.3.3 Phân tích hàm lượng lipid theo phương pháp Bligh-Dyers 31 2.3.4 Phương pháp xác định độ ẩm theo phương pháp chuẩn AOAC 950.46 (2000) 32 2.3.5 Xác định hàm lượng tro theo phương pháp AOAC 923.03 (2000) 33 2.4 Phương pháp nghiên cứu vi sinh 34 2.4.1 Điều kiện bảo quản, hoạt hóa ni cấy 34 2.4.2 Xác định suất tạo sinh khối 34 2.4.3 Xác định tốc động tăng trưởng riêng tối đa µmax 35 2.4.4 Xác định hàm lượng lipid sinh khối nấm men 35 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ KẾT LUẬN .36 3.1 Thành phần hóa học đầu cá ngừ vây vàng 36 3.2 Ảnh hưởng pH tới trình thủy phân đầu cá ngừ vây vàng enzyme Protamex 36 3.3 Đánh giá khả sinh trưởng Y lipolytica môi trường dịch thủy phân.38 3.3.1 Năng suất tạo sinh khối Y lipolytica nuôi dịch thuỷ phân .38 3.3.2 Đánh giá khả sử dụng chất dinh dưỡng dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng nấm men Y lipolytica .39 3.4 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến khả sinh trưởng nấm men Y lipolytica môi trường dịch thủy phân đầu cá ngừ 41 3.4.1 Ảnh hưởng tỷ lệ cấy giống đến khả sinh trưởng nấm men Y lipolytica môi trường dịch thủy phân đầu cá ngừ 41 iv 3.4.2 Ảnh hưởng pH nuôi đến khả sinh trưởng nấm men Y lipolytica môi trường dịch thủy phân đầu cá ngừ 43 3.4.3 Ảnh hưởng thể tích ni đến khả sinh trưởng nấm men Y lipolytica môi trường dịch thủy phân đầu cá ngừ 44 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 48 Kết luận 48 Kiến nghị .48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 Tài liệu tiếng Việt 50 Tài liệu tiếng Anh 51 Tài liệu internet 54 PHỤ LỤC .55 v DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Thành phần hóa học cá ngừ .3 Bảng 2: Thành phần hóa học cá ngừ vây vàng .3 Bảng 3: Sản lượng khai thác cá ngừ đại dương tháng tháng đầu năm 2016 Bảng 4: Thành phần hóa học đầu số cá béo Bảng 5: Tổng hợp số protease thương mại Bảng 6: Ví dụ sử dụng Y lipolytica để xử lý hay nâng cao giá trị cho phế phẩm (theo Bankar cộng sự, 2009) 18 Bảng 1: Dụng cụ máy móc thiết bị dùng trình nghiên cứu 25 Bảng 2: Thành phần môi trường sử dụng 34 Bảng 1: Thành phần hóa học đầu cá ngừ vây vàng 36 Bảng 3.2: Thành phần dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng .38 Bảng 3: Mật độ tế bào suất tạo sinh khối khô sau 72h Y lipolytica .39 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1: Cá ngừ vây vàng .2 Hình 2: Sản lượng khai thác cá ngừ tháng đầu năm 2016 kỳ .5 Hình 3: Tổng giá trị xuất cá ngừ Việt Nam đạt 271 USD nửa đầu năm 2017 Hình 4: Hình tll, M.Y lipolytica 0544 .13 Hình 5: Quy trình chung sản xuất sinh khối nấm men 20 Hình 1: Đầu cá ngừ vây vàng 24 Hình 2: Sơ đồ nội dung nghiên cứu 26 Hình 3: Sơ đồ xử lý thủy phân đầu cá ngừ vây vàng 27 Hình 4: Nguyên liệu đầu cá ngừ vây vàng 28 Hình 5: Đầu cá xay nhỏ máy xay thịt cá TA57/D 29 Hình 6: Tủ sấy chân không LVO2040+LVO1003 32 Hình 1: Hiệu suất thu hồi protein thuỷ phân đầu cá ngừ vây vàng với Protamex theo pH 37 Hình 2: Hiệu suất thu hồi lipid thuỷ phân đầu cá ngừ vây vàng với Protamex theo pH 37 Hình 3: Ảnh hưởng môi trường đến suất tạo sinh khối Y lipolytica 39 Hình 4: Tỷ lệ sử dụng chất dinh dưỡng nuôi cấy Y lipolytica DTP đầu cá môi trường YPD 40 Hình 5: Khả sinh trưởng Y lipolytica nuôi dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng theo tỷ lệ cấy giống 41 Hình 6: Hiệu sử dụng dinh dưỡng Y lipolytica nuôi dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng theo tỷ lệ cấy giống 42 Hình 7: Khả sinh trưởng Y lipolytica nuôi dịch thủy phân đầu cá vây vàng theo pH nuôi 43 vii Hình 8: Hiệu sử dụng dinh dưỡng Y lipolytica dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng theo pH nuôi 43 Hình 9: Khả sinh trưởng Y lipolytica nuôi dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng theo thể tích ni .45 Hình 10: Hiệu sử dụng dinh dưỡng Y lipolytica nuôi dịch thủy phân đầu cá ngừ theo thể tích ni 45 Hình 11: Ảnh hưởng thể tích dịch đến hiệu tạo suất sinh khối hàm lượng lipid sinh khối Y lipolytica môi trường dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng 46 viii 0.2 0.16 0.12 0.08 0.04 Hệ số tăng trưởng riêng Năng suất tạo sinh khối (g/l) 10 NS tạo SK trung bình (g/l) Hệ số tăng trưởng riêng 50 75 100 125 150 Thể tích dịch ni (ml) Hình 9: Khả sinh trưởng Y lipolytica nuôi dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng theo thể tích ni Hiệu sử dụng dinh dưỡng (%) 100 80 60 %N sử dụng 40 %Lipid sử dụng 20 50 75 100 125 150 Thể tích dịch thuỷ phân (ml) Hình 10: Hiệu sử dụng dinh dưỡng Y lipolytica nuôi dịch thủy phân đầu cá ngừ theo thể tích ni Nhận xét: Từ kết đồ thị hình 3.9 ta thấy, thể tích ni tăng suất tạo sinh khối tốc độ tăng trưởng riêng Y lipolytica VTCC 0544 nuôi dịch thủy phân giảm rõ rệt, đạt cao thể tích 50 ml thấp thể tích 150 ml Ở thể 45 tích lại suất tạo sinh khối tốc độ tăng trưởng riêng Y lipolytica 0544 gần Theo kết hình 3.10 ta thấy, hiệu sử dụng lipid Y lipolytica 0544 có xu hướng giảm tăng thể tích ni, cao thể tích 50 ml đạt 91,3 % thấp thể tích 150 ml đạt 67,1 %, hàm lượng nitơ sử dụng dao động khoảng 21-25 % Điều giải thích, hàm lượng oxi phụ thuộc vào thể tích lắc, tăng thể tích lên hàm lượng oxi giảm dẫn đến phát triển tế bào nên khả sử dụng lipid giảm Tóm lại, hàm lượng sử dụng lipid nhiều hiệu tạo suất sinh khối cao Ở 50 ml khả tạo sinh khối cao đạt 8,4 g/l hiệu sử dụng lipid nhiều đạt 91,3% b Hàm lượng lipid sinh khối Nấm men nuôi môi trường dịch thủy phân với thể tích ni 50 ml, 75 ml, 100 ml, 125 ml, 150 ml 72 h Kết thể hình 3.11 10 30 20 10 Năng suất tạo sinh khối (g/l) Hàm lượng lipid sinh khối (%) 40 %lipid SK khô NS tạo SK trung bình (g/l) 50 75 100 125 150 Thể tích dịch thuỷ phân (ml) Hình 11: Ảnh hưởng thể tích dịch đến hiệu tạo suất sinh khối hàm lượng lipid sinh khối Y lipolytica môi trường dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng 46 Nhận xét: Từ đồ thị ta thấy, thể tích dịch ni tăng suất tạo sinh khối Y lipolytica 0544 giảm từ 8,36 g/l xuống 2,89 g/l Ngược lại, hàm lượng lipid sinh khối tăng theo thể tích ni, thấp thể tích 50 ml đạt 10% cao thể tích 125 ml đạt 35% 47 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN Kết luận Trong nghiên cứu này, khả sinh trưởng nấm men Y lipolytica VTCC 0544 môi trường dịch thủy phân đầu cá ngừ khảo sát với điều kiện thể tích dịch, tỷ lệ cấy giống pH ni cấy khác Kết tóm tắt sau: Chuẩn bị dịch thủy phân để nuôi cấy nấm men Y Lipolytica VTCC 0544, điều kiện thích hợp là: - pH tự nhiên - Nhiệt độ 55oC - Tỷ lệ enzyme/NL 0,8% - Tỷ lệ NL/nước 1/1 Thể tích dịch, tỷ lệ cấy giống pH ni có ảnh hưởng đến sinh trưởng, suất tạo sinh khối tốc độ tạo sinh khối, hiệu suất sử dụng nitơ lipid sau 72 h nuôi Y lipolytica môi trường dịch thủy phân: - Tỷ lệ cấy giống tăng suất sinh khối tốc độ tăng trưởng riêng giảm hiệu suất sử dụng lipid tăng - Thể tích ni tăng suất sinh khối tốc độ tăng trưởng riêng giảm đồng thời hiệu suất sử dụng lipid dịch sau nuôi tăng hàm lượng lipid sinh khối tăng lên Điều kiện thích hợp để ni cấy nấm men Y lipolytica dịch thuỷ phân đầu cá ngừ vây vàng phạm vi nghiên cứu đề tài: thể tích ni 50 ml, tỷ lệ cấy giống 10 %, khoảng pH 6,0-6,5 Kiến nghị Kết nghiên cứu đề tài cho thấy khả ứng dụng nấm men Y lipolytica việc xử lý phụ phẩm thủy sản Dựa vào đề tài nghiên cứu với số khác, đề xuất số hướng nghiên cứu sau: Sản xuất lipid đơn bào Tăng thể tích, suất ni cấy nấm men Y lipolytica dịch thủy phân đầu cá ngừ vây vàng với quy mơ lớn, sau thấy hiệu thì: 48 - Mở rộng việc nghiên cứu nấm men để xử lý phế liệu thủy sản khác phế liệu tôm, phế liệu cá rô, … - Xử lý mơi trường nước có hàm lượng lipid/ nitơ cao, ví dụ nước thải nhà máy sản xuất dầu ăn, nước thải rửa cá 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Trần Hải Đăng (2016) "Nấm men Yarrowia lipolytica ứng dụng lĩnh vực công nghệ sinh học chất béo." Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam 9A: 43-45 Nguyễn Thị Mỹ Hương (2011), Sửdụng sản phẩm thủyphân protein từ đầu cá ngừ thứcăn cho tôm, Tạp chí khoa học cơng nghệ thủy sản - Đại học NhaTrang, 1: 99-108 Nguyễn Thị Mỹ Hương, 2013 Protein and lipid recovery from tuna head using industrial Protease Tạp chí nơng nghiệp phát triển nơng thơn số 11 (8) trang 1150 – 1158 Nguyễn Thị Mỹ Hương, (2015) Fisheries' by-products and its upgradding Protein and colorant recuperation from fisheries' by-products and applications S T Trang Hanoi, Vietnam, Agriculture Publisher: – 15 Lan Hương, Phế liệu chế biến cá ngừ - nguồn tài nguyên chưa tận dụng, Thông tin khoa học công nghệ - Kinh tế thủy sản 7/2006, Tr.26 – 28 Nguyễn Bá Thông ; Đào Mạnh Sơn ; Nguyễn Van Nghĩa; Nguyễn Long, (2007) ‘Tiềm nguồn lợi công nghệ khai thác cá ngừ Việt Nam, Thông tin Khoa học công nghệ - Kinh tế thủy sản 7/2007’, pp 7–11 Bùi Thị Cẩm Phương (2013) ‘Đánh giá chất lượng sản phẩm thủy phân protein đầu cá ngừ nghiên cứu ảnh hưởng gia vị đến chất lượng bánh cá từ sản phẩm thủy phân, Đồ án tôt nghiệp, Đại học Nha trang’ Phạm Tuyết Nhung cộng sự, (2003) ‘Tình hình sản xuất tiêu thụ cá ngừ, Hội thảo toàn quốc Khai thác, chế biến dịch vụ hậu cần nghề cá’, in, p 293 Đào Mạnh Sơn – Nguyễn Viết Nghĩa, Hiện trạng nguồn lợi tình hình khai thác cá ngừ đại dương Việt Nam, Tạp chí Thủy sản số 7/2006, Tr 20 – 23 10 Đào Mạnh Sơn, (2004) ‘Năng suất đánh bắt, phân bố số đặc điểm sinh học ba loài cá ngừ đại dương vùng biển xa bờ Việt Nam, Hội thảo toàn quốc Khai thác, chế biến dịch vụ hậu cần nghề cá’ 50 Tài liệu tiếng Anh 11 Aguedo M, Waché Y, Mazoyer V, le Grand AS, B J.-M (2003) ‘Increased Electron Dổn end Elactron Acceptor Characters Enhance the Adhesion between Oil Droplets and Cells of Yarrowia lipolytica As Evaluated by a New Cytometric Assay J Agric Food Chem 2003’, p 51:3007-3011 12 Alkasrawi, M., Nandakumar, R., Margesin, R., Schinner, F & Mattiasson, B , 1999 A microbial biosensor based on Yarrowia lipolytica for the off-line determination of middle-chain alkanes Biosensors & bioelectronics, 14(8-9), pp.723–7 13 Amaral PFF, Lehocky M, Timmons AMB, Rocha-Leão MHM, Coelho MAZ, C J (2006) ‘Cell surface charaterization of Yarrowia lipolytica IMUFRJ 50682 Yeast 2006a’, p 23:867-877 14 Amaral PFF, Ferreira TF, Fontes GC, C M (2009) ‘lycerol valorization: New biotechnological routes Food and Bioproducts Processing 2009’, p 87:179-186 15 Amaral PFF, Rocha-Leão MHN, Marrucho IM, Coutinho JAP, C M (2006a) ‘Cell surface characterizationn of Yarrowia lipolytica IMUFRJ 50682 Yeast 2006c’, pp 867–877 16 Amaral PFF, Rocha-Leão MHN, Marrucho IM, Coutinho JAP, C M (2006b) ‘Improving lipase production using a perfluorocarbon as oxygen carrier Journal of Chemical technology and biotechnology 2006c’, p 81:1368-1374 17 Amaral PFF, Silva JM, Lehocky M, Timmons AMB, Marucho IM, Coelho MAZ, C J (2000) ‘Production and characterization of a bioemulsifier from Yarrowia lipolytica Process Biotechnol 2000’, p 10:333-337 18 Aidos, I., 2002 Production of High-Quality Fish Oil from Herring By-products, Ph.D Thesis, Wageningen University, The Netherlands 19 Bankar, A., Kumar, A and Zinjarde, S (2009) ‘Environmental and industrial applications of Yarrowia lipolytica, Appl Microbiol Biotechnol 61’, pp 847–865 20 Barth, G and Gaillardin, C (1997) ‘Physiology and genetics of the dimorphic fungus Yarrowia lipolytica, FEMS Microbiol Rev 19’, pp 219–237 21 Barth G, K W (1979) ‘Alcohol dehydrogenase (ADH) in yeast II NAD+ - and NADP+-dependent alcohol dehydrogenases in Saccharomyccopsis lipolytica Z Allg Mikrobiol 1979’, p 19:381-390 51 22 Biryukova EN, Medentsev AG, Arinbasarova AY, A V (2006) ‘Tolerance ofthe yeast Yarrowia lipolytica to oxidative stress Microbiology 2006’, p 75:243-247 23 Chin, T S., Othman, N Z., Malek, R A., Elmarzugi, N., Mei, O., Ramli, S., Musa, N F., Aziz, R., Enshasy, H El and Chin, T S (2015) ‘Journal of Chemical and Pharmaceutical Research , 2015 , ( ): 122-132 Research Article Bioprocess optimization for biomass production of probiotics yeast Saccharomyces boulardii in semi-industrial scale’, 7(3), pp 122–132 24 Dao, V.T & Kim, J.K., 2011 Scaled-up bioconversion of fish waste to liquid fertilizer using a L ribbon-type reactor Journal of environmental management, 92(10), pp.2441–6 25 Does AL, Bisson, L (1989) ‘Comparison of glucose uptake kinetics in different yeast Journal of bacteriology 1989’, p 171:1303-1308 26 EFSA Panel on Biological Hazard (BIOHAZ), 2010 Scientific Opinion on Fish Oil for Human Consumption Food Hygiene, including Rancidity EFSA Journal 2010;8(10):1874 27 Falch, E., 2006 Lipids from residual fish raw materials, Ph.D Thesis, Norweygian University of Science and Technology 28 Fickers, P., Benetti, P., Wache, Y., Marty, A., Mauersberger, S and Nicaud, J (2005) ‘“Hydrophobic substrate utilisation by the yeast Yarrowia lipolytica, and its potential applications.”’, pp 527–543 29 Flores CL, Rodriguez C, Petit T, G C (2000) ‘Carbohydrate and energy yielding metabolism in non-conventional yeast FEMS Microbiology Re views, 2000’, p 24:507-529 30 Guieysse, D., Sandoval, G., Faure, L., Nicaud, J.M., Monsan, P., Marty, A., 2004 New efficient lipase from Yarrowia lipolytica for the resolution of 2-bromoarylacetic acid esters Tetrahedron Asymmetry 15(22), pp 3539–3543 31 Gutierrez JR, E L (1977) ‘“‘Hydrocarbon Uptake in Hydrocarbon Fermentations’” Biotechnol Bioeng 1977’, p 19 :1331-1341 32 Holzschu, L., Chandler, F., Ajello, L and Ahearn, G (1997) ‘Evaluation of industrial yeasts for pathogenicity, Sabouraudia’, pp 71–78 52 33 Kamnerdpetch, C., Weiss, M., Kasper, Scheper, T (2007) ‘Enzyme and Microbial Tecchnology Institut Technische, Chemie, Univeritare Hannover’ 34 Kamzolova SV, Shishkanova NV, Morgunov IG, F T (2003) ‘Oxygen requirements for growth and citric acid production of Yarrowia lipolytica FEMS Yeast Research 2003’, p 1528:1-6 35 Lopes M, Gomes N, Mota M, B I (2009) ‘Yarrowia lipolytica growth under increased air pressure: influence on enzyme production Appl Biochem Biotechnol 2009a’, p 159:4 53 36 Margesin, R & Schinner, F., 2001 Biodegradation and bioremediation of hydrocarbons in extreme environments Applied Microbiology and Biotechnology, 56(5-6), pp.650–663 37 Mbatia, N.B., 2011 Valorisation of fish waste biomass through recovery of nutritional lipids and biogas, Doctoral thesis, Lund University, Sweden 38 Novozyme (2001) ‘Protamex sheet, so 08284 – 03’ 39 Papanikolaou S, A G (2002) ‘Lipid production by Yarrowia lipolytica growing on industrial gycerol in a single-stage continuous culture Bioresource Technology 2002’, p 82 :43-49 40 Pereira-Meirelles FV, Rocha-Leão MH, S G (1997) ‘A stable lipase from Candida lipolytia, cultivation conditions and crude enzyme characteristics Applied Biochemistry and Biotechnology 1997’, pp 63-65-85 41 Rodrigues G, P C (1997) ‘The influence of acetic and other weak carboxylic acids on growth and cellular death of the yeast Yarrowia lipolytica Food Technology and Biotechnology 1997’, p 38:27-32 42 Simopoulos, A.P., 2002 The importance of the ratio of omega-6 / omega-3 essential fatty acids Biomedicine & Pharmacotherapy, 56 (8), 365-379 43 T Sivakumar; P Thangamathi; A Mariashobana; T Rathimeena; T Shankar, J (2014) ‘Advances in Med and Life Sci.,2014’, pp 1–8 44 Thevenieau F, Nicaud JM, Gaillardin C (2008) ‘“Application of the nonconventional yeast Yarrowia lipolytica”, In: Kunze SA, Satyanarayana T, eds “Diversity and potential biotechnological applications of yeasts” Amsterdam: Elsevier, 2008’ 53 45 Tomaszewska, L., Rywińska, A., Gładkowski, W., 2012 Production of erythritol and mannitol by Yarrowia lipolytica yeast in media containing glycerol J Ind Microbiol Biotechnol 39(9), pp 1333–1343 46 Trindade, J.R., Freire, M.G., Amaral, P.F.F., Coelho, M.A.Z., Coutinho, J.A.P., Marrucho, I.M., 2008 Aging mechanisms of oil-in-water emulsions based on a bioemulsifier produced by Yarrowia lipolytica Colloids and Surfaces A: physicochemical and engineering aspects 324(1–3), pp 149–154 47 Valdimarsson, G., Einarsson, H & Gudbjörnsdottir, B Magnusson, H., 1998 Microbiological quality of Icelandic cooked-peeled shrimp (Pandalus borealis) International Journal of Food Microbiology, 45(2), pp.157 – 161 48 Wang, HJ., Le Dall, M T., Wach, Y., Laroche, C., Belin, J M., Gaillardin, C and Nicaud, J M (1999) ‘Evaluation of acyl coenzyme A oxidase (Aox) isozyme function in the n-alkane-assimilating yeast Yarrowia lipolytica J Bacteriol 181’, pp 5140–5148 49 Wang ZX, Zhuge J, Fang H, P B (2001) ‘Glycerol production by microbial fermentation: a review Biotechnol Adv 2001’, p 19:201-223 50 Yano, Y., Oikawa, H & Satomi, M., 2008 Reduction of lipids in fish meal prepared from fish waste by a yeast Yarrowia lipolytica International journal of food microbiology, 121(3), pp.302–7 51 Zinjarde, S., Pant, A and Deshpande, M V (1998) ‘Dimorphic transition in Yarrowia lipolytica isolated from oil-polluted sea water Mycological Research 102’, pp 553–558 Tài liệu internet 52 https://vietnambiz.vn/xuat-khau-ca-ngu-sang-cac-thi-truong-chinh-tiep-tuctang-28027.html 53 http://vasep.com.vn/1422/Bao-cao-xuat-khau-thuy-san/Bao-cao-Thi-truong-Thuysan.htm 54 PHỤ LỤC Một số hình ảnh thí nghiệm Hình 1: Máy xay thịt TA57/D Hình 2: Dịch thủy phân sau thủy phân Hình 3: Máy ly tâm UNIVERSAL 220 55 Hình 4: Nấm men Yarrowia lipolytica 0544 hoạt hóa đĩa thạch Hình 5: Máy lắc MTS: 1038 MTS:BE06 56 Hình 6: Máy vơ hóa mẫu nitơ Hình 7: Chưng cất mẫu thiết bị bán tự động Gerhardt 57 Hình 8: Mẫu sinh khối ướt sau thủy phân với HCl 6N Hình 9: Mẫu lipid sau tách chiết dung mơi 58 Hình 10: Tủ sấy bình hút ẩm Hình 11: Tủ nung 59 ... tiêu đề tài Nghiên cứu chế biến phụ phẩm thủy sản thành chế phẩm protein thủy phân dùng nuôi cấy nấm men Yarowia lipolytica Nội dung nghiên cứu - Lựa chọn điều kiện pH thích hợp để thủy phân đầu... Tơi xin cam đoan kết đề tài: Nghiên cứu chế biến phụ phẩm thủy sản thành chế phẩm protein thủy phân dùng nuôi cấy nấm men Yarrowia lipolytica cơng trình nghiên cứu cá nhân tơi chưa cơng bố cơng... TRƯỜNG 0o0 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CHẾ BIẾN PHỤ PHẨM THỦY SẢN THÀNH CHẾ PHẨM PROTEIN THỦY PHÂN DÙNG TRONG NUÔI CẤY NẤM MEN YARROWIA LIPOLYTICA GVHD : ThS TRẦN HẢI ĐĂNG SVTH :