Xác định amlodipin besilat và perindopril tert butylamin bằng phương pháp điện di mao quản

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN NGỌC HẰNG XÁC ĐỊNH AMLODIPIN BESILAT VÀ PERINDOPRIL TERT-BUTYLAMIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN NGỌC HẰNG XÁC ĐỊNH AMLODIPIN BESILAT VÀ PERINDOPRIL TERT-BUTYLAMIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS LÊ ĐÌNH CHI PGS.TS PHẠM THỊ NGỌC MAI Hà Nội – 2018 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên xin chân thành cảm ơn TS Lê Đình Chi PGS.TS Phạm Thị Ngọc Mai giao đề tài, nhiệt tình hƣớng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Thị Ánh Hƣờng tận tình bảo, giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu Tơi xin chân thành gửi lời cảm ơn tới công ty 3S Analysis thiết kế lắp đặt hỗ trợ trang thiết bị q trình thực nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Thầy cô Bộ mơn Hóa Phân tích nói riêng khoa Hóa học nói chung dạy dỗ, bảo động viên thời gian học tập trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn gia đình, bạn học viên sinh viên mơn Hóa phân tích giúp đỡ thời gian học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 30 tháng 01 năm 2018 Học viên Trần Ngọc Hằng MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH .vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung 1.1.1 Thông tin chung amlodipin besilat perindopril tert-butylamin 1.1.2 Tính chất vật lý, vai trò tác dụng phụ 1.2 Các phƣơng pháp xác định 1.2.1 Phƣơng pháp sắc ký 1.2.2 Phƣơng pháp quang phổ 1.2.3 Phƣơng pháp điện hóa 10 1.2.4 Các phƣơng pháp điện di mao quản (CE) 11 1.3 Phƣơng pháp điện di mao quản 13 1.3.1 Độ điện di, tốc độ điện di thời gian điện di 14 1.3.2 Mao quản 15 1.3.3 Dòng điện di thẩm thấu (EOF) 16 1.3.4 Dung dịch đệm pH pha động phƣơng pháp điện di mao quản 19 1.3.5 Kỹ thuật bơm mẫu phƣơng pháp điện di mao quản 19 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 21 2.1 Đối tƣợng, mục tiêu nội dung nghiên cứu 21 2.1.1 Đối tƣợng mục tiêu nghiên cứu 21 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Phƣơng pháp khảo sát xác định điều kiện thích hợp 22 i 2.2.2 Phƣơng pháp xử lý mẫu 23 2.3 Hóa chất thiết bị 25 2.3.1 Hóa chất 25 2.3.2 Thiết bị dụng cụ 26 2.4 Các thông số đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp phân tích 28 2.4.1 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp phân tích 28 2.4.2 Độ chụm (độ lặp lại) phƣơng pháp 29 2.4.3 Độ (độ thu hồi) phƣơng pháp 29 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Nghiên cứu khảo sát tối ƣu điều kiện xác định amlodipin bessilat perindopril tert-butylamin phƣơng pháp điện di mao quản CE-C4D 31 3.1.1 Khảo sát ảnh hƣởng hệ đệm 31 3.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian bơm mẫu chiều cao bơm mẫu 38 3.2 Xây dựng đƣờng chuẩn cho chất phân tích đánh giá phƣơng pháp phân tích 41 3.2.1 Xây dựng đƣờng chuẩn 41 3.2.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp43 3.2.3 Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) độ (độ thu hồi) 44 3.3 Phân tích mẫu thuốc 47 3.3.1 Mẫu dƣợc phẩm Coveram chứa Amlodipin besilat Perindopril tertbutylamin 48 3.3.2 Mẫu thuốc Coversyl 49 3.3.3 Mẫu dƣợc phẩm Ambelin Amlodipin 51 3.4 Xây dựng quy trình chiết pha lỏng Amlodipin besilat mẫu nƣớc tiểu nhằm xác định phƣơng pháp CE – C4D 53 3.4.1 Khảo sát lựa chọn dung môi 53 ii 3.4.2 Khảo sát lựa chọn pH chiết 55 3.4.3 Khảo sát ảnh hƣởng thể tích dung mơi 56 3.4.4 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian lắc 58 3.4.5 Đánh giá phƣơng pháp phân tích Amlodipin besilat mẫu nƣớc tiểu phƣơng pháp CE – C4D kết hợp xử lý mẫu phân tích chiết lỏng – lỏng59 3.4.6 Phân tích mẫu nƣớc tiểu thực tế 61 KẾT LUẬN 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thông tin chung amlodipin besilat perindopril tert-butylamin Bảng 1.2 Các chất thƣờng dung làm pha động CE giá trị pK chúng 19 Bảng 2.1 Thông tin đặc điểm loại mẫu dƣợc phẩm 23 Bảng 3.1 Kết khảo sát ảnh hƣởng pH đến diện tích pic (Spic) thời gian di chuyển (tdc) Am, Per 32 Bảng 3.2 Kết khảo sát phụ thuộc diện tích pic Am Per vào thành phần hệ đệm điện di 35 Bảng 3.3 Kết khảo sát phụ thuộc diện tích pic (Spic) thời gian di chuyển (tdc) Am Per vào nồng độ dung dịch đệm điện di 37 Bảng 3.4 Kết phụ thuộc diện tích pic (Spic) thời gian di chuyển (tdc) Am Per vào thời gian bơm mẫu 39 Bảng 3.5 Kết phụ thuộc diện tích pic (Spic) thời gian di chuyển (tdc) Am Per vào chiều cao bơm mẫu 39 Bảng 3.6 Điều kiện tối ƣu cho phân tích hỗn hợp Am Per phƣơng pháp CE – C4D 41 Bảng 3.7 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ Am Per 42 Bảng 3.8: Phƣơng trình đƣờng chuẩn Am Per 43 Bảng 3.9 Giới hạn phát Am Per phƣơng pháp điện di mao quản CEC4D 44 Bảng 3.10 Giá trị khoảng tuyến tính, LOD LOQ chất phân tích Am Per 44 Bảng 3.11 Kết xác định độ lặp lại phƣơng pháp CE-C4D định lƣợng Am 45 Bảng 3.12 Kết xác định độ lặp lại phƣơng pháp CE-C4D định lƣợng Per 45 Bảng 3.13 Kết khảo sát độ phƣơng pháp dựa thêm chuẩn Am 47 iv Bảng 3.14 Kết khảo sát độ phƣơng pháp dựa thêm chuẩn Per 47 Bảng 3.15 Kết xác định nồng độ Am Per mẫu thuốc Coveram 49 Bảng 3.16 Kết xác định nồng độ Per mẫu dƣợc phẩm Coversyl 50 Bảng 3.17 Kết xác định nồng độ Am mẫu dƣợc phẩm Amlodipin 52 Bảng 3.18 Kết xác định nồng độ Am mẫu dƣợc phẩm Ambelin 53 Bảng 3.19 Độ lặp lại phƣơng páp CE – C4D xác định Am kết hợp xử lý mẫu nƣớc tiểu chiết lỏng – lỏng 60 Bảng 3.20 Độ thu hồi phƣơng pháp CE – C4D xác định Am kết hợp xử lý mẫu nƣớc tiểu chiết lỏng – lỏng 61 Bảng 3.21 Hàm lƣợng Am mẫu nƣớc tiểu M1, M2 M3 63 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ phân tích hệ điện di mao quản 14 Hình 1.2: Mặt cắt ngang mao quản 15 Hình 1.3: Lớp điện tích kép bề mặt mao quản 16 Hình 1.4: Ảnh hƣởng dòng EOF đến tốc độ ion trình điện di 16 Hình 1.5: Nguyên lý hoạt động cảm biến đo độ dẫn không tiếp xúc 18 Hình 1.6: Các kĩ thuật bơm mẫu phƣơng pháp điện di mao quản 20 Hình 2.1: Ảnh chụp thiết bị CEC4D triển khai Việt Nam 27 Hình 3.1a Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng pH đến phân tách Am 33 Hình 3.1b Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng pH đến phân tách Per 33 Hình 3.2 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng thành phần hệ đệm đến phân tách Am, Per 36 Hình 3.3 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng nồng độ dung dịch đệm điện di đến trình phân tách chất Am Per 37 Hình 3.4 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng thời gian bơm mẫu 39 Hình 3.5 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng chiều cao bơm mẫu 40 Hình 3.6 Đƣờng chuẩn Am theo diện tích 42 Hình 3.7 Đƣờng chuẩn Per theo diện tích 43 Hình 3.8 Điện di đồ xác định Am Per sau thêm chuẩn Am Per nồng độ khác 48 Hình 3.9 Điện di đồ xác định Per sau thêm chuẩn Per nồng độ khác 50 Hình 3.10 Điện di đồ xác định Am mẫu dƣợc phẩm Amlodipin sau thêm chuẩn Am nồng độ khác 51 Hình 3.11 Điện di đồ xác định Am mẫu dƣợc phẩm Ambelin sau thêm chuẩn Am nồng độ khác 52 vi Hình 3.12 Điện di đồ xác định Am mẫu nƣớc tiểu với dung môi chiết khác 54 Hình 3.13 Hiệu suất thu hồi xác định Am với dung mơi chiết khác 54 Hình 3.14 Điện di đồ xác định Am pH chiết khác 55 Hình 3.15 Biểu đồ phụ thuộc hiệu suất thu hồi vào pH 56 Hình 3.16 Điện di đồ xác định Am với thể tích dung mơi chiết khác 57 Hình 3.17 Biểu đồ thể phụ thuộc hiệu suất thu hồi vào thể tích dung mơi chiết 57 Hình 3.18 Điện di đồ xác định Am thời gian lắc khác 58 Hình 3.19 Biểu đồ thể phụ thuộc hiệu suất chiết vào thời gian lắc 59 Hình 3.20 Điện di đồ phân tích mẫu nƣớc tiểu thực tế M1sau 10h uống thuốc 61 Hình 3.21 Điện di đồ phân tích mẫu nƣớc tiểu thực tế M1 sau 12h uống thuốc 62 Hình 3.22 Điện di đồ phân tích mẫu nƣớc tiểu thực tế M1 sau 14h uống thuốc 62 vii 5mV (1) (2) Am 60 80 100 120 t (s) 140 160 180 Hình 3.21 Điện di đồ phân tích mẫu nước tiểu thực tế M1 sau 12h uống thuốc (1 tương ứng đường mẫu ban đầu đường thêm chuẩn) mV (1) (2) Am 60 80 100 120 140 160 t (s) Hình 3.22 Điện di đồ phân tích mẫu nước tiểu thực tế M1 sau 14h uống thuốc (1 tương ứng đường mẫu ban đầu đường thêm chuẩn) Từ điện di đồ mẫu nƣớc tiểu M1 cho thấy xuất pic Am thải trừ Am qua nƣớc tiểu sau lần lấy mẫu thời điểm khác sau uống thuốc Có thể thấy hàm lƣợng Am mẫu thay đổi rõ rệt, hàm lƣợng Am thải trừ sau 10h 62 lớn nhất, sau 12h 14h hàm lƣợng Am giảm mạnh đồng thời xuất thêm 1pic sát bên cạnh pic Am, sản phẩm phụ từ trình phân hủy amlopidin trình đào thải Sự xuất pic kèm với diện tích pic nhỏ Am mẫu lấy sau 12 14 h kể từ uống không cho phép định lƣợng xác hàm lƣợng Am mẫu Trong Bảng 3.22 kết xác định hàm lƣợng Am thải trừ qua mẫu nƣớc tiểu bệnh nhân M1, M2 M3 sau thời gian sử dụng thuốc 10h Bảng 3.21 Hàm lượng Am mẫu nước tiểu M1, M2 M3 Mẫu M1 Mẫu M2 Mẫu M3 Spic (mV.s) 20,21 19,18 17,88 Nồng độ xác định (ppm) 35,02 28,04 25,11 Kết cho thấy hàm lƣợng Am mẫu nƣớc tiểu bệnh nhân dao động khoảng từ 25,11 đến 35,02 ppm Nhƣ khẳng định sử dụng phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng kết hợp với CE – C4D phát định lƣợng đƣợc có mặt Am mẫu nƣớc tiểu 63 KẾT LUẬN Sau trình nghiên cứu thực hiện, với mục đích ứng dụng phƣơng pháp điện di mao quản tích hợp detector đo độ dẫn khơng tiếp xúc (CE-C4D) để tách xác định amlodipin besilat perindopril tert-butylamin mẫu dƣợc phẩm, Amlodipin besilat mẫu nƣớc tiểu, luận văn thu đƣợc kết sau: Đã tối ƣu đƣợc điều kiện tách xác định amlodipin besilat perindopril tert butylamin phƣơng pháp CE - C4D Các điều kiện tối ƣu bao gồm: dung dịch diện ly: đệm Tris/ace (10 mM) pH = 8; mao quản silica, tổng chiều dài 55 cm, chiều dài hiệu dụng 40cm, đƣờng kính 50 µm với thời gian bơm mẫu 30s, chiều cao h = 25cm Đánh giá phƣơng pháp phân tích: - Xây dựng đƣờng chuẩn xác định chất phân tích amlodipin besilat khoảng nồng độ từ 17,00- 80,00 ppm perindopril tert-butylamin khoảng nồng độ 5,00-150,00 ppm Đƣờng chuẩn có độ tuyến tính cao: giá trị R2 lớn 0,9995, độ lặp lại tốt (RSD < 3% ) - Xác định độ đúng: Hiệu suất thu hồi Am Per nằm khoảng 93 – 100% so với lƣợng chuẩn thêm vào mẫu trắng, điều cho thấy phƣơng pháp có độ cao - Xác định giới hạn phát (LOD) Am Per tƣơng ứng 5,00 ppm 1,00 ppm, giới hạn định lƣợng (LOQ) Am Per lần lƣợt 17,00 ppm 5,00 ppm Ứng dụng phƣơng pháp nghiên cứu để phân tích số mẫu dƣợc phẩm có chứa riêng chất phân tích Am ( có thuốc Ambelin Amlodipin) Per (có thuốc Coversyl) nhƣ xác định đồng thởi Am Per ( có thuốc Coveram) 64 Khảo sát xây dựng quy trình phân tích amlodipin besilat mẫu nƣớc tiểu với điều kiện tối ƣu nhƣ sau: 3ml dung môi n-butyl acetat, pH chiết = 9, thời gian lắc 20 phút Ứng dụng quy trình để phân tích mẫu thực tế, kết ban đầu cho thấy phát định lƣợng đƣợc amlodipin besilat mẫu nƣớc tiểu bệnh nhân sử dụng thuốc có chứa hoạt chất Từ kết thu đƣợc cho thấy phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE – C4D) phù hợp với việc xác định đồng thời amlodipin besilat perindopril tert-butyl amin mẫu dƣợc phẩm việc kết hợp CE - C4D với kỹ thuật chiết lỏng – lỏng xác định thành công amlodipin besilat mẫu nƣớc tiểu Nhƣ phƣơng pháp trở thành phƣơng pháp hữu hiệu để tra kiểm định nhanh (thậm chí triển khai thực trƣờng) chất lƣợng sản phẩm phục vụ lĩnh vực dƣợc phẩm bảo vệ sức khỏe ngƣời tiêu dùng, mở khả phát triển ứng dụng phƣơng pháp CE – C4D rộng rãi Hƣớng phát triển đề tài: Do điều kiện hạn chế thời gian nên luận văn tiến hành nghiên cứu tách xác định hàm lƣợng amlodipin besilat perindopril tert- butylamin mẫu dƣợc phẩm phân tích Amlodipin besilat mẫu nƣớc tiểu Phƣơng pháp mở rộng nghiên cứu đồng thời Am Per với đối tƣợng mẫu khác nhƣ: mẫu nƣớc tiểu, mẫu máu… nhằm phát triển phƣơng pháp hƣớng vào áp dụng cho vấn đề thực tiễn Việt Nam 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Thị Ánh Hƣờng (2010), Nghiên cứu xác định dạng asen vô nước ngầm phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn khơng tiếp xúc, Luận án Tiến sĩ Hóa học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên ĐHQGHN Nguyễn Văn Ri (2011), Các kỹ thuật phân tích Điện di, Sách chuyên đề cao học Đại học khoa học Tự nhiên-ĐHQG Hà Nội Nguyễn Văn Ri (2011), Các phương pháp tách sắc ký, Sách chuyên đề cao học Đại học khoa học Tự nhiên-ĐHQG Hà Nội Lê Thị Hồng Hảo, Phạm Thị Ngọc Mai, Nguyễn Thị Ánh Hƣờng, Nguyễn Vân Anh, Phạm Tiến Đức, Vũ Thị Trang (2016), Ứng dụng phương pháp điện di phân tích thực phẩm, Nhà Xuất Khoa học kỹ thuật, năm 2016 Phạm Luận (2005), Cơ sở lý thuyết Sắc kí điện di mao quản hiệu cao, Giáo trình giảng dạy dành cho sinh viên chuyên ngành Hóa Phân tích, Trƣờng ĐH Khoa học Tự Nhiên Hà Nội Tạ Thị Thảo (2010), Bài giảng chuyên đề thống kê hóa phân tích, ĐH Quốc gia Hà Nội TIẾNG ANH A Mohammadi, N Rezanour, M Ansari Dogaheh, F Ghorbani Bidkorbeh, M Hashem, R.B Walker, (2006), “A stability-indicating high performance liquid chromatographic (HPLC) assay for the simultaneous determination of atorvastatin and amlodipine in commercial tablet”, J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, pp 215–221 A Zarghi, S.M Foroutan, A Shafaati, A Khoddam, (2005), “Validated HPLC method for determination of amlodipine in human plasma and its application to pharmacokinetic studies”, Farmaco, 60 (9), pp 789-792 Amlodipin besilat, https://www.thuocbietduoc.com.vn/thuoc-goc-872/amlodipinebesylate.aspx 10 AOAC (2012), “Appendix F: Guidelines for standard method performance requirements”, AOAC official methods of analysis, 11 Azza Abdel Kader Gazy, (2003), “Determination of amlodipine besylate by adsorptive square-wave anodic stripping voltammetry on glassy carbon electrode in tablets and biological fluids”, Talanta, 62, pp 575–582 12 B.Venkata Kiran, Battula Sreenivasa Rao and Som Shankar Dubey, (2012), “Simultaneous determination and validation of Amolodipine and Metaprolol in Pharmaceutical Dosage forms by Reverse Phase HPLC Method”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, pp.1-3 13 Barole T.C, Gandhi S.P, Ladke A V and Damle M C, (2011), “Validated HPTLC method for the determination of Amlodipine besylate and Perindopril in bulk and its pharmaceutical dosage form”, The Pharma Review, 26, pp.268-286 14 Brian De Borba and Jeffrey Rohrer, “Development of an Assay for Besylate in Amlodipine Besylate by IC and a Second Assay to Simultaneously Determine Amlodipine and Besylate by HPLC”, Thermo Fisher Scientific, pp.1-7 15 Gabriel Hancu, Monica Budău, Lajos Kristóf Kántor, and Anca Cârje, (2015), “Cyclodextrine Screening for the Chiral Separation of Amlodipine Enantiomers by Capillary Electrophoresis”,Adv Pharm Bull, 5(1), pp 35-40 16 http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs317/en/ 17 H Greschonig, M G Schmid, G Gubitz (1998), “Capillary electrophoretic separation of inorganic and organic arsenic compounds”, Fres J Anal Chem (362), pp 218-223 18 Jignesh Prajapati, Ajay Patel1, Dr.M.B.Patel, Nimesh Prajapati,Rashmika Prajapati, (2011), “Analytical method development and validation of Amlodipine besylate and Perindopril erbumine in combine dosage form by RP-HPLC”, International Journal of PharmTech Research, (2), pp 801-808 22 19 M Josefsson, B Norlander, (1996), “Coupled-column chromatography on a Chiral-AGP phase for determination of amlodipine enantiomers in human plasma: an HPLC assay with electrochemical detection”, J Pharm Biomed Anal, 15, pp 267–277 20 Maha A Hegazy, Samah S Abbas, Hala E Zaazaa, Hebatallah M Essam, (2015), “Conventional univariate Versus multivariate Spectrophotometric assisted Techniques for Simultaneous Determination of Perindopril Arginin and Amlodipine Besylate in presence of their degradation products”, Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc, 150, pp 940-948 21 Mohit G.D, Kailesh B.G and Mrinilani C.D, (2010),“Development and validation of stability indicating HPTLC method for the determination of Perindopril erbumine”, International Research Journal of Pharmacy, 1(1), pp.428-435 22 Nafisur Rahman, Habibur Rahman, Sk Manirul Haque, (2012), “Kinetic spectrophotometric method for the determination of perindopril erbumine in pure and commercial dosage forms”, Arabian Journal of Chemistry, pp.1-8 23 Nafisur Rahman, Habibur Rahman, Sk Manirul Haque, (2012) “Development of spectrophotometric method for the determination of perindopril erbumine in pharmaceutical formualtions using 2,4-dinitrofluorobenzene”, Journal of the Chilean Chemical Society, pp.1069-1073 24 Nina Alizadeh, Fatimeh Hemati, (2014), “Spectrophotometric method for the determination of amlodipine besylate in pure and dosage forms using 7,7,8,8tetracyanoquinodimethane and tetracyanoethylene”, Bulletin of Faculty of Pharmacy, Cairo University, pp.1-6 25 Nouruddin W Ali1, Nada S Abdelwahab1, Marco M Zaki1 and M Abdelkawy, (2012), “Validated Chromatographic Methods for Simultaneous Determination of Amlodipine Besylate and Perindopril Arginine in Binary Mixtures and inPharmaceutical Dosage Form”, Chromatography Separation Techniques, 3, pp 1-5 26 P MikuSˇ , K Mara´kova´, I Vala´sˇkova´, E Havra´nek, (2008), “Determination of amlodipine enantiomers in pharmaceuticals using capillary electrophoresis separation and diode array detection”, Pharmazie, 64, pp 76-79 27 Perindopril tert – butylaim, https://www.thuocbietduoc.com.vn/thuoc-goc- 132/perindopril-tert-butylamin.aspx 28 Prameela Rani A1, Bala Sekaran.C, (2009), “A validated RP-HPLC method for the determination of perindopril erbumine in pharmaceutical formulation” International Journal of PharmTech Research, 1, pp 575-578 29 R M Guijt, C J Evenhuis, M Macka, P R Haddad (2004), “Conductivity detection for conventional and miniaturised capillary electrophoresis systems”, Electrophoresis (25), pp 4032-4057 30 Ratnaparkhi Mukesh, Patil Pradeep, Jagadale Sachin, (2013), “Development and Validation of Spectrophotometric Method for the Determination of Perindopril Erbumine in Bulk Dosage Form”, American Journal of Phytomedicine and Clinical Therapeutics , pp.78-82 31 Samia M El-Gizawy,a Osama H Abdelmageed,bc Sayed M Derayea,c Mahmoud A Omarc and Ahmed M Abdel-Megied, (2013), “Chiral separation of perindopril erbumine enantiomers using high performance liquid chromatography and capillary electrophoresis”, Royal society of chemistry, 6, pp 825-830 32 Yanfen Wei, Hao Wang, Shuangjiao Sun, Lifu Tang, Yupin Cao, Biyang Deng, (2016), “An ultrasensitive electrochemiluminescence sensor based on reduced graphene oxide-copper sulfide composite coupled with capillary electrophoresis for determination of amlodipine besylate in mice plasma”,Biosens Bioelectron,(86), pp 714-719 33 Z Simonci ˇ cˇ, R Roskar ˇ, A Gartner , K Kogej , V Kmetec, (2008), “The use of microcalorimetry and HPLC for the determination of degradation kinetics and thermodynamic parameters of Perindopril Erbumine in aqueous solutions”,Int J Pharm,365, pp 200-205 PHỤ LỤC Hình 4.1.Điện di đồ định hàm lƣợng Amlodipin besilat Perindopril tertbutylamin có mẫu thuốc Coveram phƣơng pháp CE-C4D Coveram 10 mV Amlodipin Perindopril 60 80 100 120 140 160 180 200 t (s) Điều kiện bơm mẫu: mao quản silica có đƣờng kính 50 µm với tổng chiều dài (Ltot) 55 cm (Leff=4 0cm) Điện tách -1C5 kV, thời gian bơm mẫu 30 s, chiều cao bơm mẫu 25 cm, hệ đệm điện di Tris/ace pH = Hình 4.2.Điện di đồ xác định hàm lƣợng Perindopril tert-butylamin có mẫu thuốc Covesyl phƣơng pháp CE-C4D Coversyl 10 mV Perindopril 80 100 120 140 t (s) 160 180 200 Điều kiện bơm mẫu: mao quản silica có đƣờng kính 50 µm với tổng chiều dài (Ltot) 55 cm (Leff=4 0cm) Điện tách -15 kV, thời gian bơm mẫu 30 s, chiều cao bơm mẫu 25 cm, hệ đệm điện di Tris/ace pH = Hình 4.3.Điện di đồ xác định hàm lƣợng Amlodipin besilat có mẫu thuốc Amlodipin phƣơng pháp CE-C4D Amlodipin 10 mV Amlodipin 60 80 100 120 t (s) 140 160 Điều kiện bơm mẫu: mao quản silica có đƣờng kính 50 µm với tổng chiều dài (Ltot) 55 cm (Leff=4 0cm) Điện tách -15 kV, thời gian bơm mẫu 30 s, chiều cao bơm mẫu 25 cm, hệ đệm điện di Tris/ace pH = Hình 4.4 Điện di đồ xác định hàm lƣợng Amlodipin besilat có mẫu thuốc Ambelin phƣơng pháp CE-C4D Ambelin 10 mV Amlodipin 520 540 560 580 t (s) 600 620 Điều kiện bơm mẫu: mao quản silica có đƣờng kính 50 µm với tổng chiều dài (Ltot) 55 cm (Leff=4 0cm) Điện tách -15 kV, thời gian bơm mẫu 30 s, chiều cao bơm mẫu 25 cm, hệ đệm điện di Tris/ace pH = Hình 4.5 Điện di đồ phân tích mẫu nƣớc tiểu thực tế M2 (1 tƣơng ứng đƣờng mẫu ban đầu đƣờng thêm chuẩn) 10 mV (1) (2) Am 120 140 160 t (s) 180 200 220 Điều kiện bơm mẫu: mao quản silica có đƣờng kính 50 µm với tổng chiều dài (Ltot) 55 cm (Leff=4 0cm) Điện tách -15 kV, thời gian bơm mẫu 30 s, chiều cao bơm mẫu 25 cm, hệ đệm điện di Tris/ace pH = Hình 4.6 Điện di đồ phân tích mẫu nƣớc tiểu thực tế M3 (1 tƣơng ứng đƣờng mẫu ban đầu đƣờng thêm chuẩn) 10 mV (1) (2) Am 60 80 100 120 t (s) 140 160 Regression Analysis: Diện tích pic Per versus Nồng độ Per The regression equation is Diện tích pic (mV.s) Per = - 1.93 + 3.58 Nồng độ Per (ppm) Predictor Constant Coef SE Coef -1.926 T P 2.215 -0.87 0.424 Nồng độ Per 3.58283 0.03940 90.93 0.000 S = 3.51309 R-Sq = 99.9% R-Sq(adj) = 99.9% Analysis of Variance Source Regression DF SS F P 102052 102052 8268.77 0.000 Residual Error Total MS 62 12 102113 Regression Analysis: Diện tích pic Am versus Nồng độ Am The regression equation is Diện tích Am (mV.s) = - 2.06 + 0.709 Nồng độ Am (ppm) Predictor Constant Coef SE Coef -2.0556 T P 0.3442 -5.97 0.179 Nồng độ Am(ppm) 0.709053 0.007271 97.52 0.000 S = 0.404031 R-Sq = 99.9% R-Sq(adj) = 99.9% Analysis of Variance Source Regression DF MS F P 1552.4 1552.4 9509.68 0.000 Residual Error Total SS 0.8 1553.2 0.2 ... Phƣơng pháp điện hóa 10 1.2.4 Các phƣơng pháp điện di mao quản (CE) 11 1.3 Phƣơng pháp điện di mao quản 13 1.3.1 Độ điện di, tốc độ điện di thời gian điện di ... amlodipin besilat perindopril tert- butylamin phƣơng pháp CE-C4D 12 1.3 Phƣơng pháp điện di mao quản Điện di mao quản kỹ thuật tách chất dựa di chuyển khác phân tử chất (chủ yếu ion mang điện tích)... ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN NGỌC HẰNG XÁC ĐỊNH AMLODIPIN BESILAT VÀ PERINDOPRIL TERT- BUTYLAMIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN