PHÂN TÍCH kết QUẢ điện DI HEMOGLOBIN(Phân tích thành phần hb)

Phân tích được kết quả điện di hemoglobin... Trong một hệ thống điện di, các phân tử tích điện di chuyển qua một môi trường hỗ trợ nhờ các lực được phát ra từ môi trường điện... 1 Theo đ

MỤC TIÊU

1 Nêu nguyên lý kỹ thuật điện di.

2 Nêu chỉ định làm điện di hemoglobin.

3 Nêu các bước đọc kết quả điện di.

4 Phân tích được kết quả điện di hemoglobin.

2

• kích thước và hình dạng của phân tử,

• pH của dung dich đệm,

• đặc điểm của môi trường hỗ trợ,

• khung thời gian cho phương pháp tiến hành

• và nhiệt độ của hệ thống hoạt động

• Ứng dụng: điện di hemoglobin, điện di protein huyết thanh

3

Trong một hệ thống điện di, các phân tử tích điện di chuyển qua một môi trường hỗ trợ nhờ các lực

được phát ra từ môi trường điện

Nguyên lý phân tách

• Theo điện tích

• Theo kích thước

6

(1) Theo điện tích

trong môi trường điện, chúng di chuyển về hai phía cả cực dương và cực âm theo điện tích của chúng

(2) Theo kích thước phân tử

(1) Normal (2) New born (3) Hb C trait [A-C] (4) Hb SC disease [S-C] (5) Sickle cell disease [S-S], (6) Sickle cell trait [A – S] (7) New born (8)

• Điện di hemoglobin có thể thực hiện

Một số kỹ thuật điện di Hemoglobin

 Alkaline (Cellulose Acetate) ở pH 8,6

Acid (Citrate agar) ở pH 6,2

Các kỹ thuật điện di Hemoglobin

Alkaline (Cellulose Acetate) ở pH 8,6

 Điện di Hb với gel cellulose acetate ở pH kiềm: pp sàng lọc đầu tiên được sử dụng để phát hiện các Hb bất thường.

 Những chuỗi globin bất thường sẽ khác nhau về số lượng, kiểu và trật tự các acid amin: điều này làm cho Hb có đặc tính

riêng Tỷ lệ Hb chiếm nhiều nhất ở người là HbA.

 Tất cả các phân tử Hb tích điện âm và di chuyển về phía cực dương tỷ lệ với điện tích âm của chúng.

 Ở pH kiềm HbC, E, A2 và Odi chuyển cùng nhau để hình thành 1 băng đơn giản, HbS, D và Gcũng cùng di chuyển.

Các kỹ thuật điện di Hemoglobin

 Các phân tử Hb tách ra dựa trên sự khác biệt về điện tích và khả năng gắn kết với agar.

 Thường được sử dụng để phân biệt các Hb bất thường cùng di chuyển với nhau trên gel cellulose (Vd

HbS với HbD và HbG, HbC với HbE)

 Ở pH acid HbC tách ra trừ E và O; và HbS tách từ D và G.

CHỈ ĐỊNH

HC hình liềm, HC kiềm, đa sắc )

Bất lợi của kỹ thuật điện di

• Tốn công

• Không chính xác trong

• Tính chính xác đối với HbA2 kém hơn so với HPLC (Kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu

năng cao) và một số KT khác.

18

CHỈ ĐỊNH

HC hình liềm, HC kiềm, đa sắc )

MỘT SỐ KỸ THUẬT

PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HEMOGLOBIN

• IEF - Isoelectric Focusing: tập trung đẳng điện

• HPLC – High Performance Liquid Chromatography: Sắc ký lỏng hiệu năng cao

20

ƯU ĐIỂM CỦA CE

21

PHÂN TÍCH KẾT QUẢ

22

Chuỗi alpha Chuỗi non-alpha

Bệnh lý thalassemia

Mất cân bằng

chuỗi alpha

và chuỗi non - alpha

Thiếu hụt 1 hay nhiều chuỗi globin

Giảm số lượng chuỗi globin bệnh

24

Thời kỳ bào thai

Thời kỳ sau sinh

↑ HbA2

26

Hemoglobin E

- Đông Nam châu Á

- HbE α2β226glu → lys

Thể phối hợp

31

0.5-0.8 %(∼ 1-2%)

32

CÁCH ĐỌC KẾT QUẢ

• Trả lời các câu hỏi

– Có hiện diện các Hb bình thường không?(HbA, A2, và +/-F)

– Tỷ lệ các Hb có thay đổi không? (HbA↓, HbA2↑, HbF↑)

– Có xuất hiện các Hb bất thường không? HbH, HbBarts, HbE, HbS, HbC, HbD

CÁCH ĐỌC KẾT QUẢ

1 Có hiện diện đầy đủ các Hb bình thường không?

 Có: HbA, HbA2, (± HbF) → Câu 2

 Không → câu 3

2 Tỷ lệ các Hb có thay đổi không

 Trong giới hạn BT:

- Điện di bình thường

- Chưa loại trừ α –thalassemia

 Thay đổi: HbA giảm

- HbA ↓ , ↑ HbA2 hay HbF,

- hoặc HbA ↓ , ↑ HbA2 và HbF

→ β-thalassemia

34

3 Xuất hiện các Hb bất thường nào?

- HbH, Hb Bart’s: α -thal

- HbE, HbS, HbC, : bệnh lý Hb

4 Tỷ lệ các Hb bình thường thay đổi + xuất hiện các Hb bất thường: thể phối hợp:

- β-thal + bệnh hemoglobin (Hb biến thể)

5 β -thal + α-thal: chỉ biểu hiện β-thal trên điện di

6 α -thal + HbE: biểu hiện bằng thay đổi tỉ lệ HbE

CÁCH ĐỌC KẾT QUẢ

35

β -thal + α -thal: chỉ thấy thay đổi của β-thal

α -thal + HbE: chỉ thấy thay đổi tỉ lệ HbE

Lưu ý:

1. HbE: 25-35%  Bệnh lý HbE dị hợp tử

2. HbE: >35%  Bệnh lý HbE kết hợp β -thalassemia

3. HbE: <25% TD: HbE kết hợp α -thalassemia

4. HbE: ≥ 80%  Bệnh lý HbE đồng hợp tử

Sickle cell trait

Sickle cell anemia (Hgb SS)

Hgb SC disease

Case 3

HbF: 1.0%; HbA: 38.7%; HbA2: 4.4%; HbS: 56.1%

50

LƯU Ý

– Bệnh cảnh lâm sàng của bệnh nhân

– Tổng phân tích tế bào máu ngoại vi (công thức máu)

– Phết máu ngoại biên

– Bilan chuyển hóa sắt

– Tiền sử gia đình

51