KY THUAT NHAN GIONG VO TINH LAN DENDROBIUM

Kĩ thuật nhân giống vơ tính lan Dendrobium I Tổng quan lan Dendrobium II III Kĩ thuật nhân giống Kết luận I Tổng quan Lan Dendrobium: • Đăc điểm sinh học • Điều kiện ngoại cảnh tác động • Giá trị ứng dụng Đặc điểm sinh học:  Lớp mầm (Orichidales)  Bộ Orchidaceae  Họ Orchidaceae, họ phụ Epidendroideae, tông Epidendroideae  Giống Dendrobium  Ở Đông Bán Cầu  Tập trung nhiều Đông Nam Á  Giống Dendrobium có khoảng 16000 lồi Đăc điểm hình thái lan Dendrobium: Rễ Thân • • Thuộc nhóm thân Đa dạng đa hình Đàithái hoa cấu trúc • Hình dạng cấu dạng: • • Giả hành: chứadinh diệptrúc lụclátố,rất cóđa mơ chứa Hấp thụ chất dưỡng, khống, bámMơi hìnhnhày kim, trụ có rảnh hay phiến mỏng dịch giá thể làm giảm nước dự trữ • dinh Dạng mềm mạ, mọng nước,nạc, • Mộtdưỡng số lồi, hệ rễ có chứa diệp lục dai,xanh bóng, đậm hay nhạt • • Chứa mắt ngủ Khơng chịu lạnh Trụ hoa • Trút mùa khô hạn Lá D Harveyanum Hoa Quả Hạt D Sonia Cánh hoa D anosmum Hình Cấu trúc hoa D.chung Thongchai Gold “Montion” Hình Quả lan Dendrobium • • • • lan Dendrobium Chồi hoa mọcHình từHạt mắt ngủ, Quả đầu phong lanmưa thuộchay quảđầu nangtết nở hoa mùa Một chứa từ 10000 đếnmột 100000 hạt Đôi theo 3-6 đường nứt dọc số Hoa lâu 3tàn, trung bìnhhạt 1-2có kích thước đến triệu hạt nên lồi mở theo 1-2 khía dọc, tháng nhỏ chí khơng nứt •• Cấu trúc18 hoa cựchạt kì phong phú Sau 12tháng, chín phát tán nhờ gió • Hạthấp khỏi vỏ vỏ dẫn hình dạng thích màu điều Hình 2.2 Thân Dendrobium Khi gặp nấm cộng sinh tương mục nát sắc kiện phù hợp, hạt nảy mầm Hình 2.3 Lá Dendrobium D Evonianum D Pulchellum Điều kiện ngoại cảnh ảnh hưởng đến Dendrobium Ánh sáng Nhiệt độ Nước Độ ẩm Phân bón Giá thể Sâu bệnh hại Ánh sáng Nhiệt độ  Ánh sáng cần thiết cho tăng trưởng hoa (khoảng 50% ánh sáng mặt trời)  Ánh sáng thấp làm thân mảnh khảnh, mỏng, hoa nhỏ khơng có hoa Tuy nhiên ánh sáng q cao làm bị cháy Nước Độ ẩm Phân bón Giá thể Sâu bệnh Hình 3.1a Lan Dendeobium tất thích ánh sáng Ánh sáng Nhiệt độ Nước Độ ẩm Phân bón  Nhiệt độ ảnh hưởng nhiều đến tăng trưởng Lan Dendrobium  Phần lớn thích hợp với nhiệt độ ban đêm vào khoảng 16-18oC, vào ban ngày cao khoảng 27-32oC  Tùy vào nhiêt độ chia làm loại: Ưa lạnh, ưa nóng trung gian Dendrobium amabile Giá thể Sâu bệnh Hình 3.2 bDendrobium Các loại Dendrobium nắng Primulinum Dendrobium fanmeri Dendrobium chrysotoxum Dendrobium Linlley Dendrobium fimbriatum Hình3.2c 3.2a Nhóm Một Dendrobium số Dendrobium ưa gian lạnh Hình trung Ánh sáng  Nước: - Giúp trì độ ẩm giai đoạn tăng trưởng - Mùa hè tưới lần, mùa đông tưới lần tuần đủ Nhiệt độ  Độ ẩm: - Giúp phát triển nhanh, hoa tươi tốt lâu tàn Nước - Dendrobium cần độ ẩm khoảng 50-60%  Phân bón: Độ ẩm - Cần nhiều nguyên tố, Fe, Cu, Mn, Bo, Ca, Mg, S - Cung cấp đầy đủ chất khoáng suốt thời gian tăng trưởng dùng xác loại phân cho Phân bón ( Thường có cơng thức chung N-P-K cân (10-10-10), (12-12-12)… ) Giá thể Sâu bệnh Ánh sáng Nhiệt độ  Giá thể :xốp, thống khí khơng giữ nước q lâu  Có thể sử dụng loại trộn hỗn hợp giá thể với vỏ khô, đá núi lửa, xơ dừa, dớn đá bọt  Sau năm nên thay chậu, đồng thời lúc ta nên tách chiết nhân giống Nước Độ ẩm Phân bón Giá thể Sâu bệnh Hình 3.5 Các loại giá thể trồng lan 10 Phương pháp gieo hạt nhờ nấm cộng sinh Ưu điểm • mơi trường sử dụng đơn giản, sinh khỏe mạnh có khả để kháng với tác động nấm bệnh • Thường sử dụng để nhân giống lồi lan đất vùng ơn đới Nhược điểm • cần có chủng mycorrhizal khiết • thao tác phức tạp B.Phương pháp gieo hạt không cần nấm cộng sinh • Chuẩn bị mẫu gieo hạt • Trái lan hái phải đủ già chưa bị nứt đem khử trùng • Khử trùng hóa chất khử trùng • Dùng dao xẻ dọc trái lan lấy hạt • Đem hạt rắc vào hộp ni cấy có mơi trường • Chọn mơi trường thích hợp để gieo hạt có bổ sung chất điều hòa tăng trưởng • Sau gieo hạt có màu nâu vàng =>nảy mầm chuyển sang xanh tiếp xúc với ánh sáng tạo diệp lục tố • Tạo protocorm: sử dụng hạt phình to có màu xanh, khơng bị nhiễm từ giai đoạn gieo hạt cho vào mơi trường ni câý thích hợp • Tạo nhanh protocorm: sử dụng protocorm nuôi cấy môi trường thích hợp • sau tuần bắt đầu xuất protocorm có lơng hút • Ra rễ: cấy vào môi trường rễ, bắt đầu tăng chiều cao • Tái sinh invitro hồn chỉnh: Điều kiện ni cấy giống mối trường bên ngồi, giúp thích nghi tốt sau chuyển vườn ươm • Chuyển invitro vườn ươm: cao khoảng 4-5 cm rễ phát triển đầy đủ chuyển vườn ươm • Sau rễ cứng cáp hơn, trồng với giá thể xơ dừa • Cây phát triển khỏe mạnh Phương pháp gieo hạt Ưu điểm Nhược điểm  Gia tăng lượng hoa thị trường  Nhân giống loài hoa quý nhằm nhân nhanh số lượng tự nhiên chương trình bảo tồn  Cung cấp để bán, hạn chế thai thác hoang dại  Kết hợp kĩ thuật lai giống tạo lan khỏe mạnh có màu sắc đặc biệt  Chỉ áp dụng lai giống non bị phân ly tính trạng phải từ 4-5 năm trưởng thành hoa  Đối với gieo hạt nhờ nấm cộng sinh cần phải có loại nấm chủng NI CẤY MƠ Chọn mẫu vàtrùng khử Chọn mẫu khử mẫu cấy cấy trùng mẫu Ni cấy Ni cấy Quy trình Nhân nhanh PLB Mơi trường tạo rễ Tái sinh invitro hồn chỉnh Chuyển vườn ươm Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Nguyên liệu Chồi lan tăng trưởng dài 1015cm Môi trường ni cấy Mơi trường khống MS(1962) có bổ sung chất điều hòa tăng trưởng BA 1mg/l NAA 0,1 mg/l - Các chất chiết từ trái nước dừa 10%, khoai tây - Khử trùng -Rửa chồi, dung dao mổ lột non bao xung quanh chồi để lộ chồi -Dung gòn lau nhẹ lên thân chồi, ngâm chồi xà loãng 10 phút, rửa Trong tủ cấy: -ngâm chồi vào cồn 700 phút, cho chồi vào becher chứa dung dịch javel ( thể tích javel: thể tích nước cất vơ trùng) 10 phút, lắc tay -Dùng kẹp vô trùng cho chồi vào becher vô trùng, rửa nước cất vô trùng cho javel( rửa lần) -Cắt bỏ mô chết phần gốc chồi, tách bỏ bên kim mũi nhọn để có đỉnh chồi mang 4-5 tiền phát khởi lá, cấy chồi vào ống nghiệm có chứa mơi trường -Đặt tất vào phòng ni quan sát Nuôi cấy Sau 10-12 tuần nuôi cấy đỉnh sinh trưởng chuyển sang màu xanh lục tạo khối tròn nhỏ PLB( Nhân nhanh PLB protocorm like body) Phương pháp Nihar Najak( cộng sự, 2001) thực Cymbidium aloifolium(L.) SW Dendrobium nobile Lindl Để có số lượng lớn PLB làm nguồn mẫu để phục vụ sản xuất, PLB tách thành lát có độ dày khoảng 0,5mm cấy sang mơi trường dinh dưỡng bổ sung chất điều hòa tăng trưởng( zeatin ribose, BAA,NAA) sau tuần tái sinh cụm protocorm TÁI SINH CÂY HOÀN CHỈNH INVITRO Khi đạt đến số giống cần thiết, chuyển PLB sang môi trường kích thích tạo rễ( bổ sung auxin) Sau 4-5 tháng thể chồi phát triển thành CHUYỂN CÂY RA VƯỜN ƯƠM Cây cao 5-7cm, từ 3-4 chuyển sang bầu đất mùn vơ trùng có bổ sung chất dinh dưỡng Sau thời gian phát triển ổn định,ta chuyển chậu Sau tuần bón phân, lúc đủ sức chống chọi bệnh tật Phương pháp vi nhân giống quang tự dưỡng  Phương pháp hữu hiệu nhân nhanh giống tuyển chon bảo tồn lồi q • Bình ni cấy đậy kín thiếu C02 để quang hợp, phải sử dụng nguồn carbon hữu từ môi trường dinh dưỡng để tăng trưởng thiếu khả tự dưỡng đưa vườn ươm tỉ lệ sống không cao tốn cơng chăm sóc Giải pháp Vi Nhân Giống Quang Tự Dưỡng Gồm giai đoạn Phương pháp Mẫu mô thực vật đem vào ống nghiệm nuôi cấy dị dưỡng hay quang dị dưỡng Sau xuật chuyển sang điều kiện nuôi cấy quang tự dưỡng Trao đổi khí tự nhiên: Tao lỗ cố đường kính 0,8-1 nắp hay thành bình giúp khơng khí ngồi bình trao đổi dễ dàng Mỗi lỗ dán kín film màng lọc lỗ nhỏ li ti(0,2-0,5𝜇m ) ngăn bui vi khuẩn Bơm khí trực tiếp: Sử dụng hộp ni cấy lớn, khơng khí có chứa C02 hay cao nồng độ C02 khơng khí(350-450𝜇mol/mol bơm trực tiếp vào hộp Các yếu tố ảnh hưởng đến tăng trưởng in vitro nhân giống quang tự dưỡng • kìm hãm enzyme Rubisco • tăng áp suất thẩm thấu mơ trường, rễ hấp thu nước khống Đường • tăng tỉ lệ nhiễm khuẩn giảm đường hay loại bỏ hồn tồn khỏi thành phần mơi trường ni cấy Độ ẩm Nồng độ C02 • Hộp ni cấy nhỏ kín nên độ ẩm hộp tăng cao • Hinh thái cấu trúc chức sinh lí bị thay đổi thủy tinh thể, lớp cutin mỏng, khí giảm chức đóng mở Mơi trường hộp ni cấy giới hạn trao đổi khí nồng độ C02 giảm hiệu suất quang hợp thấp phát triển đồng thời tích lũy chất ức chế C02 Các yếu tố ảnh hưởng đến tăng trưởng in vitro nhân giống quang tự dưỡng Ánh sáng Cường độ ánh sáng cần cho quang hợp có bước sóng từ 400-700nm Nhiệt độ Điều chỉnh ổn định 22-250C Giá thể Thay agar giá thể xốp hơn: vermiculite rockwoll giúp môi trường xung quanh hệ rễ thông thống Kết luận  Lan denbrobium lồi lan đẹp với nhiều màu sắc chủng loại khác nhau, người chơi hoa ưa chuộng mang lại nguồn thu nhập cao cho người dân làm vườn  Có nhiều phương pháp để nhân giống vơ tính lan Dendrobium tách con, giả hành, phương pháp gieo hạt phương pháp hữu hiệu nuôi cấy mô  nuôi cấy mô đảm bảo tạo mang đặc tính giống hồn tồn với cha mẹ (cây ổn định mặt di truyền), không nhiễm bệnh tạo số lượng lớn thời gian ngắn Tuy nhiên, việc cấy mô quy trình, trang thiết bị đầy đủ, mơi trường nhân tạo thích hợp, đặc biệt điều kiện vơ trùng phải đảm bảo nghiêm ngặt Đối với lồi khơng phải địa, phải hố vùng chọn mẫu đem ni cấy, có đảm bảo hiệu từ khâu nuôi cấy phòng thí nghiệm đến trồng ngồi vườn ươm  Để cải thiện nuôi cấy mô , gần phương pháp nhân giống quang tự dương áp dụng nhằm đảm bảo mơi trường ươm thích nghi tốt ... ưa nóng trung gian Dendrobium amabile Giá thể Sâu bệnh Hình 3.2 bDendrobium Các loại Dendrobium nắng Primulinum Dendrobium fanmeri Dendrobium chrysotoxum Dendrobium Linlley Dendrobium fimbriatum... thể nhỏ  Gây khô héo dần, rụng lá, làm cho lan còi cọc, sức nhiều sên gây hại lan Hình 3.7 h Nhện đỏ gây hại lan 14 Giá trị ứng dụng Dendrobium Lan Dendrobium Nobile Y dược thực phẩm Kinh tế... Cấu trúc hoa D.chung Thongchai Gold “Montion” Hình Quả lan Dendrobium • • • • lan Dendrobium Chồi hoa mọcHình từHạt mắt ngủ, Quả đầu phong lanmưa thuộchay quảđầu nangtết nở hoa mùa Một chứa từ