có DN lớn có thương hiệu nổi trội; sự cạnh tranh quyết liệt giữa các DN dẫn tới hiệu quả đánh bắt không cao. Đội tàu biển mới chủ yếu đảm nhận các tuyến nội địa và quanh khu vực Đông Nam Á; trình độ quản lý yếu, thiếu kinh nghiệm tham gia thị trường vận tải quốc tế. Năng suất khai thác thuỷ sản giảm, hiệu quả khai thác xa bờ thấp. Môi trường sinh thái và nguồn lợi thủy sản (NLTS) vẫn tiếp tục giảm. Bên cạnh đó công tác tìm kiếm thị trường, dự báo ngư trường, công tác thống kê còn bất cập; Ngành DLB thiếu sự quy hoạch tổng thể (QHTT), đồng bộ và tổng hòa từ nhiều khía cạnh của nền kinh tế trong Tỉnh nói riêng và KVKTTĐMT nói chung; hiệu quả trong quản lý du lịch chưa cao, tổ chức bộ máy quản lý nhà nước (QLNN) chưa ngang tầm với nhiệm vụ trước mắt và lâu dài; v.v... Những hạn chế này đặt ra cho chính quyền tỉnh Bình Định bài toán lớn trong việc quản lý phát triển kinh tế biển theo hướng bền vững (PTKTBTHBV). Với cách tiếp cận theo góc độ QLNN về PTKTBTHBV, trong những năm qua, có thể thấy chính quyền tỉnh Bình Định đã có chủ trương, chiến lược, quy hoạch, chính sách nhằm PTKTBTHBV. Tuy nhiên những chủ trương, chiến lược, quy hoạch, chính sách này mới là bước đầu, chưa đồng bộ, nhất quán, chưa tạo môi trường thuận lợi để PTKTBTHBV; tổ chức bộ máy quản lý và công tác kiểm tra, giám sát cũng còn nhiều thiếu sót, thực hiện chưa nghiêm. Do đó, việc khảo sát, phân tích, đánh giá thực trạng quản lý PTKTB tại tỉnh Bình Định, trên cơ sở đó tìm ra những giải pháp nhằm quản lý PTKTBTHBV tại tỉnh Bình Định là cấp thiết, có tính thời sự cao, có ý nghĩa thiết thực cả về lý luận và thực tiễn. Từ những phân tích, nghiên cứu sinh đã lựa chọn đề tài “Phát triển kinh tế biển theo hướng bền vững tại tỉnh Bình Định” làm đề tài luận án tiến sĩ của mình. 2 chi Glochidion ở Việt Nam tạo cơ sở khoa học trong việc sử dụng bền vững tài nguyên cây thuốc này, chúng tôi lựa chọn đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính gây độc tế bào của loài Sóc chụm (Glochidion glomerulatum) và loài Sóc lông (Glochidion hirsutum) ở Việt Nam”. Mục tiêu của luận án: Nghiên cứu để làm rõ thành phần hóa học chủ yếu của hai loài G. glomerulatum, G. hirsutum ở Việt Nam. Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất phân lập đƣợc để tìm kiếm các hợp chất có hoạt tính sinh học, làm cơ sở khoa học cho những nghiên cứu tiếp theo để tạo ra sản phẩm chăm sóc sức khỏe cho cộng đồng và góp phần giải thích tác dụng chữa bệnh từ các loài này. Nội dung luận án bao gồm: 1. Phân lập các hợp chất từ cành và lá hai loài G. glomerulatum và G. hirsutum ở Việt Nam bằng các phƣơng pháp sắc ký; 2. Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập đƣợc bằng các phƣơng pháp vật lý, hóa học; 3. Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất phân lập đƣợc.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGUYỄN VĂN THẮNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA LỒI SĨC CHỤM (GLOCHIDION GLOMERULATUM) VÀ LỒI SĨC LƠNG (GLOCHIDION HIRSUTUM) Ở VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC Hà Nội – 2018 iii MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH xi MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chi Glochidion 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Glochidion 1.1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học chi Glochidion 1.1.2.1 Các hợp chất ankenyl glycoside 1.1.2.2 Các hợp chất butenolide 1.1.2.3 Các hợp chất flavonoid 1.1.2.4 Các hợp chất lignan 1.1.2.5 Các hợp chất megastigmane 10 1.1.2.6 Các hợp chất phenolic tannin 11 1.1.2.7 Các hợp chất sesquiterpene 13 1.1.2.8 Các hợp chất triterpenoid 13 1.1.2.9 Các hợp chất khác 21 1.1.3 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học chi Glochidion 23 1.1.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ 23 1.1.3.2 Hoạt tính chống oxi hóa 26 1.1.3.3 Hoạt tính kháng vi sinh vật 27 1.1.3.4 Tác dụng chống nhiễm trùng, kháng viêm 28 1.1.3.5 Các hoạt tính khác 29 1.2 Giới thiệu hai loài G glomerulatum, G hirsutum 31 1.2.1 Loài Glochidion glomerulatum 31 1.2.2 Loài Glochidion hirsutum 31 1.2.3 Tình hình nghiên cứu hai lồi G glomerulatum, G hirsutum giới Việt Nam 32 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 34 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 34 iv 2.1.1 Loài Glochidion glomerulatum 34 2.1.2 Loài Glochidion hirsutum 34 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 35 2.2.1 Phƣơng pháp phân lập hợp chất 35 2.2.2 Phƣơng pháp xác định cấu trúc 35 2.2.3 Phƣơng pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào 37 2.3 Phân lập hợp chất 39 2.3.1 Phân lập hợp chất từ loài G glomerulatum 39 2.3.2 Phân lập hợp chất từ loài G hirsutum 42 2.4 Thông số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập đƣợc 44 2.4.1 Thông số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ loài G glomerulatum 44 2.4.1.1 Hợp chất GG1: Glomeruloside I 44 2.4.1.2 Hợp chất GG2: Glomeruloside II 44 2.4.1.3 Hợp chất GG3: Glomeruloside A 44 2.4.1.4 Hợp chất GG4: Glomeruloside B 44 2.4.1.5 Hợp chất GG5: Glomeruloside C 44 2.4.1.6 Hợp chất GG6: Glomeruloside D 44 2.4.1.7 Hợp chất GG7: Glomeruloside E 45 2.4.1.8 Hợp chất GG8: Glomeruloside F 45 2.4.1.9 Hợp chất GG9: Glomeruloside G 45 2.4.1.10 Hợp chất GG10: Glomeruloside H 45 2.4.2 Thông số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ loài G hirsutum 45 2.4.2.1 Hợp chất GH1: Hirsutoside A 45 2.4.2.2 Hợp chất GH2: Hirsutoside B 46 2.4.2.3 Hợp chất GH3: Hirsutoside C 46 2.4.2.4 Hợp chất GH4: Hirsutoside D 46 2.4.2.5 Hợp chất GH5: Hirsutoside E 46 2.5 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập đƣợc 46 2.5.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ hợp chất phân lập từ loài G glomerutum 46 v 2.5.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ hợp chất phân lập đƣợc từ loài G hirsutum 48 CHƢƠNG THẢO LUẬN KẾT QUẢ 49 3.1 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ loài G glomerulatum 49 3.1.1 Hợp chất GG1: Glomeruloside I 49 3.1.2 Hợp chất GG2: Glomeruloside II 58 3.1.3 Hợp chất GG3: Glomeruloside A 65 3.1.4 Hợp chất GG4: Glomeruloside B 73 3.1.5 Hợp chất GG5: Glomeruloside C 80 3.1.6 Hợp chất GG6: Glomeruloside D 86 3.1.7 Hợp chất GG7: Glomeruloside E 91 3.1.8 Hợp chất GG8: Glomeruloside F 97 3.1.9 Hợp chất GG9: Glomeruloside G 102 3.1.10 Hợp chất GG10: Glomeruloside H 108 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ loài G hirsutum 115 3.2.1 Hợp chất GH1: Hirsutoside A 115 3.2.2 Hợp chất GH2: Hirsutoside B 121 3.2.3 Hợp chất GH3: Hirsutoside C 126 3.2.4 Hợp chất GH4: Hirsutoside D 131 3.2.5 Hợp chất GH5: Hirsutoside E 137 3.3 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập đƣợc 143 3.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ hợp chất phân lập từ lồi Sóc chụm (G glomerulatum) 143 3.3.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ hợp chất phân lập từ lồi Sóc lơng (G hirsutum) 144 KẾT LUẬN 145 KIẾN NGHỊ 147 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 148 TÀI LIỆU THAM KHẢO 149 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC 158 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Tiếng Anh Diễn giải Ac Ara A2780 Acetyl Arabinose Human ovarian carcinoma cell line Adenocarcinomic human alveolar basal epithelial cells Hepatocellular carcinoma cell Bovine serum albumin Benzoyl Cacbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy Column chromatography H-1H- correlation spectroscopy Distortionless enhancement by polarisation transfer Human primary medulloblastoma cell line Dimethylsulfoxide 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl Human prostate cancer cell line Acetyl Arabinozơ Dòng tế bào ung thƣ buồng trứng Dòng tế bào ung thƣ phổi A-549 BEL-7402 BSA Bz 13 C-NMR CC COSY DEPT Daoy DMSO DPPH DU-145 EBV-EA EC50 ED50 ESI-MS Epstein – Barr Virus Half maximal effective concentration Median effective dose FBS G Gal GC GI50 Electron spray ionization mass spectra Fetal bovine serum Glochidion Galactose Gas Chromatography Growth inhibition Gl Galic acid Dòng tế bào tiền ung thƣ gan Albumin huyết bò Benzoyl Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân cacbon 13 Sắc kí cột Phổ 1H-1H COSY Phổ DEPT U nguyên tủy bào (CH3)2SO 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl Dòng tế bào ung thƣ tiền liệt tuyến Vi rút Epstein – Barr Nồng độ có hiệu lực 50% đối tƣợng thí nghiệm Liều lƣợng có hiệu 50% đối tƣợng thử nghiệm Phổ khối ion hóa phun m điện tử Huyết bò Chi Glochidion Galactozơ Sắc ký khí Nồng độ ức chế 50% tăng trƣởng Axit galic vii Kí hiệu Tiếng Anh Diễn giải Glc GLC4 Glucozơ Tế bào ung thƣ phổi nhỏ ngƣời Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton Dòng tế bào ung thƣ đại tràng Tế bào ung thƣ cổ tử cung Tế bào ung thƣ máu cấp HT-29 IC50 Glucose Human small cell lung cancer cell line Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy human colon cancer cell line HeLa cell Human promyelocytic leukemia cell Heteronuclear mutiple bond connectivity High performance liquid chromatography High resolution electronspray ionization mass spectrum Heteronuclear single-quantum coherence Colon adenocarcinoma cell line Inhibitory concentration at 50% K562 LN CaP human leukemic cell line Prostatic carcinoma cell line LPS LU-1 MCF-7 Me MIC Lipopolysaccharide Lung carcinoma cell line Human breast carcinoma Methyl Minimum inhibitory concentration Melt point 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]2,5-Diphenyltetrazolium bromide Human lung cancer Nuclear magnetic resonance Nuclear overhauser enhancement spectroscopy H-NMR HCT15 HeLa HL-60 HMBC HPLC HR-ESI-MS HSQC Mp MTT NCI-H460 NMR NOESY Phổ tƣơng tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Sắc ký lỏng hiệu cao Phổ khối lƣợng phân giải cao phun m điện tử Phổ tƣơng tác dị hạt nhân qua liên kết Tế bào ung thƣ đại tràng ngƣời Nồng độ ức chế 50% đối tƣợng thử nghiệm Tế bào ung thƣ bạch cầu Dòng tế bào ung thƣ tuyến tiền liệt Lipopolysaccharide Dòng tế bào ung thƣ phổi Tế bào ung thƣ vú ngƣời Gốc metyl Nồng độ ức chế tối thiểu Điểm nóng chảy 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]2,5-Diphenyltetrazolium bromide Tế bào ung thƣ phổi ngƣời Cộng hƣởng từ hạt nhân Phổ NOESY viii Kí hiệu Tiếng Anh Diễn giải OD ORAC Optical density Oxygen radical absorbance capacity Human ovarian carcinoma cell line Platelet Activating factor Polymorphonuclear leukocytes Rhamnose Rotating frame Overhause Effect Spectroscopy Roswell park memorial institute Mật độ quang Khả hấp thụ gốc tự OVCAR PAF PMN Rha ROESY RPMI SF-268 SKOV3 Central nervous system cancer cell Ovarian cell line SK-MEL-2 SRB SW-626 TCA TLC TMS Xyl Melanoma cell line Sulforhodamine B Ovarian cancer cell line Trichloroacetic acid Thin layer chromatography Tetramethylsilane Xylose Dòng tế bào ung thƣ buồng trứng Yếu tố kích hoạt tiểu cầu Bạch cầu đa hạt nhân Rhamnozơ Phổ ROESY Môi trƣờng nuôi cấy tế bào RPMI Tế bào ung thƣ thần kinh trung ƣơng Dòng tế bào ung thƣ buồng trứng Dòng tế bào ung thƣ da Sulforhodamine B Tế bào ung thƣ buồng trứng Axit tricloaxetic Sắc ký lớp mỏng (CH3)4Si Xylozơ ix DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Danh sách loài thuộc chi Glochidion Việt Nam Bảng 1.2 Các loài từ chi Glochidion cơng bố thành phần hóa học Bảng 1.3 Các hợp chất ankenyl glycoside từ chi Glochidion Bảng 1.4 Các hợp chất butenolide từ chi Glochidion Bảng 1.5 Các hợp chất flavonoid từ chi Glochidion Bảng 1.6 Các hợp chất lignan từ chi Glochidion Bảng 1.7 Các hợp chất megastigmane từ chi Glochidion 11 Bảng 1.8 Các hợp chất phenolic tannin từ chi Glochidion 12 Bảng 1.9 Các hợp chất sesquiterpene từ chi Glochidion 13 Bảng 1.10 Các hợp chất triterpene từ chi Glochidion 14 Bảng 1.11 Các hợp chất khác phân lập từ chi Glochidion 21 Bảng 2.1 % Ức chế phát triển tế bào hợp chất GG1-GG10 nồng độ 100 µM 47 Bảng 2.2 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất GG1-GG10 47 Bảng 2.3 % Ức chế phát triển tế bào hợp chất GH1 - GH5 nồng độ 100 µM 48 Bảng 2.4 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất GH1-GH5 48 Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR hợp chất GG1 hợp chất tham khảo 57 Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR hợp chất GG2 hợp chất tham khảo 64 Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR hợp chất GG3 hợp chất tham khảo 71 Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR hợp chất GG4 hợp chất tham khảo 76 Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR hợp chất GG5 hợp chất tham khảo 83 Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR hợp chất GG6 hợp chất tham khảo 88 Bảng 3.7 Số liệu phổ NMR hợp chất GG7 hợp chất tham khảo 93 Bảng 3.8 Số liệu phổ NMR hợp chất GG8 hợp chất tham khảo 99 Bảng 3.9 Số liệu phổ NMR hợp chất GG9 hợp chất tham khảo 106 Bảng 3.10 Số liệu phổ NMR hợp chất GG10 hợp chất tham khảo 112 Bảng 3.11 Thống kê 10 hợp chất phân lập từ loài G glomerulatum 114 Bảng 3.12 Số liệu phổ NMR hợp chất GH1 hợp chất tham khảo 120 x Bảng 3.13 Số liệu phổ NMR hợp chất GH2 chất tham khảo 124 Bảng 3.14 Số liệu phổ NMR hợp chất GH3 chất tham khảo 128 Bảng 3.15 Số liệu phổ NMR hợp chất GH4 chất tham khảo 135 Bảng 3.16 Số liệu phổ NMR hợp chất GH5 chất tham khảo 139 Bảng 3.17 Thống kê hợp chất phân lập từ loài G hirsutum 141 xi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc triterpene khung olean-12-ene 19 Hình 2.1 Mẫu thực vật lồi Glochidion glomerulatum (Miq.) Boerl 34 Hình 2.2 Mẫu thực vật loài Glochidion hirsutum (Roxb.) Voigt 34 Hình 2.3 Sơ đồ chiết phân đoạn mẫu G glomerulatum 40 Hình 2.4 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cặn nước loài G glomerulatum 41 Hình 2.5 Sơ đồ chiết phân đoạn mẫu G hirsutum 42 Hình 2.6 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cặn ethyl acetate loài G hirsutum 43 Hình 3.1 Cấu trúc hóa học hợp chất GG1 hợp chất tham khảo GG1A 49 Hình 3.2 Phổ HR-ESI-MS hợp chất GG1 49 Hình 3.3 Phổ 1H-NMR hợp chất GG1 50 Hình 3.4 Phổ 13C-NMR phổ DEPT hợp chất GG1 51 Hình 3.5 Phổ HSQC hợp chất GG1 52 Hình 3.6 Phổ HMBC hợp chất GG1 52 Hình 3.7 Phổ 1H – 1H COSY hợp chất GG1 53 Hình 3.8 Phổ ROESY hợp chất GG1 54 Hình 3.9 Kết phân tích GC đường chuẩn hỗn hợp đường hợp chất GG1 sau thủy phân 55 Hình 3.10 Các tương tác COSY, HMBC ROESY hợp chất GG1 56 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học hợp chất GG2 hợp chất tham khảo GG1 58 Hình 3.12 Phổ HR-ESI-MS hợp chất GG2 59 Hình 3.13 Phổ 1H-NMR hợp chất GG2 59 Hình 3.14 Phổ 13C-NMR hợp chất GG2 60 Hình 3.15 Phổ HSQC hợp chất GG2 61 Hình 3.16 Phổ HMBC hợp chất GG2 61 Hình 3.17 Phổ 1H – 1H COSY hợp chất GG2 62 Hình 3.18 Phổ ROESY hợp chất GG2 62 Hình 3.19 Các tương tác HMBC, COSY ROESY hợp chất GG2 63 Hình 3.20 Phổ HR-ESI-MS hợp chất GG3 65 Hình 3.21 Phổ 1H-NMR hợp chất GG3 66 Hình 3.22 Phổ 13C-NMR hợp chất GG3 67 LXII ???? Phổ HR-ESI-MS hợp chất GG2 Phổ 1H-NMR hợp chất GH3 LXIII Phổ 13C-NMR hợp chất GH3 Phổ DEPT hợp chất GH3 LXIV Phổ HSQC hợp chất GH3 Phổ HMBC hợp chất GH3 LXV Phổ COSY hợp chất GH3 Phổ ROESY hợp chất GH3 LXVI PHỤ LỤC HỢP CHẤT GH4 Công thức phân tử: C48H72O15 Khối lƣợng phân tử: 888 - Phổ HR-ESI-MS - Phổ 1H-NMR - Phổ 13C-NMR - Phổ DEPT - Phổ HSQC - Phổ HMBC - Phổ 1H-1H COSY - Phổ NOESY LXVII m/z 911,4779 [M+Na]+ Phổ HR-ESI-MS hợp chất GH4 Phổ 1H-NMR hợp chất GH4 LXVIII Phổ 13C-NMR hợp chất GH4 Phổ DEPT hợp chất GH4 LXIX Phổ HSQC hợp chất GH4 Phổ HMBC hợp chất GH4 LXX Phổ COSY hợp chất GH4 Phổ NOESY hợp chất GH4 LXXI PHỤ LỤC HỢP CHẤT GH5 Công thức phân tử: C48H70O15 Khối lƣợng phân tử: 886 - Phổ HR-ESI-MS - Phổ 1H-NMR - Phổ 13C-NMR - Phổ DEPT - Phổ HSQC - Phổ HMBC - Phổ 1H-1H COSY - Phổ NOESY LXXII m/z 909,4602 [M+Na]+ Phổ HR-ESI-MS hợp chất GH5 Phổ 1H-NMR hợp chất GH5 LXXIII Phổ 13C-NMR hợp chất GH5 Phổ DEPT hợp chất GH5 LXXIV Phổ HSQC hợp chất GH5 Phổ HMBC hợp chất GH5 LXXV Phổ COSY hợp chất GH5 Phổ NOESY hợp chất GH5 LXXVI Phiếu giám định tên khoa học mẫu Glochidion glomerulatum (Miq.) Boerl mẫu Glochidion hirsutum (Roxb) Voigt ... Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính gây độc tế bào lồi Sóc chụm (Glochidion glomerulatum) lồi Sóc lơng (Glochidion hirsutum) Việt Nam Mục tiêu luận án: Nghiên cứu để làm rõ thành phần hóa. .. sở liệu Scifinder đến năm 2014 có khoảng 30 cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi thuộc chi Glochidion Ở Việt Nam, số cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính. .. 3.3 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập đƣợc 143 3.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ hợp chất phân lập từ lồi Sóc chụm (G glomerulatum) 143 3.3.2 Hoạt tính gây độc tế bào