NGHIÊN CỨU CÁC THÔNG SỐ KỸ THUẬT ĐỂ NUÔI CẤY CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VAE.NATTO

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CÁC THÔNG SỐ KỸ THUẬT ĐỂ NUÔI CẤY CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VAE.NATTO Họ tên sinh viên: PHẠM ÁNH DUN Ngành: CƠNG NGHỆ HĨA HỌC Niên khóa: 2007 – 2011 Tháng 08/2011 NGHIÊN CỨU CÁC THƠNG SỐ KỸ THUẬT ĐỂ NUÔI CẤY CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VAE.NATTO Tác giả PHẠM ÁNH DUYÊN Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp kỹ sư ngành: Cơng Nghệ Hóa Học Giáo viên hướng dẫn: ThS VƯƠNG THỊ VIỆT HOA Tháng 08 năm 2011 i LỜI CẢM ƠN Tơi xin gửi lòng biết ơn sâu sắc đến: Ban giám hiệu trường Đại học Nông Lâm TP.HCM, Ban chủ nhiệm Bộ mơn Cơng Nghệ Hóa Học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học tập trường ThS Vương Thị Việt Hoa, người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, động viên suốt trình thực luận văn Cám ơn truyền đạt cho kiến thức, kinh nghiệm vô quý báu suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp ThS Nguyễn Minh Hiền, người truyền đạt cho kiến thức thực tập vi sinh thời gian thực tập Các bạn lớp DH07HH bên tôi, giúp đỡ, động viên, chia thời gian thực tập suốt năm học vừa qua Ba mẹ, bậc sinh thành sinh nuôi dưỡng tôi, anh chị em gia đình ln quan tâm, ủng hộ tơi học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Những người bạn thân bên tôi, động viên suốt trình thực đề tài Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 10 tháng 08 năm 2011 Sinh viên thực Phạm Ánh Duyên ii TÓM TẮT Đề tài “Nghiên cứu thông số kỹ thuật để nuôi cấy chủng vi khuẩn Bacillus subtilis vae.natto” tiến hành phòng thí nghiệm I4 – Trường Đại học Nơng Lâm Tp.HCM Thời gian từ tháng 03/2011 đến tháng 08/2011 Đề tài bố trí qua thí nghiệm: Thí nghiệm 1: Xác định mơi trường dinh dưỡng thích hợp để nuôi cấy chủng vi khuẩn B.natto  Yếu tố cố định: nuôi cấy tủ ấm nhiệt độ 400C  Yếu tố nghiên cứu: môi trường dinh dưỡng (MRS, NB, NGĐ, NGĐ + YE) Kết thu được: B.natto phát triển mạnh môi trường NGĐ + YE đạt mật độ đỉnh 9,52 log(TB/ml) Thí nghiệm 2: Xác định nhiệt độ thích hợp để nuôi cấy chủng vi khuẩn B.natto  Yếu tố cố định: môi trường dinh dưỡng (NGĐ + YE)  Yếu tố nghiên cứu: nhiệt độ (300C, 370C, 400C, 450C) Kết thu được: B.natto phát triển mạnh nhiệt độ 450C đạt mật độ đỉnh 10,08 log(TB/ml) Thí nghiệm 3: Xác định pH thích hợp để ni cấy chủng vi khuẩn B.natto  Yếu tố cố định: môi trường dinh dưỡng (NGĐ + Y.E), nhiệt độ 450C  Yếu tố nghiên cứu: pH (pH = 5; pH = 5,5; pH = 6; pH = 6,5; pH = 7) Kết thu được: B.natto phát triển mạnh pH = đạt mật độ đỉnh 10,24 log(TB/ml) Thí nghiệm 4: Kiểm tra khả lên men đậu nành bột B.natto Sản xuất bột B.natto đánh giá khả lên men bột so với dịch (bột B.natto lên men tốt so với dịch B.natto) iii ABSTRACT Thread "Look at the specifications for culturing bacteria Bacillus subtilis ssp.natto" was conducted in the laboratory I4 - HCMC University of Agriculture and Forestry Period from January to March 08/2011 03/2011 Topics are arranged over four experiments: Experiment 1: Determine the appropriate nutrient medium for culturing bacteria B.natto  Fixed factor: cultured in the incubator at a temperature of 400C  Studied factor: nutrient medium (MRS, NB, NGD, NGD + YE)  The result: B.natto fastest grow in the environment NGD + YE and reach the peak density of 9,52 log (TB / ml) Experiment 2: Determine the appropriate temperature for culturing bacteria B.natto  Fixed factors: nutrient medium (NGD + YE)  Studied factors: temperature (300C, 370C, 400C, 450C)  The result: B.natto fastest grow at temperatures 450C and reach the peak density of 10,08 log (TB / ml) Experiment 3: Determine the appropriate pH for culturing bacteria B.natto  Fixed factors: nutrient medium (NGD + YE), temperature 450C  Studied factors: pH (pH = 5; pH = 5,5; pH = 6; pH = 6,5; pH = 7)  The result: B.natto fastest grow at pH = and reach the peak density of 10,24 log (TB / ml) Experiment 4: Test the ability of powdered fermented soybeans B.natto Production of the powder B.natto and assess the ability of starch fermentation comparing with juice (B.natto fermented dough better than the juice B.natto) iv MỤC LỤC Trang Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt iii Abstract iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắc ix Danh sách hình x Danh sách bảng xi Chương 1: Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Nội dung đề tài 1.4 Yêu cầu Chương 2: Tổng quan tài liệu 2.1 Tổng quan Bacillus subtilis 2.1.1 Lịch sử nghiên cứu Bacillus subtilis 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Đặc điểm Bacillus subtilis 2.1.3.1 Đặc điểm sinh thái học phân bố tự nhiên 2.1.3.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3.3 Đặc điểm sinh hóa 2.1.3.4 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.3.5 Bộ gen Bacillus subtilis 2.1.3.6 Bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 2.1.4 Tính chất đối kháng Bacillus subtilis 2.1.5 Hệ enzyme Bacillus subtilis 10 2.1.5.1 Các enzyme nội bào Bacillus subtilis 10 2.1.5.2 Các enzyme ngoại bào Bacillus subtilis 10 v 2.1.6 Ứng dụng vi khuẩn Bacillus subtilis 11 2.1.6.1 Ứng dụng Việt Nam 11 2.1.6.2 Ứng dụng giới 13 2.1.6.3 Một vài ứng dụng cụ thể 14 2.2 Thực phẩm chức 20 2.2.1 Định nghĩa 20 2.2.2 Các loại thực phẩm chức 21 2.2.2.1 Các loại thực phẩm thiên nhiên chưa qua chế biến 21 2.2.2.2 Thực phẩm chế biến 22 2.2.3 Các lưu ý sử dụng TPCN 22 2.2.4 Phân biệt 23 2.2.4.1 Sự khác biệt TPCN (Functional Food) với thực phẩm (Food) 23 2.2.4.2 Sự khác biệt TPCN (Functional Food) với thuốc (Drug) 24 2.2.5 Những tác dụng độc đáo TPCN 24 2.2.6 Tình hình phát triển TPCN giới khu vực 24 2.2.7 Tại Việt Nam 25 Chương 3: Vật liệu phương pháp 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 26 3.1.1 Thời gian 26 3.1.2 Địa điểm 26 3.2 Nguyên liệu 26 3.3 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất thí nghiệm 26 3.3.1 Thiết bị 26 3.3.2 Dụng cụ 26 3.3.3 Hóa chất 27 3.3.4 Điều kiện nuôi cấy 27 3.4 Pha chế môi trường 27 3.4.1 Môi trường MRS dạng canh 27 3.4.2 Môi trường NB dạng canh 27 3.4.3 Môi trường nước giá đậu 28 3.4.4 Môi trường nước giá đậu bổ sung thêm YE 28 vi 3.5 Phương pháp làm thạch nghiêng, thạch đĩa 28 3.5.1 Thạch nghiêng 28 3.5.2 Thạch đĩa 28 3.6 Phân lập giống khiết cách cấy ria 29 3.7 Phương pháp cấy chuyền vi sinh vật 30 3.8 Phương pháp nhuộm Gram 31 3.8 Phương pháp đếm số lượng vi sinh vật buồng đếm hồng cầu 33 3.9 Bố trí thí nghiệm 35 3.9.1 Hoạt hóa kiểm tra độ khiết vi khuẩn B.natto 35 3.9.1.1 Hoạt hóa chủng vi khuẩn B.natto 35 3.9.1.2 Kiểm tra độ khiết vi khuẩn B.natto 35 3.9.2 Thí nghiệm 1: Xác định mơi trường dinh dưỡng thích hợp để ni cấy chủng vi khuẩn B.natto 35 3.9.3 Thí nghiệm 2: Xác định nhiệt độ thích hợp để ni cấy chủng vi khuẩn B.natto 36 3.9.4 Thí nghiệm 3: Xác định pH thích hợp để ni cấy chủng vi khuẩn B.natto 37 3.9.5 Thí nghiệm 4: Kiểm tra khả lên men đậu nành bột B.natto 39 Chương 4: Kết thảo luận 4.1 Hoạt hóa kiểm tra độ khiết vi khuẩn B.natto 42 4.1.1 Hoạt hóa chủng vi khuẩn B.natto 42 4.1.1.1 Kết 42 4.1.1.2 Nhận xét 42 4.1.2 Kiểm tra độ khiết vi khuẩn B.natto 43 4.1.2.1 Kết 43 4.1.2.2 Nhận xét 43 4.2 Thí nghiệm 1: Xác định mơi trường dinh dưỡng thích hợp để nuôi cấy chủng vi khuẩn B.natto 44 4.2.1 Kết thí nghiệm 44 4.2.2 Nhận xét 45 4.3 Thí nghiệm 2: Xác định nhiệt độ thích hợp để ni cấy chủng vi khuẩn B.natto 46 4.3.1 Kết thí nghiệm 46 vii 4.3.2 Nhận xét 47 4.4 Thí nghiệm 3: Xác định pH thích hợp để nuôi cấy chủng vi khuẩn B.natto 48 4.4.1 Kết thí nghiệm 48 4.4.2 Nhận xét 49 4.5 Thí nghiệm 4: Kiểm tra khả lên men đậu nành bột B.natto 50 4.5.1 Kết thí nghiệm 50 4.5.2 Nhận xét 51 Chương 5: Kết luận đề nghị 5.1 Kết luận 52 5.2 Đề nghị 53 Tài liệu tham khảo 54 Phụ lục 56 viii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT B.natto: Bacillus subtilis vae.natto VK: vi khuẩn MRS: De Man, Rogosa, Sharpe NB: Nutrient Broth YE: Yeast Extract TPCN: thực phẩm chức TB: tế bào tb: trung bình t0: nhiệt độ NGĐ: nước giá đậu TN: thí nghiệm ix Hình 4.12: Đậu nành lên men sau 48 Bảng 4.4: Bảng kết thí nghiệm kiểm tra khả lên men đậu nành B.natto dạng bột dạng nước Đậu nành lên men Thời gian quan sát 24 3% dịch vi khuẩn 3% bột vi khuẩn (3,72 x 109 TB/ml) (1,86 x 109 TB/g) Độ nhớt cao, B.natto Độ nhớt nhiều so bám nhiều lên bề mặt với bổ sung 3% dịch đậu nành, ngả vi khuẩn, đậu nành màu vàng nâu ngả sang màu vàng nâu 48 Độ nhớt cao, đậu nành Độ nhớt cao, đậu ngả sang màu vàng nành ngả sang màu nâu, có mùi hắc khó vàng nâu, có mùi hắc chịu khó chịu 4.5.2 Nhận xét Qua kết bảng 4.4 nhận thấy bột B.natto lên men bình thường cho giá trị cảm quan tốt dạng nước Vì chúng tơi nhận thấy sản xuất B.natto dạng bột giống cấp 51 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Sau trình thực đề tài chúng tơi kết luận sau:  B.natto sinh trưởng mạnh môi trường dinh dưỡng NGĐ + YE đạt mật độ đỉnh 9, 52 log(TB/ml) sau 24 nuôi cấy  B.natto sinh trưởng mạnh nhiệt độ 450C đạt mật độ đỉnh 10,08 log(TB/ml) sau 24 nuôi cấy  B.natto sinh trưởng mạnh pH = đạt mật độ đỉnh 10,24 log(TB/ml) sau 24 ni cấy  Xây dựng quy trình sản xuất bột giống vi khuẩn B.natto cấp  Kiểm tra khả lên men vi khuẩn B.natto dạng bột 52 5.2 Đề nghị  Khảo sát mức độ sinh trưởng B.natto nuôi cấy thiết bị lắc  Nghiên cứu sử dụng nguồn Yeast Extract từ bã men bia  Khảo sát mức độ sinh trưởng B.natto ni cấy điều kiện sục khí  Hồn thiện quy trình sản xuất bột vi khuẩn B.natto cấp để tìm quy trình sản xuất tối ưu 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt ThS Vương Thị Việt Hoa, 2002 Thực tập vi sinh đại cương Tủ sách Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM ThS Lê Thị Vu Lan KS Phạm Minh Nhựt, 2008 Thực tập vi sinh đại cương Đại học Kỹ Thuật Công Nghệ TP.HCM Vũ Thị Minh Đức, 2001 Thực tập vi sinh vật học Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội Phùng Thị Xuân Thường, 2009 Khảo sát khả sống sót Bacillus subtilis sản phẩm đậu nành lên men Bacillus subtilis Luận văn tốt nghiệp Khoa Công Nghệ Thực Phẩm, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM Nguyễn Đức Duy Anh, 2005 Phân lập khảo sát số đặc điểm vi khuẩn Lactobacillus acidophilus Bacillus subtilis Luận văn tốt nghiệp, Bộ môn Công Nghệ Sinh Học, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM Tống Ngọc Triêm, 2010 Tổng quan enzyme ngoại bào Bacillus subtilis Luận văn tốt nghiệp, Khoa Môi Trường Công Nghệ Sinh Học, Trường Đại học Kỹ Thuật công Nghệ TP.HCM Nguyễn Đức Lượng, 2006 Công nghệ vi sinh tập 3, Thực phẩm lên men truyền thống Nhà xuất Đại học Quốc Gia TP.HCM Lê Đỗ Mai Phương, 2004 Phân lập giám định vi khuẩn Bacillus subtilis tự nhiên, bước đầu khảo sát khả sinh enzyme amylase protease Luận văn tốt nghiệp, Trường Đại học Mở Bán Công TP.HCM Nguyễn Lân Dũng, Lê Ngọc Tú, Phạm Văn Châu La Văn Chứ, 1982 Enzyme vi sinh vật, tập Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 10 Lê Ngọc Tú, 2004 Hóa sinh công nghiệp Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 54 11 Lý Kim Hữu, 2005 Khảo sát đặc diểm vi khuẩn Bacillus subtilis tìm hiểu điều kiện ni cấy thích hợp sản xuất thử nghiệm chế phẩm Probiotic Luận văn tốt nghiệp, Khoa Chăn Nuôi Thú Y, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM 12 PGS.TS Trần Đáng, 2008 Thực phẩm chức Hội thảo quốc tế tế bào gốc dòng thực phẩm chức Flavin7, Hà Nội 13 PGS.TS Nguyễn Hữu Phúc, 1998 Các phương pháp lên men thực phẩm truyền thống Việt Nam nước vùng Nhà xuất Nông Nghiệp TP.HCM Tài liệu internet 14 http://images.google.com.vn/imgres?imgurl=http 15 http://en.wikipedia.org/wiki/Gram_staining 55 PHỤ LỤC Phụ lục 1.1: Mật độ tế bào B.natto môi trường NGĐ TN xác định môi trường dinh dưỡng thích hợp Thời gian giờ 18 24 30 42 48 Nồng độ Ống pha loãng nghiệm 10-1 10-1 10-2 10-2 10-2 10-2 10-1 Số TB 255 258 437 479 193 201 217 219 203 202 192 193 931 983 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 256,5 1,28 x 108 8,11 458,0 2,29 x 108 8,36 197,0 9,85 x 108 8,99 218,0 1,09 x 109 9,04 202,5 1,01 x 109 9,01 192,5 9,63 x 108 8,98 957,0 4,79 x 108 8,68 Phụ lục 1.2: Mật độ tế bào B.natto môi trường NGĐ + YE TN xác định mơi trường dinh dưỡng thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-1 18 10-2 24 10-2 30 10-2 42 10-2 48 10-2 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 253 259 629 607 412 504 627 697 417 478 482 455 309 269 56 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 256,0 1,28 x 108 8,11 618,0 3,09 x 108 8,49 458,0 2,29 x 109 9,36 662,0 3,31 x 109 9,52 447,5 2,24 x 109 9,35 468,5 2,34 x 109 9,37 289,0 1,45 x 109 9,16 Phụ lục 1.3: Mật độ tế bào B.natto môi trường NB TN xác định mơi trường dinh dưỡng thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-1 18 10-1 24 10-1 30 10-1 42 10-1 48 10-1 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 254 257 437 397 719 767 892 978 675 845 591 562 389 373 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 255,5 1,28 x 108 8,11 417,0 2,09 x 108 8,32 743,0 3,72 x 108 8,57 935,0 4,68 x 108 8,67 760,0 3,80 x 108 8,58 576,5 2,88 x 108 8,46 381,0 1,91 x 108 8,28 Phụ lục 1.4: Mật độ tế bào B.natto môi trường MRS TN xác định mơi trường dinh dưỡng thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-1 18 10-1 24 10-1 30 10-1 42 10-1 48 10-1 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 252 259 317 393 533 519 529 598 671 716 427 448 295 339 57 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 255,5 1,28 x 108 8,11 355,0 1,78 x 108 8,25 526,0 2,63 x 108 8,42 563,5 2,82 x 108 8,45 693,5 3,47 x 108 8,54 437,5 2,19 x 108 8,34 317,0 1,59 x 108 8,20 Phụ lục 1.5: Tổng kết số liệu TN xác định mơi trường dinh dưỡng thích hợp Mật độ tế bào B.natto môi trường khác log(TB/ml) Thời gian NGĐ NGĐ + YE NB MRS 8,11 8,11 8,11 8,11 8,36 8,49 8,32 8,25 18 8,99 9,36 8,57 8,42 24 9,04 9,52 8,67 8,45 30 9,01 9,35 8,58 8,54 42 8,98 9,37 8,46 8,34 48 8,68 9,16 8,28 8,20 Phụ lục 1.6: Bảng phân tích Anova mơi trường nuôi cấy khác lên mật độ tế bào B.natto.  One-Way Analysis of Variance -Data: TN1.Matdo Level codes: TN1.Moitruong Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 2.2424964 7474988 6.139 0030 Within groups 2.9225143 24 1217714 -Total (corrected) 5.1650107 27 58 Phụ lục 2.1: Mật độ tế bào B natto nuôi nhiệt độ 300C TN xác định nhiệt độ ni thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-1 18 10-2 24 10-2 30 10-2 42 10-1 48 10-1 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 237 278 874 954 202 208 218 252 205 196 973 986 693 759 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 257,5 1,29 x 108 8,11 914,0 4,58 x 108 8,66 205,0 1,00 x 109 9,00 235,0 1,18 x 109 9,07 200,5 1,02 x 109 9,01 979,5 4,90 x 108 8,69 726,0 3,63 x 108 8,56 Phụ lục 2.2: Mật độ tế bào B.natto nuôi nhiệt độ 370C TN xác định nhiệt độ nuôi thích hợp Thời gian Nồng độ pha lỗng 10-1 10-1 18 10-2 24 10-2 30 10-2 42 10-2 48 10-1 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 239 276 914 957 223 280 458 397 284 268 208 218 843 824 59 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 257,5 1,29 x 108 8,11 935,5 4,68 x 108 8,67 251,5 1,26 x 109 9,10 427,5 2,14 x 109 9,33 276,0 1,38 x 109 9,14 213,0 9,77 x 108 8,99 833,5 4,17 x 108 8,62 Phụ lục 2.3: Mật độ tế bào B.natto nuôi nhiệt độ 400C TN xác định nhiệt độ ni thích hợp Thời gian Nồng độ pha lỗng 10-1 10-1 18 10-2 24 10-2 30 10-2 42 10-2 48 10-2 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 240 276 981 1008 497 555 692 632 372 356 305 315 240 220 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 258,0 1,29 x 108 8,11 1002,5 5,01 x 108 8,70 526,0 2,63 x 109 9,42 662,0 3,31 x 109 9,52 364,0 1,82 x 109 9,26 310,0 1,55 x 109 9,19 230,0 1,15 x 109 9,06 Phụ lục 2.4: Mật độ tế bào B.natto nuôi nhiệt độ 450C TN xác định nhiệt độ ni thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-2 18 10-2 24 10-3 30 10-3 42 10-2 48 10-2 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 240 276 229 241 928 986 270 210 222 206 952 962 753 733 60 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 258 1,29 x 108 8,11 235 1,18 x 109 9,07 957 4,79 x 109 9,68 240 1,20 x 1010 10,08 214 1,07 x 1010 10,03 957 4,79 x 109 9,68 743 3,72 x 109 9,57 Phụ lục 2.5: Tổng kết số liệu TN xác định nhiệt độ ni thích hợp Mật độ tế bào B.natto nhiệt độ khác log(TB/ml) Thời gian t0 = 300C t0 = 370C t0 = 400C t0 = 450C 8,11 8,11 8,11 8,11 8,66 8,67 8,70 9,07 18 9,00 9,10 9,42 9,68 24 9,33 9,52 10,08 30 9,07 9,01 9,14 9,26 10,03 42 8,69 8,99 9,19 9,68 48 8,56 8,62 9,06 9,57 Phụ lục 2.6: Bảng phân tích Anova nhiệt độ nuôi cấy khác lên mật độ tế bào B.natto One-Way Analysis of Variance -Data: TN2.Matdo Level codes: TN2.Nhietdo Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 2.1506714 7168905 2.899 0458 Within groups 5.9355143 24 2473131 -Total (corrected) 8.0861857 27 61 Phụ lục 3.1 : Mật độ tế bào B.natto nuôi pH = TN xác định pH thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-1 18 10-2 24 10-2 30 10-2 42 10-2 48 10-2 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 250 265 643 712 313 351 678 646 347 332 312 253 217 203 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 257,5 1,29 x 108 8,11 677,5 3,39 x 108 8,53 332,0 1,67 x 109 9,22 662,0 3,31 x 109 9,52 339,5 1,70 x 109 9,23 282,5 1,41 x 109 9,15 210,0 1,05 x 109 9,02 Phụ lục 3.2: Mật độ tế bào B natto nuôi pH = 5,5 TN pH thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-1 18 10-2 24 10-2 30 10-2 42 10-2 48 10-2 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 237 278 993 965 573 663 996 918 832 760 379 476 286 378 62 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 257,5 1,29 x 108 8,11 979,0 4,90 x 108 8,69 618,0 3,09 x 109 9,49 957,0 4,79 x 109 9,68 796,0 3,98 x 109 9,60 427,5 2,12 x 109 9,33 332,0 1,66 x 109 9,22 Phụ lục 3.3: Mật độ tế bào B.natto nuôi pH = TN xác định pH thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-2 18 10-3 24 10-3 30 10-3 42 10-2 48 10-2 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 276 239 278 356 183 207 380 315 207 184 991 923 930 941 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 257,5 1,29 x 108 8,11 317,0 1,59 x 109 9,20 195,0 9,75 x 109 9,99 347,5 1,74 x 1010 10,24 195,5 9,78 x 109 9,99 957,0 4,79 x 109 9,68 935,5 4,68 x 109 9,67 Phụ lục 3.4: Mật độ tế bào B.natto nuôi pH = 6,5 TN xác định pH thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-1 18 10-2 24 10-2 30 10-2 42 10-2 48 10-1 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 271 244 468 537 201 258 433 329 230 262 185 215 980 934 63 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 257,5 1,29 x 108 8,11 502,5 2,51 x 108 8,40 229,5 1,15 x 109 9,06 381,0 1,91 x 109 9,28 246,0 1,23 x 109 9,09 200,0 1,00 x 109 9,00 957,0 4,79 x 108 8,68 Phụ lục 3.5: Mật độ tế bào B.natto nuôi pH = TN xác định pH thích hợp Thời gian Nồng độ pha loãng 10-1 10-1 18 10-1 24 10-2 30 10-2 42 10-1 48 10-1 Ống nghiệm 2 2 2 Số TB 237 278 382 363 971 987 276 329 227 191 968 998 714 676 Số TBtb Số TB/ml log(TB/ml) 257,5 1,29 x 108 8,11 372,5 1,86 x 108 8,27 979,0 4,90 x 108 8,69 302,5 1,51 x 109 9,18 209,0 1,05 x 109 9,02 983,0 4,92 x 108 8,69 695,0 3,48 x 108 8,54 Phụ lục 3.6: Tổng kết số liệu TN xác định pH thích hợp Mật độ tế bào B.natto pH khác log(TB/ml) Thời gian pH = pH = 5,5 pH = pH = 6,5 pH = 8,11 8,11 8,11 8,11 8,11 8,53 8,69 9,20 8,40 8,27 18 9,22 9,49 9,99 9,06 8,69 24 9,52 9,68 10,24 9,28 9,18 30 9,23 9,60 9,99 9,09 9,02 42 9,15 9,33 9,68 9,00 8,69 48 9,02 9,22 9,67 8,68 8,54 64 Phụ lục 3.7: Bảng phân tích Anova pH ni cấy khác lên mật độ tế bào B.natto One-Way Analysis of Variance -Data: TN3.Matdo Level codes: TN3.pH Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 3.4785143 8696286 3.120 0293 Within groups 8.3613429 30 2787114 -Total (corrected) 11.839857 34 65 ... iii Abstract iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắc ix Danh sách hình x Danh sách bảng xi Chương 1: Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề... chứa 4,2 megabase, xấp xỉ 4.110 gen Trong số đó, có 192 gen khơng thể thi u được, 79 gen dự đoán thi t yếu Phần lớn gen thi t yếu có liên quan với q trình trao đổi chất tế bào 2.1.3.6 Bào tử... có diện Bacillus subtilis với số lượng lớn gây cạnh tranh dinh dưỡng, cạnh tranh không gian sống vi khuẩn nấm - Do vi khuẩn phát triển nhanh (trong 24 giờ) sử dụng phần lớn chất dinh dưỡng môi