Quytrìnhtạodònggenemãhóacho NA viruscúmA (influenza H5N1) (mã số genbank AB741568.1) vào vi khuẩn E.coli E coli BL21 sử dụng plasmid pMAL-c2 Mở đầu (giới thiệu) Gen HAmãhóacho hemagglutinin, kháng nguyên glycoprotein tìm thấy bề mặt virut cúm buộc viruscúm vào tế bào bị nhiễm Mục đích chuyển gen để tạo vắcxin tái tổ hợp trị cúm h5n1 I.CHUẨN BỊ ĐOẠN GEN CẦN TẠO DÒNG: I.1 THU NHẬN mRNA mãhóacho NA ( cách thu mẫu) Thu nhận RNA tổng số (phương pháp, quy trình) Thu nhận mRNA (các phương pháp, quytrình cụ thể) I.2 Phản ứng RT-PCR khuếch đại mRNA tinh RT-PCR Thiết Kế mồi (Dựa vào trình tự gen mãhóacho NA genbank với mã số AB741568.1 với độ dài 588bp mãhóacho 195 aa Sử dụng phần mềm NEBcutter V2.0 có vị trí cắt RE cắt đoạn gen sau:) Quytrình Tinh DNA II.CHUẨN BỊ DNA PLASMID ĐỂ TẠO DÒNG: II.1 CHUẨN BỊ DNA PLASMID VÀ TẾ BÀO E COLI TẠO DỊNG: Mơi trường ni cấy vi sinh vật: Quytrình ni cấy tăng sinh E coli BL21: Quytrìnhtạo tế bàokhả nạp: Biến nạp phương pháp xử lý với CaCl2 sốc nhiệt: II.2 CHIẾT TÁCH VECTOR pMAL-c2 RA KHỎI TẾ BÀO SAU KHI ĐÃ TĂNG SINH: II.3 TINH SẠCH DNA PLASMID III TẠO DNA TÁI TỔ HỢP III.1 XỬ LÝ DNA PLASMID TẠO ĐẦU DÍNH BẰNG: III.2 XỬ LÝ DNA PLASMID TẠO ĐẦU DÍNH Dính: IV PHẢN ỨNG GHÉP TẠO DNA TÁI TỔ HỢP: Quytrình gắn nhóm P đầu 5’ vector: Phản ứng ghép nối: Quytrình nối ghép gen: V BIẾN NẠP DNA TÁI TỔ HỢP VÀO VI KHUẨN E COLI BL21: VI.CHỌN LỌC CÁC TẾ BÀO CÓ MANG DNA TÁI TỔ HỢP: ... Tinh DNA II.CHUẨN BỊ DNA PLASMID ĐỂ TẠO DÒNG: II.1 CHUẨN BỊ DNA PLASMID VÀ TẾ BÀO E COLI TẠO DỊNG: Mơi trường ni cấy vi sinh vật: Quy trình ni cấy tăng sinh E coli BL21: Quy trình tạo tế... pháp xử lý với CaCl2 sốc nhiệt: II.2 CHIẾT TÁCH VECTOR pMAL-c2 RA KHỎI TẾ BÀO SAU KHI ĐÃ TĂNG SINH: II.3 TINH SẠCH DNA PLASMID III TẠO DNA TÁI TỔ HỢP III.1 XỬ LÝ DNA PLASMID TẠO ĐẦU DÍNH BẰNG:... III.2 XỬ LÝ DNA PLASMID TẠO ĐẦU DÍNH Dính: IV PHẢN ỨNG GHÉP TẠO DNA TÁI TỔ HỢP: Quy trình gắn nhóm P đầu 5’ vector: Phản ứng ghép nối: Quy trình nối ghép gen: V BIẾN NẠP DNA TÁI TỔ HỢP VÀO