XÁC ĐỊNH độ NHẠY và độ đặc HIỆU của ELISA PHÁT HIỆN KHÁNG NGUYÊN TRONG CHẨN đoán BỆNH NGƯỜI NHIỄM ấu TRÙNG sán lợn

BAO CAO TONG KET DE TAI NGHIEN CUU KHOA HOC CAP QUAN LY DE TAI: CAP VIEN Tén dé tai: XÁC ĐỊNH ĐỘ NHẠY VÀ ĐỘ ĐẶC HIỆU CỦA ELISA PHÁT HIỆN KHANG NGUYEN TRONG CHAN DOAN BENH NGUOI NHIEM AU TRUNG SAN LON Chu nhiém dé tai: BS Đăng Cẩm Thạch Cơ quan chủ trì: Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương Ha Noi — 2004 BO Y TE VIỆN SỐT RÉT-KÝ SINH TRÙNG-CÔN TRÙNG-TRUNG ƯƠNG Bao cdo dé tai XÁC ĐỊNH ĐỘ NHẠY VÀ ĐỘ ĐẶC HIỆU CỦA ELISA PHÁT HIỆN KHÁNG NGUYÊN TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH NGƯỜI NHIEM AU TRUNG SAN LON Chủ trì đề tài : Bs Đặng Thị Cẩm Thạch Người thực hiện: CN Nguyễn Bá Nền, Bs Vũ Thị Nhung, NguyễnThiên Hương, Đoàn Thị Hạnh Nguyên, Phạm Thị Lã Cấp quản lý: Viện sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng-Trung ương Hà Nội tháng năm 2003 1.ĐẶT VẤN ĐỀ : Bệnh ấu trùng sán lợn bệnh lan truyền chung người động vật Bệnh phân bố giải rác khắp nơi phổ biến địa phương có tập quán ăn thịt lợn sống, tái Bệnh chẩn đoán xác định qua sinh thiết nang sán đa Song, trường hợp nang cư trú não quan khác thực khó chẩn đốn phát chẩn đốn phương pháp chẩn ' đốn hình ảnh(CT scan sọ não) Nhưng phương pháp đắt tiền nang thực khó phát khơng nằm lớp cắt nhìn thấy phim Như phương pháp chẩn đốn huyết học có độ nhậy độ đặc hiệu cao giải vấn đề khó khăn chẩn đốn bệnh Nghiên cứu xác định kháng thể bệnh ấu trùng sán lợn sử dụng kháng ngun thơ (Kháng ngun tồn phần) để phát kháng thể bệnh ấu trùng sán lợn cho độ nhạy cao 81-94%[2] cho kết phản ứng chéo với loại sán khác Ngày với nghiên cứu thử nghiệm chẩn đoán ELISA Bắc Ninh sơ đánh giá kết xét nghiệm ELISA để tìm kháng nguyên nang sán lưu hành 210 người lựa chọn ngẫu nhiên thôn Tỳ Điện, huyện Lương Tài, tỉnh Bắc Ninh, 12 người có kết đương tính [3] Nghiên cứu cho thấy vai trò xét nghiệm Ag- ELISA phương tiện hữu ích nghiên cứu dịch tễ chẩn đoán bệnh nhiễm ấu trùng sán lợn người Với lý đo trên, nghiên cứu cần phải tiến hành nhiều đối tượng để khẳng định kết kỹ thuật Mục tiêu chung: Để phát triển đánh giá kỹ thuật chẩn đoán xác định sán lợn trưởng thành Taenia va bénh 4u tring sán lợn nhằm hỗ trợ cho chương trình quốc gia phịng chống bệnh giun sán Muc tiéu cu thé: Đánh giá kỹ thuật ELISA chẩn đoán nhiễm ấu trùng sán lợn phương pháp xác định kháng nguyên lưu hành máu Xác định tỷ lệ nhiễm sán dây trưởng thành nhóm bệnh nhân nhiễm ấu trùng sán lợn nhóm chứng PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚU 2.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Tiêu chẩn chọn đối tưọng nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu gồm hai nhóm lựa chọn với tiêu chuẩn sau : Nhóm (1): gồm 100 bệnh nhân mắc bệnh ấu trùng sán lợn chẩn đốn xác định chụp CT não có hình ảnh tổn thương bệnh ấu trùng sán lợn sinh thiết nang da có thấy ấu trùng sn Số bệnh nhân điều trị nội trú khoa Khám bệnh chuyên ngành Nhóm (2) : gồm 100 bệnh nhân chụp CT scan não kết khơng có hình ảnh tến thương đạng ấu trùng sán lợn khơng có nang da 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ: Nhóm (1) Nhóm bệnh nhân: Những bệnh nhân mắc ấu trùng sán lợn có kết sinh thiết nang âm tính | khơng có nang sán não, Những bệnh nhân có nang sán vơi hố hồn tồn Nhóm (2)Nhóm chứng: - Những bệnh nhân có hình ảnh nghỉ ấu trùng sán lợn não - Xét nghiệm phân có trứng sán day 2.2 Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu phân tích đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu kỹ thuật ELISA phát kháng nguyên ấu trùng sán lợn huyết người 2.3 Chất liệu nghiên cứu: - Huyết bệnh nhân; Huyết đối chứng dương; huyết đối chứng âm - Phân tươi - _ Hồ sơ bệnh án đối tượng nghiên cứu (Phụ lục]) 2.4 Thiết bị nghiên cứu: - Kính hiển vi soi kí sinh trùng - Máy khuấy từ - Tủ ấm - Tủ sấy 115 °C; máy chuẩn PH - Máy nước cất 02 lần - Máy ly tâm 12.000 vòng/ph - Pipett man 20u1, 1000u1 Pipett Effendor 1000 mi loại 01 kênh; kênh; 12 kênh - ống effendor 1,5ml, giá đựng ống cffendor, đầu côn loại, giá đựng đầu côn - Đĩa làm phản ứng 2.5 Thuốc hoá chất: - Hoá chất xét nghiệm phân: dd Glyceril; Xanh malachite 3% - Bo kit lamELISA phat hién kháng nguyên ấu trùng sán lợn gồm: + Khang thé don dong Mab Mab Viện Nhiệt đới Bỉ cung cấp + Hoá chất khác: Cacbonat-Bicarbonate buffer; BPS; Tween 20 ;H,O;; dung dich H,SO, - Thuốc Praziquantel viên 600mg hãng Shingpoong- Hàn Quốc sản xuất OPD; - Thuốc magiesulfate loại bột đóng 30gr/gói 2.6 Kỹ thuật nghiên cứu 2.6.1 Thăm khám lâm sàng: - Bệnh nhân khám lâm sàng theo mẫu bệnh án 2.6.2 Sinh thiết nang, tìm ấu trùng sán để chẩn đoán xác định 2.6.3 Kỹ thuật chụp CT não : Chụp cắt lớp não vi tính ghi nhận kết 12 lớp cắt 2.6.4 Kỹ thuật xét nghiệm phân: phương pháp Kato-Katz chuẩn WHO 2001 2.6.5 Phương pháp điều trị Praziquantel liều 15mg/kg ngày đầu Sau uống magiesulfate 30 gr để tẩy đãi sán - Liệu trình điều trị: Praziquantel liều 30mg/kg/24h 15 ngày 2.6.6 Kỹ thuật ELISA Nguyên tắc phản ứng: Dùng hai loại kháng thể đơn dòng để phát kháng nguyên huyết bệnh ấu trùng sán lợn Kỹ thuật tiến hành: theo nguyên tắc phản ứng huyết học: Phủ kháng thể 1- kháng nguyên- Kháng thể 2- dùng phản ứng 2.7 Các số đánh giá - Xác định tỷ lệ nhiễm sán dây trưởng thành - So sánh kết chụp CT não kết ELISA - Đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu xét nghiệm Ag- ELISA theo công thức Độ nhậy độ đặc hiệu xét nghiệm Ag-ELISA tính sau xác định số lượng dương tính giả (FP) âm tính giả (EN) dương tính thật (TP) âm tính thật (TN) theo cơng thức chuẩn sau a) & b): 3.1.1 Ag-ELISA 3.1.2 CT-Scanner +/- Sinh thiết Tổng cộng âm tính dương tính dươngtính | TP(dươngtínhthậ) | FP(duong tinh giả) | Ag-ELISA (+) Tổng cộng a) Độ nhậy De (a) ay = TN (âm tính thật) EN (âm tính giả) âm tính | Ag-ELISA Tổng số cá thể Nhóm chứng | Bệnh nhân ấu trùng (200) (100) sán lợn (100) (-) TP TP + EN (b) Độ TTđặc hiệu = —TN +F FP 2.8 Địa điểm nghiên cứu: - _ Khoa khám bệnh chuyên ngành - _ Viện Thú Y Quốc gia - _ Trung tâm chẩn đốn hình ảnh quận Đống Da 2.9.Thời gian tiến hành nghiên cứu: Tháng 2năm 2002- năm 2003 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Đánh giá tỷ lệ nhiễm sán dây trưởng thành Tổng số Có sán trưởng | Tỷ lệ (%) thành Nhóm bệnh nhân | 75 6,7 Nhóm chứng 75 0 Cong 150 Tổng số bệnh nhân xét nghiệm ELISA : 125 Trong 75 bệnh nhân chẩn đốn xác định sinh thiết nang sán chụp CitiScaner não Số bệnh nhân nhiễm ấu trùng sán lợn có sán trưởng thành: 5/75 chiếm 6,5 % Khơng tìm thấy sán trưởng thành 75 trường hợp nhóm chứng 3.2 Kết xét nghiệm ELISA theo vi tri nang sán Ag- ELISA | BN có nang da | BN có nang da|Bn Tổng số | Tỷ lệ(%) | Tổng số | Tỷ lệ(%) 21,3 Dương tinh | 16 Ẩm tính Cong 20 Téng cong 75 5,3 nang đơn não não đơn có | Tổng số | Tỷ lệ (%) 32 42,6 10 13,3 26,6 11 14,6 21 34 Nhận xét: Trong tổng số 75 bệnh nhân nhiễm ấu trùng sán lợn xét nghiệm để chẩn đốn phát Ag-ELISA có tỷ lệ dương tính cao (42,6%) nhóm bệnh nhân có nang não đa Tỷ lệ xét nghiệm đương tính 20% nhóm bệnh nhân có nang sán đưới da đơn Nhóm có kết xét nghiệm dương tính thấp (13%) nhóm bệnh nhân có nang não 3.5 Kết xét nghiệm ELISA bệnh nhân có ấu trùng sán lợn ký sinh đơn đưới da não SL Két qua ELISA nang Nang da đơn n (+4) Nang não đơn |% {1C |% 45 In (4) |}% |) |% 28,6 |5 71.4 75 25 40 1-3 55 4-10 100 {0 >10 2 100 10 10 60 Cộng |20 16 80 21 11 52,4 | 10 20 47,6 Nhận xét : Các trường hợp nhiễm ấu trùng sán lợn đơn não da với số lượng khác cho kết ELISA khác theo nhóm Với số lượng nang da đơn nhóm từ 1- nang ELISA dương tính 5/9 = 55%; nhóm có từ nang trở lên ELISA dương tính 11/11=100% Tuy nhiên với nhóm bệnh nhân có nang sán não đơn có kết ELISA thấp hơn: nhóm 1-3 nang đương tính 2/7 = 28%; nhóm 4-10 nang dương tính 3/1 =75 % nhóm > 10 nang dương tính 6/10 =60% 3.3.Kết Độ nhậy độ đặc hiệu xét nghiệm Ag-ELISA Ag-ELISA CT-Scanner+/- Sinh thiết Dương tính dương tính thật duong tinh gia =| Ag-ELISA (+) = 57 âm tính giả = 18 âm tinh that = 75 {| Ag-ELISA Am tinh Tổng cộng 57 (-) = 93 Tổng cộng Bệnh nhân ấu|Nhóm chứng =| 150 trùng sán lợn = 75 | 75 57 (a) Độ nhậy = —— XÌI0OU =76% x 100 = 100% 57+ 18 75 (b) Độ đặc hiệu = = = =—— 75 +0 Nhận xét: Kết độ nhạy xét nghiệm 76%; độ đặc hiệu 100% Không thấy có tượng phản ứng chéo bệnh nhân nhiễm sán khác 4 BAN LUAN: Nghiên cứu đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu xét nghiệm chẩn đoán bệnh ấu trùng sán lợn phương pháp Ag- ELISA tiến hành 125 bệnh nhân 75 bệnh nhân chấn xác định có mắc bệnh ấu trùng sán lợn dựa kết chẩn đoán sinh thiết nang tìm kén sán chụp CT não tìm thấy hình ảnh kén sán não; 75 bệnh nhân có biểu triệu chứng lâm sàng bệnh thần kinh kết chụp CT —Scanner khơng có hình ảnh kén ' sán não Kết nghiên cứu cho thấy: - Tỷ lệ bệnh nhân mắc bệnh ấu trùng sán lợn có tìm thấy sán trưởng thành phân 5/75 (6,7%) 5/5 trường hợp có thời gian mắc bệnh năm Kết phù hợp với kết nghiên cứu Đoàn hạnh nguyên [1] - Kết xét nghiệm phát kháng nguyên ấu trùng sán lợn phương pháp ELISA cho thấy độ nhạy xét nghiệm 76% độ đặc hiệu 100% Phân tích trường hợp xét nghiệm có kết ELISA dương tính có 42,6 % trường hợp có kén não da; 20% trường hợp có kén sán da đơn 13% trường hợp có kén sán não đơn Tuy nhiên trường hợp âm tính giả cịn phụ thuộc vào số lượng kén sán có người, vị trí kén ký sinh da hay não So sánh kết ELISA nhóm trường hợp có số lượng nang sán tương đương cho thấy kết xét nghiệm nhóm có nang da cao so với nhóm có nang não điều phù hợp với vị trí ký sinh nang dẫn đến phân bố lượng kháng nguyên hoà tan ấu trùng sắn mấu khác So sánh độ nhạy (76%) xét nghiệm Ag-ELISA ấu trùng sán lợn nghiên cứu thấp độ nhạy xét nghiệm phát Ab-ELISA ấu trùng sán lợn sản xuất kháng nguyên toàn phần [2] Nhưng xét độ đặc hiệu (100%) nghiên cứu chứng tỏ phản ứng chéo với loại giun, sán khác Điều gợi ý cho nghiên cứu đánh giá theo dõi diễn biến bệnh xét nghiệm Ag-ELISA phát nồng độ kháng nguyên máu bệnh nhân khả quan so với phương pháp ELISA phát kháng thể ấu trùng sán lợn với kit sản xuất kháng nguyên thô Việt Nam KIẾN NGHỊ : Xét nghiệm chẩn đoán bệnh ấu trùng sán lợn phương pháp Ag- ELISA có độ nhạy độ đặc hiệu cao, đặc biệt trường hợp bệnh nhân nhiễm ấu trùng sán lợn có kén sán phối hợp người trường hợp nhiễm đơn người Tuy nhiên số lượng 150 bệnh nhân nhóm cịn hạn chế cần hồn chỉnh kỹ thuật xét nghiệm với số lượng bệnh nhân lớn nghiên cứu cần mở rộng vùng có dịch tế nhiễm sán dây cao để sớm chẩn đốn bệnh ấu trùng sán lợn, bệnh mang tính nguy hiểm cho tính mạng bệnh nhân TÀI LIỆU THAM KHẢO Đoàn Thị Hạnh Nguyên Điều trị bệnh ấu trùng sán lợn Albendazol (2001) Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học 1996-2000 Nhà xuất Y học, Hà Nội, Tr 642-644 Phạm Trí Tuệ Đánh giá hiệu áp dụng kỹ thuật miễn dịch để chẩn đoán số bệnh kí sinh trùng(1997) Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học (1991-1996) Nhà xuất Y học, Hà Nội, Tr 100-108 Erhart A., Dorny P., De N.V., Vien H.V., Thach D.C., Toan N.D., Cong L.D., Geerts S., Speybroeck N., Berkvens D., Brandt J Taenia cysticercosis in a small village in Northern Vietnam: solium Sero-prevalence Study using an ELISA for detecting circulating antigen Transaction of the Royal Society of Tropical Medicine Ngày 21 thang nam 2003 Chủ tịch hội đồng nghiệm thu Chủ trì đề tài gym — TS Nguyễn Mạnh Hùng Bs Đặng Thị Cẩm Thạch Ngày AS arg ram Viện trưởng Viện Sốt Rét Ký sĩ Côn trùng Trung ương Oe tte, Ẩ 4# ST giÌ\ [RY Suet TRUNGL tN CGN TRBNG fF US TAUNG MONG oN `" on A pa” z Are ... nhậy độ đặc hiệu cao giải vấn đề khó khăn chẩn đoán bệnh Nghiên cứu xác định kháng thể bệnh ấu trùng sán lợn sử dụng kháng ngun thơ (Kháng ngun tồn phần) để phát kháng thể bệnh ấu trùng sán lợn. .. xuất kháng nguyên thô Việt Nam KIẾN NGHỊ : Xét nghiệm chẩn đoán bệnh ấu trùng sán lợn phương pháp Ag- ELISA có độ nhạy độ đặc hiệu cao, đặc biệt trường hợp bệnh nhân nhiễm ấu trùng sán lợn có... bệnh nhân nhiễm sán khác 4 BAN LUAN: Nghiên cứu đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu xét nghiệm chẩn đoán bệnh ấu trùng sán lợn phương pháp Ag- ELISA tiến hành 125 bệnh nhân 75 bệnh nhân chấn xác định