Nghiên cứu tái sinh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)

Nghiên cứu tái sinh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tái sinh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tái sinh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tái sinh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tái sinh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu tái sinh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)

I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM tài: (Polyscias fruticosa (L.) Harms) IN VITRO KHÓA LU N T T NGHI H o Chuyên ngành Khoa Khoá h c : Chính quy : Cơng ngh sinh h c : CNSH & CNTP : 2011 - 2015 Thái Nguyên, 2015 IH C I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM tài: (Polyscias fruticosa (L.) Harms) IN VITRO KHÓA LU N T T NGHI IH C H o : Chính quy Chun ngành : Cơng ngh sinh h c Khoa : CNSH & CNTP Khoá h c : 2011 - 2015 Gi ng d n: i Lâm Khoa CNSH & CNTPVi n Khoa h c S S ng - Thái Nguyên, 2015 i L IC c s nh t trí c a Ban giám hi ng, Ban ch nhi m Khoa Công ngh Sinh h c Công ngh Th c ph m, Vi n khoa h c s s ti tài: (L.) Harms) ch (Polyscias fruticosa t i Phòng thí nhi m ng cao b ng k thu nuôi c y mô c a B môn Công Ngh T Bào thu c Vi n Khoa h c S S ng thu i h c Nông Lâm Thái Nguyên Hi tài t t nghi iH hc c k t qu ng, Ban ch nhi m khoa th y cô B môn Công ngh T bào th y cô b u ki em th i gian qua il ic c t i: n tình ch b ng d n em th i gian th c hi Cu i cùng, em xin chân thành c t tài t u ki n v v t ch t tinh th n cho em trình h c t p nghiên c u Do th i gian th c hi tài có h nh ng sai sót Em r t mong nh b tài c cs tài không th tránh kh i n c a th y c hồn thi Em xin chân thành c Sinh viên th c hi n ii DANH M C CÁC B NG Trang B ng thông d c s d ng nuôi c y mô t bào th c v t 19 B ng 2.2 B n lo ng dùng 20 B ng 4.1 K t qu ng c a th i gian kh trùng b ng dung d ch H2O2 (5 n hi u qu vô trùng m u c y 31 B ng 4.2 K t qu ng c a th i gian kh trùng s d ng viên kh trùng n hi u qu kh trùng m u c y 33 B ng 4.3 K t qu ng c a th (0,1%) 34 34 B ng 4.4 K t qu ng c n hi u qu tái sinh ch i 36 B ng 4.5 K t qu ng c n hi u qu tái sinh ch i 38 B ng 4.6 K t qu ng c a s k t h p gi n hi u qu tái sinh ch i 40 B ng 4.7 K t qu ng c a s k t h p gi n hi u qu tái sinh ch i 42 iii DANH M C CÁC HÌNH Trang Hình 4.1 Bi th hi n k t qu dung d ch H2O2 (5 Hình 4.2 Bi ng c a th i gian kh trùng b ng n hi u qu vô trùng m u c y th hi n k t qu ng c a th i gian kh trùng s d ng viên kh n hi u qu kh trùng m u c y 33 Hình 4.3: Bi HgCl2 th hi n k t qu ng c a th i n hi u qu vô trùng m u c y 35 Hình 4.4 Bi th hi n k t qu ng c n hi u qu tái sinh ch i 37 Hình 4.5 ng c a k Cơng th Hình 4.6 Bi n hi u qu tái sinh ch Hình A: i ch ng, Hình B: Cơng th c 38 th hi n k t qu ng c n hi u qu tái sinh ch i 39 Hình 4.7 ng c Cơng th Hình 4.8 Bi n hi u qu tái sinh ch i ch ng, Hình B: Công th c 40 th hi n k t qu ng c a s k t h p gi a BAP n hi u qu tái sinh ch i 41 Hình 4.9 ng c Cơng th Hình 4.10 Bi n hi u qu tái sinh ch i ch ng, Hình B: Cơng th c 42 th hi n k t qu ng c a s k t h p gi a BAP n hi u qu tái sinh ch i 43 Hình 4.11 Cơng th ng c n hi u qu tái sinh ch i ch ng, Hình B: Cơng th c 44 iv DANH M C CÁC T , C M T VI T T T Cs : C ng s CT : Công th c CV : Coeficient of Variation LSD : Least Significant Difference Test Kinetin : Furfurylaminopurine BAP : Best Absolute Perfect IAA : Indole-3- lacetic acid IBA : Indole-3-butyric acid NAA : -naphthaleneaceticd i ch ng B1 : Thiamin B2 : Ribonavin B6 : Pyridoxien 2,4D : 2,4-diclorophenoxy axetic acid C : Acid ascorbic MS : Murashige and skoog TDZ : Thidiazuron WPM : Woody Plant Medium GA3 : Gibberellin v M CL C Trang PH N 1: 1.1 1.2 tài 1.3 tài 1.4 1.4.1 1.4.2 PH N 2: T NG QUAN TÀI LI U 2.1 Gi i thi u chung v m th c v t h c c 2.1.2 Ngu n g c phân b 2.1.3 Giá tr c 2.1.4 Saponin 2.2 Tình hình nghiên c 2.3 Khái ni c 10 khoa h c c a nuôi c y mô t bào th c v t 10 c l ch s nuôi mô t bào th c v t 10 2.3.2 khái ni m v nuôi c y mô t bào th c v t 12 2.3.3 T m quan tr ng c a nuôi c y mô t bào th c v y 13 khoa h c c a nuôi c y mô t bào th c v t 14 2.4 M t s y u t n nuôi c y mô t bào th c v t 16 2.4.1 V t li u nuôi c y 16 u ki n nuôi c y 17 2.4.3 Thành ph ng nuôi c y 17 n ni c y mơ t bào th c v t 23 PH N 3: N P NGHIÊN C U 25 vi 3.1.V t li u, hóa ch t thi t b nghiên c u 25 3.1.1 V t li u nghiên c u 25 3.1.2 Hóa Ch t 25 3.1.3.Thi t b 25 m th i gian nghiên c u 25 m nghiên c u 25 3.2.2 Th i gian nghiên c u 25 3.3 N i dung nghiên c u 25 u 26 3.4.1 N i dung 1: Nghiên c u qu vô trùng m ng c a m t s ch t kh u 26 3.4.2 N i dung 2: Nghiên c u ng c a m t s ch n hi u qu tái sinh ch u ti t sinh g 28 3.5 X lý s li u 30 PH N 4: K T QU NGHIÊN C U 31 4.1 K t qu ng c a m t s ch t kh n hi u qu vô trùng m u 31 4.1.1 K t qu ng c a th i gian kh trùng b ng dung d ch H2O2 (5%) n hi u qu vô trùng m u 31 4.1.2 K t qu ng c a th i gian kh trùng s d ng viên kh trùng n hi u qu kh trùng m u c y 33 1.3 K t qu ng c a th (0,1%) 34 4.2 K t qu c a m t s ch n hi u qu tái sinh ch i 36 4.2.1 K t qu ng c n hi u qu tái sinh ch i 36 4.2.2 K t qu ng c n hi u qu tái sinh ch i 38 vii 4.2.3 K t qu ng c a s k t h p gi n hi u qu tái sinh ch i 40 4.2.4 K t qu ng c a s k t h p gi n hi u qu tái sinh ch i 42 PH N 5: K T LU N VÀ KI N NGH 45 5.1 K t lu n 45 5.2 Ki n ngh 45 O 46 I Tài li u ti ng Vi t 46 II Tài li u ti ng Anh 48 PH N 1.1 Cây Polyscias fruticosa (L.) Harms, thu c h t n ( , 2004) [17] ng ct , thu c h Ariliaceae, chi Polyscias Forst Forst.f, chi g n 100 loài th gi i phân b r i rác vùng nhi nhi u nh t i cân nhi i, Huy Bích cs, 2004) [1] u loài thu tr nh nh (Polyscias fruticosa (L.) Harms c dân gian s d ng r ng rãi làm thu ng não t r ng s c kh e ho t huy i( , 1999) [6] (Nguy n Ng c Dung, 1998) [4] Cây n, (Ph m Th T Liên cs, 2007) [12] , a 20 acid amin lo i acid amin không thay th tryptophan, cysteine (Ngô r c c b nh ng Long, 1985) [15] Nhi u nghiên c u cho th y có ch a nhi u ch t có tác d ng b i b s c kho ch a c bi t, trong nhân sâm ( 1961, inh a h p ch , 2013) [20] , 1964 cho th , 43 Ghi chú: (+) ch (+++) ch ng ch i x u; (++) ch ng ch i trung bình; ng ch i t t; ns: s Hình 4.10 Bi sai khác th hi n k t qu ng c a s k t h p gi a BAP n hi u qu tái sinh ch i K t qu nghiên c u sau 30 ngày cho th y, b xung IBA thêm vào ng nuôi c y v i n m u b t ch n t 0,1 mg/l lên 0,2 mg/l t l n 96,67% h s b t ch l n lên 3,27 l n IBA lên 0,3 mg/l ng 2,90 0,4mg/l t l m u b t ch i gi m t 96,67% xu ng 90% h s b t ch i t l n xu ng 2,73 l n, t l m u b t ch i công th c v i n 0,3mg/l 96,67% b ng v i t l m u b t ch i c a công th c nh b t ch i c a công th c l n th IBA s i h s b t ch i c a công th c i in vitro cơng th c công th c 3,27 l n V i m t t nh t thí nghi m cho t l m u b t ch 3,27 l n cao nh t thí nghi m, ch m p S m so v i i ch ng t 96,67% h s b t ch i ng t t, ch i xanh, thân 44 Hình A Hình 4.11 ng c A: Cơng th Hình B n hi u qu tái sinh ch i ch ng, Hình B: Công th c 45 PH N K T LU N VÀ KI N NGH 5.1 K t lu n Kh trùng m u b ng HgCl2 n hi u qu nh t cho m 0,1 th i gian 15 phút o v t li u kh u y mô ng MS + saccarose 30g/l + inositol 100 mg/l + agar 6,5g/l + BAP 1,5 mg/l + IBA 0,2 mg/l; Ph = 5,8 thích h p nh t cho tái sinh ch cho h s b t ch t 96,67% h s b t ch t 3,27 l n 5.2 Ki n ngh C n nghiên c u thêm sung k t h p gi ng c ng nuôi c y b c d a, d ch chi t khoai tây d ch chi t cà r t n kh i Nghiên c u ng c a m t s ch n kh ch i Nghiên c u ng c a m t s ch t h chi t n m men, d ch chi t chu Nghiên c u n kh nhan nhanh ch ng r giá th thích h ch 46 I Tài li u ti ng Vi t y ng c L , Ph m Duy Mái,Ph n T p, Tr n Toàn (2004), Cây thu ng v t làm thu c, T p I, Nxb Khoa h c K thu t, Trang 793-796 Ngơ Xn Bình, Bùi B o Hồn, Nguy n Thúy Hòa (2003), Giáo trình cơng ngh sinh h c Nxb Nông nghi p Hà N i Lê Tr n Bình, H H u Ngh , Lê Th Mu i (1997), Công ngh sinh h c th c v t c i ti n gi ng c y tr ng, Nxb Nông nghi p, Hà N i Nguy n Ng c Dung (1998 f ng t o phôi soma c y in-vitro Trung tâm Khoa h c T nhiên Công ngh Qu c gia, Vi n Sinh h c Nhi i, Nxb Nông nghi p Tp.HCM, Trang 442-445 X lý k t qu thí nghi m máy tính b ng Ph m Ti IRRISTAT 4.0 Windows, NXB Nông Nghi p (1999), Quy n II, , Nxb Tr , Trang 516- 518 Tr n Hùng (2003), B c li u ch Saponin, Giáo trình th c t c li Nguy n Th c li u, c Tp H Chí Minh Trang 26 33 n Th u tác d ng b o v gan c Polyscias fruticosa L Harms d ch tác d ng ch T c li u, T p 6, (S 1), Trang 26-33 Nguy n Th d ch, Nguy n Th i Nhân (2001), Tác c lý cao toàn ph n chi t xu t t r 47 fruticosa L Harms Araliacea), Cơng trình Nghiên c u khoa h c 19872000 Vi c Li u Nxb Khoa hH c K Thu t Trang 241-244 10 Nguy Giáo trình ch uy u ng th c v t, Nxb Giáo d c Vi t Nam ng, Tr n Th Triêu Hà (2008), Giáo 11 Tr n Th L trình Cơng ngh sinh h c th c v t, Nxb Nông nghi p, Hà N i 12.Ph m Th T Liên, Võ Th B ch Ma u nghiên c u s t o Polyscias fruticosa L Harms d ch treo t T p chí phát tri n KH&CN, t p 10, (s 07) 13.Tr n Th Liên, Nguy Thanh Nhàn (2005), Polyscias fruticosa L Harms in b vitro T p trí Nơng nghi p Phát tri n nông thôn, (S 14), trang 35- 40 14 24 Quách Th Liên, Nguy nuôi c y mô s u ki n thu sinh kh i t T p trí sinh h c, T p 26, (S 2), Trang 41-46 15.Ngơ c sinh thích nghi c a Polycias frusticosa L Harms T c li u, T p 2, (S 1), Trang 24-27 16 24 Nguy n Hoàng L c (2006), Giáo trình cơng ngh t bào, Nhà xu t b 17 i h c Hu , TP Hu (2004), Nh ng , Trang 828-830 18 Tr n Công Lu Phân l u trúc h p ch t cias Fruticosa (L.) Harms , T p 48 19 Tr n Công lu n cs (2000), u sàng l c thu c thu c Báo cáo h nhân sâm (Araliaceae) có tác d ng ch t ng k tài nghiên c u khoa h c, B Y T 20 t s bi n pháp k thu u qu nhân gi ng, C a T p chí Khoa h c Phát tri n 2013, T p 11, (s 2), 168-173 21 Nguy n Kim Thanh, Nguy n Thu n Châu (2005), Giáo trình sinh lý h c th c v t, Nxb Giáo d c, Hà N i 22.Nguy c Thành (2002), Nuôi c y mô t bào th c v t nghiên c u ng d ng, Nxb Nông nghi p Hà N i 23.Nguy n Quang Th ch (2005) Giáo trình cơng ngh sinh h c Nơng nghi p, Nxb Nơng nghi p Hà N i Hóa H c saponin 24 iH cY c Tp-HCM, Trang 194 25 B u v s phát sinh hình thái ni c y in T p trí Phát tri n Khoa h c Công ngh i h c Qu c gia TP H Chí Minh, T p 8, (s 11), trang 47-51 26 nh (2007), Công ngh t bào th c v t ng d ng, Nxb Nông nghi p, Hà N i 27 , Nguy n M ng Hùng, Lê H p (2009), Công ngh sinh h c t p - Công ngh sinh h c t bào, Nxb Giáo d c II Tài li u ti ng Anh 28 Vo D H., Yamamura, S., Ohtani, K., Kassai, R., Yamasaki, K., Nguyen, T.N., Hoang, M.C (1998) Oleanaae Saponins from Polysias Frutisoca Phytochemistry, Vol 29, No 12 2472 49 29 Wenck A R., Conger B V., Trigiano R N., and SamsC E (1988) Inhibitionof somatic embryogenesis in Ochardgrass by endogenenous cytokinins Plant Physiol, 88, pp 900-992 30 RH Smith (2005) Plant Tissue Culture: Techniques and Experiments 2ndedn Elsevier Publishers, New Dalhi 31 Murashige, T and Skoog, F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissu culture Physiol Plant, Vol 15, pp 473497 32 Dodd J H., Roberts L W.(1999), Experiments in plant tissue culture, Cambridge University press, United Kingdom PH L C MƠI Nhóm I II III IV V Thành ph n ng (mg/l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4 7H2O 370 MnSO4 4H2O 22,3 ZnSO4 7H2O 10,6 CuSO4 5H2O 0,025 CaCl2 2H2O 440 KI 0,83 CoCl2 6H2O 0,025 KH2PO4 170 H3BO3 6,2 Na2MoO4 2H2O 0,25 FeSO4 7H2O 27,85 NaEDTA 2H2O 37,25 Nicotinic acid Glycine Vitamins NG MS 0,5 Thiamine HCl 0,1 Pyridoxine HCl 0,5 Saccarose 30000 Agar 6800 Inositol 100 PH L C K T QU X Nghiên c u LÝ S LI U B NG IRRISTAR ng c a th i gian kh trùng b ng dung d ch H2O2 (5 n hi u qu ô trùng m u c y Nghiên c u Johnson ng c a th i gian kh trùng s d ng viên kh trùng n hi u qu vô trùng m u c y Nghiên c u ng c a th i gian kh trùng v hi u qu vô trùng m u c y n Nghiên c u ng c n kh Nghiên c u ng c n kh Nghiên c u ng k t h p gi ch n kh Nghiên c u ng k t h p gi ch n kh ... qu kinh t cao c nhu c u th c ti n ti tài: (Polyscias fruticosa (L.) Harms) ch t ng cao b ng k thu t in vitro 1.2 tài Nghiên c u ng c a m t s ch t kh t invitro trùng m u Nghiên c u qu tái sinh. .. th c v t, cytokinin có nhi u h t, qu n, mơ phân sinh Cytokinin kích thích ho c c ch nhi v i auxin, cytokinin i ch t Cùng u n s phát sinh hình thái ni c y mơ T l auxin/cytokinin cao s kích thích... Nhóm Cytokinin c phát hi n t nh a th k XX, ch Kinetin b t ngu n t tinh d ch cá trích Ti h n cytokinin u tiên n zeatin tách t n i a vi sinh v t, t o, t , kim Zeatin có nhi u th c v t b c cao m t