Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)

Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Phân lập, tuyển chọn một số chủng Bacillus thuringiensis có khả năng diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)

N tài: PHÂN L P, TUY N CH N M T S CÓ KH H CH NG BACILLUS HURINGIENSIS T SÂU H I RAU T I THÁI NGUYÊN o : Chính quy Chun ngành : Cơng ngh sinh h c Khoa : CNSH - CNTP Khóa h c : 2011 2015 Thái Nguyên, 2015 N tài: PHÂN L P, TUY N CH N M T S CÓ KH CH NG BACILLUS HURINGIENSIS T SÂU H I RAU T I THÁI NGUYÊN H o : Chính quy Chuyên ngành : Công ngh sinh h c Khoa : CNSH - CNTP Khóa h c : 2011 2015 Gi ng d n: GS Nguy n Quang Tuyên T ng Khoa CNSH - Thái Nguyên, 2015 i L IC L u tiên xin chân thành c ih c Nông Lâm Thái Nguyên, Ban Ch nhi m Khoa Công ngh sinh h c Công ngh th c ph m, t t c quý th y cô b môn Công ngh sinh h c Công ngh th c ph ng d ng d c ki n th hơm c bi t c tài có h Nguy n Quang Tuyên Tuy th i gian th kinh nghi t nh ng tơi hồn thành t t khóa lu n t t nghi p c a il ic ki ng d n truy i ThS u ng d n th i gian th c t p hồn thành khóa lu n Tuy nhiên, th i gian th c t p có h kinh nghi nhi u nên không tránh kh i thi u sót h n ch Kính mong nh a th y b khóa lu cs c hoàn thi Xin chân thành c 2015 Sinh viên n ii DANH M C B NG B ng 2.1: Phân lo i gene cry c a Bt B ng 3.1: Các thi t b s d ng nghiên c u 21 B ng 3.2: Các d ng c s d ng nghiên c u 21 B m hình thái khu n l c m t s m sinh h c c a ch ng vi khu n phân l c .28 B ng 4.2: K t qu th kh ng c a ch ng sau 24h 34 B ng 4.3: K t qu th ph n ng catalaza 35 B ng 4.4: K t qu th ph n ng Voges B ng 4.5: S Proskauer (V P) 36 ng bào t /ml dung d ch lên men sau 24h .37 B ng 4.6: Ho t l c di t sâu c a ch ng vi khu n nghiên c u .38 iii DANH M C HÌNH di t sâu c a vi khu n Bacillus thuringiensis 10 Hình 2.2: Vòng Hình 2.3: Rau i sâu 14 sâu 14 Hình 4.1: Hình thái KL (a) hình thái TB (b) c a ch ng C2 32 Hình 4.2: Hình thái KL (a) hình thái TB (b) c a ch ng C6 32 Hình 4.3: Hình thái KL (a) hình thái TB (b) c a ch ng C9 32 Hình 4.4 Hình thái KL (a) hình thái TB (b) c a ch ng C12 .32 Hình 4.5: Hình thái KL (a) hình thái TB (b) c a ch ng C13 .33 Hình 4.6: Hình thái KL (a) hình thái TB (b) c a ch ng C16 .33 Hình 4.7: Kh ng c a ch ng 34 Hình 4.8: Ph n ng catalaza c a ch ng (a) Ch ng C2, (b) Ch ng C6, (c) Ch ng C9, (d) Ch ng C12, (e) Ch ng C13, (f) Ch ng C16 .35 Hình 4.9: Kh a ch ng 36 Hình 4.10: Ho t l c di t sâu c a ch ng C6 C16 .39 Hình 4.11: Bi th hi n t di t sâu c a ch ng theo th i gian 39 iv DANH M C T VI T T T Bt : Bacillus thuringiensis KL : Khu n l c TB : T bào v M CL C Ph n I M U .1 tv .1 1.2 M u 1.3 M c tiêu nghiên c u tài .2 c .2 c ti n .2 Ph n T NG QUAN TÀI LI U Bacillus thuringiensis .3 i m sinh lý c a Bt m sinh hoá c a Bt 1.1.3 m phân lo i c a Bt 1.1.4 Phân lo c t c a Bt .5 1.1.5 Các lo c t c a Bt .7 ng c a protein tinh th lên côn trùng 1.1.7 Các y u t ng t i trình hình thành bào t tinh th c 10 1.2 Côn trùng th nghi m .12 1.3 Tinh hình nghiên c u ng d ng B thuringiensis 15 1.3.1 Tình hình nghiên c u ng d ng B thuringiensis th gi i 15 1.3.2 Tình hình nghiên c u ng d ng B thuringiensis Vi t Nam 17 Ph n V T LI U .20 it ng, v t li u ph m vi nghiên c u 20 ng 20 3.1.2 V t li u hóa ch t d ng c nghiên c u 20 3.1.3 Ph m vi nghiên c u .22 a di m th i gian nghiên c u 22 m 22 vi 3.2.2 Th i gian 22 3.3 N i dung nghiên c u 22 n hành thí nghi m .22 p vi khu n Bt 22 3.4.2 c tính sinh lý sinh hóa c a ch ng vi khu n Bacillus thuringiensis phân l c 24 lý s li u 27 Ph n K T QU NGHIÊN C U 28 4.1 K t qu phân l p Bacillus thuringiensis t m u 28 4.2 K t qu phân l c tính sinh hóa c a vi khu n Bacillus thuringiensis c 33 4.2.1 K t qu th nghi m kh ng 33 4.2.2 K t qu th ph n ng catalaza 35 4.2.3 K t qu th ph n ng Voges Proskauer (V P): .36 nh ho t tính di t sâu c a ch ng vi khu n có tinh th 4.4.1 K t qu 4.4.2 K t qu nh s c 37 ng bào t 24h nuôi c y 37 t l c di t sâu 38 Ph n K T LU N VÀ KI N NGH 41 5.1 K t lu n 41 5.2 Ki n ngh 41 TÀI LI U THAM KH O 42 Ph n I M 1.1 U tv Hi n t i vùng tr ng rau chuyên canh k thu t ti n b m ng nhi u t rau không ng c nâng lên Tuy nhiên thâm canh sâu b nh h i rau xu t hi n ngày l i nhi u lên mb d ng nhi u bi m d ng lo i thu c tr sâu hóa h c, phân bón hố h c thi u ch n l c ng xung quanh b ô nhi ct t Các nghiên c u khoa h r ng s d ng thu c vi sinh v t gi c qu n th sâu h i phát tri n thành d ch, b o v m c th p nh t không th phát tri t ch ng rau, b o v ng Các ch ph m thu c tr sâu sinh h khu n Bacillus thuringiensis ng s ng s c c nghiên c u t vi c ng d ng ngày ph bi n Vi c tìm ch ng Bt m i th c s có giá tr , ý l c c lo i trùng vi sinh v t có ích khác, góp ph n nâng c kho c ng cho phép ng d ng to b o t n ngu n gen quý t o ch ph m sinh h c ph c v nông nghi p Xu t phát t nh ti n nói trên, chúng tơi ti Bacillus thuringiensis có kh Phân l p, n ch lý lu n v khoa h c th c tài "Phân l p, n ch n m t s ch ng t sâu h i rau t i Thái Nguyên" c m t s ch ng Bacillus thuringiensis có kh (Plutellidae xylostella) t i Thái Nguyên Tuy n ch c - ch ng Bacillus thuringiensis có ho t l c di t sâu cao nh t t ch ng vi khu n sinh tinh th c phân l c ng c a vi khu n Bacillus thuringiensis phân l p t m t khác t c a bàn t nh Thái Nguyên - Phân lo i ch ng Bacillus thuringiensis có ho t l c di (Plutella xylostella) cao n - D a nh c q trình nghiên c u góp ph n xác cm ts m v hình thái t bào khu n l c c a vi khu n Bacillus thuringiensis - Giúp sinh vên ti p c n v i công tác khoa h ng th i t o cho b n thân sinh viên tác phong làm vi c nghiêm túc nghiên c u khoa h c 29 C5 + - + + + - + - + + + - Hình que, hai C6 có hình khơng xác KL hình ovan, màu C7 tâm KL có hình tròn, màu C8 ng C9 Hì 10 C10 tâm 11 C11 + - 12 C12 + + 30 có tháp + + - - + - C16 + + 17 C17 + - 18 C18 - - 19 C19 + - 20 C20 + - 13 C13 14 C14 15 C15 16 Ghi chú: + có: có b xung quang mép trong, tâm ); - 31 Bacillus ( C6, C9, C12, C13, C16 70oC 20 phút) h Bacillus thuringiensis - Bacillus thuringiensis nghiê 32 (a) (b) (a) (b) (a) (b) (a) (b) 33 (a) (b) (a) (b) Hình 4.6: Hình thái KL (a) Bacillus thuringiensis 4.2 glucose 4.2.1 34 STT C2 C6 C9 C12 C13 C16 - Hình 4.7: (b Hình 4.7: (d) Hình 4.7: (e) + + + + + + 35 4.2.2 2O2 STT C2 C6 C9 C12 C13 C16 + + + + + + - 2O2 thành O2 H2O Hình 4.8 catalaza 36 4.2.3 Voges Proskauer (V P): o MR- C ta Voges STT C2 C6 C9 C12 C13 C16 Proskauer (V P) + + + + + + 37 4.3 â o (Plutella xylostella) o C L o trùng 5 lên men sau 24h STT C2 1,67 C6 2,33 C9 1,67 C12 2,00 C13 1,33 C16 2,00 :T i (2.33x109 38 sâu C13, C16) pha lỗng Hình 4.11 STT 24h 48h 72h C2 16,66 44,44 70,83 C6 33,33 62,96 91,67 C9 16, 67 48,15 75,00 C12 26,66 51,85 83,33 C13 13,33 37,04 58,33 C16 23,33 48,33 87,50 cao - (13,3%); 48h (37,04%); 72h (58,33%) - 48h (51,85%); 72h (83,33%) 39 48h (48,33%); 72h (87,5%) - (33,33%); 48h (62,96%); 72h (91,67%) - Hình 4.10: Ho t l c di t sâu c a ch ng C6 C16 - gia 40 c h khác -24h, 24h-48h, 48h- C6 33,34% Hình 4.11 41 Bacillus thuringiensis Qua trình - g Bacillus in - - Bacillus thuringiensis Bacillus thuringiensis n tìm 42 TÀI THAM g Ngơ Bính, Nguy n Qu nh Châu, Nguy n Ánh Nguy t (2002), Thu nh n huy t mi n d ch cho phân lo i Bacillus thuringiensis, K y u Vi n Công ngh Sinh h c 200-2001, trang 296-303 Ngơ Bính, Châu, Ánh Jasser Mohamad Jamil, Ngơ Hồi Trâm (2000), khoa nghiên sinh Ngô Châu, (2000), h Bacillus thuringiensis phân Tài ngun sinh sinh thái Bính (2005), Giáo trình phát sâu sinh nh Bính, Lê Th Minh Thành, Tr nh Th Thu Hà, Ph m Ki u Thúy, Ph m Minh Nguy n Th Luy, Lê Th H ng Nhung, (2010), H i ngh khoa h c k ni m 35 Công ngh Vi t Nam, trang 288 Ngơ Châu, Chính, dòng (2003), tồn 832 Thanh Nghiên Bacillus thuringiensis Báo cáo khoa Khoa Nguyên 2004, NXB KHKT, trang 59 Khoa hai, trang 830 Ánh Bính (2004), Bacillus sâu khoang nghiên Báo cáo khoa Châu, Ngơ Xn Hồi Trâm, , Xn Vi n Khoa h c Ánh gene mã hóa protein Cry1C thuringiensis subsp Ti n 300 Bính, Vi ng sâu sinh h c Bacillus nghiên c u phát tri n thu c tr thuringiensis t i Vi t Nam , trang 1-7 Ngô Ngô Báo cáo sinh gia, trang 484-488 Bính, Ánh Anh Trí, Nơng lâm 62 sinh vi nghiên núi, Thái 43 Ty (2000), Vi sinh Lân Nxb Giáo Quang, trúc gene Bt (1999), sinh toàn 10.Hoàng Nhà vào hai , Báo cáo 1371-1376 (2003), Giáo trình trùng Nơng 11.Lê Duy Q Hà 122 Minh Thành, nông 2, 167 Thanh Ánh Xuân Thúy, Ngơ Nghiên phân phân gene chí Di vùng 4), trang 29 vi Bính (2005), Bacillus thuringiensis ,( 34 Anh 12.Klier A (1985), opportunities and challegene for anegement insect Parteun International page 16 13 http://www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/toxins2.html 5/5/2015 14.Metahelix Life Sciences Private Limited, Bio- Safety Evaluation of Cry1C Protein Expressed in Bt cotton carrying Cry1C genes, Review Committee on Genetic Modifications Department of Biotechnology MST, GOI New Delhi 110003 event MLS9124 15.Nester E.W, Thomashow L S, Metz M and Gordon M (2002), 100 years of Bacillus thuringiensis: A Critical Scientific Assessment, American Academy of Microbiology,Washington, USA 16.Theiry and E Franchon (1997), preservation entomopathogenic isolation, culture and Biotechniques Manual of Technology in insect Pathology, Edited by Lawrence A Lacey, Academic Press, pp 55 57 17.Schnepf E, Crickmore N., Van Rie N., Lereclus D., Baum F., Feitelson J., Zeigler D.R., and Dean D.H.,(1998) crystal Bacillus thuringiensis and its pesticidal Microbiol Mol Biol Rev 62: page 775-806 ... quang phá Sâu sâu gây quanh xn Hình 2.3: Rau sâu Sâu cơng giai toàn gây 15 Các nghiên kháng thành sâu cao Trong không sâu system) Khi sâu xúc thích 100 - 200 sâu nghiêm có có men có phân men vi... Mình sâu có lơng 1: Thân màu Sâu màu xanh Sâu non có dài có theo 50 - 400 sâu 14 Hình 2.2: Vòng c sâu m gây h i Sâu gây lá, cho cao tồn quan sâu thành rãnh, vào xác, phát cây, sâu non bì Sâu non... chúng tơi ti Bacillus thuringiensis có kh Phân l p, n ch lý lu n v khoa h c th c tài "Phân l p, n ch n m t s ch ng t sâu h i rau t i Thái Nguyên" c m t s ch ng Bacillus thuringiensis có kh (Plutellidae