Nghiên cứu thành phần hợp chất Flavonoit từ cây Rì Rì (Homonoia - Riparia)

Khóa luận tốt nghiệp Dương Thị Thu Linh LỜI CẢM ƠN Khố luận tốt nghiệp hồn thành Phòng Nghiên cứu cấu trúc Viện hóa sinh biển, Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lòng biết ơn tới PGS TS Phan Văn Kiệm anh chị phòng Nghiên cứu cấu trúc, Viện Hóa Sinh biển Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian làm khóa luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Hồng Lê Tuấn Anh - Viện Hố Sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, người tận tình hướng dẫn em suốt q trình thực hồn thành khố luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới Lãnh đạo Viện Hóa Sinh biển tạo điều kiện cho em học tập sử dụng thiết bị tiên tiến Viện để hoàn thành tốt mục tiêu đề khóa luận tốt nghiệp Em xin cảm ơn thầy giáo PGS TS Nguyễn Văn Bằng – Giám đốc TT hỗ trợ NCKH&CGCN toàn thể thầy giáo khoa Hố học, thầy cô giáo Trường Đại học Sư phạm Hà Nội truyền đạt kiến thức quý báu cho em suốt trình học tập trường Hà Nội, ngày 16 tháng 05 năm 2013 Sinh viên Dương Thị Thu Linh K35C – Khoa Hóa học i Trường ĐHSP Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp K35C – Khoa Hóa học Dương Thị Thu Linh i Trường ĐHSP Hà Nội DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT [α]D Độ quay cực Specific Optical Rotation C NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 13 Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy H NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Proton Magnetic Resonance Spectroscopy H-1H COSY 2D-NMR H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều Two-Dimensional NMR CC Sắc ký cột Column Chromatography DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer EI-MS Phổ khối lượng va chạm electron Electron Impact Mass Spectrometry FAB-MS Phổ khối lượng bắn phá nguyên tử nhanh Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence HR-FAB-MS Phổ khối lượng bắn phá nguyên tử nhanh phân giải cao High Resolution Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry IR Phổ hồng ngoại Infrared Spectroscopy Me Nhúm metyl MS Phổ khối lượng Mass Spectroscopy NOESY TLC Nucler Overhauser Effect Spectroscopy Sắc ký lớp mỏng Thin Layer Chromatography K35C – Khoa Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội K35C – Khoa Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ CÁC BẢNG BIỂU Hình 1.1: Lá Rì Rì…………………………………………………….3 Hình 1.2: Flavan (2-phenyl chromen) Hình 1.3: Flavon Hình 1.4: Flavonol Hình 1.5: Flavanon Hình 1.6: Flavanonol-3 Hình 1.7: Chalcon Hình 1.8: Auron Hình 1.9: Antoxianidin Hình 1.10: Leucoantoxianidin Hình 1.11: (+)-Catechin Hình 1.12: (–)-Catechin Hình 1.13: 3-phenyl chromen .9 Hình 1.14: 3-phenylchromen-4-one .9 Hình1.15: Rotenoit Sơ đồ: Phân lập hợp chất từ rì rì 25 Hình 4.1.1 Phổ 1H-NMR hợp chất 27 Hình 4.1.2 Phổ 1H2-NMR hợp chất 28 Hình 4.1.3 Phổ 13 C-NMR hợp chất 29 Bảng 4.1 Các kiện phổ NMR hợp chất 30 Hình 4.1.4 Phổ 1H-NMR hợp chất 31 Hình 4.1.5 Phổ 1H2-NMR hợp chất 32 Hình 4.1.6 Phổ 13 C-NMR hợp chất 33 Bảng 4.2 Các kiện phổ NMR hợp chất 34 Hình 4.1.7 Cấu trúc hóa học hợp chất 1-2 35 Bảng 4.3: số liệu phổ NMR hợp chất -2………………………………35 K35C – Khoa Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội K35C – Khoa Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội MỤC LỤC MỞ ĐẦU i CHƯƠNG 1:TỔNG QUAN 1.1 Vài nét họ Thầu dầu, Rì Rì 1.1.1 Cây Rì rì (Homonoia riparia) 1.2 Lớp chất flavonoit, thành phần hố học có Rì rì 1.2.1 Giới thiệu chung [1, 3, 6, 7, 11] 1.2.2 Các nhóm flavonoit [1, 3, 6, 7, 11] .5 1.3 Các phương pháp chiết mẫu thực vật 1.3.1 Chọn dung môi chiết 10 1.3.2 Quá trình chiết .12 1.4 Các phương pháp sắc ký phân lập hợp chất hữu [8,10] 13 1.4.1 Đặc điểm chung phương pháp sắc ký 13 1.4.2 Cơ sở phương pháp sắc ký 14 1.4.3 Phân loại phương pháp sắc ký .14 1.5 Một số phương pháp hoá lý xác định cấu trúc hợp chất hữu 19 1.5.1 Phổ hồng ngoại (Infrared spectroscopy, IR) 17 1.5.2 Phổ khối lượng (Mass spectroscopy, MS) 17 1.5.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 18 Chương 2:ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Mẫu thực vật 21 2.2 Phương pháp phân lập hợp chất 21 2.2.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC): .21 2.2.2 Sắc ký cột (CC) 21 2.2.3 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC): .21 2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 21 2.3.1 Điểm nóng chảy (Mp) 21 2.3.2 Phổ khối lượng (ESI-MS) 22 2.3.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 22 2.3.4 Độ quay cực [α]D 22 2.4 Dụng cụ thiết bị 22 2.4.1 Dụng cụ thiết bị tách chiết 22 2.4.2 Dụng cụ thiết bị xác định cấu trúc 22 2.5 Hoá chất 23 CHƯƠNG :THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 24 3.1 Xử lý mẫu 24 3.2 Phân lập chất 24 3.2 Hằng số vật lý giữ liệu phổ hợp chất 26 3.1.1 Hợp chất 1: Myricetin-3-α-D-xylopyranoside (1) 26 3.1.2 Hợp chất 2: Myricetin-3-O- β- xylopyranoside (2):……………….26 CHƯƠNG 4:KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất 27 4.1.1 Hợp chất 1: Myricetin-3-O- α- arabinopyranoside (1): 27 4.1.2 Hợp chất 2: Myricetin-3-β-D-xylopyranoside (2) 31 KẾT LUẬN 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 Hình 4.1.6 Phổ 13C-NMR hợp chất Từ kết nêu hợp chất khẳng định tìm thấy từ việc phân lập hợp chất từ Homonoia riapaia OH 3' OH 4' HO O 5' OH OH O O 2'' 4'' HO HO O 3'' OH Hợp Chất 2: Myricetin-3-β-D-xylopyranoside Formula: C20H18O12 Exact Mass: 450.08; MW: 450.35 (Vvedenskayaet al., 2004); (Vvedenskaya et al., 2004) Bảng 4.2 Các kiện phổ NMR hợp chất δC δH 158.97 - 135.49 - 179.34 - 163.01 - 99.83 6.19 (1H, s) 165.98 - 94.63 6.37 (1H, s) 158.36 - 10 105.59 - 1' 121.93 - 109.84 7.22 (1H, s) 3' 146.45 - 4' 138.83 - 5' 146.45 - Pos δC (*) Aglycone 99.5 2' 94.1 109.1 6' 109.1 109.84 7.22 (1H, s) 3-β-D-xylo 1'' 102.5 104.60 5.17 (1H, d, 6.8) 2'' 74.3 75.2 3.40 (1H, t, 8.8) 3'' 77.0 77.57 3.53* 4'' 70.2 70.98 3.53* 5'' 66.9 67.23 3.79 (1H, dd, 4.8, 120) 3.08 (1H, dd, 9.6, 120) OH OH 3' 3' OH 4' HO 5' O OH HO 5' O OH O HO O OH 2'' O 2'' 4'' OH 3'' O OH OO 4'' OH OH HO HO Hợp Chất Myricetin-3-O-α-L-arabinopyranoside Formula: C20H18O12 MW: 450.35 3'' Hợp Chất Myricetin-3-β-D-xylopyranoside Formula: C20H18O12 MW: 450.35 Hình 4.1.7 Cấu trúc hóa học hợp chất 1-2 Bảng 4.3: số liệu phổ NMR hợp chất -2 C δCa,b) OH 4' δCa,b) Aglycone δHa,c) δCa,b) δCa,b) δHa,c) 159.4 158.6 - 136.6 135.8 - 135.5 - 180.1 179.3 - 179.3 - 163.7 163.0 - 163.0 - 100.7 166.9 95.5 159.1 158.4 - 158.4 - 10 106.3 105.6 - 105.6 - 1' 122.5 121.7 - 121.9 - 2' 110.6 109.8 7.30 s 99.8 6.19 d (2.0) 159.0 99.5 166.1 94.6 6.38 d (2.0) - 99.8 6.19 br s 166.0 - 94.1 109.1 94.6 6.37 br s 109.8 7.22 s 3' 147.2 146.5 - 146.4 - 4' 138.9 138.1 - 138.8 - 5' 147.2 146.5 - 146.4 - 6' 110.6 109.8 7.30 s 3-O-α-L-arabinopyranosyl 1'' 105.6 2'' 73.7 73.0 3'' 75.0 74.2 4'' 70.0 69.3 3.83 m 104.8 5.18 d (6,5) 3.88 dd (6.5, 109.1 109.8 7.22 s 3-O-β-D-xylopyranosyl 102.5 104.6 5.17 d (6.8) 74.3 75.2 77.0 77.6 3.53* 70.2 71.0 3.53* 8.8) 3.63 dd (3.2, 8.8) 3.79 dd (4.8, 3.48 d (10.8) 5'' 67.9 67.1 3.85 dd (3.0, 66.9 10.8) a) đo CD3OD, b) 3.40 t (8.8) 100MHz, c)400 MHz 67.2 12.0) 3.80 dd (9.6, 12.0) KẾT LUẬN Thực khóa luận với đề tài “Nghiên cứu thành phần flavonoit từ Homonoia- riparia”, phương pháp sắc ký kết hợp sắc ký cột silicagel pha thường pha đảo, hai hợp chất sau: Myricetin-3-O-α-L-arabinopyranoside (1), Myricetin-3-β-D-xylopyranoside (2) phân lập từ dịch chiết metanol lồi Rù rì (Homonoia riparia) Cấu trúc hóa học chúng xác định phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều kiện phổ công bố OH 3' OH 4' HO O 5' OH O OH OH O O 2'' 4'' OH HO 3'' Hợp chất 1: Myricetin-3-O-α-L-arabinopyranoside (1) OH 3' OH 4' HO O 5' OH OH O O 2'' 4'' HO HO O 3'' OH Hợp chất : Myricetin-3-β-D-xylopyranoside (2) TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập Trần Toàn, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tập I, trang 875-876 (2004) [2] Võ Văn Chi, 1999 Từ điển thuốc Việt Nam NXB Y học, Hà Nội, tr 471 [3] Ternai B., Markham K.R., C13-NMR of flavonoids-1-Flavones and flavonols, Tetrehedron 32, pp 565 (1976) [4] Hayerman A.E., Butler I.G., Assay of condensed tanin or flavonoid oligomers and related flavonoid in plant, Meth, Enz, 234, pp 249 (1994) [5] Duc Do Khac, Sung Tran Van, Angela Martha Campos, Jean-Yves Lallemand and Marcel Fetizon, Ellagic acid compounds from Diplopanax stachyanthus, Phytochemistry, Vol.29(1), pp 251-256 [6] Mabry F.J., Markman R.B., Thomas M.B., The syrematic indentification of flavonoids, springer Verlag-Berlin-Heidelberg-New york, (1970) [7] Harborn J.B., The flavonoids advance in research since 1986, Chaprman & Hall, (1994) [8] Peter J Houghton and Lu Minh Lian, Triterpenes from Desfontainia spinosa, Phytochemistry, Vol.25(8), pp 1939-1944 (1986) [9] GS TS Lã Đình Mỡi (chủ biên), TS Trần Minh Hợi, TS Dương Đức Huyến, TS Trần Huy Thái, TS Ninh Khắc Bản, Tài nguyên thực vật Việt Nam Những chứa hợp chất có hoạt tính sinh học, tập 1, Nhà xuất nông nghiệp, trang 125-127, (2005) [10] Liang Guang-Yi, Alexander I Gray and Peter G Waterman, Pentacylic triterpenes from the fruits of Rosa sterilis, Journal of Natural Products, Vol.52, pp 162-167 (1989) [11] Agrawal P.K., Carbon-13 NMR of flavonoids, Elsevier Science Pub B.V., (1989) [12] Yi-Ming Chiang, Jang-Yang Chang, Kuo Ching-Chuan, Chang ChiYen, Yueh-Hsiung Kuo, Phytochemistry, Vol.66, pp 495-501 [13] Narasimhan Ramarathnam, Toshihiko Osawa, Mitsuo Namniki, and Shunro Kawakishi (1989) Chemical studies on novel rice hull antioxidants Identification of isovitexin, a C [14] 13 C-NMR of flavonoids, P.K Agrawal, p-144, Elsevier Science Publishers, 1989 [15] Yang S M, Liu X K., Qing C., Wu D G., Zhu D Y, Chemical constituents from the roots of Homonoia riparia Yao Xue Xue Bao, (2007), 42, 292-296 [16] Lee I., Kim J., Kim Y S., Yoo N H., Kim C S., Jo K., Kim J H., Bach T T., Kim J S., Cycloartane-type triterpenes from the leaves of Homonoia riparia with VEGF-Induced angiogenesis inhibitory activity Journal of Natural Products, (2012), 75, 1312- 1318 [17] Kadota, Shigetoshi; Takamori, Yasushi; Khin, NyeinNyein; Kikuchi, Tohru; Tanaka, Ken; Ekimoto, Hisao Constituents of the leaves of WoodfordiafruticosaKurz I Isolation, structure, and proton and carbon-13 nuclear magnetic resonance signal assignments of woodfruticosin (woodfordin C), an inhibitor of deoxyribonucleic acid topoisomerase II Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1990), 38, 2687-2697 [18] Vvedenskaya, Irina O.; Rosen, Robert T.; Guido, Jane E.; Russell, David J.; Mills, Kent A.; Vorsa, Nicholi Characterization of flavonolsin cranberry (Vaccinium macrocarpon) powder Journal of Agricultural and Food Chemistry, (2004), 52, 188-195 [19] Kim, Hyoung Ja, Eun Rhan Woo, and Hokoon Park A Novel Lignan and Flavonoids from Polygonum Aviculare Journal of Products, (1994), 57, 581-586 [20] J Agric Food chem.2004,52, 188-195(1) [21] J Nad prod.2012,75(7), pp1313-1318 Natural ... hợp chất từ rì rì 25 Hình 4.1.1 Phổ 1H-NMR hợp chất 27 Hình 4.1.2 Phổ 1H2-NMR hợp chất 28 Hình 4.1.3 Phổ 13 C-NMR hợp chất 29 Bảng 4.1 Các kiện phổ NMR hợp chất ... 1H-NMR hợp chất 31 Hình 4.1.5 Phổ 1H2-NMR hợp chất 32 Hình 4.1.6 Phổ 13 C-NMR hợp chất 33 Bảng 4.2 Các kiện phổ NMR hợp chất 34 Hình 4.1.7 Cấu trúc hóa học hợp chất 1-2 ... mẫu tạo dịch chiết - Chiết tách hợp chất Flavonoit - Xác định cấu trúc hoá học hợp chất tách chiết CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vài nét họ Thầu dầu, Rì Rì 1.1.1 Cây Rì rì (Homonoia riparia) 1.1.1.1