Nghiên cứu phân lập các hợp chất phenolic từ quả cây Na biển (annona glabra)

3cm,nhữngchiếccánhhoavòngngoàithườnglớnvàc ó dạnghìnhtamgiácrộng,cánhhoavòngtrongthườngnhỏ,cóbớtđỏởmặttrong;nhịnhiều;lánoãnnhiều;bầucó lô ng.Quảhìnhtrứngdài7 -10cm,vàngxanh,vỏnhẵn,khôngg

TrườngĐHSP HàNội2 Khóaluậntốtnghiệp

MỞĐẦU

Nướctacókhíhậuvàthảmthựcvậtkháphongphúvàđadạng.Dânt ộ c ViệtNamcótruyềnthốngvềsửdụngcácloàithảomộclàmthuốcchữabệnh.Nhữngnămgầnđâyxuhướngtìmkiếmmộtsốhoạtchấttrongcácloàithảomộcc ó t á c dụngchữabệnhngàymộttăng,thuhútc á c nhàkhoahọcnghiêncứu.TheocácsốliệuthốngkêmớinhấtthảmthựcvậtViệtNamcótrên12000loài,trongsốđócótrên3200loàiđượcsửdụnglàmthuốctrongyhọcdângian[1]

Từxưađếnnay,nhữngcâythuốcdângianvẫnđóngvaitròhếtsứcquantrọngtrongviệcchămsócsứckhỏechoconngười.Ngàynaynhữnghợpchấtthiênnhiêncóhoạttínhsinhhọcđượcphânlậptừcâycỏđãđượcứngdụngtrongrấtnhiềungànhcôngnghiệp,nôngnghiệpvàchămsócsứckhỏeconngười.Chúngđượcsửdụnglàmthuốcchữabệnh,thuốcbảovệthựcvật,làmnguyênliệuchongànhcôngnghiệpthựcphẩmvàmỹphẩm…

M ặ c dùcôngnghiệptổnghợphóadượcngàynayđãpháttriểnmạnhmẽ,tạoracácbiệtdượckhácnhausửdụngtrongcôngtácphòng,chữabệnh,nhờđógiảmt ỷ lệtửvongrấtnhiềusongnhữngđónggópcủacácthảodượccũngkhôngvìt h ế màmấtđichỗđứngtrongYhọc.Nóvẫntiếptụcđượcdùngnhưlànguồnnguyênliệutrựctiếp,giántiếphoặccungcấpnhữngchấtđầuchocôngnghiệpbántổnghợpnhằmtìmkiếmnhữngdượcphẩmmớichoviệcđiềutrịcá c chứngbệnhthôngthườngcũngnhưcácbệnhnany.Mặtkháctrongcôngt á c phòngv à chữabệnh,Đảngv à Nhànướct a luônchủtrươngvàkhuyếnkhíchsửdụngcácnguyênliệutừthựcvậtvìchúngcóchứanhiềubiệtdượcr ấ t khótổnghợpvàhầunhưkhônggâytácdụngphụ

Trongthếgiớithựcvậtmuônmàu,nhiềuloàicâycỏđượcsửdụngnhưnhữngdư

ợcliệuquý.TrongsốđócócâyNabiển(tênkhoahọclàAnnona

y.CácdântộcởTrungMỹ,NamMexico,BrazilvàPerusửdụngnướcsắclácâyđểtrịbệnhgiunsánhoặcgiãnátđắpmụnnhọt,ápxevàloét.Theokinhnghiệmd â n gian,quảNabiểnchíntrịđượcbệnhkhíh ư (huyếttrắng)ởphụnữvàchứngthiếumáu.Hạtgiãnátdùngđắpquanhnướurăngđ ểlàmgiảmnhứcrăng, cótá c dụnghútmủ,giảinhiệt,banđỏ,nhuậnphế,mátganvàgiảikhát.Ngoàiranócònđượcsửdụnglàmthuốctrịtiêuchảy,kiếtlỵvàlàmthuốcsáttrùng,làmthuốctrịbướu,láđượcdùngtrịviêmkhíquảnmạntính[2].Đâylàcâythuốcquý,cầnđượcnghiêncứuđểgiảithícht á c dụngchữabệnhc ủ a cây,t ạ o c ơ s ở đểt ì m k i ế m phươngthuốcđiềutrịbệnh

Nhằmmụcđíchthựctậptìmhiểucáchthứcchiết,phânlậpvàxácđịnhcấ u trúccáchợpchấtcótrongthànhphầnhoáhọccủacâyNabiểnnênemlựachọnđềtàikhóal

uậntốtngiệplà:‘‘NghiêncứuphânlậpcáchợpchấtphenolictừquảcâyNabiển( Annonaglabra)‘‘vớinhữngnộidungchínhnhưsau:

1 ThumẫuquảcâyNabiển(Annonaglabra),xửlýmẫuvàtạodịchchiếtnướ

c

2 Phânlậpmộtsốhợpchấtphenolictừq u ả c â y Nabiển(Annonaglabra).

3 Xácđịnhcấutrúchóahọccủacáchợpchấtđãphânlậpđược

3cm,nhữngchiếccánhhoavòngngoàithườnglớnvàc ó dạnghìnhtamgiácrộng,cánhhoavòngtrongthườngnhỏ,cóbớtđỏởmặttrong;nhịnhiều;lánoãnnhiều;bầucó lô ng.Quảhìnhtrứngdài7 -

10cm,vàngxanh,vỏnhẵn,khônggai,nạc,thịttrắng.Hạtmàunâunhạt

1.1.2 Phânbố,sinhthái

CâymọcrảirácởcáckhuvựcdọcbờbiểntừQuảngNinhđếnQuảngNam(CùLaoChàm)vàcáctỉnhphíaNam.Mộtsốýkiếnchorằng,câyNabiểncónguồng ố c ởvùngvenb i ể n nhiệtđ ớ i ChâuMĩv à ChâuPhi,đượcnhậptrồngởViệtNam

Câytrồngdựab ờ rạchcónướcl ợ , c ó thểmọcc ả ở dướimươngd ù nướcvừaphèn,vừamặn

1.1.3 Côngdụng

HầuhếtcácbộphậncủacâyNabiểnđềucónhữngtácdụngriêngnhư:QuảcâyNabiểnchínănđược,mùahoaquảgầnnhưquanhnăm.CácdântộcởTrungMỹ,NamMexico,BrazilvàPerusửdụngnướcsắclácâyđểtrịbệnhgiunsánhoặcgiãnátđắpmụnnhọt,á p x e v à loét.Theokinhnghiệmd â n gian,quảNabiểnchíntrịđượcbệnhkhíhư(huyếttrắng)ởphụnữvàchứngthiếumáu.Hạtgiãnátdùngđắpquanhnướurăngđểlàmgiảmnhứcrăng,cótácdụnghútmủ,giảinhiệt,banđỏ,nhuậnphế,mátganvàgiảikhát.Ngoàirahạtcủacâynàycũngđượcdùngnhưhạtbìnhbátlàmthuốctrịtiêuchảy,kiếtlỵvàlàmthuốcsáttrùng.Vỏcâygiãracũngcótácdụngtươngtựvàdịchlácâydùngđểtrừchấy

ỞCuBa,gỗbìnhbátnướcnhẹ,đượcdùnglàmphaogiữlướiđánhcánổitrênmặtnướcvàlàmthuyềnđánhcá

ỞTrungQuốc,toànc â y dùngl à m thuốctrịbướu,l á đượcdùngt r ị v i ê m khíquảnmạntính

Ngoàiracóthểtrồngcâynàyđểlàmgốcghépmãngcầuxiêmvừatạoracâymãngcầucóquảto,cơmdày,vịngọtthanh,thíchhợpvớivùngtrũng,đấtphèn

17-oicacid(17),ent-kaur-15-en-19-oicacid(

18)andent-kaur-15-en-17-ol-19-oicacid(19)),4hợpchấtacetogenin(annomontacin(20),annonacin(21),isoanno nacinone(22)v à squamocin(23)),4 h ợ p chấtsteroid(-

sitosterol(24),stigmasterol(25), -sitosteryl-D-glucoside(

26),stigmasteryl-

D-glucoside(27))và1hợpchấtoxoaporphine(liriodenine(28)[6].

Cấutrúchóahọccủacáchợpchấtnàynhưsau:

Hình1.3.CấutrúchóahọccủacáchợpchấtphânlậptừcâyNabiển.

Trongđ ó , hợpchấtmethyl-16

OH)tựdohoặckếthợpvớicácnhómchứckhácnhưether,esterhoặcglycosid.Cáchợpchấtphenolictantrongnướcvìphầnlớnđềuởdạngkếthợpvớiđườngnhưmộtglycosidvàthườngởtrongkhôngbào.Cáchợpchấtphenolcómàusắctựnhiênnêncóthểlợidụngmàus ắ c củachúngđểtheodõiquátrìnhchiếtsuấtvàphânlập

Isocaumarin,Orcinol,Depside,Depsidoen,Xanthone,Quinone

CấutrúcđadạngcủacáchợpchấtphenolcóđượclàdoquátrìnhsinhtổnghợpvàbởisựtăngdầntầnsốkếthợpgiữahaiconđườngShikimatevàacetateđốivớicáchợpchấtđượctạothànhtronghỗnhợp.Khảnăngthamgiacácthànhtốthứbalàhoàntoàncóthểmặcdùvớitầnsốthấphơn.SựkếthợpnàyđượctạobởicácthànhtốtạobởihaiconđườngShikimatevàMevalonate,vídụnhưmộtsốloạiQuinonehoặckhungFuranovàPoly-coumarin

MộtvàihợpchấtcủaPhenolcóthểdễdàngnhậnbiếtbằngmắtthườngn h ư cácAnthocyanint ừ h o a , c á c hợpchấtkháccóthểnhậnbiếtdướiánhsángđènUVhoặcbởicácphảnứngmàuđặctrưng.Cácphảnứngmàunàyđượcs ử dụngtrongquátrìnhs

ắ c kí,phânl ậ p c á c hợpchấtPhenolic.Tuynhiên,việcsử dụngc ác phảnứngmàutrêncácdịchchiếtthườngkhópháthiệnvàkhôngnhạybởicáctươngtáccủacácyếutốgâynhiễukếtquảthựcnghiệm.Cáchóachấtthườngđượcsửdụngpháthiệncácchấtphenolđólà:Cloritsắt,Vanllinin,Phosphomolybdate-

phosphotungstate.Đốivớimộtv à i hóachất,việcsử dụngcáchợpchấtcócấutrúcphenolđượcthựchiệntheotínhđặchiệunhưthờigianphảnứng,sự chuyểnmàu,nhữngđiềun ày gópphầnlàmtăngkhảnăngnhậnbiếtcáchợpchấtphenol

Chúngđượcphânbốrộngrãitronggiớithựcvậtv àlàcác sảnp hẩ m traođổichấtphongphúcủathựcvật.Hơn8.000cấutrúcphenolicđãđượct ì m thấy,từcácphântửđơngiảnnhưcácaxitphenolicđếncácchấtpolymen h ư tannin,lignin,neoligman,melanin, Trongđóflavonoidl à nhómh ợ p chấtlớnnhấtnhưnglàcácphenolđơnvòngđơngiản,phenyl-

propanoidvàt ấ t cảcácquinonphenolictồntạitươngđốinhiều[7]

Cáchợpchấtphenolicđượccácnhàkhoahọcđặcbiệtquantâm,vìnóc ó khảnăngứcchếchấtsinhungthưvàlàchấtgâyđộtbiếnhoặcngănchặnc á c tácnhângâybệnh,kýsinhtrùngvàđộngvậtănthịt,cũngnhưlàmtăngcácmàusắccủathựcvật.Vídụ,phenolicgópphầnsựcayđắngvàchátcủatráic â y v à nướcé p t r á i

c â y , v ì s ự tươngt á c giữaphenolic,c hủyếulàprocyanidin,vàglycoproteintrongnướcbọt.Anthocyan–

mộttrongcácthànhphầnpolyphenolthựcvậtchịutráchnhiệmvềcam,đỏ,xanhdươn

gv à màut í m củanhiềuloạitráicâyvàrauquảnhưtáo,dâu,củcảivàhànhtây.Chiếtxuấtphenolichoặcpolyphenolbịcôlậpt ừ thứcănthựcv ậ t khácnhauđ ã đượcnghiêncứutrongmộtsốcácdòngtếbàoungthưđạidiệnchocácgiai

đoạntiếnhóakhácnhaucủaungthư.Vídụ,Rossvàcộngsự.chothấyhoạtđộngkhángsinhchiếtxuấtmâmxôitrongtếbàocủangườibệnhungthưcổtửcung(Hela)đãđượcchủyếulàliênquanđếnellagitannins[9].Isoflavonegenisteincótrongđậunànhcóthểứcchếsựtăngtrưởngcủacácdòngtếbàoungthưkhácnhaubaogồmcảbệnhbạchcầu,ungthưhạch,tuyếntiềnliệt,v ú , phổivàđứngđầulàcáctế

bàoungthưcổ[10].Flavonoidcamquýứcchếmạnhmẽsự pháttriểncủ a

HL-60bệnhbạchcầutếbào[11].Ngoàira ,tác dụngchốngoxyhóavàgiảmđaucủapolyphenolđónggópvàotácdụngđiềutrịdựphònghoặcbảovệcơthể.Chúngcóởkhắpcácbộphậncủacâyvàvìvậy,chúngcũnglàmộtphầnkhôngthểthiếutrongchếđộănuốngcủaconngười

á c acidp – hydroxybenzoic,acidprocatechuic,acidvanilic,…

Ngượclạivớic á c acidtrên,cácphenolt ự dotrongc â y thườngtươngđốihiếm.Hydroquinonphổbiếnnhất,ngoàiracòngặpcáccatechol,orcinol,…

1.2.2.1.1 Cácphenolđơngiản

OH

Cácphenolđơngiảntồntạinhiềutrongcây,hydroquinonchỉđượctìmt h ấ y trongvàihọthựcvật,chủyếudướidạngglycosiddiphenolh a y ethermonomethyl

1.2.2.1.2 Cácacidphenolic:Acidphenolicbaogồm2nhóm:

 Dẫnxuấtcủaacidbenzoic

CácacidphenolicC6–

C1làcácdẫnxuấthydroxylcủaacidbenzoictồntạiphổbiếnởtrạngtháitựdo,cũngnhưởdạngkếthợpester(nhưacidsalicylic)h a y glycosid;acidp r o c a t e c h i c ,acidgallicở dạngtựd o v à dạngestercótrongthànhphầncấutạocủataninvàmộtsốcatechin.Cácandehittươngứngvớicácacidnàynhưvanilin,anisaldehyd,…

Flavonoidl à mộtnhómhợpchấtpoliphenolđadạngv ề cấutrúchóahọcvàtác

củacây,đặcbiệttrongcáctếbàothựcvật,làhợpchấtđượccấutạogồmhaivòngbenzenA,Bđượckếtnốibởi1dịvòngCvớikhungcácbonC6-C3-

C6.Tạicácvòngcóđínhmộthaynhiềunhómhydroxytựdohayđãthaythếmộtphần.Vìvậyvềbảnchấtchúnglàcácpoliphenolcótínhaxit.Cácpoliphenolcóthểphảnứnglẫnnhauquacác nhómhydroxyđểtạothànhcácphântửphứctạphơnhaycóthểliênkếtvớicáchợpchấtkháctrongcâynhưcácOza(dạngglicozit)hayprotein

Cácflavonoidlàdẫnxuấtcủa2-phenylchroman(flavan)

A8

9 O 2 7

2' 3' B

1' 4'

5' 6' 6

Hình1.6.Lignan

O-4’)tađượcNeolignan,chẳnghạn3–3’thaycho8–8’:

n

Hình1.7.3,3’-Neolignan

Coumarinlàhợpchấthữucơcótrongnhiềuloàicây,đượcpháthiệntừn ă m 1820.Coumarinlànhữngdẫnchất-pyroncócấutrúcC6–C3.Benzo

-pyronlàmộtcoumarinđơngiảnnhấttồntạitronghạtcâyhọĐậu.Chođếnnay,ngườitađãbiếtđếngần1000coumarinkhácnhau.Trongcoumarinc á c nhómOHphenolđượcetherhóabằngnhómCH3haybằngmộtmạchtecpenoidtừ1đến3đơnvịisoprenoid.Vềmặthóahọc,coumarincóthểtồntạidướidạngtựdohaydạngkếthợpvớiđườngglucosetạothànhcoumaringlycosid

Cáchợpchấtphenolnhưarbutinđượcdùngđ ể sáttrùngđườngniệu,cáchợpchấtsalycylatcótácdụngchốngviêm,cácestercủaacidcinnamictrongactisô(nhưcynarin,c á c acidphenolic)c ó t á c dụngb ả o v ệ gan.Cácestercủaphenylpropanoidglycosidđ ã đượcchứngminhcónhiềut á c dụngquantrọngnhưứcchếmenC A MPphosphodiesterase(forsythiasid,planta-

majosid),ứcchếmenaldosereductase(verbacosid).Verbacosid,forsythiasidứcc h

ế

men5-LO(5-lipoxygenase)trongbạchcầuhạtở ngườiv à ở màngbụngchuột.Nhiềuhợpchấtphenolcó tácdụngkhángkhẩnvàkhángnấm.Coumarincũngcónhiềutácdụngdượclýquantrọngbaogồmchốngđôngmáu,kíchthíchtố,làmnhạycảmvớida,diệtvitrùng,thuốcgiãnmạch,diệtcôntrùng,trừgiunsán,giảmđau,hạnhiệt,làmbềnv à bảovệthànhmạchn hư aesculetin,bergaptenv à fraxin.Coumaringlycosidcótácdụngchốngn ấmvàchốngungthư.Coumarinvàcácdẫnxuấtcókhảnăngkíchthíchđạithựcbàonêncóthểdùnglàmthuốcđiềutrịvếtbỏngvàcácvếtthươngdonhiệt.Ngoàirachúngcòngâynênsựthayđổiđángkểtrongđiềuhòađápứngmiễndịch Chúngđóngvaitrògiántiếpquasựđiềubiếncủahệmiễndịchchủ,dođókíchthíchhoạttínhmiễndịchdẫntớibảovệchốnglạisựtáiphátcủakhốiu,hoặcgiảmkíchthướccáckhốiunhỏvàtácdụngtrựctiếpứcchế

pháttriểnđốivớidòngtếbàouáctínhinvitro,thídụdịchchiếtmetanolcủaTordylium(c hứaumbeliferon,isoimperatorinv à dẫnxuấtangelicin)ứcc h ế dòngtếbàoungthư

KB(ungthưmũihầu)vàNSCLS-N6(dòngtếbàoungthưbiểumôcuốngphổi).Trongkhi,tácdụngứcchếungthưcủatanninchủyếudokhảnăngkếthợpcủataninvớicácchấtgâyungthư.Taninởnồngđộcaoứcchếhoạtđộngcủacácenzyme,nhưngởnồngđộthấpchúngthườngkíchthíchhoạttínhcácenzyme.Taninđóngvaitròđặcbiệttrongnénépbềmặtmàngnhầysaukhivàocơthể,

vìvậynódùngđểtrịbệnhtiêuchảynhưngphảithảitrừngaykhỏiđườngtiêuhóabằngcáchdùngthuốcnhuậntràng.Ngoàiratanincótácdụngchốngchảymáu,giảmđauvàlàmgiảmnồngđộacidtrongd ạ dày.Nướcé p q u ả hồngcóchứanhiềutanninngưngtụđượcdùngởNhậtđểđiềutrịcaohuyếtápvàngănngừa

chứngđộtquỵ.Casuarinin,taninthủyp h â n đượcchiếtx u ấ t t ừ vỏcâyTerminaliaa rjunaL i n n ,c ó t á c dụngứcchếvirusHerpestyp2 (HSV-

2)i n vitro.Geraniin,mộttaninthủyphânđượcc ó trongthànhphầnc â y c h ó đ ẻ răn gcưa(PhylanthusamarusChum.e t Thonn.)đượcdùngđ ể điềutrịviêmganvirusdo

ứcc h ế tínhiệuđiềukhiểnproteinkinase,hayứcchếtươngtácgiữaHBVenhacerIvàcácyếut ố dịchmãt ế bào.Thànhphầnpolyphenolc ó t á c dụngchốngoxyhó achínhtrongchèxanh…

Lignanvàcáccâycóchứalignanđãđượcsửdụngl âu đờitrongyhọccổtruyền,chúngcótácdụngbảovệgannhưschizandrin,isoschizandrinvàcácgomisinA,B,C,D,Fv

Schizandraceae)chot h ấ y tácdụngbảovệganrấttốt,tăngtổnghợpproteinganđượcd

àGtìmthấytrongquảcâyngũvịtử(Schizandrachinensis(Turcz.)Baill.,họNgũvị-ùngđểđiềutrịv i ê m ganmạnc ó meng a n tăng,điềut r ị tổnthươnggan,…

Lignanacidnordihydroguaaretic–

NDGA(trongcâyLarreamexicana)làmộttrongnhữnghợpchấtthiênnhiêncótácdụ

ngchốngoxyhóamạnh,ứcchếmen5-LO,ứcchếtếbàoungthưđượcdùnglàmthuốcchốngoxyhóa,chốngung

thưvàchốngviêm.NghiêncứuchothấyLignanvàneolignancótácdụngứcc h ế men,đặcbiệtlàmenC-

AMPphosphodiesterasevàcácmencủaquátrìnhhôhấp,chốngdịứngvàviêmkhớp,ứcchếyếutốhoạthóatiểucầu.Mộtsốlignanlàdẫnxuấtcủaxyclolignannaphtalenhaytetrahydro-

naphtalencótácdụngchốngvirus.Từdịchchiếtchóđẻrăngcưa,cácnhàkhoahọcTháiLanđ ã chiếtđược2dẫnxuấtcủalignanlàphylanthinvàhydrophylanthincóhoạttínhđốivớidòngtếbàoungthưKB-

V1đãkhángvinblastin.Mộtsốlignancót h ể kếthợpvớiprotein(kểcảenzyme),polysaccharide,acidnucleictạocácphântửcótácdụngkhángsinhvàtrừsâubọchocây

1.3 Cácphươngphápchiếtmẫuthựcvật.

Saukhitiếnhànhthuháivàlàmkhômẫu,tuỳthuộcvàođốitượngchấtcótrongcácmẫukhácnhau(chấtkhôngphâncực,chấtcóđộphâncựctrungbình,

chấtphâncực…)màtachọndungmôivà hệdungmôikhácnhau

1.3.1 Chọndungmôichiết.

Điềukiệncủadungmôilàphảihoàtanđượcnhữngchấtchuyểnhoát h ứ cấpđangnghiêncứu,dễdàngđượcloạibỏ,cótínhtrơ(khôngphảnứngvớichấtnghiêncứu),khôngdễbốccháy,khôngđộc

Thườngthìcácchấtchuyểnhoáthứcấptrongcâycóđộphâncựckhácnhau.Tuynhiênnhữngthànhphầntantrongnướcítkhiđượcquantâm.Dungmôidùngtrongquátrìnhchiếtítkhiđượcquant â m v à c ầ n phảiđượclựachọnrấtcẩnthận

Dungmôinếulẫncáctạpchấtthìcóthểảnhhưởngđếnhiệuquảvàchấtlượngcủaquátrìnhchiết.Vìvậynhữngdungmôin à y cầnđượcchưngcấtđểthuđượcdạngsạchtrướckhisửdụng.Cómộtsốchấtdẻothườnglẫntrongdungmôinhư:diankylphtalat,tri-n-butylphotsphatvàtri-n-

butylaxetylcitrar.Nhữngchấtnàycóthểlẫnvớidungmôitrongquátrìnhsảnxuất

NhữngtạpchấtcủaclorofocnhưCH2ClBr,CH2Cl2cóthểphảnứngvớiv à i hợpchấtnhưcáca n c a l o i dtạomuốib ậ c 4 v à nhữngsảnphẩmk h á c Tươngtựnhưvậy,sựcómặtcủamộtlượngnhỏaxitclohidric(HCl)cũngcót h ể gâyrasựphânhuỷ,sựkhửnướchaysựđồngphânhoávớicáchợpchấtkhác.Clorofoccóthểgâytổnthươngchoganvàthậnnênkhilàmviệcvớichấtnàycầnthaotáccẩnthậnvàkhéoléoởnơithoángmátvàphảiđeomặtnạphòngđộc.Metylencloritítđộchơnvàdễbayhơihơnclorofoc.

Metanolv à etanol8 0 % l à nhữngdungmôiphâncựchơncáchidrocacbonthếclo.Cácdungmôithuộcnhómrượuđượcchorằngsẽthấmtốthơnlênmàngtếbàonênquátrìnhchiếtvớicácdungmôinàysẽthuđượclượnglớnc á c thànhphầntrongtếbào.Tráil ạ i , khảnăngphâncựccủaclorofocthấphơn, nócóthểrửagiảicácchấtnằmngoàitếbào.Cácancolhoàt a n phầnlớncácchấtchuyểnhoáphâncựccùngvớicáchợpchấtphâncựctrungbìnhvàthấp.Vìvậykhichiếtbằngancolthìcácchấtnàycũngbịhoàt an đồngthời.Thôngthườngdungmôicồntrongnướccónhữngđặctínhtốtnhấtchoquátrìnhchiếtsơbộ

Tuynhiêncũngcómộtvàisảnphẩmđượctạothànhkhidùngmethanoltrongsuốtquátrìnhchiết.Thíd ụ trechlonolideA thuđượctừtrechonaetesaciniatađượcchuyểnthànhtrechonolideBbằngquátrìnhphânhuỷ1-

Ngườitathườngítsửdụngnướcđểthuđượcdịchchiếtthôtừcâymàthayvàođólàdùngdungdịchnướccủametanol

Dietyletehiếmkhiđượcdùngchocácquátrìnhchiếtthựcvậtvìnórấtdễb a y hơi,d ễ bốcc h á y v à r ấ t đ ộ c , đồngthờinócóxuhướngtạothànhperoxitdễnổ,peroxitcủadietyletedễgâyphảnứngoxihoávớinhữnghợpchấtkhôngcókhảnăngtạocholesterolnhưcáccalotenoid.Tiếpđếnlàaxetoncũngcóthểtạothànhaxetonitnếu1,2-cis-

diolcómặttrongmôitrườngaxit.Quátrìnhchiếtdướiđiềukiệnaxithoặcbazơthườngđượcdùngvớiquátrìnhphântáchđặctrưng,cũngcókhixửlýcácdịchchiếtbằngaxit–bazơcóthểt ạ o thànhnhữngsảnphẩmmongmuốn

Sựhiểubiếtvềnhữngđ ặ c tínhcủanhữngchấtchuyểnhoát h ứ cấptrongcâyđượcchiếtsẽrấtquantrọngđểtừđólựachọndungmôithíchhợpchoquátrìnhchiếttránhđược sựphânhuỷcủachấtbởidungmôivàquátrìnhtạothànhchấtmongmuốn

Thôngthườngquátrìnhchiếtngâmkhôngđượcsửdụngnhưphươngphápchiếtliêntụcbởimẫuđượcngâmvớidungmôitrongmáychiếtkhoảng2 4 giờrồichấtchiếtđượclấyra.Thôngthườngquátrìnhchiếtmộtmẫuchỉthựchiệnqua3lầndungmôivìkhiđócặnchiếtsẽkhôngcònchứanhữngchấtgiátrịnữa.Sựkếtthúcquátrìnhchiếtđượcxácđịnhbằngmộtvàicáchkhácnhau

Vídụ:Khichiếtcácancaloid,tacóthểkiểmtrasựxuấthiệncủahợpchấtnàybằngsựtạothànhkếttủavớinhữngtácnhânđặctrưngnhưtácnhân:DragendroffvàMaye

Chiếtngâml à mộttrongnhữngphươngphápđượcs ử dụngrộngrãinhấttrongquátrìnhchiếtthựcvậtbởinókhôngđòihỏinhiềucôngsứcvàthờigian.Thiếtbịsửdụnglàmộtbìnhthuỷtinhvớimộtcáikhoáởdướiđáyđểđiềuchỉnhtốcđộchảythíchhợpchoquátrìnhtáchrửadungmôi.Dungmôicóthểnónghoặclạnhnhưngnóngsẽđạthiệuquảcaohơn.Trướcđây,máychiếtngâmđòihỏiphảilàmbằngkimloạinhưnghiệnnaycóthểdùngbìnhthuỷtinh

Thôngthườngquátrìnhchiếtngâmkhôngđượcsửdụngnhưphươngphápchiếtliêntụcbởimẫuđượcngâmvớidungmôitrongmáychiếtkhoảng2 4 giờrồichấtchiếtđượclấyra.Thôngthườngquátrìnhchiếtmộtmẫuchỉthựchiệnqua3lầndungmôivìkhiđócặnchiếtsẽkhôngcònchứanhữngchấtgiátrịnữa.Sựkếtthúcquátrìnhchiếtđượcxácđịnhbằngmộtvàicáchkhácnhau

1.4 Cácphươngphápsắckýtrongphânlậpcáchợpchấthữucơ

Phươngphápsắcký(Chromatography)làmộtphươngphápphổbiếnv à hữuhiệunhấthiệnnay,đượcsửdụngrộngrãitrongviệcphânlậpcáchợpchấthữucơnóichungvàcáchợpchấtthiênnhiênnóiriêng

1.4.1 Đặcđiểmchungcủaphươngphápsắcký

Sắckýlàphươngpháptáchcácchấtdựavàosựkhácnhauvềbảnchấthấpphụvàs

ựphânbốkhácnhaucủachúnggiữahaipha:phađộngvàphatĩnh.Sắckýgồmcóphađộngvàphatĩnh.Khitiếpxúcvớiphatĩnh,cáccấutửcủahỗnhợpsẽphânbốgiữaphađộngvàphatĩnhtươngứngvớitínhchấtcủachúng(tínhbịhấpphụ,tínhtan…).Cácchấtkhácnhausẽcóáilựckhácnhauvớiphađộngvàphatĩnh.Trongquátrìnhphađộngchuyểnđộngdọctheohệsắckýhếtlớpphatĩnhnàyđếnlớpphatĩnhkhác,sẽlặpđilặplạiquátìnhhấpphụvàphảnhấpphụ.Kếtquảlàcácchấtcóáilựclớnvớiphatĩnhsẽchuyểnđộngchậmhơnquahệthốngsắckýsovớicácchấttươngtácyếuhơnvớiphanày,nhờđặcđiểmnàyngườitacóthểtáchcácchấtquaquátrìnhsắcký

1.4.2 Cơsởcủaphươngphápsắcký

Phươngphápsắckýdựavàosựphânbốkhácnhaucủacácchấtgiữaphatĩnhvàphađộng.Ởđiềukiệnnhiệtđộkhôngđổi,địnhluậtmôtảsựphụthuộccủalượngchấtbịhấpphụlênphatĩnhvớinồngđộcủadungdịch(hoặcvớichấtkhílàápsuấtriêngphần)gọilàđịnhluậthấpphụđơnphântửđẳngnhiệtLangmuir:

n =Error!

Trongđó: n:lượngchấtbịhấpphụlênphatĩnhlúcđạtcânbằng

C:nồngđộcủachấtbịhấpphụ

1.4.3 Phânloạicácphươngphápsắcký

Trongphươngphápsắcký,phađộnglàcáclưuthế(cácchấtởtrạngtháikhíhaylỏng),cònphatĩnhcóthểlàcácchấtởtrạngtháilỏnghoặcrắn.Dựavàotrạngtháitậphợpcủaphađộng,ngườitachiasắckýthànhhainhómlớn:sắckýlỏngvàsắckýkhí.Dựavàocáchtiếnhànhsắcký,ngườitachiarathànhcácphươngphápsắckýchủyếusau:

1.4.3.1 Sắckýcột(C.C)

chấthấpphụlàphatĩnhgồmc á c loạisilicagel(cókíchthướchạtkhácnhau)phathườngvàphađảoYMC,ODS,Dianion.Chấthấpphụđượcnhồivàocột(cộtcóthểbằngthuỷtinhhoặckimloại,phổbiếnnhấtlàcộtthuỷtinh).Độmịncủachấthấpphụhếtsứcquantrọng,nóphảnánhsốđĩalýthuyếthaykhảnăngtáchcủachấthấpphụ.Độhạtcủachấthấpphụcàngnhỏthìsốđĩalýthuyếtcànglớn,khảnăngtáchcàngcaovàngượclại.Tuynhiên,nếuchấthấpphụcókíchthướchạtcàngnhỏthìtốcđộchảycànggiảm.Trongmộtsốtrườnghợp,nếulựctrọngtrườngkhôngđủlớnthìgâyr a hiệntượngt ắ c cột(dungmôikhôngchảyđược),khiđóngườitaphảisửdụngápsuất,vớiápsuấttrungbình(MPC),ápsuấtcao(HPLC)

Trongsắckýcột,tỷlệđườngkính(D)sovớichiềucaocột(L)rấtquantrọng,nóthểhiệnkhảnăngtáchcủacột.TỷlệL/

Dphụthuộcvàoyêucầutách,tứclàphụthuộcvàohỗnhợpchấtcụthể.Trongsắcký,tỷlệgiữađườngđicủachấtcầntáchsovớiquãngđườngđicủadungmôilàRf,vớimỗimộtchấtsẽcómộtRfkhácnhau.NhờvàosựkhácnhauvềRfnàymàtacóthểtáchtừng

1/10),cònnếutáchtinhthìtỷlệnàycaohơnvàtuỳvàohệsốtách(tứcphụthuộcvàosựkhácnhauRfcủacácchất),màhệsốnàytrongkhoảng1/20-1/30

Trongsắckýcột,việcđưachấtlêncộthếtsứcquantrọng.Tuỳthuộcvàolượngchấtv à dạngchấtmàngườitac ó thểđưachấtlêncộtbằngcácphươngphápkhácnhau.Nếulượngchấtnhiềuvàchạythôthìphổbiếnlàtẩmchấtvàosilicagelrồilàmkhô,tơihoàntoàn,đưalêncột.Nếutáchtinhthìđưatrựctiếpchấtlêncộtbằngcáchhoàtanchấtbằngdungmôichạycộtvớilượngtốithiểu

Cóhaicáchđưachấthấpphụlêncột:

- Cách1:Nhồicộtkhô.Theocáchnày,chấthấpphụđượcđưatrựctiếpvàocộtkhicònkhô,sauđódùngquemềmđểgõnhẹlênthànhcộtđểchấthấpphụsắpxếpchặttrongcột.Sauđódùngdungmôichạycộtđểchạycộtđếnkhicộttrongsuốt

- Cách2:Nhồicộtướt.Tứclàchấthấpphụđượchoàtantrongdungmôichạycộttrướcvớilượngdungmôitốithiểu.Sauđóđưadầnlêncộtđếnkhiđủlượngcầnthiết

Khichuẩnbịcộtphảilưuýkhôngđượcđểbọtkhíbêntrong(nếucóbọtkhígâynênhiệntượngchạyrốitrongcộtvàgiảmhiệuquảtách)vàcộtkhôngđượcnứt, gãy

Tốcđộchảycủadungmôicũngảnhhưởngđếnhiệuquảtách.Nếutốcđộdòngchảyquálớnsẽlàmgiảmtốcđộhiệuquảtách.Cònnếutốcđộdòngchảyquáthấpthìsẽkéodàithờigiantáchvàảnhhưởngđếntiếnđộcôngviệc

1.4.3.2 Sắckýlớpmỏng

Sắck ý lớpmỏng(SKLM)thườngđượcsử đụngđểk i ể m trav à địnhhướngchosắckýcột.SKLMđượctiếnhànhtrênbảnmỏngtrángsẵnsilica