Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)Nâng cao năng suất sinh sản của lợn nái Landrace và Yorkshire thông qua chọn lọc bằng chỉ thị phân tử (Luận án tiến sĩ)
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ VINH NÂNG CAO NĂNG SUẤT SINH SẢN CỦA LỢN NÁI LANDRACE VÀ YORKSHIRE THÔNG QUA CHỌN LỌC BẰNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ Chuyên ngành : Chăn nuôi Mã số : 62 01 05 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÀ NỘI - 2018 Cơng trình hồn thành tại: HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS VŨ ĐÌNH TƠN Phản biện 1: PGS.TS Đinh Văn Chỉnh Học viện Nông nghiệp Việt Nam Phản biện 2: TS Phạm Thị Kim Dung Cục Chăn nuôi Phản biện 3: TS Phạm Sỹ Tiệp Viện Chăn nuôi Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Học viện họp tại: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi giờ, ngày tháng năm 2018 Có thể tìm hiểu luận án thƣ viện: - Thƣ viện Quốc gia Việt Nam - Thƣ viện Học viện Nông nghiệp Việt Nam PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Chọn lọc sử dụng thị phân tử MAS (marker assisted selection) công nghệ gen sử dụng phục vụ cho công tác chọn giống lợn phổ biến Các gen thị RBP4 (Retiol-Binding Protein 4), RNF4 (Ring Finger Protein 4) IGF2 (Insulin like Growth Factor 2) quan tâm gen ứng viên cho suất sinh sản lợn Tại Việt Nam, năm gần việc ứng dụng di truyền phân tử chọn lọc giống cải thiện suất chăn nuôi lợn đạt thành tựu định Tuy nhiên nghiên cứu chủ yếu tập trung vào đánh giá ảnh hưởng số gen đến tính trạng sinh trưởng suất thịt lợn Rất ít, chí chưa có nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng gen RNF4, RBP4 IGF2 đến tính trạng suất sinh sản lợn sử dụng gen phục vụ cho công tác chọn tạo giống lợn có suất sinh sản cao Xuất phát từ lý trên, nghiên cứu tiến hành đánh giá mối liên quan đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 với suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire, từ xác định gen ứng viên cho suất sinh sản lợn làm sở cho công tác chọn tạo giống vật nuôi sau 1.2 MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI 1.2.1 Mục tiêu chung Đánh giá mối liên quan đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 với suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire nhằm phục vụ cho công tác giống định hướng chọn lọc theo kiểu gen để nâng cao suất sinh sản giống lợn 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - Đánh giá thực trạng suất sinh sản yếu tố ảnh hưởng đến suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire nuôi sở nghiên cứu; - Xác định tính đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2; - Đánh giá mối liên quan đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 với suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire; - Đánh giá mối liên quan đa hình gen RNF4 RBP4 với sinh trưởng suất thịt lợn Landrace Yorkshire 1.3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU Đề tài tiến hành xác định mối liên quan đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 với suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire sở nghiên cứu Công ty TNHH lợn giống hạt nhân DABACO Xí nghiệp Chăn ni lợn Đồng Hiệp vòng 2,5 năm 1.4 NHỮNG ĐĨNG GĨP MỚI CỦA ĐỀ TÀI - Đề tài xác định đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 đánh giá mối liên quan đa hình gen đến tính trạng suất sinh sản sinh trưởng lợn Landrace Yorkshire - Định hướng chọn lọc lợn Landrace Yorkshire mang kiểu gen cho suất sinh sản cao từ sớm từ rút ngắn thời gian chọn lọc quy mơ đàn hậu bị, từ nâng hiệu chăn ni đáp ứng yêu cầu sản xuất chăn nuôi nước ta 1.5 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.5.1 Ý nghĩa khoa học - Đề tài cơng trình khoa học nghiên cứu cách tương đối có hệ thống đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 mối liên quan đa hình gen với suất sinh sản sinh trưởng giống lợn Landrace Yorkshire - Kết nghiên cứu đóng góp thêm tư liệu cho giảng dạy, nghiên cứu khoa học mối liên quan đa hình gen với suất sinh sản sinh trưởng lợn 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn - Cung cấp thơng tin có khoa học khả sản xuất lợn Landrace Yorkshire giúp sở chăn nuôi nâng cao hiệu việc sử dụng khai thác giống lợn sản xuất - Lợn giống mang kiểu gen mong muốn sở giữ lại làm nguyên liệu trì đàn giống gốc sản xuất giống có chất lượng cao cung cấp cho người chăn nuôi - Giá thành giống sản xuất có khả cạnh tranh cao cần đầu tư ban đầu để tạo đàn giống có suất sinh sản cao Các sở giống chọn lọc sớm giống, loại thải đưa vào ni thịt, từ nâng cao hiệu chăn nuôi cho sở PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU Hiện giới công tác giống, công nghệ gen ứng dụng rộng rãi để chọn tạo giống vật nuôi Việc chọn tạo giống dựa vào gen đặc hiệu mang lại hiệu lớn không chọn cá thể có vốn gen tốt mà rút ngắn đáng kể thời gian chọn lọc Gen RNF4 (Ring finger protein 4) nằm NST số genome lợn RNF4 chất đồng vị thụ thể steroid, làm tăng q trình phiên mã glucocorticoid, progesterone, estrogen (Moilanen et al., 1998; Saville et al., 2002), tác động đến phát triển tế bào mầm bào thai, q trình chín tế bào granulosa (tế bào hạt) nang noãn (Hirvonen-Santti et al., 2004), tỷ lệ rụng trứng (Rohrer et al., 1999) Theo Niu et al (2009), vùng intron gen RNF4 (Ring Finger Protein 4) có alen T C Nái có kiểu gen CC có số sơ sinh số sơ sinh sống/ổ cao nái mang kiểu gen TT Chính vậy, RNF4 coi gen ứng cử viên liên quan đến suất sinh sản Gen RBP4 nằm NST số 14 gen lợn RBP4 thành viên thứ nhóm RBP, gen biểu thời gian mang thai lợn (Harney et al., 1993) Mang thai trì q trình mang thai lợn đòi hỏi tương tác thể nái với tử cung, mô tử cung nái (Chiocca et al., 1989), tiết hormone estrogen, prostaglandins protein (Schindler, 1986) Theo Harney and Bazer (1990) khoảng vào ngày thứ 10 đến 12 thai kỳ, tử cung lợn nái tiết RBP Retinol biding protein có số chức quan trọng giai đoạn đầu trình mang thai Retinol ảnh hưởng đến trình phiên mã gen (Chiocca et al., 1989), hình thành loại tế bào, sản sinh steroid, tạo tế bào máu tế bào miễn dịch (Amatruda and Koeffler, 1986), tạo tế bào interferon (Blalock and Gifford, 1976) Tất sản phầm dường khơng thể thiếu việc hình thành trì thành cơng cho giai đoạn mang thai lợn Điều cho thấy retinol RBP4 có vai trò quan trọng thời gian mang thai lợn (Harney et al., 1993) Mặt khác, retinol protein gắn kết đóng vai trò quan trọng phát triển phôi bào thai Sự thiếu thừa retinol gây quái thai (Lefebvre et al., 2005).Tỷ lệ chết phôi giảm số sơ sinh khối lượng sơ sinh/ổ tăng lên lợn nái mang thai tiêm β-carotene vitamin A (Chew, 1996; Coffey and Britt, 1993) Ngoài ra, retinol protein liên kết có liên quan đến việc giảm tỷ lệ chết phôi Sự biểu tăng lên gen RBP4 nội mạc tử cung quan sát thấy lợn nái vào ngày thứ 10 ngày thứ 12 thai kỳ, cho thấy tầm quan trọng vitamin A protein vận chuyển vitamin A trình mang thai (Harney et al., 1993) Chính lý mà gen RBP4 coi gen ứng viên tiềm cho suất sinh sản lợn IGF2 nằm NST số lợn gồm 10 exon Thụ thể IGF2 IGFPB - đóng vai trò quan trọng trình sinh trưởng phát triển bào thai thể sau sinh Gen IGF2 xác định nằm nhiễm sắc thể số lợn Một SNP nằm vùng intron (IGF2-in3-G3072A) chứng minh ảnh hưởng đến phát triển mỡ lợn (Jeon et al., 1999; Jungerius et al., 2004; Nezer et al., 1999; Van Laere et al., 2003) Một cơng trình khác nghiên cứu SNP nằm vùng intron (Horák et al., 2001; Knoll et al., 2000) sử dụng enzyme NciI phương pháp PCR-RFLP cho thấy đa hình gen IGF2 intron có ảnh hưởng đến số sơ sinh, số sơ sinh sống lợn Black Pied Prestice Do đó, IGF2 intron coi gen ứng viên cho suất sinh sản lợn PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU Nghiên cứu thực đàn lợn Landrace Yorkshrie chủng 3.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU Nghiên cứu tiến hành sở chăn nuôi Công ty TNHH lợn giống hạt nhân DABACO, Huyện Tiên Du, Tỉnh Bắc Ninh Xí nghiệp Chăn ni Đồng Hiệp, Tỉnh Hải Phòng Phân tích đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 thực Phòng thí nghiệm sinh học phân tử Bộ môn Di truyền giống vật nuôi, Khoa Chăn nuôi, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 3.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU (1) Đánh giá thực trạng suất sinh sản yếu tố ảnh hưởng đến suất sinh sản đàn lợn nái Landrace Yorkshire nuôi sở nghiên cứu; (2) Xác định đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 quần thể lợn nái Landrace Yorkshire; (3) Mối liên quan đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 với suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire; (4) Mối liên quan đa hình gen RNF4, RBP4 với suất sinh trưởng lợn hậu bị Landrace Yorkshire 3.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.4.1 Đánh giá thực trạng suất sinh sản yếu tố ảnh hƣởng đến suất sinh sản đàn lợn nái Landrace Yorkshire sở giống a Vật liệu Nghiên cứu thực 951 lợn nái bao gồm 537 Landrace 414 Yorkshire chủng nuôi sở giống Công ty TNHH lợn giống hạt nhân DABACO Xí nghiệp chăn ni lợn Đồng Hiệp khoảng thời gian từ năm 2011 đến 2016 b Phương pháp nghiên cứu Đàn lợn nái nuôi Xí nghiệp Chăn ni lợn Đồng Hiệp ni điều kiện chuồng hở thức ăn công nghiệp đàn lợn ni Cơng ty TNHH lợn giống hạt nhân DABACO ni điều kiện chuồng kín thức ăn công nghiệp cung cấp tự động Quy trình chăm sóc ni dưỡng phòng trị bệnh thực theo quy trình sở Các tiêu nghiên cứu bao gồm: Tuổi phối giống lần đầu, tuổi đẻ lứa đầu theo dõi đàn hậu bị Năng suất sinh sản đánh giá thông qua tiêu: số sơ sinh/ổ, số sơ sinh sống/ổ, số cai sữa/ổ, tỷ lệ sơ sinh sống, tỷ lệ sống đến cai sữa, khối lượng sơ sinh/con, khối lượng sơ sinh/ổ, khối lượng cai sữa/con, khối lượng cai sữa/ổ khoảng cách lứa đẻ Xăm số tai thực lúc sơ sinh Dựa vào số thẻ nái, sổ ghi chép trang trại dể thu thập số liệu nghiên cứu Số sơ sinh/ổ, số sơ sinh sống/ổ, số cai sữa/ổ xác định cách đếm thời điểm tương ứng Khối lượng sơ sinh/con, khối lượng cai sữa/con cân cân đồng hồ thời điểm tương ứng Cân khối lượng sơ sinh cân đồng hồ 5kg với phân độ nhỏ 20g, sai số nhỏ ± 10g, số số lớn ± 30g Cân khối lượng lợn cai sữa cân đồng hồ 10kg với phân độ nhỏ 50g, sai số nhỏ ± 25g, sai số lớn ± 50g Khối lượng sơ sinh/ổ, khối lượng cai sữa/ổ tổng khối lượng toàn ổ thời điểm sơ sinh cai sữa Tỷ lệ sơ sinh sống = (số sống /số đẻ ra) x 100; tỷ lệ sống đến cai sữa = (số cai sữa/số sống) x 100 c Xử lý số liệu Số liệu xử lý phần mềm SAS 9.1 (2002) Sử dụng mơ hình phân tích phương sai yếu tố để phân tích ảnh hưởng yếu tố giống đến tính trạng suất sinh sản Các tham số thống kê bao gồm dung lượng mẫu (n), giá trị trung bình (Mean) sai số tiêu chuẩn So sánh cặp đôi giá trị trung bình theo phương pháp Duncan mức ý nghĩa P< 0,05 Mơ hình thống kê: Yij = μ + Bi + εij; Trong đó: Yij: tiêu suất sinh sản; Bi: ảnh hưởng giống thứ ith (i = 2: Landrace Yorkshire); εij: sai số ngẫu nhiên Sử dụng thủ tục GLM để phân tích yếu tố ảnh hưởng đến tính trạng suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire Các tham số thống kê bao gồm dung lượng mẫu (n), trung bình bình phương nhỏ (LSM) sai số tiêu chuẩn (SE) So sánh giá trị LSM theo cặp phép thử Tukey Mơ hình thống kê: Yijkl = μ + Fi + Pj+ Sk + εijkl; Trong đó: Yijkl: tiêu suất sinh sản; µ: trung bình quần thể; Fi: ảnh hưởng trại thứ ith (i = 2: DABACO Đồng Hiệp); Pj: ảnh hưởng lứa thứ jth (j =6: lứa 1, 2, 3, 4, ≥ 6); Sk: ảnh hưởng mùa vụ thứ kth (k = 2: đông-xuân hèthu); εijkl: sai số ngẫu nhiên 3.4.2 Xác định đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 quần thể lợn nái Landrace Yorkshire a Vật liệu Lợn nái Landrace Yorkshire, mẫu mô tai chúng sử dụng để phân tích kiểu gen b Phương pháp nghiên cứu Lấy mẫu Mẫu mô tai lợn nái Landrace Yorkshire thu thập, sau vận chuyển bình đá lạnh bảo quản nhiệt độ - 20oC Bộ môn Di truyền- Giống vật nuôi, Khoa Chăn nuôi, Học viện Nông nghiệp Việt Nam phân tích Tách chiết ADN ADN tổng số tách chiết sử dụng Kit QIAamp ADN FFPE TISSUE hãng QIAGEN ADN tổng số kiểm tra phương pháp điện di gel agarose 1% hiệu điện 110V, cường độ dòng điện 91mA 15-20 phút Mỗi giếng điện di chứa µl sản phẩm ADN trộn với µl loading dye 6X Một giếng chứa thang ADN 1000 bp Gel agarose trộn với µl thuốc nhuộm huỳnh quang Red Safe Kết đọc tia UV buồng đọc IGenius3 Tiếp theo ADN tổng số định lượng máy đo quang phổ bước sóng 260nm 280nm Sản phẩm tách chiết ADN lý tưởng có số OD đạt 100 ng/μl với độ tinh (tỷ lệ A260/A280) đạt 1,8 ~ 2,2 ADN sau pha loãng nồng độ ADN microlit 50ng/µl bảo quản -20oC Khuếch đại ADN Các gen RNF4, RBP4 IGF2 khuyếch đại sử dụng cặp mồi thiết kế theo Niu et al (2009), Rothschild et al (2000) Knoll et al (2000) Vùng nhân mồi phản ứng thể Bảng 3.1 Phản ứng PCR (thể tích 25µl) để khuếch đại gen sử dụng ADN genome, mồi khuếch đại, dNTPs, MgCl2, Taq polymerase dung dịch đệm cho phản ứng Chương trình nhân đoạn gen RNF4: 94oC vòng phút, 94oC 45 giây, 50oC 45 giây, 72oC phút lặp lại 35 chu kì, bước extension 72oC 10 phút Chương trình nhân đoạn gen RBP4: 95oC vòng phút, 95oC 30 giây, 56oC 45 giây, 72oC 45 giây lặp lại 35 chu kì, bước extension 72oC phút Và chương trình nhân đoạn IGF2: 95oC vòng phút, 95oC vòng 20 giây, 55oC 30 giây, 72oC 60 giây lặp lại 35 chu kỳ, bước extension 72oC phút Kết khuyếch đại gen phương pháp điện di gel agarose 1,5% Bảng 3.1 Trình tự mồi, sản phẩm PCR enzyme cắt giới hạn gen RNF4, RBP4 IGF2 RBP4 Vị trí (Amio acid change) DQ208408:g.358 T>C Intron Exon and exon IGF2 Intron Gen RNF4 NST Mồi xuôi mồi ngược (5’-3’) CGAAATGCCAGGGAAGAG CCATGCAGATCGGACAACT GAGCAAGATGGAATGGGTT CTCGGTGTCTGTAAAGGTG CACAGCAGGTGCTCCATCGG GACAGGCTGTCATCCTGTGGG 14 Enzyme cắt SacII MspI NciI Nguồn Niu et al (2009) Rothschild et al (2000) Knoll et al (2000) Phân tích đa hình gen Đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 xác định kỹ thuật PCRRFLP (Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism) với enzyme cắt đặc hiệu cho gen SacII, MspI NciI Sản phẩm khuếch đại ủ với 5U enzyme giới hạn thời gian - 37oC water bath Kiểm tra kết cắt enzyme đọc phương pháp điện di gel agarose 2,5% c Xử lý số liệu Tần số alen kiểu gen tính phần mềm excel (2010) Sau liệu xử lý thống kê phần mềm SAS 9.1 (2002) Các tham số thống kê bao gồm dung lượng mẫu (n), tần số quan sát, tần số ước tính lý thuyết Phép thử bình phương (Chi-square test) sử dụng nhằm kiểm định mức độ phù hợp tần số kiểu gen, tần số alen quan sát so với lý thuyết 3.4.3 Mối liên quan đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2 với suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire Sau xác định đa hình gen RNF4, RBP4 IGF2, mối liên quan đa hình gen với suất sinh sản xác định Số liệu thu thập xử lý thống kê phần mềm SAS 9.1 (2002) Các tham số gồm dung lượng mẫu (n), trung bình bình phương nhỏ (LSM) sai số tiêu chuẩn So sánh giá trị LSM theo cặp pháp so sánh Tukey Mơ hình tuyến tính tổng qt GLM sử dụng để phân tích mối liên quan gen ước tính giá trị cộng gộp (a) giá trị trội (d) đến tính trạng suất sinh sản sau:Yijklm = µ + Gi + Fj + Pk + Sl + eijklm; Trong đó: Yijklm: tiêu suất sinh sản; µ: trung bình quần thể; Gi: mối liên quan kiểu gen thứ ith gen RNF4 (i = TT, TC, CC) RBP4 (i = AA, AB, BB) IGF2 (i = AA, AB, BB); Fj: ảnh hưởng trại thứ jth (j = 2: DABACO Đồng Hiệp); Pk: ảnh hưởng lứa thứ kth (k =6: lứa 1, 2, 3, 4, ≥ 6); Sl: ảnh hưởng mùa vụ thứ lth (l = 2: đông-xuân hèthu); εijklm: sai số ngẫu nhiên Ảnh hưởng giá trị cộng gộp (a) xác định tương ứng 0,5; -0,5 cho CC, TC TT (cho gen RNF4); BB, AB AA (cho gen RBP4) BB, AB AA (cho gen IGF2); ảnh hưởng giá trị trội (d) xác định tương ứng -0,5; -0,5 cho CC, TC TT (cho gen RNF4); BB, AB AA (cho gen RBP4) BB, AB AA (cho gen IGF2) Mô hình sử dụng để phân tích mối liên quan đa hình gen RNF4 RBP4 với suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire qua lứa đẻ 3.4.4 Mối liên quan đa hình gen RNF4, RBP4 với sinh trƣởng suất thịt lợn Landrace Yorkshire a Vật liệu Tổng số 284 lợn hậu bị bao gồm 146 Landrace 138 Yorkshire Công ty TNHH lợn giống hạt nhân DABACO sử dụng nội dung Lợn bấm số tai từ lúc sinh b Phương pháp nghiên cứu Mẫu mô đuôi sau lấy từ lợn vận chuyển bình đá lạnh bảo quản nhiệt độ -20oC phân tích Xác định kiểu gen cá thể thực Phòng Thí nghiệm Bộ mơn Di truyền giống, Khoa Chăn nuôi, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Phương pháp tách chiết ADN, khuyếch đại xác định đa hình gen RNF4 RBP4 trình bày mục 3.4.2 Lợn ni kiểm tra có khối lượng từ 30-40 kg tương ứng với 70-90 ngày tuổi (khối lượng bắt đầu kiểm tra) Kết thúc kiểm tra lợn đạt khối lượng từ 80-90kg tương ứng với 130-160 ngày tuổi (khối lượng kết thúc kiểm tra) Khối lượng thời điểm bắt đầu kiểm tra kết thúc kiểm tra cân cân điện tử vào buổi sáng trước cho ăn Tăng khối lượng trung bình/ngày tính giai đoạn cơng thức: Tăng khối lượng bình qn/ngày = (Tăng khối lượng / Số ngày nuôi) x1000 Độ dày mỡ lưng độ dày thăn đo lợn sống máy siêu âm Agroscan AL với đầu dò ALAL350 (ECM, France) vị trí xương sườn - cuối, cách đường sống lưng cm cá thể sống Tỷ lệ nạc uớc tính thơng qua độ dày mỡ lưng độ dày thăn phương trình hồi quy Bộ Nơng nghiệp Bỉ khuyến cáo (1998): Y = 59,902386 – 1,060750X1 + 0,229324X2; Trong đó: Y: tỷ lệ nạc ước tính (%); X1: độ dày mỡ lưng, bao gồm da (mm); X2: độ dày thăn (mm) c Xử lý số liệu Số liệu xử lý phần mền SAS 9.1 (2002) Các tham số thống kê bao gồm dung lượng mẫu (n), trung bình bình phương nhỏ (LSM) sai số tiêu chuẩn (SE) So sánh giá trị LSM theo cặp phép so sánh Tukey Mô hình tuyến tính tổng qt GLM sử dụng để phân tích mối liên quan gen (RNF4 RBP4) với tính trạng suất sinh trưởng Số ngày nuôi thời điểm bắt đầu cân sử dụng hiệp phương sai để phân tích khối lượng bắt đầu ngày cân khối lượng bắt đầu khơng hoàn toàn thực thời điểm số nuôi thời điểm kết thúc sử dụng hiệp phương sai để phân tích tiêu khối lượng kết thúc, ADG tiêu suất thịt Yijk = µ + b*tijk RNP4i + RBP4j + eijk; Trong đó: Yijk: Giá trị quan sát; µ: Giá trị trung bình; tijk độ tuổi theo ngày cá thể thứ k với kiểu gen RNF4 thứ i RBP4 thứ j; b: hệ số hồi quy tuyến tính yijk thời điểm tijk; RNF4i: Ảnh hưởng kiểu gen RNF4 thứ ith (i = 3: TT, TC CC); RBP4j: Ảnh hưởng kiểu gen RBP4 thứ jth (j = 3: AA, AB BB); eij: Sai số ngẫu nhiên PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 NĂNG SUẤT SINH SẢN VÀ CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN NĂNG SUẤT SINH SẢN CỦA LỢN NÁI LANDRACE VÀ YORKSHIRE NUÔI TẠI CÁC CƠ SỞ NGHIÊN CỨU 4.1.1 Năng suất sinh sản lợn nái Landrace Yorkshire Kết cho thấy hầu hết tiêu suất sinh sản có khác biệt lợn nái Landrace lợn nái Yorkshire (P < 0,05) ngoại trừ tuổi đẻ lứa đầu, khối lượng sơ sinh/ổ số ngày cai sữa (P>0,05) Lợn nái Landrace có tiêu tuổi phối giống lần đầu khoảng cách lứa đẻ (249,72 149,11 ngày) ngắn so với lợn nái Yorkshire (257,40 150,59 ngày) Tuy nhiên lợn nái Yorkshire lại có tiêu số sơ sinh/ổ, số sơ sinh sống/ổ số cai sữa/ổ (12,21; 10,75 9,32 con) cao so với lợn nái Landrace (11,22; 10,18 9,10 con) Khối lượng sơ sinh/con, khối lượng cai sữa/ổ khối lượng cai sữa/con lợn sinh từ nái Yorkshire nhỏ so với nái Landrace Điều hoàn toàn phù hợp với kết số từ sơ sinh đến cai sữa Tỷ lệ sơ sinh sống tỷ lệ sống đến cai sữa lợn nái Landrace (90,25 89,39%) cao lợn nái Yorkshire (88,66 85,05%) (P < 0,05) Tuổi đẻ lứa đầu số ngày cai sữa lợn nái Landrace Yorkshire nuôi sở nghiên cứu khơng có sai khác có ý nghĩa thống kê (P>0,05) Tuổi đẻ lứa đầu dao động khoảng 367,66 – 372,06 ngày, số ngày cai sữa dao động khoảng 22,97 – 23,15 ngày Bảng 4.1 Năng suất lợn nái Landrace Yorkshire Chỉ tiêu Tuổi phối giống lần đầu (ngày) Tuổi đẻ lứa đầu (ngày) Khoảng cách lứa đẻ (ngày) Số sơ sinh/ổ (con) Số sơ sinh sống/ổ (con) Tỷ lệ sơ sinh sống (%) Khối lượng sơ sinh/ổ (kg) Khối lượng sơ sinh/con (kg) Số cai sữa/ổ (con) Số ngày cai sữa (ngày) Tỷ lệ sống đến cai sữa (%) Khối lượng cai sữa/ổ (kg) Khối lượng cai sữa/con (kg) n 537 507 1562 2777 2746 2744 2600 2600 1630 1607 1607 1310 1310 Landrace Mean 249,72b 367,66 149,11b 11,22b 10,18b 90,25a 16,57 1,49a 9,10b 23,15 86,39a 64,31a 6,59a SE 1,87 2,15 0,28 0,08 0,08 0,31 0,11 0,01 0,03 0,11 0,38 0,42 0,03 n 414 412 1249 2439 2426 2425 2303 2303 1516 1504 1504 1378 1378 Yorkshire Mean 257,40a 372,06 150,59a 12,21a 10,75a 88,66b 16,69 1,39b 9,32a 22,97 85,05b 62,46b 6,22b SE 2,17 2,45 0,28 0,08 0,08 0,34 0,12 0,02 0,04 0,12 0,41 0,45 0,04 Trong hàng, giá trị LSM có chữ khác sai khác có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) kiểu TC có băng tương ứng 937bp, 545bp, 392bp; kiểu CC có băng tương ứng 545bp, 392bp (Hình 4.2) Gen RNF4 Gen RBP4 Gen IGF2 Hình 4.2 Kết điện di sản phẩm cắt RNF4-SacII, RBP4-MspI IGF2-NciI gel agarose (2,5%) Các kiểu gen đƣợc ghi đỉnh giếng M: thang đo ADN Sản phẩm PCR gen RBP4 cắt enzyme MspI tạo nên alen tương ứng alen A xuất điểm cắt cho băng ADN với kích thước 190bp, 154bp 136bp alen B xuất điểm cắt cho băng ADN với kích thước 190bp, 136bp 125bp Tổ hợp alen A B tạo nên ba kiểu gen tương ứng là: Kiểu AA có băng tương ứng 190bp, 154bp 136bp; kiểu AB có băng tương ứng 190bp, 154bp, 136bp 125bp; kiểu BB có băng tương ứng 190bp, 136bp 125bp.Trên thực tế, kiểu gen AA có băng 190bp, 154bp, 136bp 70bp; kiểu gen BB có băng 190bp, 136bp, 125bp, 70bp 29bp vạch 70bp 29bp không thấy rõ điện di độ phân dải thấp Tuy nhiên, phân biệt kiểu gen AA, BB hoàn toàn so với kết nghiên cứu trước (Rothschild et al 2000; Korwin-Kossakowska et al 2005; Terman et al 2007) Sản phảm PCR gen IGF2 cắt enzyme NciI tạo nên alen tương ứng alen A xuất điểm cắt cho băng ADN với kích thước 308 28 bp alen B xuất điểm cắt cho băng ADN với kích thước 208, 100 28 bp Tổ hợp alen A B tạo nên ba kiểu gen tương ứng là: Kiểu AA có băng tương ứng 308 28 bp; kiểu AB có băng tương ứng 308 bp, 208 bp, 100 bp 28 bp; kiểu BB có băng tương ứng 208 bp, 100 28 bp 4.2.3 Tần số kiểu gen alen đa hình gen a Tần số kiểu gen alen gen RNF4 Tần số alen kiểu gen gen RNF4 trình bày Bảng 4.3 Ở nái Landrace, alen C kiểu gen CC xuất với tần số thấp (0,23 0,10) nái Yorkshire, tần số xuất alen C kiểu gen CC lại cao với giá trị 0,63 0,57 Khi nghiên cứu phân bố alen gen RNF4 số giống lợn khác nhau, Niu et al (2009) tần số alen C xuất dao động khoảng 0,47 – 0,69, tần số alen C xuất với tần số cao giống lợn Meishan (0,69), Tongcheng (0,61), Yorkshire (0,47) Trong nghiên cứu này, lợn Yorkshire có tần số alen C tương đối cao (0,63) lại xuất với tần số thấp (0,23) lợn Landrace Tần số kiểu gen alen gen RNF4 giống lợn Landrace 11 Yorkshire không trạng thái cân Hardy-Weinberg (P