Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (tt)

Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)Nghiên cứuthành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng và vịnh Hạ Long (LA tiến sĩ)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGUYỄN VĂN TUẤN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ LỒI THỰC VẬT VÙNG VEN BIỂN CẦN GIỜ, SĨC TRĂNG VÀ VỊNH HẠ LONG Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 62.44.01.14 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội – 2017 Cơng trình hồn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học 1: PGS.TS Nguyễn Thị Hoàng Anh Người hướng dẫn khoa học 2: TS Trần Thị Phương Thảo Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … ’, ngày … tháng … năm 2017 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam I MỞ DẦU Tính cấp thiết luận án Vịnh Hạ Long nơi chứa đựng đầy đủ giá trị địa chất, địa mạo đa dạng sinh học Ở đó, số quần xã loài thực vật khác tìm thấy lồi lồi thực vật ngập mặn, thực vật bờ cát ven đảo, loài mọc sườn núi, vách đá vôi, đỉnh núi cửa hang Hiện nay, nhà khoa học phát 19 loài thực vật đặc hữu Vịnh Hạ Long Trong có số lồi Hedyotis lecomtei, Allophylus leviscens, Chirita gemella, Đại đa số loài thực vật chưa nghiên cứu hóa học dược lý học Rừng ngập mặn ven biển Cần Giờ Sóc Trăng quần thể lồi động, thực vật cạn thủy sinh hình thành vùng châu thổ rộng lớn cửa sông Đồng Nai, Sài Gòn, Vàm Cỏ Đơng, Vàm Cỏ Tây UNESCO công nhận khu dự trữ sinh giới với hệ động thực vật đa dạng độc đáo điển hình vùng ngập mặn với 150 lồi thực vật Đây địa điểm lí tưởng cho cơng tác nghiên cứu khoa học Để đóng góp vào việc tìm hiểu, nghiên cứu, đánh giá cách có hệ thống hợp chất có hoạt tính sinh học từ loài thực vật vùng ven biển ngập mặn, đồng thời đề xuất hướng khai thác bảo tồn nguồn gen quý loài thực vật Việt Nam, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số lồi thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng Vịnh Hạ Long” Mục tiêu nghiên cứu luận án Nghiên cứu thành phần hố học hai lồi Chirita drakei vịnh Hạ Long Dolichandrone spathacea Sóc Trăng nhằm tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học, làm sở khoa học cho nghiên cứu Những nghiên cứu luận án - Phân lập hợp chất từ thân cành hai loài Chirita drakei thu hái vịnh Hạ Long Dolichandrone spathacea thu hái vùng ngập mặn tỉnh Sóc Trăng phương pháp sắc ký cột - Xác định cấu trúc hoá học hợp chất phân lập phương pháp phổ IR, MS, 1D-NMR, 2D-NMR - Đánh giá hoạt tính độc tế bào, hoạt tính kháng viêm, hoạt tính hạ đường huyết, hoạt tính chống oxi hóa hoạt tính kháng vi sinh vật dịch chiết hợp chất phân lập CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung thực vật vùng Hạ Long 1.1.1 Sơ lược thực vật 1.1.2 Tình hình nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số lồi thực vật đặc hữu vịnh Hạ Long 1.1.3 Tổng quan chi Chirita, họ Rau tai voi (Gesneriaceae) 1.1.4 Tình hình nghiên cứu Cày rita drake (Chirita drakei) 1.2 Giới thiệu chung thực vật vùng Cần Giờ, Sóc Trăng 1.2.1 Sơ lược thực vật 1.2.2 Tình hình nghiên cứu số lồi thực vật vùng Cần Giờ, Sóc Trăng 1.2.3 Tổng quan chi Dolichandrone, họ Quao (Bignoniaceae) 1.2.4 Tình hình nghiên cứu Quao nước (Dolichandrone spathacea) CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 2.1 Mẫu thực vật - Lá vỏ thân Quao nước (Dolichandrone spathacea) thu hái Sóc Trăng vào 04/2013, Cử nhân Ngô Văn Trại, Viện Dược liệu xác định tên khoa học Mẫu tiêu vỏ thân (QN1) lưu giữ phòng Tổng hợp Hữu cơ, Viện Hóa học, VAST - Mẫu Cày rita drake (Chirita drakei) phần mặt đất thu hái đảo vịnh Hạ Long, tỉnh Quảng Ninh vào 10/2013, tên khoa học TS Trần Thị Phương Anh, Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam, VAST xác định Tiêu (số VHH.HL10.2013.1) lưu giữ phòng Nghiên cứu Hợp chất Thiên nhiên, Viện Hóa học, VAST 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp chiết tách Sử dụng sắc ký lớp mỏng (TLC) sắc ký cột thường (CC) 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc Phương pháp xác định cấu trúc hóa học xác định dựa thông số vật lý kết hợp với phương pháp phổ gồm: Độ quay cực [α]D, phổ hồng ngoại (IR), phổ tử ngoại (UV-Vis), phổ khối phun mù điện tử (ESI-MS), phổ khối phân giải cao (HR-ESI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1DNMR): 1H-, 13C-NMR hai chiều (2D-NMR): HSQC, HMBC, COSY, NOESY 2.2.3 Phương pháp thử hoạt tính sinh học 2.2.3.1 Phương pháp thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Sử dụng ba chủng vi khuẩn gram (+): Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Lactobacillus fermentum; chủng vi khuẩn gram (-): Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica; chủng nấm men: Candida albicans 2.2.3.2 Phương pháp thử hoạt tính chống oxy hóa DPPH Sử dụng 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) tạo gốc oxy hóa tự dùng để sàng lọc chất chống oxy hóa 2.2.3.3 Phương pháp thử hoạt tính gây độc tế bào Phép thử tiến hành xác định hàm lượng protein tế bào tổng số dựa vào mật độ quang học (OD – Optical Density) đo thành phần protein tế bào nhuộm màu Sulforhodamine B (SRB) 2.2.3.4 Phương pháp thử hoạt tính kháng viêm Phép thử đánh giá khả ức chế IL-6 TNF-α 2.2.3.5 Phương pháp thử hoạt tính ức chế NO Phép thử xác định khả ức chế sản sinh NO tế bào macrophage RAW 264.7 2.2.3.6 Phương pháp thử hoạt tính hạ đường huyết Phép thử đánh giá khả ức chế enzym α-glucosidase 2.3 Chiết tách tinh chế hợp chất từ hai nghiên cứu 2.3.1 Cây Quao nước (Dolichandrone spathacea)  Phân lập chất từ Quao nước Hình 2.1 Sơ đồ phân lập chất từ Quao nước  Phân lập chất từ vỏ Quao nước Hình 2.2 Sơ đồ phân lập chất từ vỏ Quao nước 2.3.2 Cây Cày rita drake (Chirita drakei) ChiÕt MeOH 90% (6 x 2,5 L), 4h Bæ sung H2O, chiÕt -hexane (4 x 0,5 L) ChiÕt Ethyl acetate (4 x 0,5 L) hexane/EtOAc, 9/1 ChiÕt -butanol (4 x 0,5 L) 4/1 DCM/MeOH, 100/1 0/100 DCM/MeOH/H2O (4/1/0 -hexane/EtOAc, (2/1) -hexane/EtOAc, (3/2) DCM/MeOH, (10/1) DCM/MeOH, (9/1) EtOAc/MeOH/H2O (5/0,5/0,1 2,5/0,5/0,1 Rp-18 (MeOH/H2O, 2/3) Sephadex LH-20 (MeOH) DCM/MeOH/H2O (4/1/0,1 2/1/0,1) Rp-18 (Acetone/H2O, 3/7) Sephadex LH-20 (MeOH) Hình 2.3 Sơ đồ phân lập chất từ Cày rita drake  Số liệu phổ hợp chất phân lập từ Quao nước  Hợp chất QN1: 6-O-[(E)-4-methoxycinamoyl]catalpol Chất bột vơ định hình, màu trắng IR (KBr, νmax, cm-1): 2936 (-CH alkan), 1716 (C=O ester), 1633 (C=C alken), 1602 (C=C-Ar), 1063 (C-O ether) (+)ESI-MS m/z 523,1 [M+H]+, CTPT C25H30O12 1H-NMR (500 MHz, CD3OD + CDCl3), δH (ppm): 5,15 (d, 9,0, H-1); 6,36 (dd, 6,0; 1,5, H-3); 5,00 (dd, 6,0; 1,5, H-4); 2,63-2,61 (m, H-5); 5,05 (dd, 7,5; 1,0, H-6); 3,73 (br s, H-7); 2,67-2,64 (m, H-9); 4,16 (d, 13,0, H-10b); 3,87 (d, 13,0, H-10a); 4,81 (d, 8,0, H-1’); 3,333,32 (m, H-2’); 3,46-3,32 (m, H-3’); 3,30-3,28 (m, H-4’); 3,35-3,34 (m, H-5’); 3,94 (dd, 12,0; 2,0, H-6’b); 3,68 (dd, 12,0; 6,0, H-6’a); 7,55 (d, 8,0, H-2”, H6”); 6,95 (d, 8,0, H-3”, H-5”); 7,69 (d, 16,0, H-7”); 6,41 (d, 16,0, H-8”); 3,84 (s, -OCH3) 13C-NMR (125 MHz, CD3OD + CDCl3), δC (ppm): 94,88 (C-1); 142,17 (C-3); 102,74 (C-4); 36,46 (C-5); 81,09 (C-6); 60,05 (C-7); 66,67 (C-8); 42,89 (C-9); 61,12 (C-10); 99,47 (C-1’); 74,50 (C-2’); 77,38 (C-3’); 71,39 (C4’); 78,25 (C-5’); 62,63 (C-6’); 127,92 (C-1”); 130,90 (C-2”); 115,26 (C-3”); 162,98 (C-4”); 115,26 (C-5”); 130,98 (C-6”); 146,69 (C-7”); 115,31 (C-8”); 168,61 (C-9”); 52,81 (-OCH3)  Hợp chất QN2: Specioside Chất bột vơ định hình, màu trắng (-)-ESI-MS m/z 507,1 [M-H]-, CTPT C24H28O12 1H-NMR (500 MHz, CD3OD), δH (ppm): 5,18 (d, 9,5, H-1); 6,39-6,38 (m, H-3); 5,00 (dd, 4,0; 6,0, H-4); 2,61-2,59 (m, H-5); 5,04 (d, 7,0, H-6); 3,72 (br s, H-7); 2,66-2,62 (m, H-9); 4,20 (d, 13,0, H-10b); 3,87 (d, 13,0, H-10a); 4,81 (overlap, H-1’); 3,34-3,27 (m, H-2’); 3,45-3,42 (m, H-3’); 3,34-3,27 (m, H-4’); 3,37-3,35 (m, H-5’); 3,95 (dd, 12,0; 2,0, H-6’b); 3,67 (dd, 12,0; 6,5, H-6’a); 7,49 (d, 8,5, H-2”, H-6”); 6,83 (d, 8,5, H-3”, H-5”); 7,70 (d, 16,0, H-7”); 6,40 (d, 16,0, H-8”) 13C-NMR (125 MHz, CD3OD), δC (ppm): 95,09 (C-1); 142,36 (C-3); 102,94 (C-4); 36,74 (C-5); 81,30 (C-6); 60,26 (C-7); 66,82 (C-8); 43,19 (C-9); 61,29 (C-10); 99,71 (C-1’); 74,84 (C-2’); 77,69 (C-3’); 71,75 (C-4’); 78,61 (C-5’); 62,92 (C-6’); 127,08 (C-1”); 131,30 (C-2”); 116,86 (C-3”); 161,39 (C-4”); 116,86 (C-5”); 131,30 (C-6”); 147,20 (C-7”); 114,61 (C-8”); 168,61 (C-9”)  Hợp chất QN3: 6-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]catalpol Chất bột vơ định hình, màu trắng IR (KBr, νmax, cm-1): 2903 (-CH alkan), 1717 (C=O ester), 1635 (C=C alken), 1594 (C=C-Ar), 1086 (C-O ether) (+)ESI-MS m/z 580,7 (95%) [M+Na+5H]+ CTPT C26H32O13 1H-NMR (500 MHz, CD3OD + CDCl3), δH (ppm): 5,05-5,00 (m, H-1); 6,34 (dd, 4,5; 2,0, H-3); 5,055,00 (m, H-4); 2,65-2,64 (m, H-5); 5,05-5,00 (m, H-6); 3,74 (br s, H-7); 2,712,66 (m, H-9); 4,03 (d, 13,0, H-10b); 3,95 (overlap, H-10a); 4,84 (d, 8,0, H-1’); 3,39-3,36 (m, H-2’); 3,52-3,48 (m, H-3’); 3,39-3,36 (m, H-4’); 3,52-3,48 (m, H5’); 3,88 (dd, 12,0; 5,5, H-6’b); 3,78 (dd, 12,0; 5,0, H-6’a); 7,09 (d, 1,5, H-2”); 6,90 (d, 8,5, H-5”); 7,14 (dd, 8,5; 1,5, H-6”); 7,68 (d, 15,5, H-7”); 6,38 (d, 15,5, H-8”); 3,92 (-OCH3) 13C-NMR (125 MHz, CD3OD + CDCl3), δC (ppm): 94,26 (C-1); 141,05 (C-3); 102,06 (C-4); 35,17 (C-5); 79,65 (C-6); 59,12 (C-7); 65,42 (C-8); 41,76 (C-9); 60,53 (C-10); 98,58 (C-1’); 73,02 (C-2’); 75,97 (C-3’); 69,29 (C-4’); 76,41 (C-5’); 60,91 (C-6’); 127,01 (C-1”); 111,00 (C-2”); 149,10 (C-3”); 151,30 (C-4”); 109,72 (C-5”); 122,86 (C-6”); 145,90 (C-7”); 114,64 (C8”); 167,32 (C-9”); 55,81 (-OCH3); 55,76 (-OCH3)  Hợp chất QN4: Minecoside Chất bột vô định hình, màu trắng 1H-NMR (500 MHz, CD3OD), δH (ppm): 5,18 (d, 9,5, H-1); 6,40-6,38 (m, H-3); 5,00 (dd, 6,0; 4,0, H-4); 2,612,60 (m, H-5); 5,05 (d, 7,0, H-6); 3,72 (br s, H-7); 2,66-2,62 (m, H-9); 4,18 (d, 13,0, H-10b); 3,88 (d, 13,0, H-10a); 4,78 (d, 8,0, H-1’); 3,31-3,27 (m, H-2’); 3,45-3,41 (m, H-3’); 3,31-3,27 (m, H-4’); 3,35-3,34 (m, H-5’); 3,95 (dd, 12,0; 2,5, H-6’b); 3,67 (dd, 12,0; 6,5, H-6’a); 7,21 (br s, H-2”); 6,82 (d, 8,0, H-5”); 7,11 (dd, 8,0; 1,5, H-6”); 7,68 (d, 16,0, H-7”); 6,40-6,38 (overlap, H-8”); 3,92 (s, -OCH3) 13C-NMR (125 MHz, CD3OD), δC (ppm): 95,07 (C-1); 142,39 (C3); 102,93 (C-4); 36,76 (C-5); 81,29 (C-6); 60,27 (C-7); 66,82 (C-8); 43,17 (C9); 61,30 (C-10); 99,69 (C-1’); 74,85 (C-2’); 77,70 (C-3’); 71,78 (C-4’); 78,66 (C-5’); 62,93 (C-6’); 127,98 (C-1”); 112,06 (C-2”); 147,85 (C-3”); 151,25 (C4”); 110,85 (C-5”); 122,59 (C-6”); 145,74 (C-7”); 114,62 (C-8”); 167,54 (C9”); 56,41 (-OCH3)  Hợp chất QN1a: 6-O-[(E)-4-methoxycinnamoylpentaacetate]catalpol Chất bột vơ định hình, màu trắng 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δH (ppm): 5,25-5,23 (m, H-1); 6,31 (d, 6,0, H-3); 5,02-4,97 (m, H-4); 2,69-2,66 (m, H-5); 5,165,12 (m, H-6); 3,71 (br s, H-7); 2,64-2,62 (m, H-9); 3,99 (d, 12,5, H-10b); 3,73 (overlap, H-10a); 4,89-4,85 (m, H-1’); 4,98-4,96 (m, H-2’); 4,98-4,96 (m, H-3’); 4,98-4,96 (m, H-4’); 4,89-4,85 (m, H-5’); 4,30 (dd, 12,0; 2,0, H-6’b); 4,21 (dd, 12,0; 4,0, H-6’a); 7,49 (d, 8,5, H-2”, H-6”); 6,91 (d, 8,5, H-3”, H-5”); 7,70 (d, 15,5, H-7”); 6,35 (d, 15,5, H-8”); 3,83 (s, -OCH3); 2,13; 2,12; 2,05; 2,04; 2,01 (s, -OCOCH3) 13CNMR (125 MHz, CDCl3), δC (ppm): 94,26 (C-1); 141,01 (C-3); 102,13 (C-4); 34,99 (C-5); 79,26 (C-6); 58,83 (C-7); 62,53 (C-8); 41,55 (C-9); 61,19 (C-10); 96,59 (C1’); 70,57 (C-2’); 72,28 (C-3’); 68,20 (C-4’); 72,53 (C-5’); 62,32 (C-6’); 126,85 (C1”); 129,88 (C-2”); 114,38 (C-3”); 161,64 (C-4”); 114,38 (C-5”); 129,88 (C-6”); 145,63 (C-7”); 114,54 (C-8”); 167,12 (C-9”); 55,34 (-OCH3); 170,62; 170,46; 170,16; 169,23; 169,02 (-COCH3); 20,66; 20,61; 20,58; 20,54 (-COCH3)  Hợp chất QN2a: Specioside hexaacetate Chất bột vơ định hình, màu trắng 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δH (ppm): 5,31 (t, 9,5, H-1); 6,40 (d, 5,5, H-3); 5,09-5,02 (m, H-4); 2,61-2,60 (m, H-5); 5,135,12 (m, H-6); 3,76 (br s, H-7); 2,61-2,60 (m, H-9); 3,93 (overlap, H-10b); 3,81 (d, 12,5, H-10a); 4,94 (m, H-1’); 5,09-5,02 (m, H-2’); 5,09-5,02 (m, H-3’); 5,09-5,02 (m, H-4’); 5,00-4,98 (m, H-5’); 4,38 (dd, 12,5; 2,5, H-6’b); 4,23 (dd, 12,5; 4,0, H6’a); 7,70 (d, 8,5, H-2”, H-6”); 7,19 (d, 8,5, H-3”, H-5”); 7,77 (d, 16,0, H-7”); 6,60 (d, 16,0, H-8”); 2,30; 2,14; 2,12; 2,04; 2,00 (s, -COCH3) 13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δC (ppm): 95,98 (C-1); 142,43 (C-3); 103,02 (C-4); 36,59 (C-5); 81,26 (C6); 60,06 (C-7); 64,76 (C-8); 42,79 (C-9); 62,30 (C-10); 98,13 (C-1’); 72,23 (C-2’); 73,36 (C-3’); 69,63 (C-4’); 74,05 (C-5’); 63,73 (C-6’); 133,31 (C-1”); 130,56 (C2”); 123,45 (C-3”); 154,03 (C-4”); 123,45 (C-5”); 130,56 (C-6”); 146,03 (C-7”); 118,39 (C-8”); 168,13 (C-9”); 172,68; 172,49; 171,62; 171,16; 170,95; 170,77 (COCH3); 20,90; 20,77; 20,73; 20,59; 20,54; 20,52 (-COCH3)  Hợp chất QN3a: 6-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoylpentaacetate]catalpol Chất bột vơ định hình, màu trắng 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δH (ppm): 5,25-5,21 (m, H-1); 6,32 (dd, 6,0; 1,5, H-3); 5,03-4,96 (m, H-4); 2,64-2,62 (m, H5); 5,16-5,12 (m, H-6); 3,71 (br s, H-7); 2,70-2,65 (m, H-9); 3,99 (d, 12,5, H-10b); 3,73 (overlap, H-10a); 4,89-4,85 (m, H-1’); 5,03-4,96 (m, H-2’); 5,03-4,96 (m, H3’); 5,03-4,96 (m, H-4’); 4,89-4,85 (m, H-5’); 4,31 (dd, 12,5; 2,5, H-6’b); 4,21 (dd, 12,5; 4,0, H-6’a); 7,07 (d, 1,5, H-2”); 6,87 (d, 8,0, H-5”); 7,12 (dd, 8,0; 1,5, H-6”); 7,68 (d, 16,0, H-7”); 6,36 (d, 16,0, H-8”); 3,91 (s, 3”-OCH3); 3,91 (s, 4”OCH3); 2,13; 2,12; 2,05; 2,04; 2,02 (s, -COCH3) 13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δC (ppm): 94,23 (C-1); 141,06 (C-3); 102,09 (C-4); 35,01 (C-5); 79,28 (C-6); 58,85 (C-7); 62,57 (C-8); 41,53 (C-9); 62,16 (C-10); 96,57 (C-1’); 70,54 (C-2’); 72,26 (C-3’); 68,15 (C-4’); 72,51 (C-5’); 62,35 (C-6’); 127,07 (C-1”); 111,01 (C-2”); 149,21 (C-3”); 151,39 (C-4”); 109,59 (C-5”); 122,91 (C-6”); 145,92 (C-7”); 114,72 (C-8”); 167,05 (C-9:); 55,95; 55,85 (-OCH3); 170,70; 170,54; 170,22; 169,28; 169,07 (-COCH3); 20,70; 20,65; 20,61; 20,57 (-COCH3)  Hợp chất QN4a: Minecoside hexaacetate Chất bột vô định hình, màu trắng 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δH (ppm): 5,18-5,15 (m, H-1); 6,27 (dd, 6,0; 1,5, H-3); 4,96-4,90 (m, H-4); 2,57-2,54 (m, H-5); 5,09-5,05 (m, H-6); 3,66 (br s, H-7); 2,61-2,58 (m, H-9); 3,92 (d, 12,5, H10b); 3,69 (overlap, H-10a); 4,82-4,79 (m, H-1’); 4,96-4,90 (m, H-2’); 4,964,90 (m, H-3’); 4,96-4,90 (m, H-4’); 4,82-4,79 (m, H-5’); 4,26 (dd, 12,0; 2,0, H-6’b); 4,13 (dd, 12,0; 4,0, H-6’a); 7,08-7,07 (m, H-2”); 7,00 (d, 8,0, H-5”); 7,08-7,07 (m, H-6”); 7,63 (d, 16,0, H-7”); 6,38 (d, 16,0, H-8”); 3,80 (s, -OCH3); 2,25; 2,06; 1,98; 1,97; 1,95 (s, -COCH3) 13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δC (ppm): 94,16 (C-1); 141,03 (C-3); 101,89 (C-4); 34,96 (C-5); 79,50 (C-6); 58,77 (C-7); 62,58 (C-8); 41,47 (C-9); 61,14 (C-10); 96,50 (C-1’); 70,55 (C-2’); 72,12 (C-3’); 68,12 (C-4’); 72,50 (C-5’); 62,32 (C-6’); 132,97 (C-1”); 117,20 (C-2”); 141,57 (C-3”); 151,32 (C-4”); 111,30 (C-5”); 123,18 (C-6”); 145,26 (C7”); 121,32 (C-8”); 166,72 (C-9”); 55,80 (-OCH3); 170,96; 170,87; 170,37; 169,51; 169,32; 168,97 (-COCH3); 20,51; 20,46; 20,43 (-COCH3)  Hỗn hợp QN5: Dolichandrone C (mới) QN6: Dolichandrone D (mới) Chất bột vơ định hình màu trắng [ ]25D -76 (c 1.0, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε): 200 (3,20) 308 (2,87) nm; ESI-MS m/z 361,1 [M-H]-, 363,0 [M+H]+; HR-ESI-MS m/z 385,1242 [M+Na]+ (tính tốn lý thuyết cho công thức C19H22O7Na, 385,1263) CTPT C19H22O7 - Số liệu phổ NMR QN5: 1H-NMR (500 MHz, CD3OD), δH (ppm): 4,58 (d, 9,0, H-1); 3,58 (m, H-3); 1,58 (m, H-4); 2,38 (m, H-5); 5,34 (dd, 1,0; 10,0, H-6); 3,71 (m, H-7); 2,23 (dd, 7,5; 9,0, H-9); 3,80 (d, 13,0, H-10b); 3,62 (d, 13,0, H-10a); 7,59 (d, 9,0, H-2’, H-6’); 6,98 (d, 8,5, H-3’, H-5’); 7,70 (d, 16,0, H-7’); 6,43 (d, 16,0, H-8’); 3,85 (s, -OCH3) 13C-NMR (125 MHz, CD3OD), δC (ppm): 96,19 (C-1); 62,85 (C-3); 24,01 (C-4); 36,39 (C-5); 75,78 (C-6); 59,42 (C-7); 66,60 (C-8); 45,13 (C-9); 60,97 (C-10); 128,28 (C-1’); 131,12 (C-2’); 115,47 (C-3’); 163,29 (C-4’); 115,47 (C5’); 131,07 (C-6’); 146,53 (C-7’); 115,65 (C-8’); 169,28 (C-9’); 55,89 (-OCH3) - Số liệu phổ NMR QN6: 1H-NMR (500 MHz, CD3OD), δH (ppm): 5,35 (d, 4,2, H-1); 4,10 (m, H-3); 1,82 (m, H-4); 2,22 (m, H-5); 5,49 (dd, 1,0; 9,0, H-6); 3,61 (m, H-7); 2,55 (dd, 4,0; 7,0, H-9); 4,16 (d, 12,5, H-10b); 4,05 (d, 12,5, H-10a); 7,59 (d, 9,0, H-2’, H-6’); 6,98 (d, 8,5, H-3’, H-5’); 7,71 (d, 16,0, H-7’); 6,44 (d, 16,0, H-8’); 3,85 (s, -OCH3) 13C-NMR (125 MHz, CD3OD), δC (ppm): 91,03 (C-1); 54,46 (C-3); 23,42 (C-4); 33,50 (C-5); 77,42 (C-6); 60,97 (C-7); 67,20 (C-8); 40,82 (C-9); 61,42 (C-10); 128,33 (C-1’); 131,12 (C-2’); 115,47 (C3’); 163,29 (C-4’); 115,47 (C-5’); 131,07 (C-6’); 146,78 (C-7’); 115,91 (C-8’); 169,28 (C-9’); 55,89 (-OCH3)  Hợp chất QN7: Dolichandrone A (chất mới) Chất bột vơ định hình, màu trắng HR-ESI-MS m/z 475,41510 [M+H]+ (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C31H55O3, 475,41512) CTPT C31H54O3 1HNMR (CD3OD + CDCl3, 500 MHz), δH (ppm) 13C-NMR (CD3OD + CDCl3, 125 MHz), C (ppm): bảng 3.10 chương  Hợp chất QN8: Dolichandrone B (chất mới) Chất bột vơ định hình, màu trắng HR-ESI-MS m/z 495,3810 [M+Na]+, (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C31H52O3Na, 495,3814), CTPT C31H52O3 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz), δH (ppm): 1,91 (m, H-1b); 1,59 (m, H-1a); 2,69 (m, H-2b); 2,33 (m, H-2a); 1,63 (m, H-5); 1,42 (m, H-6b); 0,78 (m, H-6a); 1,34 (m, H-7b); 1,11 (m, H-7a); 1,55 (m, H-8); 2,14 (m, H-11b); 1,23 (m, H-11a); 1,70 (m, H-12); 1,35 (m, H-15b); 1,13 (m, H-15a); 1,66 (m, H-16b); 1,35 (m, H-16a); 1,72 (m, H17); 1,07 (s, H-18); 0,82 (d, 4,0, H-19b); 0,65 (d, 4,0, H-19a); 1,41 (m, H-20); 0,93 (d, 7,0, H-21); 1,60 (m, H-22b); 1,57 (m, H-22a); 1,71 (m, H-23b); 1,23 (m, H23a); 1,73 (m, H-25); 0,93 (d, 7,0, H-26); 0,89 (d, 7,0, H-27); 3,85 (d, 11,0, H28b); 3,35 (d, 11,0, H-28a); 1,00 (s, H-29); 1,00 (s, H-30); 1,07 (s, H-31) 13CNMR (CD3OD, 125 MHz), C (ppm): 30,43 (C-1); 38,86 (C-2); 217,87 (C-3); 56,02 (C-4); 42,18 (C-5); 22,15 (C-6); 26,75 (C-7); 49,51 (C-8); 22,07 (C-9); 26,32 (C-10); 27,63 (C-11); 33,96 (C-12); 46,36 (C-13); 49,82 (C-14); 36,66 (C15); 29,10 (C-16); 53,48 (C-17); 18,95 (C-18); 30,38 (C-19); 37,72 (C-20); 18,76 (C-21); 37,68 (C-22); 33,37 (C-23); 75,47 (C-24); 36,97 (C-25); 18,04 (C-26); 17,35 (C-27); 64,47 (C-28); 16,96 (C-29); 19,87 (C-30); 23,12 (C-31)  Hợp chất QN9: β-sitosterol H-NMR (CDCl3, 500 MHz), H (ppm): 5,38-5,36 (1H, m); 3,56-3,52 (1H, m); 2,33-2,25 (2H, m); 2,05-1,97 (2H, m); 1,89-1,82 (3H, m); 1,70-1,65 (2H, m); 1,54-1,11 (24H, m); 1,07 (3H, s); 1,00 (3H, d, 6,7); 0,87 (3H, t, 7,1); 0,86 (6H, br s); 0,70 (3H, s) 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), C (ppm): 140,79; 121,72; 71,82; 56,80; 56,10; 50,17; 45,88; 42,35; 42,33; 39,81; 37,28; 36,53; 36,16; 33,98; 31,93; 31,69; 29,20; 28,26; 26,14; 24,32; 23,10; 21,11; 19,82; 19,41; 19,06; 18,80; 12,00; 11,87  Hợp chất QN10: Daucosterol H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz), H (ppm): 0,65 (3H, s); 0,80 (3H, d, 6,9); 0,81 (3H, d, 6,8); 0,90 (3H, d, 6,5), 0,96 (6H, br s); 1,00 (3H, d, 6,7); 1,23 (3H, s, H-19); 1,38-1,41 (5H, m); 1,43-1,49 (4H, m); 1,62-1,49 (1H, m); 1,90-1,97 (3H, m); 2,10-2,17 (1H, m); 2,34-2,38 (1H, m), 2,87-2,91 (1H, m), 3,05-3,08 (2H, m); 3,10-3,14 (2H, m); 3,38-3,48 (2H, m); 3,64 (1H, dd, 5,5; 10,1); 4,22 (1H, d, 7,8); 4,39 (1H, t, 5,7); 4,83 (3H, m); 5,32 (1H, br s) 13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz), C (ppm): 140,4; 121,1; 100,7; 76,9; 76,7; 76,6; 73,4; 70,0; 61,0; 56,1; 55,4; 49,5; 45,1; 41,8; 38,2; 36,7; 36,1; 35,4; 33,3; 31,3; 31,3; 28,6; 27,7; 25,4; 23,8; 22,5; 20,5; 19,6; 19,0; 18,9; 18,5; 11,7; 11,6  Hợp chất QN11: Ursolic acid Chất bột vơ định hình, màu trắng IR (KBr, νmax, cm-1): 3448 (-OH acid), 2932 (-CH alkan), 1691 (C=O acid) (+)-ESI-MS m/z 479,23 [M+Na]+, CTPT C30H48O3 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz), H (ppm): 3,00 (m, H-3); 5,12 (br s, H12); 2,10 (d, 11,5, H-18); 0,89 (s, H-23); 0,67 (s, H-24); 0,86 (s, H-25); 0,75 (s, H26); 1,04 (s, H-27); 0,81 (d, 6,5, H-29); 0,90 (d, 6,5, H-30); 4,30 (d, 4,5, 3-OH); 11,88 (s, 28-OH) 13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz), C (ppm): 38,24 (C-1); 26,98 (C-2); 76,85 (C-3); 38,37 (C-4); 54,79 (C-5); 18,00 (C-6); 30,19 (C-7); 39,10 (C-8); 47,02 (C-9); 36,53 (C-10); 23,81 (C-11); 124,58 (C-12); 138,19 (C-13); 41,64 (C- 11 5,00 (m, H-4”’); 4,08 (dd, 4,5; 12,0, H-5”’b); 3,34 (dd, 8,0; 12,0, H-5”’a); 2,31; 2,30; 2,27; 2,26; 2,06; 2,05; 1,99 (3H, s); 2,03 (6H, s), COCH3) 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δC (ppm): 137,63 (C-1); 123,79 (C-2); 141,78 (C-3); 140,51 (C-4); 123,10 (C-5); 127,28 (C-6); 69,73 (C-α); 35,33 (C-β); 133,14 (C-1’); 122,85 (C-2’); 142,44 (C-3’); 143,64 (C-4’); 123,94 (C-5’); 126,60 (C-6’); 143,60 (C-7’); 118,59 (C-8’); 166,17 (C-9’); 100,72 (C-1”); 70,18 (C-2”); 80,12 (C-3”); 68,64 (C-4”); 71,98 (C-5”); 62,63 (C-6”); 101,10 (C-1”’); 70,84 (C-2”’); 72,34 (C-3”’); 68,85 (C-4”’); 61,78 (C-5”’); 20,92; 20,76; 20,74; 20,69; 20,66 (x2C); 20,63;20,61; 20,49, COCH3); 170,18; 169,83; 169,43; 169,34; 169,08; 168,36; 168,29; 168,04; 167,93, COCH3)  Hợp chất CD4: 2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl-β-D-glucopyranoside Chất bột vơ định hình, màu vàng nhạt (-)-ESI-MS m/z 315,0 [M-H]-, CTPT C14H20O8 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz), δH (ppm): 6,71 (d, 1,5, H-2); 6,69 (d, 8,0, H-5); 6,57 (dd, 1,5; 8,0, H-6); 3,67-3,74 (m, Ha-α); 4,05 (m, Hb-α); 2,80 (m, H-β); 4,31 (d, 7,5, H-1’); 3,20 (t, 8,0, H-2’); 3,28-3,39 (m, H-3’); 3,28-3,39 (m, H-4’); 3,283,39 (m, H-5’); 3,88 (dd, 1,5; 12,0, H-6’b); 3,68 (dd, 5,0; 12,0, H-6’a) 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz), δC (ppm): 131,55 (C-1); 117,13 (C-2); 146,11 (C-3); 144,64 (C4); 116,33 (C-5); 121,27 (C-6); 72,09 (C-α); 36,55 (C-β); 104,35 (C-1’); 75,11 (C2’); 77,92 (C-3’); 71,62 (C-4’); 78,07 (C-5’); 62,72 (C-6’)  Hợp chất CD5: Desrhamnosyl isoacteoside Chất bột vơ định hình, màu vàng nhạt (+)-ESI-MS m/z 501,0 [M+Na]+, CTPT C23H26O11 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz), δH (ppm): 6,69 (d, 2,0, H-2); 6,65 (d, 8,0, H-5); 6,56 (dd, 2,0; 8,0, H-6); 3,74 (m, Ha-α); 3,96 (m, Hb-α); 2,81 (t, 6,7, H-β); 4,35 (d, 8,0, H-1’); 3,24 (t, 8,0, H-2’); 3,38 (m, H-3’); 3,38 (m, H-4’); 3,38 (m, H-5’); 4,36 (dd, 5,5; 11,5, H-6’a); 4,51 (dd, 2,0; 11,5, H-6’b); 7,05 (d, 1,5, H2”); 6,78 (d, 8,0, H-5”); 6,91 (dd, 1,5; 8,0, H-6”); 7,58 (d, 15,7, H-7”); 6,30 (d, 15,7, H-8”) 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz), δC (ppm): 131,42 (C-1); 117,12 (C-2); 146,06 (C-3); 144,57 (C-4); 116,42 (C-5); 121,30 (C-6); 72,38 (C-α); 36,62 (C-β); 104,47 (C-1’); 75,01 (C-2’); 77,87 (C-3’); 71,70 (C-4’); 75,36 (C-5’); 64,64 (C-6’); 127,65 (C-1”); 115,10 (C-2”); 146,73 (C-3”); 149,59 (C-4”); 116,58 (C-5”); 123,20 (C-6”); 147,29 (C-7”); 117,08 (C-8”); 169,29 (C-9”)  Hợp chất CD6: Chiritoside C Chất bột vô định hình, màu vàng nhạt ESI-MS m/z 639,1 [M-H]-, 663,1 [M+Na]+, CTPT C29H36O16 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz), δH (ppm): 6,69 (d, 2,0, H-2); 6,65 (d, 8,0, H-5); 6,55 (dd, 2,0; 8,0, H-6); 3,74 (m, Ha-α); 3,96 (m, Hb-α); 2,81 (t, 7,5, H-β); 4,35 (d, 8,0, H-1’); 3,24 (t, 8,0, H-2’); 3,32-3,99 (m, H-3’); 3,323,99 (m, H-4’); 3,32-3,99 (m, H-5’); 4,34 (dd, 5,5; 11,5, H-6’a); 4,55 (dd, 2,0; 11,5, H-6’b); 7,11 (d, 2,0, H-2”); 7,20 (d, 8,5, H-5”); 6,94 (dd, 2,0; 8,5, H-6”); 7,59 (d, 15,5, H-7”); 6,39 (d, 15,5, H-8”); 4,88 (d, 7,5, H-1”’); 3,32-3,99 (m, H2”’); 3,32-3,99 (m, H-3”’); 3,32-3,99 (m, H-4”’); 3,32-3,99 (m, H-5”’); 3,32-3,99 (m, H-6”’) 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz), δC (ppm): 131,34 (C-1); 117,08 (C-2); 146,16 (C-3); 144,67 (C-4); 116,38 (C-5); 121,24 (C-6); 72,45 (C-α); 36,74 (C-β); 12 104,57 (C-1’); 75,08 (C-2’); 77,97 (C-3’); 71,85 (C-4’); 75,42 (C-5’); 64,81 (C6’); 130,99 (C-1”); 115,80 (C-2”); 148,49 (C-3”); 148,92 (C-4”); 118,11 (C-5”); 122,45 (C-6”); 146,37 (C-7”); 117,08 (C-8”); 168,69 (C-9”); 103,45 (C-1”’); 74,81 (C-2”’); 77,56 (C-3”’); 71,35 (C-4”’); 78,36 (C-5”’); 62,47 (C-6”’)  Hợp chất CD7: (+)-lariciresinol Chất bột vơ định hình, màu trắng [ ]25D +32 (c 0.1, MeOH) (+)-ESI-MS m/z 383,1 [M+Na]+, CTPT C20H24O6 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δH (ppm): 6,85 (d, 1,5, H-2); 6,86 (d, 8,0, H-5); 6,80 (dd, 1,5; 8,0, H-6); 4,78 (d, 7,0, H-7); 2,40 (m, H-8); 3,73-3,78 (m, H-9a); 3,92 (m, H-9b); 6,68 (m, H-2’); 6,83 (d, 8,0, H-5’); 6,69 (m, H-6’); 2,54 (dd, 10,5; 13,0, H-7’a); 2,90 (dd, 5,0; 13,0, H-7’b); 2,72 (m, H-8’); 3,74 (dd, 6,2; 8,5, H-9’a); 4,04 (dd, 6,5; 8,5, H-9’b); 3,87 (s, 3OCH3); 3,86 (s, 3’-OCH3) 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δC (ppm): 134,79 (C-1); 108,36 (C-2); 146,65 (C-3); 145,04 (C-4); 114,20 (C-5); 118,75 (C-6); 82,83 (C7); 52,58 (C-8); 60,88 (C-9); 132,28 (C-1’); 111,24 (C-2’); 146,55 (C-3’); 144,01 (C-4’); 114,44 (C-5’); 121,97 (C-6’); 33,30 (C-7’); 42,41 (C-8’); 72,88 (C-9’); 55,92 (3-OCH3); 55,92 (3’-OCH3)  Hợp chất CD8: (+)-isolariciresinol Chất bột vơ định hình, màu trắng [ ]25D +41 (c 0.1, MeOH) (-)-ESI-MS m/z 359 [M-H]-, CTPT C20H24O6 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz), δH (ppm): 6,67 (s, H-2); 6,21 (s, H-5); 2,79 (d, 7,5, H-7); 2,02 (m, H-8); 3,66-3,76 (m, H-9); 6,70 (d, 1,5, H2’); 6,76 (d, 8,0, H-5’); 6,63 (dd, 1,5; 8,0, H-6’); 3,84 (m, H-7’); 1,79 (m, H-8’); 3,42 (dd, 4,0; 11,0, H-9’a); 3,65 (m, H-9’b); 3,79 (s, 3-OCH3); 3,82 (s, 3’-OCH3) 13CNMR (CD3OD, 125 MHz), δC (ppm): 129,03 (C-1); 112,41 (C-2); 147,20 (C-3); 145,27 (C-4); 117,35 (C-5); 134,17 (C-6); 33,57 (C-7); 40,02 (C-8); 65,98 (C-9); 138,62 (C-1’); 113,82 (C-2’); 149,01 (C-3’); 145,94 (C-4’); 115,99 (C-5’); 123,20 (C-6’); 48,06 (C-7’); 48,02 (C-8’); 62,27 (C-9’); 56,36 (3-OCH3); 56,41 (3’-OCH3)  Hợp chất CD9: 24-methylenelanost-8-en-3β-ol Chất bột vơ định hình, màu trắng (+)-ESI-MS m/z 441 [M+H]+, CTPT C31H52O 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δH (ppm): 3,24 (dd, 4,0; 11,5, H-3); 0,69 (s, H-18); 1,00 (s, H-19); 0,92 (d, 6,5, H-21); 4,71 (br s, H-24a); 4,66 (d, 1,5, H-24b); 1,02 (d, 3,0, H-26); 1,03 (d, 3,0, H-27); 0,88 (s, H-28); 0,81 (s, H-29); 0,98 (s, H30) 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δC (ppm): 35,59 (C-1); 27,86 (C-2); 79,01 (C-3); 38,90 (C-4); 50,39 (C-5); 18,26 (C-6); 28,21 (C-7); 134,41 (C-8); 134,41 (C-9); 37,03 (C-10); 21,01 (C-11); 26,51 (C-12); 44,51 (C-13); 49,82 (C-14); 31,00 (C15); 30,85 (C-16); 50,41 (C-17); 15,76 (C-18); 18,72 (C-19); 36,49 (C-20); 19,15 (C-21); 35,59 (C-22); 31,29 (C-23); 156,94 (C-24); 105,93 (C-241); 33,81 (C-25); 22,00 (C-26); 21,87 (C-27); 15,43 (C-28); 27,97 (C-29); 24,27 (C-30)  Hợp chất CD10: 3α,24-dihydroxy-urs-12-en-28-oic acid Chất bột vơ định hình, màu trắng (+)-ESI-MS m/z 473 [M+H]+, CTPT C30H48O4 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz), δH (ppm): 3,79 (br s, H-3); 5,26 (br s, H-12); 2,22 (d, 11,5, H-18); 1,05 (s, H-23); 3,70 (d, 11,5, H-24b); 3,41 (d, 11,5, 13 H-24a); 0,95 (s, H-25); 0,84 (s, H-26); 1,16 (s, H-27); 0,92 (d, 6,5, H-29); 0,99 (br s, H-30).13C-NMR (CD3OD, 125 MHz), δC (ppm): 34,38 (C-1); 24,46 (C-2); 71,30 (C-3); 44,00 (C-4); 50,62 (C-5); 19,45 (C-6); 34,62 (C-7); 40,90 (C-8); 48,83 (C-9); 37,95 (C-10); 25,33 (C-11); 126,91 (C-12); 139,59 (C-13); 43,32 (C-14); 29,19 (C-15); 26,12 (C-16); 48,83 (C-17); 54,39 (C-18); 40,46 (C-19); 40,41 (C-20); 30,74 (C-21); 38,11 (C-22); 22,80 (C-23); 66,32 (C-24); 16,30 (C-25); 17,63 (C-26); 24,13 (C-27); 181,63 (C-28); 17,67 (C-29); 21,57 (C-30)  Hợp chất CD11: Brachyanin D Chất dầu không màu (+)-ESI-MS m/z 467 [M+Na]+, CTPT C20H28O11 H-NMR (CD3OD, 500 MHz), δH (ppm): 6,97 (d, 2,0, H-3); 6,89 (dd, 2,0; 8,5, H-5); 7,13 (d, 8,5, H-6); 6,63 (dd, 11,0; 17,5, H-7); 5,64 (d, 17,5, H-8b); 5,12 (d, 11,0, H-8a); 4,75 (d, 6,5, H-1’); 3,38 (m, H-2’); 3,47 (m, H-3’); 3,73 (m, H4’); 3,57 (m, H-5’); 4,06 (dd, 1,5; 11,0, H-6’b); 3,64 (dd, 6,5; 11,0, H-6’a); 4,76 (br s, H-1”); 3,38 (m, H-2”); 3,89 (m, H-3”); 3,50 (m, H-4”); 3,69 (dd, 6,5; 9,5, H-5”b); 1,25 (d, 6,5, H-5”a) 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz), δC (ppm): 146,59 (C-1); 148,31 (C-2); 114,37 (C-3); 135,01 (C-4); 119,52 (C-5); 118,55 (C-6); 137,65 (C-7); 112,84 (C-8); 104,12 (C-1’); 74,06 (C-2’); 77,63 (C-3’); 72,43 (C-4’); 77,10 (C-5’); 67,97 (C-6’); 102,25 (C-1”); 71,60 (C-2”); 72,19 (C-3”); 74,88 (C-4”); 69,89 (C-5”); 17,95 (C-6”)  Hợp chất CD12: Cannabiside B Chất dầu không màu (+)-ESI-MS m/z 234,8 [M+H+H·]+, CTPT C9H12O7 H-NMR (CD3OD, 500 MHz), δH (ppm): 8,02 (d, 8,0, H-4); 5,71 (d, 8,0, H-5); 5,91 (d, 4,5, H-2’); 4,20 (t, 5,0, H-3’); 4,16 (t, 5,0, H-4’); 4,02 (m, H-5’); 3,75 (dd, 3,0; 12,0, H-6’a); 3,86 (dd, 2,5; 12,0, H-6’b) 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz), δC (ppm): 166,19 (C-2); 153,03 (C-3); 142,73 (C-4); 102,65 (C-4); 90,76 (C-2’); 75,73 (C-3’); 71,31 (C-4’); 86,38 (C-5’); 62,29 (C-6’)  Hợp chất CD13: Digiferruginol Chất bột vơ định hình, màu vàng da cam (-)-ESI-MS m/z 253,0 [M-H]-, CTPT C15H9O4 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δH (ppm): 7,85 (d, 8,0, H-3); 7,82 (m, H-4); 8,30 (m, H-5); 7,77 (d, 7,5, H-6); 7,82 (m, H-7); 8,30 (m, H-8); 4,87 (s, -CH2OH); 2,35 (s, 2-CH2OH); 13,01 (s, 1-OH) 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δC (ppm): 159,70 (C-1); 137,99 (C-2); 134,09 (C-3); 119,34 (C-4); 127,30 (C-5); 133,21 (C-5a); 134,14 (C-6); 134,69 (C-7); 126,84 (C-8); 133,73 (C-8a); 188,98 (C-9); 115,20 (C-9a); 182,30 (C-10); 131,85 (C-10a); 59,13 (-CH2OH)  Hợp chất CD14: Epoxyconiferyl alcohol Chất bột vơ định hình, màu nâu đen (-)-ESI-MS m/z 195,0 [M-H]-, CTPT C10H12O4 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δH (ppm): 6,89 (d, 2,0, H-2); 6,88 (d, 8,2, H-5); 6,81 (dd, 2,0; 8,2, H-6), 3,88; 4,24 (dd, tín hiệu 1H, H-1’); 3,10 (m, H-2’); 4,74 (d, 4,5 Hz, H-3’); 3,89 (s, -OCH3); 5,72 (s, 4-OH) 13CNMR (CDCl3, 125 MHz), δC (ppm): 132,88 (C-1); 108,66 (C-2); 146,74 (C3); 145,26 (C-4); 114,31 (C-5); 118,94 (C-6); 71,64 (C-1’); 54,13 (C-2’); 85,86 (C-3’); 55,94 (OCH3) 14 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Các kết nghiên cứu Quao nước 3.1.1 Kết thử hoạt tính sinh học cao chiết - Kết thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư biểu mô (KB), ung thư gan (HepG2), ung thư phổi (Lu) ung thư vú (MCF7): Cao chiết n-hexane (QNL1) ức chế dòng tế bào ung thư mức độ trung bình với giá trị IC50 37,43; 68; 79,6; 81,74 g/ml Cao chiết dichlomethane (QNL2) acetone (QNL3) thể hoạt tính ức chế chọn lọc với dòng tế bào ung thư biểu mô KB với giá trị IC50 25,14; 101,08 g/ml - Kết xác định khả ức chế IL-6 TNF-α mẫu cao chiết methanol (QNL4): Mẫu cao chiết methanol (QNL4) bắt đầu ức chế tế bào miễn dịch sinh IL-6 nồng độ 12,5 µg/ml bắt đầu ức chế tế bào macrophage tăng sinh TNF-α nồng độ cao 50 µg/ml - Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế NO: Cao chiết methanol vỏ Quao nước (QNV3) có khả ức chế sản sinh NO tốt với giá trị IC50 26,20±2,32 μg/ml Các kết thử nghiệm hoạt tính sở để định hướng phân lập hợp chất từ cao chiết tương ứng 3.1.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập Từ phận vỏ phân lập xác định cấu trúc 14 hợp chất bao gồm iridoid (QN1-QN6), sterol (QN7-QN10), triterpenoid (QN11-QN12), dẫn xuất acid cinnamic (QN13), triglyceride (QN14) chuyển hóa dẫn xuất acetyl chất iridoid (QN1a-QN4a)  Hợp chất QN7: Dolichandrone A (chất mới) Cấu trúc hóa học tương tác COSY ( ) HMBC (→) QN7 Hợp chất QN7 thu dạng chất bột màu trắng Phổ khối HR-ESIMS ion dương QN7 cho pic ion giả phân tử m/z 475,41510 [M+H]+ (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C31H55O3 m/z 475,41512) Công thức phân tử rút từ pic ion giả phân tử số liệu phổ NMR C31H54O3 Phổ 1H-NMR QN7 có tín hiệu đặc trưng nhóm methine gắn nhóm β-hydroxy δH 3,71 (1H, dd, J = 4,5; 11,5 Hz, H-3), nhận định khẳng định phân tích giá trị số tương tác J proton H-3 với JH-3/H-2 = 11,5 Hz lớn, chứng tỏ H-3 vị trí axial hay α, tức nhóm –OH C-3 nằm vị trí equatorial hay có cấu hình β Sự xuất hai tín hiệu proton vòng cyclopropane thể δH 0,59 (1H, d, J = 4,0 Hz) 0,38 (1H, d, J = 4,0 Hz) Ngồi ra, có mặt nhóm hydroxymethylene xác nhận 15 phổ 1H-NMR δH 3,60 (1H, d, J = 11,0 Hz); 3,36 (1H, d, J = 11,0 Hz) Sự xuất bốn nhóm methyl bậc ba δH 1,05; 1,01; 0,94; 0,79 (mỗi tín hiệu 3H, s) ba nhóm methyl bậc hai δH 0,91 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-26); 0,89 (3H, d, J = 5,0 Hz, H-21), 0,87 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-27) Hình 3.19 Phổ HMBC QN7 Phổ 13C-NMR DEPT có mặt 31 nguyên tử carbon với carbon bậc bốn cộng hưởng δC 49,82; 46,26; 44,98; 26,63; 20,85, carbon bậc ba mang oxi δC 75,46, carbon nhóm methine δC 74,59; 42,21; 49,50; 53,41; 37,65; 36,93 có nhóm hidroxymethine δC 74,59 (C-3), 12 carbon nhóm methylene có nhóm hydroxymethylene δC 67,45 (C-28) carbon nhóm methyl δC 23,09 (C-31), 19,83 (C-30), 18,91 (C-18), 18,62 (C-21), 18,00 (C-26), 17,31 (C-27), 11,00 (C-29) Trên sở phân tích số liệu phổ 13C-NMR, DEPT HSQC khẳng định hợp chất QN7 sterol khung cycloartane Thông qua tương tác phổ HSQC vị trí carbon gán với proton tương ứng Trên phổ HMBC cho thấy tín hiệu tương tác proton H-28 (δH 3,60; 3,36) với C-29 (δC 11,00); C-4 (δC 44,98); C-3 (δC 74,59) C-5 (δC 42,21) cho phép xác định nhóm hydroxymethylene (C-28) gắn vị trí C-4 Tương tác proton hai nhóm methyl CH326 (δH 0,91) CH3-27 (δH 0,87) với carbon mang oxi bậc bốn C-24 (δC 75,46) với tương tác proton CH3-31 (δH 1,05) với C-24 (δC 75,46) C-25 (δC 36,93) chứng tỏ carbon nằm cạnh nhóm isopropyl Ngồi ra, tương tác proton CH3-21 (δH 0,89) với C-17 (δC 53,41), proton CH3-18 (δH 1,01) với C-12 (δC 33,98); C-13 (δC 46,26); C-14 (δC 49,82) C-17 (δC 53,41) với tương tác proton CH3-30 với C-13 (δC 46,26); C-14 (δC 49,82) C15 (δC 36,58) xác nhận phổ HMBC Phân tích chi tiết tương tác phổ COSY cho phép gán vị trí proton khung cycloartane, tương tác H-3 (δH 3,71) với H-2 (δH 1,67; 1,71), hai proton vòng cyclopropane H-19a (δH 0,37) H-19b (δH 0,58), hai proton nhóm hydroxylmethylene H-28a (δH 3,36) H-28b (δH 3,60) Phổ NOESY QN7 cho thấy tương tác H-3/H-28b, H-19/H-29 cho phép xác định cấu hình C-28 C-29 Như vậy, sở phân tích số liệu 16 phổ khối, 1D- 2D-NMR cho phép kết luận cấu trúc hóa học QN7 xác định 24-methylcycloart-3β,24ξ,28-triol Đây sterol đặt tên dolichandrone A Bảng 3.10 Số liệu phổ NMR QN7 C 10 11 12 13 14 15 16 a a,b δH 1,73 m (H-1b) 1,29 m (H-1a) 1,57 m (H-2b) 1,14 m (H-2a) 3,72 dd (11,5; 4,0) 1,63 m 1,58 m (H-6b) 0,83 m (H-6a) 1,32 m (H-7b) 1,17 m (H-7a) 1,55 m 2,05 m (H-11b) 1,15 m (H-11a) 1,62 m 1,35 m (H-15b) 1,33 m (H-15a) 1,95 m (H-16b) 1,35 m (H-16a) a,c δC 30,44 C 17 δH 1,67 m δC 53,41 30,41 18 1,01 s 18,91 74,59 19 30,83 44,98 42,21 21,82 20 21 22 26,77 23 49,50 20,85 26,63 27,39 24 25 26 27 0,58 d (4,0, H-19b) 0,37 d (4,0, H-19a) 1,37 m 0,89 d (6,0) 1,59 m (H-22b) 1,57 m (H-22a) 1,60 m (H-23b) 1,26 m (H-23a) 1,65 m 0,91 d (6,5) 0,87 d (6,5) 33,98 28 67,45 46,26 49,82 36,58 29 30 31 3,60 d (11,0, H-28b) 3,37 d (11,0, H-28a) 0,79 s 0,94 s 1,05 s 37,65 18,62 37,68 32,82 75,46 36,93 18,00 17,31 11,00 19,83 23,09 29,05 đo (CD3OD + CDCl3), b500 MHz, c125 MHz 3.1.3 Kết thử hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập 3.1.3.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào Trong hợp chất phân lập từ Quao nước (QN1, QN3, QN7, QN8, QN12) thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào kết cho thấy: Hợp chất QN12 (pomolic acid) thể hoạt tính gây độc tế bào trung bình 11 dòng tế bào ung thư với IC50 18,75 – 61,92 µM, mạnh dòng ung thư bạch cầu HL-60 với IC50 18,75 µM Hợp chất QN8 (dolichandrone B) ức chế chọn lọc dòng tế bào ung thư KB với IC50 18,77 µM Trong hợp chất QN7 (dolichandrone A) khơng thể hoạt tính 3.1.3.2 Kết thử hoạt tính kháng viêm Kết thử nghiệm cho thấy mẫu 6-O-[(E)-4-methoxycinnamoyl] catalpol (QN1) 6-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]catalpol (QN3) ức chế IL-6 TNF-α nồng độ 25 μg/ml Như vậy, khẳng định QN1 QN3 17 hoạt chất cao chiết methanol ức chế IL-6 TNF-α Sự có mặt IL-6 dịch Sự có mặt TNF-α dịch sau tế bào xử lý mẫu QN1 sau tế bào xử lý mẫu QN1 Hình 3.27 Sự có mặt IL-6 TNF-α dịch sau tế bào xử lý mẫu QN1 Sự có mặt IL-6 dịch Sự có mặt TNF-α dịch sau tế bào xử lý mẫu QN3 sau tế bào xử lý mẫu QN3 Hình 3.28 Sự có mặt IL-6 TNF-α dịch sau tế bào xử lý mẫu QN3 3.1.3.3 Kết thử hoạt tính ức chế sản sinh NO Hai iridoid QN1 QN3 có hàm lượng lớn cao chiết methanol vỏ (QNV3) lựa chọn tiếp tục thử nghiệm hoạt tính kháng viêm theo chế ức chế sản sinh NO Kết cho thấy hai mẫu nghiên cứu QN1 QN3 không gây độc tế bào thể ức chế sản sinh NO yếu với IC50 324,28-335,48 μM (chất đối chứng dương L-NMMA IC50 30,73 μM) 3.1.3.4 Kết thử hoạt tính hạ đường huyết Hai iridoid QN1 QN3 tiếp tục lựa chọn để thử hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Kết thử nghiệm cho thấy hợp chất QN1 QN3 thể khả ức chế enzyme α-glucosidase mạnh với IC50 191,50 175,52 μM (chất chuẩn acarbose IC50 278,80 μM) Một số nhận xét thành phần hóa học hoạt tính sinh học Quao nước (Dolichandrone spathacea): Kết phân lập chất từ vỏ Quao nước cho thấy chúng chứa chủ yếu hợp chất iridoid, steroid triterpenoid, ngồi chứa dẫn xuất acid cinnamic triglyceride Trong đó, hợp chất iridoid thành phần chủ yếu chiếm khối lượng lớn Quao nước (QN1 chiếm 0,45% QN3 chiếm 0,2% so với lượng mẫu khô ban đầu) Theo tài liệu tra cứu nay, hợp chất lần phân lập từ Quao nước Trong đó, có hợp chất hỗn hợp Dolichandrone C (QN5) Dolichandrone D (QN6), 18 Dolichandrone A (QN7) Dolichandrone B (QN8) Lần nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào kháng viêm Quao nước thử nghiệm Các kết cho thấy hợp chất QN12 thể khả gây độc tế bào 11 dòng tế bào ung thư tốt với IC50 18,75-61,92 μM, đặc biệt dòng ung thư bạch cầu HL-60 với IC50 18,75 μM Ngoài ra, hợp chất QN8 thể hoạt tính gây độc chọn lọc dòng tế bào KB với IC50 18,77 μM Hoạt chất QN1 QN3 có tác dụng ức chế yếu tố tiền viêm IL-6 TNF-α nồng độ 25 μg/ml Bên cạnh đó, hai hoạt chất QN1 QN3 không gây độc tế bào thể ức chế sản sinh NO yếu với IC50 324,28-354,77 μM (chất đối chứng dương L-NMMA IC50 30,73 μM) gợi mở nghiên cứu sâu hoạt tính kháng viêm sở phân lập bán tổng hợp dẫn xuất từ hai hợp chất Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ Quao nước 3.2 Các nghiên cứu Cày rita drake 3.2.1 Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập Từ Cày rita drake (Chirita drakei), loài thuộc chi Chirita lần nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Bằng phương pháp sắc ký cột thường phân lập 14 hợp chất, phương pháp phổ MS NMR xác định cấu trúc phenylethanoid (CD1-CD6), lignan (CD7-CD8), triterpenoid (CD9CD10), phenol glycoside (CD11), dẫn xuất furan (CD12), anthraquinone (CD13) phenylpropanoid (CD14) Dưới cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 19  Hợp chất CD2: Chiridrakoside A (chất mới) Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (→) CD2 Hợp chất CD2 phân lập dạng bột màu trắng Công thức phân tử xác định C28H34O16 sở xuất pic ion giả phân tử m/z 625,1763 [M-H]- (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C28H33O16, 625,1769) phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS Phổ 1H- 13C-NMR CD2 tương tự CD1, phenylethanoid glycoside, bao gồm nhóm phenylethyl, nhóm caffeoyl hai đơn vị đường (β-glucose β-xylose) Nhóm trans-caffeoyl cho tín hiệu ba proton thơm vòng benzen với hệ spin ABX H 7,07 (1H, d, J = 2,0 Hz); 6,80 (1H, d, J = 8,0 Hz); 6,98 (1H, dd, J = 2,0; 8,0 Hz), nối đơi có cấu hình trans H 6,28 (1H, d, J = 16,0 Hz); 7,59 (1H, d, J = 16,0 Hz) nhóm carbonyl C 168,44 Ngồi ra, hai tín hiệu proton anomer H 4,49 (1H, d, J = 7,5 Hz)/C 104,41 H 4,48 (1H, d, J = 7,5 Hz)/C 106,87 cho thấy phân tử CD2 có hai đơn vị đường -glucose -xylose Sự khác biệt CD2 so với CD1 đơn vị phenylethyl, thể qua thay nhóm methylene chất CD1 nhóm oxymethine (H 4,78/C 73,52) chất CD2 20 Hơn nữa, tín hiệu proton nhóm oxymethylene C- dịch chuyển phía trường thấp (H 4,67) so với hợp chất CD1 Hình 3.39 Phổ HMBC CD2 Nhóm hydroxyl gắn C-βđược khẳng định tương tác H- (H 4,78) với C-1 (C 133,58), C-2 (C 118,96), C-6 (C 114,75) C- (C 76,78) phổ HMBC với tương tác proton H-(H 4,78) với hai proton H (H 4,01 3,57) phổ COSY Cấu hình nhóm hydroxyl C- chưa xác định Các tương tác phổ HMBC H-1”’ (H 4,48) C-” (C 84,89); H-4” (H 4,94) C-9’ (C 168,38) H-1” (H 4,49) C- (C 76,78) chứng tỏ vị trí kết nối đơn vị glucose, xylose, caffeoyl phenylethyl chất CD2 giống chất CD1 Như vậy, cấu trúc hóa học hợp chất CD2 xác định [2(3,4-dihydroxyphenylglycol)]-3-O--D-xylopyranosyl-(1→3)-(4-O-caffeoyl)-D-glucopyranoside, đặt tên chiridrakoside A Bảng 3.16 Số liệu phổ NMR CD2 C α a,b δH β 1’ 6,73 (d, 2,0) 6,76 (d, 8,0) 6,86 (dd, 2,0; 8,0) 4,01 (dd, 3,0; 10,0) 3,57 m 4,78 (dd, 3,0; 10,0) - 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 7,07 (d, 2,0) 6,80 (d, 8,0) 6,98 (dd, 2,0; 8,0) a a,c δC 133,58 118,96 146,30 146,09 116,16 114,75 76,78 C 7’ 8’ 9’ 1” 2” 3” 4” δH 7,59 (d, 16,0) 6,28 (d, 16,0) 4,49 (d, 8,0) 3,57 m 3,91 m 4,94 (t, 9,0) δC 146,90 114,63 168,38 104,41 76,06 84,89 70,86 73,52 127,76 5” 6” 74,18 62,30 115,13 147,24 149,69 116,56 122,96 1”’ 2”’ 3”’ 4”’ 5”’ 3,57 m 3,57 m 3,65 m 4,48 (d, 8,0) 3,18 m 3,29 m 3,37 m 3,10 m 3,67 m đo CD3OD, b500 MHz, c125 MHz 106,87 75,78 77,57 71,02 67,30 21 3.2.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào số hợp chất phân lập Kết thử hoạt tính gây độc tế bào 14 hợp chất phân lập từ Cày rita drake cho thấy hai hợp chất CD14 CD10 thể hoạt tính yếu dòng tế bào biểu mơ (KB), ung thư gan (HepG2), ung thư phổi (LU) ung thư vú (MCF7) với IC50 46-128 μM 140-169 μM Hợp chất CD12 thể gây độc tế bào chọn lọc dòng tế bào ung thư vú MCF7 với IC50 96 μM Một số nhận xét thành phần hóa học hoạt tính sinh học Cày rita drake (Chirita drakei): Đây lần thành phần hóa học hoạt tính sinh học Cày rita drake nghiên cứu Việt Nam giới Kết phân lập xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập cho thấy Cày rita drake chứa chủ yếu hợp chất phenylethanoid (6/14 hợp chất) Trong số 14 hợp chất phân lập có 10 hợp chất lần phân lập từ chi Chirita Cusianoside B (CD1), Chiridrakoside A (CD2), Chiridrakoside B (CD3), (+)lariciresinol (CD7), (+)-isolariciresinol (CD8), 24-methylene-lanost-8-en-3β-ol (CD9), 3,24-dihydroxy-urs-12-ene-28-oic acid (CD10), Brachyanin D (CD11), Cannabiside B (CD12), Epoxyconiferyl alcohol (CD14) Trong đó, có hợp chất Chiridrakoside A (CD2) hợp chất lần phân lập từ thiên nhiên Chiridrakoside B (CD3) Kết thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào bốn dòng tế bào: ung thư biểu mơ (KB), ung thư gan (HepG2), ung thư phổi (Lu) ung thư vú (MCF7) 14 hợp chất phân lập từ Cày rita drake cho thấy có hợp chất CD10, CD12 CD14 thể hoạt tính mức độ khác Trong đó, hai hợp chất CD10 CD14 gây độc với dòng tế bào ung thư mức độ yếu, hợp chất CD12 thể chọn lọc với dòng ung thư vú (MCF7) Các kết thử nghiệm hoạt tính hợp chất phân lập từ hai Quao nước Cày rita drake trình bày hình 3.53 6-O-[(E)-4-methoxycinnamoyl]catalpol (QN1) Hoạt tính ức chế IL-6, TNF-α: 25 μg/ml Hoạt tính ức chế sản sinh NO: IC50 324,28 μM Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase: IC50 191,50 μM 6-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]catalpol (QN3) Hoạt tính ức chế IL-6, TNF-α: 25 μg/ml Hoạt tính ức chế sản sinh NO: IC50 335,48 μM Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase: IC50 175,52 μM 22 HO O H HO Dolichandrone B (QN8) Hoạt tính gây độc tế bào (μM) IC50: 18,87 (KB) 3,24-dihydroxy-urs-12-ene-28-oic acid (CD10) Hoạt tính gây độc tế bào (μM) IC50: 165±1,5 (KB), 167±1,2 (HepG2), 169±0,4 (Lu), 140±1,4 (MCF7) Pomolic acid (QN12) Hoạt tính gây độc tế bào (μM) IC50: 50,76 (NIH/3T3), 39,65 (KB), 44,60 (LU), 61,92 (MCF7), 44,60 (SK-Mel2), 18,75 (HL60), 48,73 (SW626), 37,49 (SW480), 51,08 (LNCaP), 35,37 (MKN7), 41,13 (RD) Cannabiside B (CD12) Hoạt tính gây độc tế bào (μM) IC50: 96±0,5 (MCF7) Epoxyconiferyl alcol (CD14) Hoạt tính gây độc tế bào (μM) IC50: 46±0,4 (KB), 47±0,6 (HepG2), 55±0,6 (Lu), 128±0,5 (MCF7) KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ hai loài nghiên cứu Quao nước Cày rita drake phân lập xác định cấu trúc hóa học 28 hợp chất khác nhau, chuyển hóa dẫn xuất acetyl 1.1 Về Quao nước (Dolichandrone spathacea) 1.1.1 Thành phần hóa học Từ vỏ thân Quao nước thu hái Sóc Trăng phân lập, chuyển hóa xác định cấu trúc hóa học 14 hợp chất dẫn xuất acetyl có chất bao gồm: iridoid: 6-O-[(E)-4-methoxycinnamoyl]catalpol (QN1); specioside (QN2); 6-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]catalpol (QN3); minecoside (QN4), hỗn hợp dolichandrone C (QN5, chất mới) dolichandrone D (QN6, chất mới), steroid: dolichandrone A (QN7, chất mới); dolichandrone B (QN8, chất mới); β-sitosterol (QN9); daucosterol (QN10), triterpenoid: ursolic acid (QN11); pomolic acid (QN12), dẫn xuất acid cinnamic: trans-4-methoxycinnamic acid (QN13), triglyceride: Glycerol 1,2-di-(9Z,12Z-octadecadienoate) 3-dodecanoate (QN14), dẫn xuất acetyl: 6specioside O-[(E)-4-methoxycinnamoylpentaacetate]catalpol (QN1a), hexaacetate (QN2a), 6-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoylpentaacetate]catalpol (QN3a), minecoside hexaacetate (QN4a) 23 1.1.2 Hoạt tính sinh học  Kết thử hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư cho thấy: Cao chiết dichlomethane (QNL2) ức chế dòng KB (IC50 25,14 g/ml) Acid pomolic (QN12) ức chế mạnh dòng HL-60 với IC50 18,75 μM Hợp chất dolichandrone B (QN8) ức chế chọn lọc dòng KB với IC50 18,77 μM Hai iridoid QN1 QN3 khơng gây độc tế bào dòng tế bào ung thư thử nghiệm  Kết thử hoạt tính kháng viêm: Hai iridoid có hàm lượng lớn 6-O-[(E)-4-methoxycinnamoyl]catalpol (QN1) 6-O-[(E)-3,4dimethoxycinnamoyl]catalpol (QN3) ức chế IL-6 TNF-α nồng độ 25 μg/ml  Kết thử hoạt tính ức chế sản sinh NO: Cao chiết methanol vỏ (QNV3) ức chế sản sinh NO mức trung bình với IC50 26,20 μg/ml (chất đối chứng dương L-NMMA IC50 7,76 μg/ml) Hai iridoid QN1 QN3 thể ức chế sản sinh NO yếu với IC50 324,28-335,48 μM (chất đối chứng dương LNMMA IC50 30,73 μM)  Kết thử hoạt tính hạ đường huyết: Hai iridoid QN1 QN3 ức chế enzyme α-glucosidase mạnh với IC50 191,50 175,52 μM (chất đối chứng dương acarbose IC50 278,80 μM) 1.2 Về Cày rita drake (Chirita drakei) 1.2.1 Thành phần hóa học Đây lần Cày rita dake nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Việt Nam giới Từ phần mặt đất loài phân lập, chuyển hóa xác định cấu trúc 14 hợp chất dẫn xuất acetyl bao gồm: phenylethanoid: cusianoside B (CD1); chiridrakoside A (CD2); chiridrakoside B (CD3); 2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl--D-glucopyranoside (CD4); desrhamnosyl isoacteoside (CD5); chiritoside C (CD6); lignan: (+)lariciresinol (CD7); (+)-isolariciresinol (CD8), triterpenoid: 24-methylenelanost-8-en-3β-ol (CD9); 3,24-dihydroxy-urs-12-ene-28-oic acid (CD10), phenol glycoside: brachyanin D (CD11), dẫn xuất furan: cannabiside B (CD12), anthraquinone: digiferruginol (CD13), phenylpropanoid: epoxyconiferyl alcohol (CD14), dẫn xuất acetyl: chiridrakoside B nonaacetate (CD3a) Trong đó, 10 hợp chất lần phát chi Chirita, hợp chất chiridrakoside A (CD2), hợp chất lần phân lập từ thiên nhiên chiridrakoside B (CD3) dẫn xuất chiridrakoside B nonaacetate (CD3a) 1.2.2 Hoạt tính sinh học Kết thử hoạt tính gây độc tế bào bốn dòng tế bào ung thư: KB, HepG2, Lu MCF7 14 hợp chất phân lập cho thấy epoxyconiferyl alcohol (CD14), phenylpropanoid với nhóm epoxy hydroxyl phân tử ức chế mạnh tất dòng thử nghiệm (IC50 46-128 μM) 24 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu sâu hoạt tính sinh học số hợp chất có hoạt tính sinh học từ hai lồi nghiên cứu từ tìm mối tương quan cấu trúc hóa học hoạt tính sinh học Tìm phương pháp chuyển hóa hợp chất QN1 QN3, có hàm lượng lớn Quao nước thể hoạt tính kháng viêm, nhằm tìm kiếm dẫn xuất có hoạt tính tốt NHỮNG ĐĨNG GĨP MỚI CỦA LUẬN ÁN Từ hai loài nghiên cứu Quao nước Cày rita drake phân lập xác định cấu trúc hóa học 28 hợp chất khác nhau, chuyển hóa dẫn xuất acetyl Kết nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học Quao nước (Dolichandrone spathacea) cho thấy: - 14 hợp chất phân lập chất lần tìm thấy từ lồi bao gồm: dolichandrone A (QN7, chất mới), dolichandrone B (QN8, chất mới), hỗn hợp dolichandrone C (QN5, chất mới) dolichandrone D (QN6, chất mới), 6-O-[(E)-4-methoxycinnamoyl]catalpol (QN1), specioside (QN2), 6-O[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]catalpol (QN3), minecoside (QN4), β-sitosterol (QN9), daucosterol (QN10), ursolic acid (QN11), pomolic acid (QN12), trans4-methoxycinnamic acid (QN13), Glycerol 1,2-di-(9Z,12Z-octadecadienoate) 3-dodecanoate (QN14) chuyển hóa dẫn xuất acetyl: 6-O-[(E)-4methoxycinnamoylpentaacetate]catalpol (QN1a), specioside hexaacetate (QN2a), 6-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoylpentaacetate]catalpol (QN3a), minecoside hexaacetate (QN4a) - Lần nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào, kháng viêm, ức chế sản sinh NO hạ đường huyết cao chiết số hợp chất phân lập thực từ loài Hai iridoid glycoside QN1 QN3 có hàm lượng lớn vỏ thể ức chế tế bào miễn dịch sản sinh IL-6 TNF-α, ức chế sản sinh NO có khả ức chế enzyme α-glucosidase mạnh với IC50 191,50 175,52 µM (chất đối chứng dương acarbose IC50 278,80 µM) Lần Cày rita drake (Chirita drakei Burtt) nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học Việt Nam giới - 14 hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học 10 hợp chất lần tìm thấy chi Chirita, hợp chất chiridrakoside A (CD2) hợp chất lần phân lập từ thiên nhiên chiridrakoside B (CD3) Chuyển hóa dẫn xuất acetyl chiridrakoside B nonaacetate (CD3a) - 14 hợp chất CD1-CD14 thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư biểu mơ (KB), ung thư gan (HepG2), ung thư phổi (Lu) ung thư vú (MCF7) có CD14 ức chế dòng tế bào (IC50 46-128 µM) 25 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Nguyen Thi Hoang Anh, Nguyen Van Tuan, Dao Duc Thien, Tran Duc Quan, Nguyen Thanh Tam, Giang Thi Kim Lien, Katrin Franke, Trinh Thi Thuy, Tran Van Sung, Chemical constituents of Chirita drakei Burtt, Natural Product Communications, 2017, 12 (4), 563-566 Nguyen Thi Hoang Anh, Nguyen Van Tuan, Tran Đuc Quan, Đao Đuc Thien, Nguyen Thanh Tam, Giang Thi Kim Lien, Trinh Thi Thuy, Tran Van Sung, Chemical constituents of Chirita drakei Burtt collected in Ha Long Bay, Quang Ninh province, Viet Nam, I Compounds isolated from the n-hexane and ethyl acetate extracts, Vietnam Journal of Chemistry, 2017, 55 (2), 203-207 Nguyen Thi Hoang Anh, Nguyen Van Tuan, Tran Đuc Quan, Đao Đuc Thien, Nguyen Thanh Tam, Giang Thi Kim Lien, Trinh Thi Thuy, Tran Van Sung, Chemical constituents of Chirita drakei Burtt collected in Ha Long Bay, Quang Ninh province, Viet Nam, II Compounds isolated from the nbutanol extract, Vietnam Journal of Chemistry, 2017, 55 (4), 504-508 Nguyễn Văn Tuấn, Nguyễn Tuấn Thành, Nguyễn Thế Anh, Đỗ Lệ Quyên, Trần Văn Lộc, Trần Văn Sung, Trần Thị Phương Thảo, Nghiên cứu thành phần hóa học Quao nước (Dolichandrone spathacea) thu hái tỉnh Sóc Trăng, Việt Nam, Tạp chí hóa học, 2016, 54 (6e2), 34-39 Van Tuan Nguyen, Le Quyen Do, The Anh Nguyen, Tuan Thanh Nguyen, Van Loc Tran, Ngoc Anh Ho, Van Chien Tran, Van Sung Tran and Thi Phuong Thao Tran, New cycloartanes and new iridoids from Dolichandrone spathacea collected in the mangrove forest of Soc Trang province, Vietnam, Journal of Asian Natural Product Research, Published online 28/11/2017, https://doi.org/10.1080/10286020.2017.1406927 ... quý loài thực vật Việt Nam, tiến hành đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số lồi thực vật vùng ven biển Cần Giờ, Sóc Trăng Vịnh Hạ Long Mục tiêu nghiên cứu luận án Nghiên. .. 1.1 Giới thiệu chung thực vật vùng Hạ Long 1.1.1 Sơ lược thực vật 1.1.2 Tình hình nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số loài thực vật đặc hữu vịnh Hạ Long 1.1.3 Tổng quan chi Chirita,... hình nghiên cứu Cày rita drake (Chirita drakei) 1.2 Giới thiệu chung thực vật vùng Cần Giờ, Sóc Trăng 1.2.1 Sơ lược thực vật 1.2.2 Tình hình nghiên cứu số lồi thực vật vùng Cần Giờ, Sóc Trăng