Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)

Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)Chiết tách và phân tích định lượng một số lignan từ loài dó đất (Balanophora fungosa subsp. indica (Arn.) B. Hansen) (LV thạc sĩ)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TRẦN THỊ HỒNG QUN CHIẾT TÁCH VÀ PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ LIGNAN TỪ LỒI DĨ ĐẤT (Balanophora fungosa subsp indica (Arn.) B Hansen) LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC THÁI NGUYÊN - 2017 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TRẦN THỊ HOÀNG QUYÊN CHIẾT TÁCH VÀ PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ LIGNAN TỪ LỒI DĨ ĐẤT (Balanophora fungosa subsp indica (Arn.) B Hansen) Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Bùi Hữu Tài THÁI NGUYÊN - 2017 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn TS Bùi Hữu Tài - Viện Hóa sinh Biển - Viện Hàn lâm Khoa học Công Nghệ Việt Nam tin tưởng giao đề tài, định hướng nghiên cứu, tận tình hướng dẫn tạo điều kiện tốt cho em hoàn thành luận văn thạc sĩ Em xin chân thành cảm ơn tới TS Dương Nghĩa Bang, TS Phạm Thế Chính thầy khoa Hóa học, Trường Đại Học Khoa Học - Đại Học Thái Nguyên tạo điều kiện , giúp đỡ em trình triển khai nghiên cứu thực đề tài Em xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo thầy, cô, cán kĩ thuật viên Viện Hóa sinh Biển - Viện Hàn Lâm Khoa học Cơng Nghệ Việt Nam tận tình dạy hướng dẫn em trình học tập, thực nghiệm thực đề tài Cuối em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè lớp Cao học Khố 2015 - 2017 giúp đỡ động viên em suốt trình học tập thực luận văn Tác giả luận văn Trần Thị Hoàng Quyên a MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN .a MỤC LỤC b DANH MỤC CÁC HÌNH d DANH MỤC CÁC BẢNG f DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT g ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật chi Balanophora loài B fungosa subsp indica 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Balanophora 1.1.2 Đặc điểm thực vật loài B fungosa subsp indica 1.2 Một số nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học chi Balanophora 1.3 Phương pháp sắc ký phân tích, phân lập hợp chất hữu 10 1.3.1 Sắc ký lớp mỏng 11 1.3.2 Sắc ký cột 12 1.3.3 Sắc ký lỏng hiệu cao 13 1.4 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất hữu 15 1.4.1 Phương pháp phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều 16 1.4.1 Phương pháp phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều 17 Chương THỰC NGHIỆM 19 2.1 Nguyên liệu, hóa chất 19 2.2 Các phương pháp thiết bị nghiên cứu 19 2.2.1 Phương pháp thiết bị nghiên cứu chiết xuất phân lập hợp chất 19 2.2.2 Thiết bị nghiên cứu xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 20 2.2.3 Thiết bị phân tích hàm lượng hợp chất mẫu dược liệu 20 2.3 Thu thập xử lý mẫu loài B fungosa subsp indica 21 2.4 Chiết xuất phân lập số hợp chất lignan từ loài B fungosa subsp indica 21 b 2.6 Phân tích hàm lượng số chất phân lập mẫu thực vật khô 23 2.6.1 Chuẩn bị mẫu 23 2.6.2 Khảo sát điều kiện phân tích 23 2.6.3 Xây dựng đường chuẩn định lượng hợp chất dịch chiết tổng 23 2.6.4 Xử lý số liệu 24 Chương KẾT QUẢ THẢO LUẬN 25 3.1 Mẫu thực vật 25 3.2 Thông số vật lí số hợp chất phân lập từ loài B Fungosa subsp indica 26 3.3 Biện giải cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ loài B fungosa subsp indica 27 3.4 Phân tích hàm lượng số hợp chất lignan loài B fungosa subsp indica 44 KẾT LUẬN 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC c DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh số loài thuộc chi Balanophora Hình 1.2 Một số hình ảnh lồi B fungosa subsp indica Hình 2.1 Sơ đồ phân lập hợp chất BF1-BF4 từ loài B fungosa subsp indica 22 Hình 3.1 Một số hình ảnh mẫu thu thập loài B fungosa subsp indica 25 Hình 3.2 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC hợp chất BF1 27 Hình 3.3 Phổ 1H-NMR hợp chất BF1 29 Hình 3.4 Phổ 13C-NMR hợp chất BF1 29 Hình 3.5 Phổ DEPT-135 hợp chất BF1 30 Hình 3.6 Phổ HSQC hợp chất BF1 30 Hình 3.7 Phổ HMBC hợp chất BF1 31 Hình 3.8 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC hợp chất BF2 31 Hình 3.9 Phổ 1H-NMR hợp chất BF2 33 Hình 3.10 Phổ 13C-NMR hợp chất BF2 33 Hình 3.11 Phổ HMQC hợp chất BF2 34 Hình 3.12 Phổ HMBC hợp chất BF2 34 Hình 3.13 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC hợp chất BF3 35 Hình 3.14 Phổ 1H-NMR hợp chất BF3 38 Hình 3.15 Phổ 13C-NMR hợp chất BF3 38 Hình 3.16 Phổ HSQC hợp chất BF3 39 Hình 3.17 Phổ HMBC hợp chất BF3 39 Hình 3.18 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC hợp chất BF4 40 Hình 3.19 Phổ 1H-NMR hợp chất BF4 42 Hình 3.20 Phổ 13C-NMR hợp chất BF4 42 Hình 3.21 Phổ HSQC hợp chất BF4 43 d Hình 3.22 Phổ HMBC hợp chất BF4 43 Hình 3.23 Cấu trúc hóa học số hợp chất lignan (BF1-BF4) từ loài B fungosa subsp indica 44 Hình 3.24 Phổ UV chất BF1 BF3 45 Hình 3.25 Sắc ký đồ HPLC dịch chiết methanol loài B fungosa subsp indica điều kiện lựa chọn phân tích 45 Hình 3.26 Đường chuẩn định lượng hợp chất BF1 46 Hình 3.27 Đường chuẩn định lượng hợp chất BF3 49 e DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR hợp chất BF1 hợp chất tham khảo 28 Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR hợp chất BF2 hợp chất tham khảo BF1 32 Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR hợp chất BF3 hợp chất tham khảo 37 Bảng 3.5 Phân tích HPLC hợp chất BF1 nồng độ khác 46 Bảng 3.6 Xác định giá trị giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) hợp chất BF1 47 Bảng 3.7 Độ lặp lại độ thu hồi phép phân tích hợp chất BF1 47 Bảng 3.8 Hàm lượng hợp chất BF1 dịch chiết methanol mẫu B fungosa subsp indica 48 Bảng 3.9 Phân tích HPLC hợp chất BF3 nồng độ khác 48 Bảng 3.10 Xác định giá trị giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) hợp chất BF3 49 Bảng 3.11 Độ lặp lại độ thu hồi phép phân tích hợp chất BF3 49 Bảng 3.12 Hàm lượng hợp chất BF3 dịch chiết methanol mẫu B fungosa subsp indica 50 f DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ (Tiếng Anh) Viết đầy đủ (Tiếng Việt) 13 Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Proton Nuclear Magnetic Cô ̣ng hưởng từ ̣t nhân cacbon 13 Cô ̣ng hưởng từ ̣t nhân proton CC DEPT Resonance Column chromatography Distortionless Enhancement Sắc kí cột Distortionless Enhancement by DMSO by Polarisation Transfer Dimethyl sulfoxide Polarisation Transfer Dimethyl sulfoxide DPPH ESI-MS 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl Electrospray Ionization Mass Spectrometry 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl Phổ khố i lượng ion hóa phun mù điê ̣n EtOAc Ethyl acetate Etyl axetat HMBC HPLC Heteronuclear mutiple Bond Connectivity High-performance liquid Tương tác di ̣ha ̣t nhân qua nhiề u liên kế t Sắc ký lỏng hiệu cao HR-ESIMS HSQC chromatography High Resolution Electrospray Ionization Mass Spectrometry Heteronuclear Single- Phổ khối lượng phân giải cao ion hóa phun mù điện Tương tác di ̣ha ̣t nhân qua LOD LOQ RP-18 TLC TMS Quantum Coherence Limit of detection Limit of quantitation Reserve phase C-18 Thin layer chromatography Tetramethylsilane liên kế t Giới hạn phát Giới hạn định lượng Chất hấp phụ pha đảo C-18 Sắ c ký lớp mỏng Tetramethylsilane C-NMR H-NMR g ĐẶT VẤN ĐỀ Cây thuốc động vật làm thuốc nhiều dân tộc giới sử dụng rộng rãi để điều trị bệnh khác Theo thống kê sơ bộ, số nước châu Á châu Phi, có tới 80 % dân số phụ thuộc vào y học cổ truyền việc chăm sóc sức khỏe Ở nhiều nước phát triển, từ 70 % đến 80 % dân số sử dụng thuốc chế phẩm Các thuốc sử dụng dân gian dần chứng minh nghiên cứu khoa học Nó sở ban đầu trình nghiên cứu phát triển thuốc tạo nhiều loại thuốc Tây Trong vài thập kỉ qua, dựa thuốc dân gian, dược liệu cổ truyền đóng vai trò nguồn nguyên liệu cung cấp cho thuốc Tây với 40% tổng loại thuốc Hơn việc nghiên cứu hóa học lồi thuốc có ý nghĩa vô quan trọng nhằm làm sở khoa học cho việc sử dụng nguồn tài nguyên cách hiệu nhất, lý giải công dụng ngăn ngừa bệnh sử dụng thuốc dân tộc, phát hợp chất thể hoạt tính giúp định hướng bào chế phát thuốc Bên cạnh đó, đánh giá hàm lượng hoạt chất dược liệu yêu cầu quan trọng nhằm nâng cao giá trị sử dụng hiệu kinh tế dược liệu Các dược liệu thuộc chi Balanophora (Dó đất) thường biết đến với tên gọi ‘Tỏa dương’ hay ‘nấm ngọc cẩu’ Theo kinh nghiệm dân gian, cơng dụng lồi thuộc chi Balanophora chủ yế bổ dương, kích thích ăn ngon miệng, phục hồi sức khỏe nhanh … Một số loài bị săn tìm riết để phục vụ cho thuốc tăng cường sinh lực nên dẫn đến nguy cạn kiệt, số loài nằm sách đỏ Việt Nam Do đó, việc nghiên cứu thành phần hóa học đánh giá hàm lượng hoạt chất loài thuộc chi Balanophora nước ta nói chung lồi B fungosa subsp indica nói riêng mang nhiều ý nghĩa khoa học thực tiễn; vừa tạo sở giải thích cơng dụng dân gian loài vừa tạo sở để đánh giá hiệu kinh tế Phụ lục 24 Phổ 13C-NMR hợp chất BF3 Phụ lục 25 Phổ 13C-NMR giãn hợp chất BF3 15 Phụ lục 26 Phổ 13C-NMR giãn hợp chất BF3 Phụ lục 27 Phổ HSQC hợp chất BF3 16 Phụ lục 28 Phổ HSQC giãn hợp chất BF3 Phụ lục 29 Phổ HSQC giãn hợp chất BF3 17 Phụ lục 30 Phổ HMBC hợp chất BF3 Phụ lục 31 Phổ HMBC giãn hợp chất BF3 18 Phụ lục 32 Phổ HMBC giãn hợp chất BF3 Phụ lục 33 Phổ 1H-NMR hợp chất BF4 19 Phụ lục 34 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất BF4 Phụ lục 35 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất BF4 20 Phụ lục 36 Phổ 13C-NMR hợp chất BF4 Phụ lục 37 Phổ 13C-NMR giãn hợp chất BF4 21 Phụ lục 38 Phổ 13C-NMR giãn hợp chất BF4 Phụ lục 39 Phổ HSQC hợp chất BF4 22 Phụ lục 40 Phổ HSQC giãn hợp chất BF4 Phụ lục 41 Phổ HSQC giãn hợp chất BF4 23 Phụ lục 42 Phổ HMBC hợp chất BF4 Phụ lục 43 Phổ HMBC giãn hợp chất BF4 24 Phụ lục 44 Phổ HMBC giãn hợp chất BF4 Phụ lục 45 Phổ HMBC giãn hợp chất BF4 25 Phụ lục 46 Phổ HMBC giãn hợp chất BF4 26 D A D 1A ,S ig= 230,16R e f= o ff (D :\N C C T \B A N A N O S P H O R A2002-01-0102-21-17\031-0101.D ) 13.900 m A U 40 30 20 10 7.275 -10 -20 10 12 1 10 12 1 1 14 16 18 m in m in 16 18 m in m in m in D A D 1A ,S ig = ,1 6R e f= o ff (D :\N C C T \B A N A N O S P H O R A2 0 -0 -0 10 -2 -1 \0 -0 D ) 13.910 m A U 0 0 D A D 1A ,S ig= 230,16R e f= o ff(D :\N C C T \B A N A N O S P H O R A2002-01-0102-21-17\033-0301.D ) 13.916 m A U 200 150 100 50 14 D A D 1A ,S ig = ,1 6R e f= o ff(D :\N C C T \B A N A N O S P H O R A 0 -0 -0 10 -2 -1 \0 -0 D ) 13.820 m A U 0 0 0 0 7.215 0 D A D 1A ,S ig = ,1 6R e f= o ff(D :\N C C T \B A N A N O S P H O R A 0 -0 -0 10 -2 -1 \0 -0 D ) 13.824 m A U 0 0 0 0 0 0 7.183 4.635 0 Phụ lục 47 Sắc ký đồ BF1 nồng độ 62.5, 125, 250, 500, 1000 µg/mL 27 D A D 1A ,S ig = ,1 6R e f= o ff (D :\N C C T \B A N A N O S P H O R A2 0 -0 -0 10 -2 -1 \0 -0 D ) 9.118 m A U 6.709 4.061 2.2.436555 0 D A D 1A ,S ig= 230,16R e f= o ff (D :\N C C T \B A N A N O S P H O R A2002-01-0102-21-17\042-0801.D ) 1 m in 10 12 14 16 18 m in 10 12 14 16 18 m in 10 12 14 16 18 m in 10 12 14 16 18 m in 9.068 m A U 80 60 40 8.456 4.3.040884 4.470 6.696 2.347 20 D A D 1A ,S ig=230,16R e f=o ff (D :\N C C T\B A N A N O S P H O R A2002-01-0102-21-17\043-0901.D ) 9.017 m A U 175 150 125 100 75 8.407 6.673 4.691 2.464 2.932 25 3.879 50 D A D 1A ,S ig=230,16R e f=o ff (D :\N C C T\B A N A N O S P H O R A2002-01-0102-21-17\044-1001.D ) 9.114 m A U 350 300 250 200 150 100 8.476 6.696 6.325 4.645 3.889 2.462 2.954 50 D A D 1A ,S ig=230,16R e f=o ff (D :\N C C T\B A N A N O S P H O R A2002-01-0102-21-17\045-1101.D ) 9.130 m A U 700 600 500 400 300 200 8.482 6.715 5.945 6.344 4.648 3.888 2.465 2.969 100 Phụ lục 48 Sắc ký đồ BF3 nồng độ 62.5, 125, 250, 500, 1000 µg/mL 28 DAD1A,Sig=230,16Ref=off (D:\NCCT\BANANOSPHORA2002-01-0102-21-17\046-1201.D) 4.620 mAU 2.4822.603 400 15.584 13.836 11.398 10.550 9.664 8.481 5.783 6.244 6.710 7.174 7.643 1.777 100 5.192 33.1.05167 3.455 3.776 200 9.171 4.759 300 10 12 14 16 18 Phụ lục 49 Sắc ký đồ HPLC dịch chiết methanol loài B fungosa subsp indica điều kiện lựa chọn phân tích 29 ... THỊ HỒNG QUN CHIẾT TÁCH VÀ PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ LIGNAN TỪ LỒI DĨ ĐẤT (Balanophora fungosa subsp indica (Arn.) B Hansen) Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC... Thu thập xử lý mẫu loài B fungosa subsp indica 21 2.4 Chiết xuất phân lập số hợp chất lignan từ loài B fungosa subsp indica 21 b 2.6 Phân tích hàm lượng số chất phân lập mẫu thực... Thơng số vật lí số hợp chất phân lập từ loài B Fungosa subsp indica 26 3.3 Biện giải cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ loài B fungosa subsp indica 27 3.4 Phân tích hàm lượng